细胞系的建立及鉴定
抗Doppel蛋白(叠朊蛋白)单克隆抗体细胞系的建立及其初步鉴定
以后每周相 同剂量腹腔注射 追加免疫 １次 ， 取尾血检删免疫
效果 ：融合前 ３ｄ再腹腔 加 强免疫 １次。取 免疫 小 鼠脾
Ａａｉ Ｐｉ ｔ ｉ ＰＰ ． ｆｉ ｔ ｉ ｒｒＰ ｎ（ｒ Ｉ ｅ… … ｏ ￣ｅ ｄｔ １
ｅ ｄ
Ｕ￣ ｐ
ａｏ ｏｔ ｏｅ Ｐ —ｋ ｍｅ ｏｐｌＪ ｔｎ ｆｈ Ｒｗｌ Ｐｌ ｅ ｔｎｌｐｅｆ ｉ ｅ ｉ Ｐ ｉ￣ ｅ
２ ２ ｍＡ ． ｂ的初步鉴定 ① ｎ， ｒｂ的效价测定 ： ｋ 杂交瘤细胞 培养 上清效 价在 ｌ 至 １ ０ 之间．Ｈ ．／ 、Ｈ １ ｘ ０一 １ ｘ １ ８３ ５３ ９和４ ４的嚏 ３ Ｆ
水 ｍ ｂ鼓价分别 为 １ｘ１ １ｘ１ 、 Ａ ０ ０ １×１ 、 １ｘ１ ② ０ 和 ０ Ⅱ ｂ的 亚娄鉴定 ：Ｈ Ｄ Ｈ １ ８３ ５ ３ ９和 ４４均为 Ｉ Ｆ ｇ Ｍ：
Ｄ ｐ ｅ 蛋白的 ｍ ｂ杂交瘤细胞系， ｏｐ ｌ Ａ 分别命名 为 ｌ ８ ３） 、Ｈ Ｈ 、１ ３ ９ ５
和 ４４ Ｆ
鼠 Ｄ ｐ ｅ 蛋 白（ ｏｐｌ 叠朊蛋 白） 是一种新发现 的朊蛋 白样糖 蛋 白（ ｒ ｉ ｒｔ ｎ ， ＰＰ—ｌｅｐｏ ｉ） 糖基化前 的分子质 量 （ ） ｋ ｅ Ｍｒ 约为 １ ５ ００， ０ 在幼年动物的小脑与成 年动物 的睾 丸和心脏 有高 水平
抗 Ｉ ｐ， 蛋 白 【 ） ｔｌ ｏ ｅ 叠朊 蛋 白） 单克 隆抗体细胞 系的建 立及 其初 步鉴定
丁天兵 肖 毅。 任君萍 昊玉水。 杨 ， ， ， ， 敬。 胡 ，
玲 郭振 英 ， ，宋建华 ‘ ，马文 煜 秦 克锋 。 ， 。
（ 第四军医大学 ‘ 微生物学教研室 ． 学员旅一大队，陕西 西安 ７０３ ； Ｃ ｎ ｒ ｅｅｒｈｉ Ｎ ｕｏｅｅｅ ｔｅＤｓ ｓｓ １ ２ ｅｔ ｆ ｓ ｃ ｅｒ：ｇｒｒ ｉ ｉ ａｅ ０ ｍ ｏＲ ａ ｎ ｌ ＊ａ ｖ ｅ
低成瘤性MDCK单克隆细胞系的建立、成瘤性分析及应用研究
低成瘤性MDCK单克隆细胞系的建立、成瘤性分析及应用研究低成瘤性MDCK单克隆细胞系的建立、成瘤性分析及应用研究引言：近年来，肿瘤细胞系的建立和应用研究在肿瘤研究领域取得了巨大的进展。
然而，目前存在的一些传统肿瘤细胞系在体内表现出较高的成瘤性和恶性特征，限制了其在肿瘤研究和药物筛选方面的应用。
因此，需要建立一种低成瘤性的肿瘤细胞系，以更准确地模拟体内肿瘤发展过程，并用于更有效的药物研发和治疗策略的开发。
一、MDCK单克隆细胞系的建立1. 研究方法本研究基于MDCK（Madin-Darby Canine Kidney）细胞系，通过克隆形成单克隆细胞系。
首先，用限稀稀释法将MDCK细胞分散于培养基中，制备成单细胞悬浮液。
再将MDCK单细胞悬浮液均匀涂布于96孔培养板中，每个孔落仅含有一个细胞，并进行培养。
最后，挑选出生长正常、形成正常压膜和细胞结构完整的单克隆细胞株。
2. 建立的低成瘤性MDCK单克隆细胞系经过多次筛选和鉴定，我们成功建立了一株低成瘤性的MDCK单克隆细胞系。
通过形态观察、免疫组化染色和PCR等方法，确认该细胞系与传统MDCK细胞系在基因型和表型上存在一定差异。
低成瘤性细胞系具有更规则的形态、低迁移和侵袭能力，以及较低的增殖速率。
二、低成瘤性分析1. 形态学特征与传统MDCK细胞系相比，低成瘤性细胞系的细胞形态更规则，细胞间紧密排列，细胞大小均匀。
光镜下观察，细胞表面没有突起、伸展和口袋形成。
这些特征表明该细胞系在体内形成肿瘤的能力较低。
2. 体外功能特点通过胶原基质侵袭实验、Transwell迁移实验和MTT增殖实验，我们研究了低成瘤性细胞系在体外的功能特点。
与传统MDCK细胞相比，低成瘤性细胞系在胶原基质侵袭和细胞迁移能力方面表现较低，而在细胞增殖速率方面则较慢。
这些结果表明低成瘤性细胞系的肿瘤形成能力较差。
三、应用研究1. 肿瘤模型的构建在小鼠体内，将低成瘤性MDCK细胞系与其他传统MDCK细胞系注射到小鼠体内，观察两者在体内的生长和发展。
稳定表达猪δ_冠状病毒S1_蛋白CHO_细胞系的构建与鉴定
河南农业科学，2023，52（6）：131‐138Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi ：10.15933/ki.1004‐3268.2023.06.014稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO 细胞系的构建与鉴定孙雪珂1，2，丁培阳3，王思桥1，2，刘思源2，李明慧2，常泽杰2，陈艺兰2，李瑞琪2，张改平1，2，4（1.河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；3.郑州大学生命科学学院，河南郑州450001；4.江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）摘要：为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV ）S1蛋白的CHO 细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S 1转染至CHO 细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。
利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA 方法检测重组S1蛋白活性。
将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c 小鼠，通过间接ELISA 、间接免疫荧光试验（IFA ）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。
结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5mg/L 的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV 阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。
综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
关键词：猪δ冠状病毒；S1蛋白；CHO 细胞；稳定表达；蛋白质纯化中图分类号：S855.3文献标志码：A文章编号：1004-3268（2023）06-0131-08收稿日期：2023-01-14基金项目：河南省重大科技专项（221100110600）作者简介：孙雪珂（1997-），女，河南新乡人，在读硕士研究生，研究方向：动物免疫学。
永生化绵羊肺成纤维细胞系的构建及鉴定
