高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点梳理

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2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数总结

实例启示
1、在实验设计时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。
2、在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
（三）实验基本原则 1、平行重复原则
实例分析2
想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异如此之大，请分析原因可能有哪些？
3、单一变量原则
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
（二）微生物计数 3、统计菌落数目——稀释涂布平板法
酵母菌的菌落特征：菌落形态特征与细菌相似，但比细菌大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，多数不透明，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落颜色单调，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。
思考2：统计的菌落数往往比活菌的际数目高还是低，为什么？
低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？
实例分析1
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。
（一）筛选菌株
1、实验室微生物的筛选原理（P21）

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 +H2O
脲酶 NH3 + CO2
3、常见的分解尿素的微生物
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、导
课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养条件：（1）为培养的微生物提供合适的营养和环境条件
（2）确保其他微生物无法混入
一般过程：
配制培养基接种培养观察
课题背景
1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
2、如何计算每克样品中的菌落数？ 3、设置对照试验的目的是什么？ 4、在做分解尿素细菌的筛选与统计菌落数目的试验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约230 个菌落，但其他同学在相同的稀释倍数下只选择出大约100个菌落。试分析原因并设计探究方案，根据结果得出结论。
五、评
实验注意事项
二、思
首先观看教学视频，然后独立自主完成导学案上的“实验设计”。
三、四：议、展
小组合作探究探究一、筛选菌株的培养基
1、什么是选择培养基？ 2、请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实例。
三、四：议、展三、议、展
小组合作探究探究二、统计菌落数目和设置对照
1、如何对样品中细菌进行计数？
能在以尿素为唯一氮源的选择培养基中生长的细菌一定是可以分解尿素的细菌吗？如果不是还需怎样处理？

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ A ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状，与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 ( D) A.CO2和N2 B.葡萄糖和的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 ④涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。
5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
思考与讨论
在微生物培养过程中，为什么每隔24h统计一次菌落数目？菌种鉴定的依据是什么？答：不同种类的微生物，往往需不同的培养温度和培养时间，每隔24h统计1次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。
4.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数

【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1.分离菌株的想法(1)自然界中目的菌株的筛选① 依据：根据其对生活环境的要求，在相应的环境中寻找。

②实例：pcr技术过程中用到的耐高温的taqdna聚合酶，就是从热泉中筛选出来的taq细菌中提取出来的。

（2）实验室筛选目标菌株①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.ph等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

培养基中分解尿素微生物的选择原则：培养基的氮源为尿素。

只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，尿素被用作氮源。

缺乏脲酶的微生物不能分解尿素，并且由于缺乏氮源而不能生长、发育和繁殖。

因此，可以用这种培养基选择分解尿素的微生物②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。

配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

2.菌落数的计算方法(1)稀释涂布平板法（间接）① 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。

②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。

（2）显微镜直接计数3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。

4.实验过程土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定知识发展：1、taq细菌是耐高温的微生物。

2.培养基对微生物有选择性作用。

在配置培养基时，根据某一种或某一种微生物的特殊营养要求，添加一些物质或排出一些营养物质，以保持其他微生物的生长，或根据某些微生物对某些物理和化学因素的抗性，向培养基中添加化学物质，以筛选未确定的微生物。

这种培养基称为选择性培养基。

3、测定微生物数量的方法：① 直接计数法：常用显微镜直接技术，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞细菌的计数。

②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

是
分离只生长尿素尿素细
养基
细菌菌
对照组
牛肉膏蛋白胨培养
基
判断该培生长多
是
养基有无种微生选择性物
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征
缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。
or ?
水生栖热菌Taq
Taq酶
因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有
Taq细菌被筛选出来。
1.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境要求，到相应的环境中去寻找。
每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等。
三、操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间
石油分解菌
纤维素分解菌尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，
同时抑制或阻止其他微生物生长。
3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点梳理

