双特异性抗体与抗体融合蛋白[优质ppt]
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双特异性抗体与抗体融合蛋白课件
杂交瘤技术
通过将不同免疫细胞系融合，获得同时产生两种不同抗体的杂交瘤细胞，进 而筛选出能够产生所需双特异性抗体的细胞系。
基因工程方法
通过基因工程技术改造抗体基因，使一个抗体分子具备两种不同抗原结合的 能力。
双特异性抗体的应用前景
肿瘤治疗
自身免疫性疾病治疗
利用双特异性抗体靶向肿瘤细胞，同时激活 免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，提高治疗 效果。
03
02
感染性疾病
自身免疫性疾病
双特异性抗体与抗体融合蛋白也可 以应用于自身免疫性疾病的治疗。 通过调节免疫应答，抑制炎症反应 ，有望为自身免疫性疾病患者带来 更好的治疗选择。
在感染性疾病治疗中，双特异性 抗体与抗体融合蛋白可以作为中 和抗体使用，抑制病毒或细菌的 感染和传播。同时，也可以通过 调节免疫应答，减轻感染引起的 炎症反应。
优化治疗效果
双特异性抗体与抗体融合蛋白的联合应用可以 提高肿瘤治疗的整体治疗效果，减少不良反应 和副作用。
双特异性抗体与抗体融合蛋白在自身免疫性疾病治疗中的 联合应用
调节免疫反应
01
双特异性抗体与抗体融合蛋Байду номын сангаас可以调节自身免疫性疾病患者的
免疫反应，抑制炎症和自身免疫反应，缓解病情。
创新药物研发
02
双特异性抗体与抗体融合蛋白的联合应用为自身免疫性疾病的
单链抗体融合蛋白、多链抗体融合蛋白
按功能分类
双特异性抗体、单克隆抗体
抗体融合蛋白的制备方法
直接免疫球蛋白融合
将两个不同抗体的重链和轻链进行直接融合
基因工程抗体融合蛋白
通过基因工程技术将两个不同抗体的重链和轻链进行融合
抗体融合蛋白的应用前景
肿瘤免疫治疗
通过将不同免疫细胞系融合，获得同时产生两种不同抗体的杂交瘤细胞，进 而筛选出能够产生所需双特异性抗体的细胞系。
基因工程方法
通过基因工程技术改造抗体基因，使一个抗体分子具备两种不同抗原结合的 能力。
双特异性抗体的应用前景
肿瘤治疗
自身免疫性疾病治疗
利用双特异性抗体靶向肿瘤细胞，同时激活 免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，提高治疗 效果。
03
02
感染性疾病
自身免疫性疾病
双特异性抗体与抗体融合蛋白也可 以应用于自身免疫性疾病的治疗。 通过调节免疫应答，抑制炎症反应 ，有望为自身免疫性疾病患者带来 更好的治疗选择。
在感染性疾病治疗中，双特异性 抗体与抗体融合蛋白可以作为中 和抗体使用，抑制病毒或细菌的 感染和传播。同时，也可以通过 调节免疫应答，减轻感染引起的 炎症反应。
优化治疗效果
双特异性抗体与抗体融合蛋白的联合应用可以 提高肿瘤治疗的整体治疗效果，减少不良反应 和副作用。
双特异性抗体与抗体融合蛋白在自身免疫性疾病治疗中的 联合应用
调节免疫反应
01
双特异性抗体与抗体融合蛋Байду номын сангаас可以调节自身免疫性疾病患者的
免疫反应，抑制炎症和自身免疫反应，缓解病情。
创新药物研发
02
双特异性抗体与抗体融合蛋白的联合应用为自身免疫性疾病的
单链抗体融合蛋白、多链抗体融合蛋白
按功能分类
双特异性抗体、单克隆抗体
抗体融合蛋白的制备方法
直接免疫球蛋白融合
将两个不同抗体的重链和轻链进行直接融合
基因工程抗体融合蛋白
通过基因工程技术将两个不同抗体的重链和轻链进行融合
抗体融合蛋白的应用前景
肿瘤免疫治疗
融合蛋白参考PPT
目前研究发现， β-半乳糖苷酶-半 乳糖脱氢酶融合蛋白在一定条件下， 其偶联反应产生 NADH 的速度是 同时加入这两种酶的反应速度的两 倍以上。同时过渡态时间缩短近四 倍。
21
融合蛋白
定向药物一般由两部分组成：一部 分是药物；另一部分是可以与病灶 特异性结合的配基。通过融合蛋白 技术将这两部分融合在一起， 即 可构成一个具有独特构象与功能的 蛋白质。
30
融合蛋白
目前已有人构建了抗菌肽B和人 溶菌酶的融合蛋白表达载体。并 成功表达出了具有抗菌和抗病毒 双重活性的重组蛋白。
31
融合蛋白
（一）免疫球蛋白（Ig）融合 蛋白
（二）甲状旁腺激素（PTH） 融合蛋白
（三）细胞因子重组融合蛋白
融合蛋白
Ig融合蛋白是指在基因水平将目的 基因同Ig部分片段基因相连，并在 真核或原核细胞中表达出的具有上 述两部分结构域的重组蛋白。据目 的蛋白与Ig不同片断相连，可将其 分为二大类 ：一类为Fab(Fv)融合 蛋白； 另一类为 Fc融合蛋白。