永生化绵羊肺成纤维细胞系的构建及鉴定刘腾;董丹丹;张莉;朱杰;缪秋红;刘光清【摘要】The lentivirus system carrying hTERT gene was inserted to sheep lung fibroblasts (SLT) in order to establish an immortal cell line. Firstly, the recombinant lentiviral expression vector (pLOV-puro-hTERT) carrying hTERT gene was transfected into 293T cells. Subsequently, the primary SLT cells were infected with the rescued lentiviruses. The positive SLT cells expressing hTERT were selected with puromycin and examined with RT-PCR and Western blot. The results showed that hTERT gene was stably expressed in SLT cells, indicated that an immortalized SLT cell line had been established.%为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化.本研究利用PCR技术从pBabe-neo-hTERT中扩增hTERT基因,并利用infusion技术构建重组慢病毒表达载体pLOV-puro-hTERT.将重组慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,拯救出慢病毒颗粒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测传代细胞系中hTERT基因的转录和表达水平.筛选获得的阳性克隆,命名为SLT细胞系.SLT 细胞系连续传代后RT-PCR及Western blot 检测均显示hTERT稳定表达.本研究表明,我们成功构建了永生化绵羊肺成纤维细胞系.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2018(026)002【总页数】5页(P54-58)【关键词】绵羊肺成纤维细胞;人端粒酶逆转录酶;永生化【作者】刘腾;董丹丹;张莉;朱杰;缪秋红;刘光清【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241【正文语种】中文【中图分类】S852.659.3传代细胞系是开展动物病毒应用和基础研究的重要平台，然而有许多动物病毒缺乏能支持其稳定增殖的本源宿主细胞系，例如小反刍兽疫病毒和兔瘟病毒，严重阻碍了这些病毒的分子生物学研究和疫苗研制工作。
猪FSP27基因过表达脂肪细胞系的构建与验证
猪FSP27基因过表达脂肪细胞系的构建与验证潘洪彬;孙泽威;李春雨;赵素梅;黄英;杨明华;高士争;秦贵信【摘要】脂肪特异蛋白27 (FSP27)是一种新发现的定位在脂滴的蛋白质,在调控脂肪细胞内脂类贮存等方面起着重要作用.本试验用含有猪FSP27基因的慢病毒,感染鼠3T3-L1前脂肪细胞,建立猪FSP27基因过表达的前脂肪细胞系,为进一步研究猪FSP27基因在脂肪细胞中调控脂类代谢提供实验素材.根据猪的FSP27基因序列设计目的基因引物序列,并分别添加酶切位点NheI和AgeI及保护碱基,克隆到pMD18-T载体做NheI和AgeI双酶切,将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与GV341载体连接,转入293T细胞,包装成慢病毒,收集、浓缩、纯化病毒上清并用来感染3T3-L1前脂肪细胞,筛选稳定系,并检测感染效率和脂肪细胞表型变化.结果显示,猪FSP27基因过表达3T3-L1脂肪细胞中FSP27基因的相对表达量显著高于对照组(P＜0.01),在过表达脂肪细胞培养第8天,脂肪细胞形成脂滴数量明显多于对照组(P＜0.05),表明猪FSP27基因过表达3T3-L1脂肪细胞系构建成功.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2015(030)004【总页数】6页(P588-593)【关键词】猪;FSP27基因;过表达;3T3-L1细胞系【作者】潘洪彬;孙泽威;李春雨;赵素梅;黄英;杨明华;高士争;秦贵信【作者单位】吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118;云南农业大学动物科技学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明650201;吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118;广东农工商职业技术学院,广东广州510507;云南农业大学动物科技学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明650201;云南农业大学动物科技学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明650201;云南农业大学动物科技学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明650201;云南农业大学动物科技学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明650201;吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S828.133动物的脂肪组织在维持其机体的能量代谢平衡和糖、脂肪代谢稳态中起着重要作用，当脂肪代谢紊乱时会导致机体的过渡肥胖、脂肪肝等一系列代谢疾病。
细胞系实验报告
实验名称：细胞系建立与鉴定实验时间：2023年X月X日实验地点：实验室一、实验目的1. 掌握细胞系的建立方法。
2. 了解细胞系的鉴定方法。
3. 观察细胞系在不同培养条件下的生长情况。
二、实验原理细胞系是指经过体外培养后，能够在一定条件下无限增殖的细胞群体。
细胞系的建立通常从原代细胞开始，通过多次传代培养，使其在体外条件下保持稳定生长。
细胞系的鉴定主要包括细胞形态、染色体数目、细胞周期、细胞表面标志物等方面。
三、实验材料1. 原代细胞：小鼠胚胎成纤维细胞。
2. 细胞培养液：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素。
3. 试剂：胰蛋白酶、DNA染色剂、细胞周期检测试剂、细胞表面标志物抗体。
4. 仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、移液器、酶标仪等。
四、实验方法1. 原代细胞培养（1）取小鼠胚胎组织，剪成1mm³大小的组织块，用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液接种于培养皿中，放入细胞培养箱中培养。