高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点梳理社会的进展，人类文明的进步，个人一辈子活质量的提高，都要靠生物学的进展和应用。

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1.培养基一样都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。

2.培养基的分类：按照物理性质能够分为、、按照化学性质分为和;按照用途分为和。

3.尿素能够为农作物提供肥，然而只有被分解成之后，才能被植物吸取利用。

4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个要紧目的是：(一)选择菌株1.原理: 人为提供有利于生长的条件(包括等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

2.方法：选择培养基(1)定义：在微生物学中，将承诺的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

(2)配制的的依据：①在培养基中加入某种化学物质能够做到这一点，加入能够分离出酵母菌和霉菌。

加入高浓度的食盐可得到。

那个地点的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。

②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。

如培养基中缺乏源时，能够分离固氮微生物。

③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离成效。

④改变微生物的培养条件，也能够达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。

(二)统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有和。

(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能估量出样品中大约含有多少活细菌。

为了保证结果准确，一样设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一样用菌落数而不是活菌数来表示。

(三)实验设计实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时刻安排等的综合考虑和安排。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》知识梳理

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．研究培养基对微生物的选择作用。

2．进行微生物数量的测定。

一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的农业____肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成____之后，才能被植物利用。

土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成______。

（1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的______生长的条件（包括营养、______、pH等），同时______或______其他微生物生长。

（2）选择培养基：在微生物学中，将允许________的微生物生长，同时______或______其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

2．统计菌落数目（1）常用来统计样品中______数目的方法是________。

即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的________。

通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目____。

这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

因此，统计结果一般用________来表示。

（2）____________也是测定微生物数量的常用方法。

（3）细菌的数目还可以通过______法来测定。

例如，测定饮用水中大肠杆菌的数目，可将________的水过滤后，将滤膜放到________培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现____色，可以根据培养基上________的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。

3．设置对照（1）设置对照的主要目的是排除实验组中__________对实验结果的影响，提高实验结果的________。

（2）对照实验是指除了________的条件以外，其他条件都______的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

【高中生物】高二生物下册第二单元知识点：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【高中生物】高二生物下册第二单元知识点：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数社会的发展，人类文明的进步，个人生活质量的提高，都要靠生物学的发展和应用。

以下是生物网为大家整理的高二生物下册第二单元知识点，希望可以解决您所遇到的相关问题，加油，生物网一直陪伴您。

本实验的目的是利用选择性培养基分离土壤中的尿素分解细菌，并学会计算每克土壤样品中的尿素分解细菌数量。

这个实验比主题1更复杂。

学生不仅要了解更多关于微生物培养的知识，而且要有许多实验工具和复杂的操作步骤。

如果老师直接告诉学生实验方法和步骤，学生不易记忆操作步骤，没有独立思考，导致实验中出现问题。

很难让学生自己设计实验。

在这里，我们应该充分发挥教师的引导作用，运用提问的教学策略。

在对教师提出的问题进行思考和讨论的过程中，学生应逐步明确实验方法，尝试设计实验方案，并在实验课后通过讨论和交流课对自己和他人的实验进行评价。

1，引导学生理解相关知识通过阅读教学材料，学生可以了解土壤中尿素分解菌的代谢特性。

它们可以分解尿素，因为这些细菌可以分泌脲酶，在脲酶的催化下可以产生二氧化碳和氨。

教师举例帮助学生了解不同的环境条件，选择不同种类的微生物生存。

例如，耐热细菌生活在温泉中，耐热细菌将被消灭；制作泡菜时，泡菜罐中的厌氧环境会选择乳酸菌等厌氧菌，而需氧菌则无法存活。

如果你想分离土壤中分解尿素的细菌，你可以使用什么方法？指导学生分析尿素培养基的组成，以及该培养基配方是否对微生物有选择性影响？通过对以上问题的分析和讨论，帮助学生树立选择性媒体的概念。