8
融合蛋白
3.将重组表达载体转染宿主细胞 并利用选择标志进行筛选及测 序。
4.融合基因的诱导表达及表达蛋 白的纯化 。
9
融合蛋白
在构建融合蛋白中，一个关键的问题 是两蛋白间的接头序列( Linker )，即 连接肽。它的长度对蛋白质的折叠和 稳定性非常重要。如果接头序列太短， 可能影响两蛋白高级结构的折叠，从 而相互干扰；如果接头序列太长，又 涉及免疫原性的问题，因为接头序列 本身就是新的抗原。
融合蛋白
07生物技术
融合蛋白
融合蛋白的概念 融合蛋白技术概况 融合蛋白技术的临床应用 常见的几种融合蛋白
融合蛋白
在基因工程迅速发展的基础上， 有目的地把两段或多段编码功能蛋白 的基因连接在一起，进而表达所需蛋 白，这种通过在人工条件下将两个或 多个基因的编码区首尾连接，由同一 调控序列控制构成的基因表达后所得 的蛋白质产物称为融合蛋白(fusion protein，FP)。
21
融合蛋白
定向药物一般由两部分组成：一部 分是药物；另一部分是可以与病灶 特异性结合的配基。通过融合蛋白 技术将这两部分融合在一起， 即 可构成一个具有独特构象与功能的 蛋白质。
30
融合蛋白
目前已有人构建了抗菌肽B和人 溶菌酶的融合蛋白表达载体。并 成功表达出了具有抗菌和抗病毒 双重活性的重组蛋白。
31
融合蛋白
（一）免疫球蛋白（Ig）融合 蛋白
（二）甲状旁腺激素（PTH） 融合蛋白
（三）细胞因子重组融合蛋白
融合蛋白
Ig融合蛋白是指在基因水平将目的 基因同Ig部分片段基因相连，并在 真核或原核细胞中表达出的具有上 述两部分结构域的重组蛋白。据目 的蛋白与Ig不同片断相连，可将其 分为二大类 ：一类为Fab(Fv)融合 蛋白； 另一类为 Fc融合蛋白。
8
融合蛋白
3.将重组表达载体转染宿主细胞 并利用选择标志进行筛选及测 序。
4.融合基因的诱导表达及表达蛋 白的纯化 。
9
融合蛋白
在构建融合蛋白中，一个关键的问题 是两蛋白间的接头序列( Linker )，即 连接肽。它的长度对蛋白质的折叠和 稳定性非常重要。如果接头序列太短， 可能影响两蛋白高级结构的折叠，从 而相互干扰；如果接头序列太长，又 涉及免疫原性的问题，因为接头序列 本身就是新的抗原。
融合蛋白
07生物技术
融合蛋白
融合蛋白的概念 融合蛋白技术概况 融合蛋白技术的临床应用 常见的几种融合蛋白
融合蛋白
在基因工程迅速发展的基础上， 有目的地把两段或多段编码功能蛋白 的基因连接在一起，进而表达所需蛋 白，这种通过在人工条件下将两个或 多个基因的编码区首尾连接，由同一 调控序列控制构成的基因表达后所得 的蛋白质产物称为融合蛋白(fusion protein，FP)。
双特异性抗体与抗体融合蛋白ppt课件
11
构建策略
双特异性抗体的构建方法
杂化杂交瘤技术
将具有某种特异性（如抗瘤细胞）的McAb 细胞株与具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白） 的小鼠脾细胞进行融合，即产生出杂化杂交 瘤细胞株的二价瘤体。
Immunology
12
杂化杂交瘤技术产生的双特异性抗体
Immunology
13
杂化杂交瘤分泌的抗体形式
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 吞噬细胞/APC FcγR、CR
Immunology
9
构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 NK细胞 FcγR、CD56
Immunology
10
双特异性抗体的效应靶
效应细胞 T细胞
NK细胞
靶分子
TCR/CD3,CD2
14
只有L1H1-H2L2才是所需的双特异性抗体
Immunology
15
杂化杂交瘤方法的不足
产量低，仅占10% 产物需筛选，费时费力 瘤株不稳定
Immunology
16
构建策略
双特异性抗体的构建方法
化学交联法
Nisonoff和Rivers最早开始研究 化学交联无需经过细胞融合，比较简便易行。 通常利用重链与轻链这间的二硫链经还原 和再氧化，将两种不同特异性抗体的半分子结 合在一起。或用双功能交联剂，如邻苯酸酯等， 把两个抗体半分子交联在一起。
双特异性抗体与抗体融合蛋 白
2
双特异性抗体
概述 构建策略 应用
Immunology
3
概述
双特异性抗体：
双特异性抗体与抗体融合蛋白课件