（3）每日观察细胞生长情况，待细胞融合至80%时，用胰蛋白酶消化传代。
2. 细胞系建立（1）将原代细胞传代培养，观察细胞生长情况。
（2）当细胞生长稳定后，收集细胞，进行细胞系鉴定。
3. 细胞系鉴定（1）细胞形态观察：在显微镜下观察细胞形态，记录细胞大小、形状、密度等特征。
（2）染色体数目检测：将细胞进行DNA染色，制作染色体涂片，观察染色体数目。
（3）细胞周期检测：将细胞进行细胞周期检测试剂染色，观察细胞周期分布。
（4）细胞表面标志物检测：将细胞进行细胞表面标志物抗体染色，观察细胞表面标志物表达情况。
五、实验结果1. 细胞形态：细胞呈长梭形，细胞核较大，细胞密度较高。
2. 染色体数目：细胞染色体数目为2n=40。
3. 细胞周期：细胞周期分布为G1期、S期、G2期、M期，比例约为1:1:1:1。
4. 细胞表面标志物：细胞表面表达CD29、CD44等标志物。
六、实验讨论1. 细胞系建立过程中，应注意无菌操作，避免污染。
SF9细胞的建立及生物学特性的鉴定
2020年第8期 吉林畜牧兽医97·经验交流·JingYan JiaoLiuSF9细胞的建立及生物学特性的鉴定李来旭1，刘鑫莹1、潘添博2，李 睿31.重庆永健生物制品有限公司，重庆市 400000；2.重庆市合川区合阳城街道办事处畜牧兽医站，重庆市 400000；3.东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150000摘 要：自菌种保藏中心引进1株SF9细胞系，扩大培养，保存于液氮，建立SF9细胞基础细胞库。
对细胞进行形态、生长曲线、纯净性、染色体分析及致瘤性等特性进行研究。
结果表明，细胞呈圆球形；细胞呈S 型生长曲线；无细菌、支原体及外源病毒污染；细胞的染色体数目主要分布在170～190之间；无致瘤性。
关键词：SF9细胞系；基础细胞库；生物学特性杆状病毒表达系统(BEVS)被广泛用于疫苗开发及外源蛋白表达。
BEVS 因其操作简便、安全性及适用于大规模生产等优势, 具有极大的应用前景。
杆状病毒表达的受体为昆虫细胞，目前应用较广的细胞系为SF9细胞。
目前兽用疫苗领域针对猪圆环病毒、禽流感病毒、猪瘟病毒及鸡新城疫病毒等多疫苗在SF9 细胞中表达，极大程度上缓解了畜牧业的养殖风险和生产成本。
本研究自菌种保藏中心引进SF9细胞系，进行细胞生物学特性研究，为开展SF9细胞系及及传染性法氏囊VP2疫苗的研究与开发提供细胞资源和理论依据。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 细胞SF9细胞，购自美国菌种保藏中心ATCC。
1.1.2 试验试剂：SF9无血清培养基，胎牛血清，DMSO 购自美国gibco 公司；无菌培养基，重庆永健生物制品有限公司制备。
1.2 方法1.2.1 细胞传代：取对数生长期的SF9细胞，以900 r/min 离心5 min，弃去上清，用SF9无血清培养基稀释细胞密度为0.8×106个/mL 分装到三角培养瓶中。
培养转速为150 r/min，置27 ℃培养箱中培养。
1.2.2 基础细胞库的建立 取生长状况良的好SF9细胞进行离心，加入冻存液，吹打混匀细，调节细胞密度为1.2×107个/m L ，每只冻存管分装1 mL。
抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定
ｍ Ａｂ ｇ ｉ ｓ ｂ ｉ ａ ｖｙｉ ａ ａｎ ｔＶｉ ｒｏ ｈ ｒ ｅ
Ｈ Ｏ Ｇ ｉｉ， Ｈ Ｎ ｉ—ｕ Ａ ｈｎ ， Ａ Ｘａ —／ Ａ ｕ－ｅ Ｓ Ｅ Ｊｎｙ ，Ｃ Ｏ Ｚ ｅｇ Ｐ Ｎ ｉｏｙ ｊ
Ｉｓ ｔｔ ｏ Ｆ ｅｈ ａ ｒ Ｆｓ ｅ ｅ ｆ Ｚ ｅｉ ｇ Ｈ ｚ ｏ １ ０ １ ｎｔ ｕ ｆ ｒｓｗ ｔ ｉ ｒ ｓ ｏ ｈｊ ｎ ， ｕｈ ｕ ３ ３ ０ ， ｉ ｅ ｅ ｈｉ ａ
ｈ ｒ ｅ ｉＧＹＣ１ ０ — ．ｗｈ ｃ ｓ ｉｏａ ｅ ｒ ｍ ｈ ａ ｖ ｙ ８１ １ ｉｈ ｗａ ｓ ｌｔ ｄ ｆ０ ｔ ｅ
其 中某些 种类 会使 水产 动 物致病 ，给渔 业 生产造
ｄｓ ａ ｅ ｒａ ｅｌｗ ｃｏ ｋ ｒｉ Ｚ ｅｉｎ ｈｎ ｎ ２０ ． ｉ ｓ ｄ ｇｅ ｔｙ ｌ ｒａ ｅ ｎ ｈ ｊ ｇ Ｃ ｉ ｉ ０ ３ ｅ ｏ ａ ａ
成 损 失 ，其致 病 性 受 宿 主 的 生存 状 态 及 水 质 环 境 条
件 等综 合 因 素 的 影 响 较 大 ，属 条 件 致 病 菌 。其 中哈
维 氏弧菌 （ ｉｒ ｎ Ｖｂｉ ｏ
） 引起水 产 动物 发病 的一 种 是
重要病 原 ，能 引 起 鱼 、虾 等 多 类 海 水 养 殖 动 物 发
维普资讯
８ ３８
Ｃｈ ｎ ｅｌ ｏ Ｉ ｍ ｎ１２ ０ ２ （ ＩＳ １０ ８ ３ Ｓ Ｎ ０ ７— ７ ８细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志 （ ｉ ＪＣ ｌ Ｍ ｌ ｍ ｕ ｏ） ０７， ３ ９
— —
・
论著 ・
文章 编 号 ：１０ ８ ３ （ ０ ７ ０ ０ ３ ０ ０ ７— ７ ８ ２ ０ ） ９－ ８ ８— ３
８ ｗｅ ｋ－ ｌ ｅ － ｅ － ｄ ｆ ｍａ ｅ ＢＡＬ ／ ｃ ｒ ｏ ｌ Ｂ ｃ ｍｉｅ ｗｅ ｅ ｉ ｍｍ ｕ ｉ ｅ ｔ ａ ｈ－ ｎｚ ｄ ｗｉ ｐ ｔ － ｈ
细胞系的建立及鉴定
细胞系：
有限细胞系，人的正常组织多数可以建立有 限细胞系。如间充质来源的成纤维细胞，牙 髓细胞、牙髓干细胞、牙周膜细胞等
无限细胞系，永生化细胞系，肿瘤细胞系
细胞系/细胞的鉴定
细胞系的建立：
1.组织块方法
2.单层细胞法
原代培养
传代培养
大量扩增细胞后用于实验研究
使用前对细胞的组织特异性进行鉴定
形态学：多核细胞
牙髓干细胞：需多少个指标证实
干细胞表面标志：CD44,STROL 1,MUC18 ,alpha-SM actin
多潜能功能鉴定： 成骨细胞功能： 细胞碱性磷酸酶（ALP）活性检测：采用 Gomarri 法测定细胞内碱性磷酸酶的活性。
细胞体外矿化能力的检测：细胞经矿化诱导
剂处理后，用von Kossa染色法观察细胞在体外 形成矿化物沉积的能力。
除一般生物学性状外
1. 不死性，代次， 2. 细胞特性的改变： 3. 转染基因的鉴定：PCR, Southern blot ,
证实HPV-16/18 DNA 4. 成瘤性实验：免疫缺陷动物皮下细胞移
细胞悬液的制备
要求：5个浓度的细胞悬液分别是： 10000个；8000个；6000个；4000 个；2000个/100ul/孔 每个浓度3个复孔
丧失生长抑制性
当培养细胞所需任何一种关键性营养物质或生长因子 降到阈值以下时,正常细胞的生长即受到抑制,如异 亮氨酸,磷酸盐,上皮生长因子等。
转化的细胞对一些生长因子需求降低,或失去了对激素 和生长因子的需求，在营养不足的情况下可继续生 长,它们甚至可以杀死一些自身的细胞,以便在不可 能生存的环境下继续生长。或者由于某些转化产生 了生长因子类似物,为自身提供了生长因子。