2，引导学生理解稀释涂布平板法计数细菌数目的原理问这个问题：如果你想知道每克土壤中有多少细菌能分解尿素？我们该怎么办？此问题的目的是要引出计数细菌数目的方法。

问题本身比较开放，学生会有多种设想，不妨让学生谈谈。

在多种设想中，引出本实验要训练学生的细菌计数方法稀释涂布法。

引导学生回忆课题1是如何通过稀释涂布平板法获得单个菌落的，培养基上的单个菌落就代表稀释液中的一个活菌，因此计数平板上的菌落数就能推知样品中的细菌数目。

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

3.重复组的结果是否一致
如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。
六、课题延伸
能分解尿素的细菌的鉴定
鉴定的原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基
的pH升高。鉴定方法：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。
三、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。Leabharlann 2.样品的稀释操作是否成功
如果得到了2个或2个以上菌落数目在 30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？如果有，又是如何进行筛选的？
有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。
二、统计菌落数目
原理
运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。
统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30 ～300的平板进行计数。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

目，最后选取数目稳定时的记录作为结果
(4)计数：当菌落数目稳定时，取同一稀释度下的3个平板进行计数，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目
2．菌种鉴定 (1)原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，使培养基的碱性增强。 (2)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿
圆褐固氮菌生活于土壤中，能以氮气作为氮源。请探讨、交流实验室分离圆褐固氮菌的方法。
提示：配制无氮培养基作为选择培养基。
[跟随名师·解疑难] 1．选择培养基的类型及作用 (1)在培养基中加入某种化学物质。如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入指的是在培养基的培养成分的基础上加入。 (2)改变培养基中的营养成分。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。 (3)改变微生物的培养条件。如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
[自读教材·夯基础]
1．实验设计流程
1土壤①土壤要求：富含有机质，pH接近中性且潮湿
取样
②取样部位：距地表约3～8
cm的土壤层
①稀释原因：样品的稀释程度直接影响
平板上生长的菌落数目
2样品稀释②稀释标准：选用一定稀释范围的样品
液进行培养，保证获得菌落数在 30～300 之间便于计数
①培养：不同种类的微生物，往往需要 3培养与观察不②同观的察培：养每温隔度24和h统培计养一时次间菌落数
1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。
2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌数目低。

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结高中同学现代意识的培育，对于当前新课改下的高中生物教学来说，是一个特别有效的途径。

下面是小偏整理的土壤中分解尿素的细菌的分别和计数生物选修一高考考点总结，感谢您的每一次阅读。

土壤中分解尿素的细菌的分别和计数生物选修一高考考点总结(1)土壤取样：①土壤取样缘由：土壤有“微生物的自然培育基”之称。

同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

②要求：富含有机质(富含有机质的土壤层中微生物数量大、种类多)，酸碱度接近中性且潮湿(土壤中的微生物大约有70%~80%是细菌，此环境相宜细菌的生长)的土壤。

③取样部位：先铲去表层土3cm左右，再取距地表3~8cm的土壤层，将样品装入事先预备好的信封中。

(取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过灭菌)(2)制备培育基：以牛肉膏蛋白胨培育基作为对比组，以尿素为唯一氮源的培育基作为试验组，用来推断选择培育基是否具有选择的作用。

(3)样品的稀释与涂布平板：①取样稀释：在火焰旁称取土壤10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振荡使土样与水充分混合。

将细菌分散，制成101倍土样稀释液。

用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL 土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成102倍土壤稀释液。

依次类推，制成103、104、105、106、107倍土壤稀释液。

(稀释缘由：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目)②取样涂布：根据由107～103稀释度的挨次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。

根据浓度从107~103的挨次涂布平板，不必更换移液管(涂布时稀释倍数的选择：选用肯定稀释范围的样品液进行培育，保证获得菌落数在30~300之间，便于计数;如测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板涂布培育;测定土壤中放线菌的数量时，一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板涂布培育;测定土壤中真菌的数量时，一般选用102、103、104倍的稀释液进行平板涂布培育)。