预期收益
系统地掌握双特异性抗体与抗体融合蛋白的专业 知识和技能，提高专业素养和研究能力
熟悉双特异性抗体与抗体融合蛋白在生物医药领 域的应用及研究进展，拓展知识面和视野
培养独立分析问题和解决问题的能力，为日后的 科研和工作打下坚实的基础。
02
双特异性抗体的基本概念
双特异性抗体的定义与特性
双特异性抗体的定义
抗体融合蛋白的制备方法
采用基因工程技术，将两个不同抗体的轻链和重链可变区基 因进行融合，构建成嵌合基因，然后通过转录和翻译得到抗 体融合蛋白。
抗体融合蛋白的制备流程
确定抗体特异性、设计嵌合基因、构建表达载体、转染细胞 、抗体融合蛋白表达和纯化。
抗体融合蛋白的应用场景与优势
抗体融合蛋白的应用场景
可用于肿瘤免疫治疗、自身免疫性疾病治疗、感染性疾病治疗等领域。
抗体融合蛋白
抗体融合蛋白是指将抗体与其它蛋白质或 小分子融合，形成的具有特殊功能的新型 蛋白质药物。目前，抗体融合蛋白已经广 泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病、神经系 统疾病等治疗领域。然而，抗体融合蛋白 在生产过程中存在的问题和挑战也需要重 视和解决。
发展趋势与未来展望
双特异性抗体
未来，双特异性抗体的研究方向将更加多元化，从治 疗肿瘤向治疗其它疾病拓展。同时，双特异性抗体的 生产工艺也将不断优化，提高产量和纯度，降低生产 成本，使得双特异性抗体药物更加普及和可及。
抗体融合蛋白
针对抗体融合蛋白的研究重点应放在以下几个方面：1）研究和优化抗体融合蛋白的生产工艺；2）研 究和解决抗体融合蛋白在临床应用中可能遇到的问题；3）探索新型的抗体融合蛋白设计和制备方法； 4）评估抗体融合蛋白的长期疗效和安全性。
06
结语
第四十章-免疫球蛋白与抗体-幻灯片(1)
IgM、IgG1~G3可通过经典途径活化补体，凝 集的IgA、IgG4、IgE可通过替代途径活化补体。 3. 结合Fc受体：介导I型超敏反应，调理吞噬作用， 发挥ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用： 具有Fc受体的杀伤细胞如NK细胞、吞噬细胞、嗜 中性、嗜碱性粒细胞与Ig如IgG、Iga、IgE的Fc段 结合，杀伤靶细胞）作用。(图2-7-1)、（图2-7-2） 4. 通过胎盘和粘膜（IgG唯一的可通过胎盘从母体 转移给胎儿的Ig）。（图能
一、IgG：抗感染的主要抗体（抗菌、抗病毒、抗毒 素抗体），通过胎盘，激活补体，调理作用， ADCC，某些自身抗体。 二、IgA：粘膜局部抗感染作用（抗菌、抗病毒）， 免疫排除功能（结合饮食中可溶性抗原，肠道正常
菌群病原微生物释放的热原物质，防止它们进入血 液）。
概念
1. 抗体（antibody，Ab）：是B细胞识别抗 原后活化、增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成 和分泌的能与相应抗原特异性地结合的球蛋白。
2. 免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：具 有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。
3. 免疫球蛋白的发现（图2-1）。
第一节 免疫球蛋白的结构与类型
• 2、了解多克隆抗体与单克隆抗体的概念。
谢谢！
轻链分子量约25kD，由214个AA残基组成。根据其抗原 性不同可分为两型，即κ型和λ型。通常κ：λ=2：1。根据λ 链恒定区个别AA的差异不同，又可分为λ1、λ2、λ3、λ4 四个亚型。
（二）可变区和恒定区：(图2-3) 1. 可变区（V区）：位于L链靠近N端的1/2和H链 靠近N端的1/5或1/4。高变区（HVR）或互补决 定区（CDR）：IgV区内，H链有三个，L链有三
第四节 人工制备抗体
一、IgG：抗感染的主要抗体（抗菌、抗病毒、抗毒 素抗体），通过胎盘，激活补体，调理作用， ADCC，某些自身抗体。 二、IgA：粘膜局部抗感染作用（抗菌、抗病毒）， 免疫排除功能（结合饮食中可溶性抗原，肠道正常
菌群病原微生物释放的热原物质，防止它们进入血 液）。
概念
1. 抗体（antibody，Ab）：是B细胞识别抗 原后活化、增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成 和分泌的能与相应抗原特异性地结合的球蛋白。