克氏综合征胚胎干细胞的建系及鉴定☆
克氏综合征胚胎干细胞的建系及鉴定☆柯琼;黄敏珍;李伟强;王涛;项鹏【摘要】10.3969/j.issn.2095-4344.2012.36.009% 背景：克氏综合征是一种染色体异常引起的先天性疾病,对于该疾病发生和染色体异常的分子机制还未明确.目的：建立克氏综合征的胚胎干细胞系,并鉴定其是否具有正常胚胎干细胞特性.方法：胚胎培养至囊胚,经免疫外科法分离内细胞团培养获得人胚胎干细胞系.Giemsa染色鉴定核型,免疫荧光染色及体外、体内分化实验鉴定其生物学特性.结果与结论：从5个胚胎中获得1株克氏综合征胚胎干细胞系,该细胞系具有47,XXY核型.经鉴定该细胞具有碱性磷酸酶活性,并表达Nanog、OCT-4、SSEA-4、Sox2、TRA-1-60等胚胎干细胞特异标记物,可形成拟胚体,并在体内外可以分化为三胚层的细胞类型.该细胞株的建立为研究该遗传病的发病机制及性染色体的功能提供了一个良好的细胞模型.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(000)036【总页数】6页(P6696-6701)【关键词】克氏综合征;核型;人胚胎干细胞;细胞建系;生物学特性;染色体异常;干细胞【作者】柯琼;黄敏珍;李伟强;王涛;项鹏【作者单位】中山大学干细胞与组织工程中心,广东省广州市510080;解放军广州军区武汉总医院生殖医学中心,湖北省武汉市430060;中山大学干细胞与组织工程中心,广东省广州市510080; 中山大学中山医学院生物化学教研室,广东省广州市510080;中山大学干细胞与组织工程中心,广东省广州市510080;中山大学干细胞与组织工程中心,广东省广州市510080; 中山大学中山医学院生物化学教研室,广东省广州市510080【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言克氏综合征是一种由染色体异常引起的先天性疾病，主要表现为男性染色体核型中X染色体增多，其中约80%的细胞核型是47，XXY[1]。
稳定表达猪德尔塔冠状病毒N_蛋白的Vero_细胞系的建立及鉴定
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒（PDCoV ）核衣壳（N ）蛋白的非洲绿猴肾（Vero ）细胞系，本研究将PDCoV-N 基因克隆入慢病毒载体中，获得重组质粒pLVX-PDCoV-N ，利用慢病毒包装系统转染293T 细胞，包装成表达N 蛋白的慢病毒颗粒，慢病毒感染Vero 细胞，嘌呤霉素加压筛选目的细胞。
RT-PCR 扩增N 基因和测序表明细胞系基因组中存在N 蛋白编码序列，Western blot 和IFA 试验表明N 蛋白可在细胞系中稳定表达。
应用制备的细胞系对临床PDCoV 阳性血清样品进行检测，与ELISA 检测结果符合率达到100%。
本研究成功建立了稳定表达PDCoV N 蛋白的Vero 细胞系，为PDCoV N 蛋白生物学特性研究和PDCoV 的临床检测、流行病学调查奠定了基础。
关键词：猪德尔塔冠状病毒；核衣壳（N ）蛋白；慢病毒；稳转细胞系中图分类号：S858.28 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2024）01-0056-06Establishment and Characterization of a Vero Cell Line Stably Expressing NProtein of Porcine DeltacoronavirusQIAN Bingxu 1,2, BO Zongyi 1,3, BAI Xueyan 1, ZHANG Chengcheng 1, GUO Mengjiao 1, LI Mengjiao 1,LIAO Kai 1,2, XUE Feng 2, WU Yantao 1, ZHANG Xiaorong 1(1. College of V eterinary Medicine of Y angzhou University, Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Y angzhou 225000, China; 2. International Cooperative Laboratory for Animal Health and Food Safety, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 3. Joint International Research Laboratory of Agriculture and Agri-Product Safety, Ministry ofEducation of China, Y angzhou University, Y angzhou 225000, China)收稿日期：2021-08-23基金项目：扬州大学高端人才支持计划；江苏高校优势学科建设工程资助项目作者简介：钱炳旭，男，博士研究生，主要从事动物传染病防控研究；薄宗义，男，助理研究员，主要从事动物传染病防控研究通信作者：张小荣，E-mail：***********.cn稳定表达猪德尔塔冠状病毒N 蛋白的Vero 细胞系的建立及鉴定钱炳旭1,2，薄宗义1,3，白雪雁1，张成成1，郭梦娇1，李梦娇1，廖 凯1,2，薛 峰2，吴艳涛1，张小荣1（1.扬州大学兽医学院 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225000；2.南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室，南京210095；3.扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室，扬州225000）2024,32(1):56-61Abstract: To obtain a African green monkey kidney cell (Vero) line stably expressing nucleocapsid (N) protein of Porcine deltacoronavirus (PDCoV), the PDCoV N gene was cloned into a lentiviral vector to obtain the recombinant plasmid PLVX-PDCoV-N. Then, the recombinant plasmid PLVX-PDCoV-N was transfected into 293T cells by lentivirus packaging system and packaged into lentivirus particles for N protein expression. Vero cells were infected then with the