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
（一）筛选菌株
3、选择培养基
根据微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不
同，配制的允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他
种类微生物生长的培养基。
本课题使用的选择培养基
物理特性：固体培养基功能特性：选择培养基
例：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是
(D )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和261，取平均值238
C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
（二）统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
（2）常用Байду номын сангаас法：稀释涂布平板法。
葡萄糖
10.0g
不缺能乏分氮解源尿的素培，养缺基乏—氮—源分而离不固能氮生微长生物
尿素琼脂
1.0g 15.0g
发在育无繁氧殖条，件而下受的到普抑通制培，养所基以—用—此分培离厌氧型将和上兼述性物质厌溶氧解型后微，用生蒸物馏水
养基就能够选择出分解尿素的微生物。
定容到1000mL。
例：下列能筛选出分解尿素的细菌的培养基是( A )
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响因素吗？

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数核心知识要点1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

2．实验流程(1)土壤取样→富含有机质的土壤表层土(2)样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板(3)接种→用稀释涂布平板法接种(4)培养⎩⎪⎨⎪⎧细菌：30～37 ℃培养1～2天放线菌：25～28 ℃培养5～7天霉菌：25～28 ℃培养3～4天(5)观察→根据菌落的特征区分微生物 (6)计数→统计菌落的数目(7)计算→根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数]”进行计算【重难详解】1．选择培养基四种常见制备方法或实例方法一加入某些特定物质2．两种计数方法的比较【解析误区】1．“选择菌落数在30～300的平板”的两个提醒用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。

解题时易出现以下误解： (1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。

错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。

(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。

②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。

可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300之间”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。

2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素
5、培养基选择分解尿素的微生物的原理
这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
计算公式：每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
耐高温的酶
寻找
耐高温生物体
寻找
耐高温环境（热泉、火山口）
1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的Taq细菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。说明：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
筛选原因：因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微
生物，使耐热的Taq细菌保留下来。
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力
与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数

尿素分解细菌的纯培养
尿素分解细菌的纯培养是分离尿素分解细菌的关键步骤，通过选择性培养基，将土壤中的尿素分解细菌分离出来，获得单一菌落。
培养基中添加尿素作为唯一氮源，以筛选出能够分解尿素的细菌。同时，培养基中还应添加适量的其他营养成分，以满足尿素分解细菌的生长需求。
尿素分解细菌的计数方法
尿素分解细菌的计数可以采用菌落计数法或细胞计数法。菌落计数法是通过培养基上形成的菌落数量来计算尿素分解细菌的数量，而细胞计数法则采用显微镜直接观察和计数细胞。
菌落计数法操作简便，但可能存在菌落重叠和无法区分死菌和活菌的问题。细胞计数法虽然准确度高，但操作较为复杂，需要使用显微镜和专业的细胞计数器。
尿素分解细菌的计数实验步骤
将土壤样品稀释后涂布在含有尿素的培养基上，然后进行培养。
对筛选出的尿素分解细菌进行纯培养，并进行进一步的生理生化实验和分子生物学鉴定，以确定其种类和特性。
采集时间
采样方法
选择适宜的时间采集土壤样品，通常在春季或秋季进行，此时土壤中的微生物活性较高。
采用多点采样法，在不同地点和深度采集土壤样品，以获得更全面的土壤信息。
采样地点
选择具有代表性的土壤区域进行采样，如农田、森林、草地等，确保采集的土壤样品具有广泛性和代表性。
分离尿素分解细菌的方法
生长特性
这些细菌在尿素培养基上生长良好，表现出对尿素的良好分解能力。
尿素分解细菌的记数结果
菌落计数
通过菌落计数法，对分离出的尿素分解细菌进行数量统计。
数量分布
在土壤的不同区域，尿素分解细菌的数量分布存在差异。
生长条件
部分尿素分解细菌对生长条件较为敏感，如温度、 pH值等。