2. 免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：具 有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。
3. 免疫球蛋白的发现（图2-1）。
第一节 免疫球蛋白的结构与类型
• 2、了解多克隆抗体与单克隆抗体的概念。
谢谢！
轻链分子量约25kD，由214个AA残基组成。根据其抗原 性不同可分为两型，即κ型和λ型。通常κ：λ=2：1。根据λ 链恒定区个别AA的差异不同，又可分为λ1、λ2、λ3、λ4 四个亚型。
（二）可变区和恒定区：(图2-3) 1. 可变区（V区）：位于L链靠近N端的1/2和H链 靠近N端的1/5或1/4。高变区（HVR）或互补决 定区（CDR）：IgV区内，H链有三个，L链有三
第四节 人工制备抗体
抗体融合蛋白课件
体等。 • 3.抗体偶联物，由抗体或抗体片段与“弹头”药物连接而成。可用作
“弹头”的物质有放射性核素、化学治疗 ( 化疗 ) 药物和毒素。这些 “弹头”物质与抗体连接，分别构成放射免疫偶联物、化学免疫偶联 物和免疫毒素。
• 4.抗体融合蛋白，由抗体片段和活性蛋白两部分构成。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
• 4. 制备抗肿瘤抗体药物的定靶性；即根据需要利用基因工程技术制备 具有不同治疗作用的抗体药物。可以针对特定的靶分子，定向制备相 应的抗体；也可以根据需要选择相应的“弹头”药物或效应分子，制 备相应的免疫偶联物或融合蛋白。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到多样性生物功能的融合蛋白如 ：
• 1.含Fv段的抗体融合蛋白：将Fv与某些毒素、酶、细胞因子基因拼连 ，通过这些抗体的引导，可将其生物活性物质导向靶细胞特定部位， 所谓“生物导弹”。
• 2.嵌合受体：将ScFv与某些细胞膜蛋白分子融合，形成的融合蛋白， 可表达于细胞表面，称为嵌合受体，由于其介导的杀伤效应不受MHC 限制，在过继性免疫治疗中有潜在应用价值。
VEGF-EGFR 多靶向 Fc 融合蛋白 EVP1 的构建
• 方法： • 1.利用 PCR 方法扩增 Herin 基因和 Flt-1 基因 Ig 样第二
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
抗肿瘤抗体药物的分类
• 按抗肿瘤抗体药物结构可将其分为 4 类 • 1.抗体，也称裸抗体。根据其人源化的程度，又可分为鼠源抗体、嵌
合抗体、人源化抗体、完全人源抗体。 • 2.抗体片段，包括 Fab’、单链抗体、双链抗体、三链抗体、微型抗
“弹头”的物质有放射性核素、化学治疗 ( 化疗 ) 药物和毒素。这些 “弹头”物质与抗体连接，分别构成放射免疫偶联物、化学免疫偶联 物和免疫毒素。
• 4.抗体融合蛋白，由抗体片段和活性蛋白两部分构成。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
• 4. 制备抗肿瘤抗体药物的定靶性；即根据需要利用基因工程技术制备 具有不同治疗作用的抗体药物。可以针对特定的靶分子，定向制备相 应的抗体；也可以根据需要选择相应的“弹头”药物或效应分子，制 备相应的免疫偶联物或融合蛋白。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到多样性生物功能的融合蛋白如 ：
• 1.含Fv段的抗体融合蛋白：将Fv与某些毒素、酶、细胞因子基因拼连 ，通过这些抗体的引导，可将其生物活性物质导向靶细胞特定部位， 所谓“生物导弹”。
• 2.嵌合受体：将ScFv与某些细胞膜蛋白分子融合，形成的融合蛋白， 可表达于细胞表面，称为嵌合受体，由于其介导的杀伤效应不受MHC 限制，在过继性免疫治疗中有潜在应用价值。
VEGF-EGFR 多靶向 Fc 融合蛋白 EVP1 的构建
• 方法： • 1.利用 PCR 方法扩增 Herin 基因和 Flt-1 基因 Ig 样第二
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
抗肿瘤抗体药物的分类
• 按抗肿瘤抗体药物结构可将其分为 4 类 • 1.抗体，也称裸抗体。根据其人源化的程度，又可分为鼠源抗体、嵌
合抗体、人源化抗体、完全人源抗体。 • 2.抗体片段，包括 Fab’、单链抗体、双链抗体、三链抗体、微型抗
基因工程抗体PPT课件