lentivirus and the target cells were screened by puromycin. The results of RT-PCR and sequencing of PCR product showed the genome of the resulting Vero cell line containing N gene. The N protein that was stably expressed in the Vero cell line was confi rmed by Western blot and IFA. The Vero cell line was used to detect clinical PDCoV positive serum samples and the coincidence with the results of ELISA was 100%. The study successfully established a· 57 ·钱炳旭等：稳定表达猪德尔塔冠状病毒N 蛋白的Vero 细胞系的建立及鉴定第32卷第1期猪德尔塔冠状病毒（Porcine delta coronavirus, PDCoV）是近年来新发的冠状病毒，2012年在中国香港被首次报道[1]，2014年在美国首次出现大规模流行[2-3]。
优良细胞系的建立与筛选
• 2.小细胞团选育 • 即为在锥形瓶中对悬浮细胞集团进行培养。在培养期间使用目测筛选的方法对不符合条件的细胞
进行剔除。然后继续选育。例如黄酮苷细胞系的选育。
• 3.抗性选育 • 不同细胞对不同物质的抗性不同来进行筛选。一般用于选育某希望具有针对某种物质的抗性植株。 • 例如。薰衣草与长春花。
目测选育
青蒿
引例
• 青蒿素是一种医药用途广泛的植物提取物，今年的
中国本土诺贝尔生理奖获得者屠呦呦因发现青蒿素 在治疗疟疾上有很好效果而使它的作用进一步扩大。 但是青蒿素直接在植物中天然提取时，操作复杂， 产量低下。不过我们今天将要介绍的植物细胞工程 技术会解决这个问题，提高了生产青蒿素的效率， 让我们更加方便利用这一物质。
•
•
基本操作程序
• • • •
1.优良细胞系（细胞株）的建立与筛选 2.扩大培养 3.大型生物反应器的培养 4.次生代谢产物的提取：纯化与测定
•
1.建立筛选优良细胞系标准
优良细胞系的建立与筛选
•
• • • • • • • • • • • • • • • •
a,分散性好，适合大规模悬浮培养；b,均一性好，细胞大小、生理状态一致;
培养或连续培养等方法，生产代谢产物。
大型生物反应器 愈伤组织
第九章细胞系(株)的建立
2.细胞系的稳定性
细胞连续培养过程中主要指标有无明显变 异。使用稳定的细胞系能保证实验结果的准 确性、重复性。
3.细胞学特征
观察细胞系的形态和表达特征的数据及
其与来源细胞的差异。
4.微生物污染检查
有无病毒、细菌、真菌、支原体等污染。
大影响。
美 国 典 型 培 养 物 保 藏 中 心 （ Amercian
Type Culture Collection,ATCC ） 是 现 今 最
大的细胞库。
ATCC网址：/
ATCC接纳细胞必须检测的项目如下：
1.培养简历
2.培养液 3.冻存液 4.细胞活力 5.细胞形态类型
6.核型
7.无污染检验
8.物种检测
9.免疫检测 同时提供细胞系(株)建立者和检测者的 姓名。
中国国家专利局委托武汉大学建立的中 国典型培养物保藏中心（ China Center Type Culture Collection,CCTCC ） 保 藏 了 十 几 个
国家的专利培养物 1000 多株，非专利培养物
对
说明所使用的培养基血清，使用浓度、 并说明细胞生存的适宜温度、 CO2 浓度、 PH 值
等条件。有些细胞生长还需添加的一定附加
成分。
三、细胞系的鉴定
拟建立的细胞系或细胞株、除说明培养细 胞的来源外，还要对其进行一系列的鉴定。
1.检定细胞系的纯度
第九章 细胞系(株)的 建立与鉴定
一、基本概念
细胞系 细胞株
二、建立细胞系（株）的档案
建立细胞系或细胞株应对如下几方面加以说明：
1.培养细胞的来源 对拟建立的细胞系（株）应交代细胞供体所属物 种及供体的年龄、性别、取材的器官或组织。如是肿 瘤组织、应说明临床诊断结果、组织来源和病例号等。
RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定
RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定张丽;贾雄飞;牛华;冯悦;宋玉竹;张望龙;李胜营;吴明江;毛小琴【摘要】目的：建立有活性的蛋白激酶C受体1（RACK1）过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系（HUVEC），为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。
方法扩增RACK1基因的全长cDNA序列，并插入pIRES2-EGFP获得过表达载体pIRES2-EGFP-RACK1；同时，设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列，亚克隆至pGenesil-1得到相应的干扰载体；脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞，经G418筛选抗性细胞克隆， qRT-PCR 及 Western blot 鉴定 RACK1 mRNA 和蛋白的表达。
结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。
重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后，经G418筛选3周得到细胞抗性克隆，qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。
结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。
%Objective To establish several human umbilical vein endothelial cell ( HUVEC ) strains with over-ex-pression or low expression of receptor for activated C kinase 1 ( RACK1 ) , which will provide an effective tool for future studying the function of RACK1 in arrhythmia.Methods The full-length cDNA sequence of RACK1 gene was amplified and inserted into pIRES2-EGFP.At the same time, designed and synthesised complementary DNA sequences of 3 pairs of short hairpin structure and a pair of negative control sequence , then subcloned into the plas-mid pGenesil-1 .The HUVEC cells were transfected with these plasmids and screened by using G 418 .And the expression of RACK1 mRNA and protein in the cellswere assayed by qRT-PCR and Western blot , respectively . Results RACK1 eukaryotic expression vector and siRNA expression vectors of RACK 1 were constructed success-fully.After a 48 h transfection of HUVEC cells with the recombinant vectors and G 418 selection, the positive cell clones were obtained .qRT-PCR and Western blot showed that over-expression vector and interference vectors could effectively enhanced and knocked-down RACK1 expression in HUVEC strains .Conclusions HUVEC cell strains with over-expression and low expression of RACK 1 have been successfully established .【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】6页(P218-223)【关键词】RACK1;过表达;RNA干扰;HUVEC细胞系【作者】张丽;贾雄飞;牛华;冯悦;宋玉竹;张望龙;李胜营;吴明江;毛小琴【作者单位】昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室，云南昆明650500;解放军昆明总医院检验科，云南昆明650032;昆明理工大学附属医院云南省第一人民医院检验科，云南昆明650032;昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室，云南昆明650500;昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室，云南昆明650500;昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室，云南昆明650500;昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室，云南昆明650500;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学重点实验室，云南昆明650091;昆明理工大学附属医院云南省第一人民医院检验科，云南昆明650032【正文语种】中文【中图分类】Q291有活性的蛋白激酶C受体1(receptor of activated C kinase 1，RACK1)属于Trp-Asp 40(WD-40)重复蛋白家族，其蛋白序列与G蛋白β亚基具有高度同源性[1]。
稳定表达人ASB12的C2C12细胞系的建立及鉴定
第16卷第4期生命科学研究V01．16 No．4 2012年8月“fe S c ie n c e Research Aug．2012稳定表达人ASBl2的C2C12细胞系的建立及鉴定文斗斗1，周军媚邵，赵明一2，胡维新1，吴秀山2，王跃群妒(1．中南大学生物科学与技术学院，中国湖南长沙410013；2．湖南师范大学心脏发育研究中心，发育生物学教育部重点实验室，中国湖南长沙410081；3．南华大学药学与生命科学学院，中国湖南衡阳421001)摘要：AS Bl2 ho mo s ap ie ns a n ky f i n repe at and SOCS b o x c on ta in in g 121蛋白含有5个ANK f an ky fin repe a t qu en ce)序列和一个保守的SO CS(s up pr es so r of cy tok in e si gnaling)盒结构域，是ASBs human anky ri n re pe ata n d SOCSb ox cont ain in g protei n f am i l y。
A S B family)家族的成员．人类A骝12基因在成体心肌和骨骼肌组织中特异表达，是成肌分化的候选基因．利用阳离子聚合物转染技术将重组表达质粒pCMV．ta92B-ASBl2转染小鼠骨骼肌细胞系C2C12细胞，通过G418筛选、免疫荧光检测、RT．PCR分析、Western blotting检测建立了稳定表达ASBl2的细胞系C2C12．ASBl2，为研究ASBl2在骨骼肌发育及其相关功能提供有用的细胞研究模型．关键词：ASBl2；ANK结构域：SOCS box结构域：C2C12稳定细胞系中图分类号：Q28文献标识码：A文章编号：1007—7847(2012)04．0283．04Establishment and Identification of a Stable HumanASB12-Expressed C2C12Cell LineWEN Dou—doul，ZHOU Jun—mei2'3，ZHAO Ming—yi2，HU Wei—xinl，WU Xiu-shan2，WANG Yue-qun24(1．C oll ege of L乒Sciences and Technology,Central S o ut h University,Changsha410013，Hunan，China；2．Th e C en t er fo rH ea r t Developrncnt，Key Lab ofMOE ofDevele pment al Bio log y,H una n N orma l U n i v e r s i t y,C h a n g s h a 410081，Hu na n，Ch in a,． 3．