Ricin A:蓖麻毒素A,对肿瘤细胞具有毒性作用
32
scFv IL-2
IL-2
免疫细胞因子(Immunocytokine)
33
五、细胞内抗体
细胞内抗体主要是指在细胞内合成并作 用于细胞内组分的抗体，亦称内抗体 （intrabody）。
目前的研究主要集中在单链抗体上，在 ScFv的C端或N端插入其它靶向信号 （targeting signals），如分泌信号、核 定位信号、线粒体定位信号和内质网滞留信 号等，从而进行检测、识别、发挥特定功能。
特点：减少了鼠源性抗体的免疫
原性，同时保留了亲本抗体特异性结
9
人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略
启动子
Pr 鼠VH 人 CH
免疫球蛋白 基因载体的构建
Pr 鼠VL 人 CL
H链嵌合载体
L 链嵌合载体
共转染细胞
10
抗体分泌细胞
鼠VH
鼠V L
人CL 人CH
人-鼠嵌合基因工程抗体
11
第二代的抗体人源化——改型抗体
基因工程抗体
Genetic engineering antibody
根据研究者的意图，采用基因工程方法， 在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、 拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生 新型抗体。主要包括嵌合抗体、单链抗体、 人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体等。
1
单克隆抗体用于治疗存在的问题
1、单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严
因此只含V区基因片段的小分子抗体，即只 有VH或 VL一个功能结构域，也能保持原单 克隆抗体的特异性。这种小分子的抗体片段 就称为单域或单区抗体，其分子量仅为整个 Ig分子的1／12，故也称之为小抗体。
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VHA L VLA fos
VHB L VLB jun
Immunology
23
双体型双特异性抗体
将两种不同抗体的VH和VL用较短的linker连 接形成两种不同单链，当它们共表达时，其相 互间连接在一起，形成双特异性抗体
1993，Holliger
Immunology
24
双特异性抗体的应用
免疫诊断 肿瘤放射显影 肿瘤药物杀伤 肿瘤的免疫杀伤
L1H1-H1L1，L2H2-H2L2
重链特异性相同的配对抗体分子：
L1H1-H1L2，L1H2-H2L1 L2H1-H1L2，L1H2-H2L2
重链、轻链特异性不同的配对抗体分子：
L1H1-H2L2，L1H2-H1L2 L1H1-H2L1，L2H2-H1L2
Immunology
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只有L1H1-H2L2才是所需的双特异性抗体
双特异性抗体的构建方法
杂化杂交瘤技术
将具有某种特异性（如抗瘤细胞）的McAb 细胞株与具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白） 的小鼠脾细胞进行融合，即产生出杂化杂交 瘤细胞株的二价瘤体。
Immunology
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杂化杂交瘤技术产生的双特异性抗体
Immunology
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杂化杂交瘤分泌的抗体形式
保持原特异性抗体分子：
如，Mylotarg—抗CD33单抗偶联加里奇霉素， 治疗老年人急性髓细胞性白血病，2000年上 市。
Immunology
28
与单抗偶联的常用“弹头”药物
类别 植物毒素 微生物毒素 抗代谢药物
蒽环类药物 烷基化药物 抗有丝分裂药物 抗生素
名称
蓖麻毒素，相思豆毒素，皂角苷 绿脓杆菌外毒素，白喉毒素 氨基蝶呤，甲氨蝶呤，阿糖胞苷，5氟尿嘧啶，5-氟脱氧尿苷 阿霉素 柔红霉素 吗啉阿霉素 顺铂 苯丙氨酸氮芥 丝裂霉素C 长春花碱 秋水仙碱 鬼臼毒素 博莱霉素 加里奇霉素 平阳霉素
靶分子
TCR/CD3,CD2 FcγRIII,CD44,CD56,CD38
FcγRI,CR3, Fc αRI FcγRI,CR3, FcαRI