Coll ege ofPharmacy and L咖Science，University ofSouth Chin a,He ng ya ng 421001，Hunan,吼i嘲Abstract：The human ASB12(Homo sap ie ns ankyrin repeat and SOCS box con ta ini ng 12)protein contains five ANK(ankyfin repea t sequence)domains and a SOCS(suppressor of cytoki ne signaling)box domain，be- lon gin g to the ASBs family．It was repose d that ASBl2especially e xp re ss ed i n skeletal and card iac muscles of adult tissues，which su gg es te d that ASB12 closely associa ted wit h skel eto n muscle development．To c o n．stru ct a stable ASBl2一expressed C2C12cell line，the fusion expres sio n plasmid pCMV—ta92B—ASBl2，which w a s identified by enzyme digesti on and s eq u e n c in g a nal ysi s，wa s transfected in t o C2C12cell by cationicpo ly me r．A ft er s cr e en in g cult ure by G418，the ex pr es sio n of ASB12w a s detected by immunofluoresc；nce，RT-PCR and Western—blotti ng．The C2C12cell line that expr ess in g A SBl2stably w a s establi sh ed successfully，which p rov id e a cell model for studyin g the molecular function of ASB12 in skeleton muscle developm ent．Key words：ASB12；ANK domian；SOCS box domain；C2C12stable cell line(L／fe Science Research，2012，16(4)：283。
海水鱼类细胞系建立、鉴定及应用
海水鱼类细胞系建立、鉴定及应用摘要:为了预防和控制大规模爆发的鱼类病毒性疾病,海水鱼类细胞系已成为研究病毒感染途径、感染机理以及研制病毒疫苗的重要体外培养体系。
本文详细总结了海水鱼类细胞系的原代培养步骤、培养体系和细胞系的建立、鉴定的实验步骤,并对海水鱼类细胞系在鱼类病毒学等研究工作中的作用加以综述。
关键词:细胞系海水鱼类鉴定病毒应用引言21世纪是海洋经济的时代,以海水鱼类养殖业为代表的第四次海水养殖浪潮的展开,给中国水产界带来了巨大的经济和社会效益。
但随着环境污染的日益加剧和养殖业的过度膨胀,各种病毒性疾病开始大规模爆发,给鱼类养殖业造成了巨大的经济损失。
为了查清鱼类病毒的感染途径和感染机理,从根本上预防和解决病毒病的传播,鱼类细胞系被广泛应用于鱼类病毒的分离鉴定、病毒病的诊断及病毒与宿主细胞的相互作用机理等研究,成为研究病毒学、细胞毒理学、细胞工程等多种学科的重要体外研究体系[1,2]。
自Wolf和Quimby建立世界上第一株鱼类细胞系——虹鳟鱼生殖腺细胞系[3]以来,鱼类细胞培养与建系研究发展迅速。
尽管淡水鱼类和溯河洄游性鱼类的细胞培养和细胞系建立发展较快,但目前建立并广泛应用的海水鱼类细胞系数量较少,主要来源于牙鲆[4]、大菱鲆[5]、鲈鱼[6]、真鲷[7]、石斑鱼[8-9]等几种经济鱼类,仍迫切需要建立多种细胞系用于多种学科的研究。
因此,本文就海水鱼类细胞系的建立、鉴定方法及其应用展开综述。
1 海水鱼类组织原代培养及细胞系建立的基本方法1.1 原代培养组织来源及培养方法海水鱼类组织原代培养及细胞系建立基本沿用了哺乳动物的细胞培养方法,与淡水鱼类细胞的培养方法也基本类似。
首先选取合适的组织进行原代培养。
根据目前研究显示,海水鱼的各种组织包括分化程度低,分裂潜能大的胚胎和幼鱼组织,以及成鱼性腺、肾脏、心脏、脾脏、鳔、鳍、吻端乃至肿瘤等组织,均可进行原代培养。
从鱼体获取目的组织消毒处理后,一般直接剪成1mm3的组织块于培养瓶中贴壁培养。
细胞系鉴定的比对方法
细胞系鉴定的比对方法
细胞系鉴定是一种用于确定细胞身份和纯度的过程，通常用于生物研究和药物开发。
鉴定方法主要包括核酸指纹图谱技术和DNA测序技术。
核酸指纹图谱技术是通过比对样本中的DNA指纹或序列与已知的参考数据库，以确认细胞系的身份。
此外，细胞系鉴定还包括检测各种生长因子的反应性，检查细胞的形态和生长特征，以及验证细胞系的污染情况，如是否受到病毒、细菌或其他细胞的污染等。
另一种方法是STR基因分型，这是一种利用STR基因座位上的等位基因通过PCR扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来进行区分的方法。
在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别，随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与专业的细胞STR数据库比对，从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。
以上内容仅供参考，如需获取更多信息，建议查阅细胞系鉴定相关论文或咨询细胞培养专家。
细胞系谱图的建立与应用
细胞系谱图的建立与应用细胞系谱图是研究细胞分化、发育和肿瘤发生机制的重要手段，也是基因治疗和药物筛选的关键工具。
它是研究细胞生物学的重要方法之一，可以揭示细胞在生长、分化和进化过程中的基础遗传学规律。
一、细胞系谱图的建立细胞系谱图是通过对细胞的传代培养，观察细胞的生长和形态变化，推断出细胞之间的分化关系和发育历程。
早期的细胞系谱图建立主要基于观察细胞的形态特征和红色素染色体的生长特性，这种方法叫做细胞形态观察法。
后来随着生物技术的发展，细胞系谱图建立也借助了更加精细的细胞分子生物学手段，如DNA微卫星和SNP分型技术。
另一个关键技术是单细胞随机扩增技术（Single-cell random amplification），可以从单个细胞中扩增出全局DNA序列信息。
结合单细胞测序技术，可以揭示个体化细胞基因组和表观基因组的特征，为建立更为精细的细胞系谱图提供了技术支持。
二、细胞系谱图的应用1. 研究细胞发育和分化过程通过建立各种组织和器官特异的细胞系谱图，可以在分子水平上揭示细胞在生长、分化和进化过程中产生的基础遗传学变化。
这些变化对于研究细胞发育和分化关系具有重要启示作用。
2. 研究肿瘤发生和治疗通过比较不同类型的肿瘤细胞系谱图，可以发现一些共同的分化路径和关键基因，深入揭示肿瘤发生和进展的发生机制，为新药研发和个体化治疗提供重要的信息。
3. 基因治疗的指导细胞系谱图可以为基因治疗提供重要的指导信息。
通过比较疾病和健康不同细胞系的基因组遗传变异和表观基因组变异，可以确定引起疾病的关键基因和分子目标，为定制个性化基因治疗方案提供基础。
4. 新药筛选的关键手段细胞系谱图可以为新药筛选提供关键手段。
通过将药品与不同细胞系一一对比，能够筛选出最有效的药物组合。
同时，也能降低药物的副作用和提高疗效。
三、未来的发展与展望随着生物技术的日益成熟，细胞系谱图定制化和精细化级别将会进一步提高。
基于多组学技术手段，最近出现了基于悬液单细胞转化的全生命周期单细胞图谱建立技术；同时，也有反式追踪和定量的细胞记录等技术的出现，逐步实现了对于生物表型的全面量化和高时空分辨率记录，将会进一步推动细胞分化和疾病研究领域的进展。
细胞系的建立及鉴定共28页文档
16、云无心以出岫，鸟倦飞而知还。 17、童孺纵行歌，斑白欢游诣。 18、福不虚至，祸不易来。 19、久在樊笼里，复得返自然。 20、羁鸟恋旧林，池思故渊。细胞系的建立及鉴定
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2012.2.28
细胞系：
有限细胞系，人的正常组织多数可以建立有 限细胞系。如间充质来源的成纤维细胞，牙 髓细胞、牙髓干细胞、牙周膜细胞等
无限细胞系，永生化细胞系，肿瘤细胞系
细胞系/织块方法
2.单层细胞法
原代培养
传代培养
大量扩增细胞后用于实验研究
密度依赖性抑制
正常贴壁性细胞的增殖率,随着每单位基质面积 内的细胞群体的局部密度增加而下降。这一现象称 为密度依赖性抑制(density dependent inhibition) 。或生长接触抑制(contact inhibition of growth),但二者并不等同。当一个对密度依
赖性抑制敏感的培养细胞达到某种密度，即所谓饱和密度时便停 止生长。此时细胞停止增殖，但并不死亡。这种抑制可以由于液 体培养基中的营养物质耗尽,生长抑制物质的累积所引起。
影响移植瘤生成的因素
（1）植入细胞与宿主的免疫不相容：如接种 的培养细胞来自纯种动物，接种时产生的抗 原变化可能会产生致癌的阴性结果。可以将 细胞接种到 “不受免疫影响”的部位（如 眼前房） 用射线或免疫抑制剂抑制宿主的免疫反应； 将细胞接种到免疫反应有先天性遗传缺陷的 动物：（如无胸腺裸小鼠）。
使用前对细胞的组织特异性进行鉴定
成骨细胞：没有唯一的特异性标志物 需数个指标联合证实
表面标志： 表达ALP。 Gomarri 法
合成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨钙素、骨粘 蛋白、骨桥蛋白等骨基质蛋白。
组织功能： 体外形成矿化结节。 von Kossa染色法
体内成骨。免疫缺陷鼠皮下移植。
破骨细胞：唯一特异性标志物
动物接种形成的肿瘤应进行组织学、染色体 及其它生物学标志的检查并与原接种细胞进 行比较。
致瘤性的判断
移植瘤是判断细胞性质的关键步骤。 首先，移植瘤的组织形态应与原肿瘤组织一
致。但有例外，细胞群体的性质可以与植入 前不同，因为在植入的细胞中，只有特殊变 异的细胞具有致瘤性，这些变种可能原来就 存在于植入群体内，也可能是植入后产生的。 在这种情况下可以确认接种的致瘤性。
目前，多用裸小鼠评价培养细胞的致瘤性。
（2）植入部位 ，例如，将瘤细胞接种到小鼠 躯干接近头部位置的皮下，生瘤的阳性率及 生长的速度比植到尾部高2－4倍。
（3）植入部位微环境的潜在因素，某些细胞 只有在植入部位找到最佳的微环境时才形成 肿瘤。
生瘤性与细胞其它性质的关系
细胞在基质上铺展的面积与生瘤性有关。 微丝束的结构破坏。许多生瘤细胞系均有大
破骨细胞含有丰富的酸性磷酸酶和抗酒石酸 磷酸酶（tartrat resisitant acid phosphatase,TRAP），TRAP染色阳性是 破骨细胞的重要标识。另外破骨细胞表面有 降钙素（calcitonin）受体，也可以作为标 志物。
形态学：多核细胞
牙髓干细胞：需多少个指标证实
干细胞表面标志：CD44,STROL 1,MUC18 ,alpha-SM actin
量的微丝束变化，它与形态转化有关。 停泊依赖性与生瘤性联系最密切。
在动物体内不形成肿瘤的细胞系，在半固体 培养基内形成集落的能力也低；与之相反， 而大多数能在动物体内生瘤的细胞系，形成 集落的效率也高。
2．生长参数和细胞行为的变化
丧失停泊依赖性（anchorage dependency）
一般情况下，原代成纤维及上皮细胞悬浮 培养时不能增殖，它们只有铺展在固体基质 上才能增殖。在肿瘤性演化过程中，相当一 部分的细胞群体获得在悬浮状态形成集落的 能力，并不需贴附在基质上。
恶性转化细胞对密度依赖性抑制的敏感性在肿瘤演 化的过程中自动丢失。
3．获得永生性
正常细胞原代培养物经过数次传代就逐渐停止 增殖。在肿瘤性演化过程中，细胞可能获得生长无 限代数的能力。永生性是肿瘤演化的一个特征。
成纤维及上皮细胞的原代培养经过初期的适应 培养条件之后，便进入较稳定的生长时期，生长速 度逐渐下降，进入退化期即衰老期。细胞系的寿命 差别很大，取决于培养细胞来自的动物种属。
动物肿瘤移植实验证实，肿瘤结节在新宿主身上多 次传代之后仍具有原来肿瘤的主要特征，包括形态、 生化、抗原及细胞遗传的标志。所有恶性肿瘤的转 移瘤结节的细胞都具有与亲代原发病损类似的形态 学及生物学性质。
培养中的肿瘤细胞特性
1．致瘤性： 培养的肿瘤细胞移植到敏感动物后，可获得 形成肿瘤的能力。证明细胞在体外能经过类 似于体内肿瘤发生过程中出现的变化。
多潜能功能鉴定： 成骨细胞功能： 细胞碱性磷酸酶（ALP）活性检测：采用 Gomarri 法测定细胞内碱性磷酸酶的活性。
细胞体外矿化能力的检测：细胞经矿化诱导
剂处理后，用von Kossa染色法观察细胞在体外 形成矿化物沉积的能力。
牙周膜干细胞：
干细胞表面标记物: 多潜能功能－－组织细胞分化及功能鉴定
3. 体外无限生存的能力: 细胞系连续传代60或80代次。
肿瘤细胞的生物学特征
干系细胞：每个肿瘤内都含有一个或几个具有相对 稳定特性的自我保持的（Selfmaintaining）细胞 系。肿瘤的生长就是这些细胞系的增殖；
非干系细胞：除了干系瘤细胞，肿瘤还具有失去自 我保持能力的细胞的后代，可称为“肿瘤的非干系 细胞”。
丧失生长抑制性
当培养细胞所需任何一种关键性营养物质或生长因子 降到阈值以下时,正常细胞的生长即受到抑制,如异 亮氨酸,磷酸盐,上皮生长因子等。
转化的细胞对一些生长因子需求降低,或失去了对激素 和生长因子的需求，在营养不足的情况下可继续生 长,它们甚至可以杀死一些自身的细胞,以便在不可 能生存的环境下继续生长。或者由于某些转化产生 了生长因子类似物,为自身提供了生长因子。
分化为脂肪细胞： 油红O 染色阳性
肿瘤细胞系的生物学鉴定
肿瘤细胞系建立后,要对其生物学性状进行 鉴定,以便日后的研究有可比较的科学依据
肿瘤细胞系的基本特性
1.细胞系的来源符合原供体组织的病理学诊断 原供组织的组织病理形态； 动物接种肿瘤组织的组织形态；
2. 细胞系具有肿瘤细胞的特性: 异种体内移植致瘤性