FcγR CR1
效应
杀伤肿瘤细胞
杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞 杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞 杀伤肿瘤细胞 病毒感染细胞
抗原递呈
免疫粘附
Immunology
11
构建策略
Immunology
29
小分子药物与抗体偶联物
一个单抗可偶联一个至数十个小分子 药物。
抗体分子中的多个基团可以用于连接， 如巯基，氨基，羟基，胍基，羧基，糖 基等。
Immunology
30
小分子药物与抗体偶联物
直接偶联物
将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 2-亚胺四氢噻吩(2-IT)
双特异性抗体
2
双特异性抗体
概述 构建策略 应用
Immunology
3
概述
双特异性抗体：
抗体两个结合点表现为不同的特异性，即分 别结合不同表位。
如，一个结合靶细胞（如肿瘤细胞），另一 结合药物或免疫效应细胞（如蓖麻毒素、抗 癌药物、细胞毒性细胞）
Immunology
4
双特异性抗体
Immunology
5 Immunology
6
双特异性抗体的功用：
提高疗效，减少副作用。 主要用于靶向治疗。
Immunology
7
构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 T细胞 TCR CD3 CD2
Immunology
8
构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 吞噬细胞/APC FcγR、CR
Immunology
9
构建策略
双特异性抗体的靶标
一个结合治疗靶标，另一个指向体 内效应细胞 NK细胞 FcγR、CD56
Immunology
10
双特异性抗体的效应靶
效应细胞 T细胞 NK细胞 中性粒细胞
单核巨噬细胞 树突状细胞 红细胞
Immunology
17
化学交联的双特异性抗体
Immunology
18
构建策略
双特异性抗体的构建方法
化学交联法
用于制备双功能抗体的McAb可以是完整分 子，也可是经胃酶水解获得F（abˊ）2片段。 后者在减少鼠源免疫原性方面，效果较好。
Immunology
19
构建策略
双特异性抗体的构建方法
Immunology
15
杂化杂交瘤方法的不足
产量低，仅占10% 产物需筛选，费时费力 瘤株不稳定
Immunology
16
构建策略 双特异性Fra bibliotek体的构建方法 化学交联法
Nisonoff和Rivers最早开始研究 化学交联无需经过细胞融合，比较简便易行。 通常利用重链与轻链这间的二硫链经还原 和再氧化，将两种不同特异性抗体的半分子结 合在一起。或用双功能交联剂，如邻苯酸酯等， 把两个抗体半分子交联在一起。
基因工程技术
利用分子生物学技术设计产生双功能抗体 常见有四种构建形式，多为小分子抗体。
Immunology
20
末端半胱氨酸残基（Cys）共价交联
在两种scFv分子C末端分别带上自由的Cys， 通过常规二硫键共价交联，形成双特异性抗体
VHA L VLA Cys
VHB L VLB Cys
-S-S-
可在具氨基的化合物上引入巯基
Immunology
31
小分子药物与抗体偶联物
直接偶联物
将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 SPDP(N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯)
可将巯基引入抗体 如，阿霉素与抗子宫内膜腺癌单抗偶联，效果 提高57倍
乳腺癌、淋巴母细胞白血病、神经胶质瘤
Immunology
25
抗体免疫偶联物
Immunology
26
抗体免疫偶联物
概述 小分子药物与抗体偶联物 毒素及大分子多肽药物与抗体偶联物 应用
Immunology
27
概述
抗体免疫偶联物
将单抗与“弹头”药物偶联在一起，以提高 药物作用的特异性，主要用于肿瘤治疗。
Immunology
21
单链双特异性抗体
将两种scFv分子基因用linker连接在一起， 然后表达形成双特异性抗体
VHA L VLA L VHB L VLB
Immunology
22
微型双特异性抗体
利用专门二聚化结构将两种scFv分子连接在 一起，形成双特异性抗体
如利用fos和jun基因的亮氨酸拉链序列：