细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案

细胞生物学实验考试样题

一、填空题（2分/每空，共30分）

1、洗液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水组成。

2、1640培养基包括RPMI1640培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。

3、鉴别活细胞的染液是0.4%台盼蓝溶液;鉴别细胞核的染液是甲基绿-派洛宁染液；

鉴别线

粒体的染液中性红-詹纳斯绿染液。

4、细胞核分离的基本步骤是组织匀浆、离心、纯化、鉴定。

5、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是1%Triton-100。

二、简答题（5+5+10共20分）

1.线粒体在分离提取过程中，为什么要在0~4℃中进行？

答：①为了保持组分的生理活性;

②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活

2.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？

答：①确保实验是在等渗条件下进行；

②防止物质的进出；

③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。

3.细胞的计数步骤和方法。

答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞

无色，死

细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。

Ⅰ：每毫升原液细胞数=4个大格细胞总数/4*100*稀释倍数

Ⅱ：细胞存活率(%)=(细胞总数-死细胞数)/细胞总数。

细胞生物学实验思考题答案

实验一利用各种显微镜观察细胞形态、结构

1、简述显微镜的主要结构和操作要领。

普通生物显微镜由3部分构成：

①照明系统：包括光源和聚光器。

②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。

③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等使用（一）、观察前准备

检查：底座右侧的光源亮度旋钮是否在“1”位置，即顺时针选到最底位。

开机：①.打开后座主电源开关——绿色按钮

②打开后座CCD电源开关——红色按钮

白平衡调整：不放切片，在10倍物镜下将电源调整到最亮，然后按底座右方的白平衡按钮（红色）3－5秒之后将光源亮度调回到适中状态。

（二）、观察操作

放上切片，将光源调到自己习惯的亮度。

视度补偿：调节目镜双筒找到自己的瞳距，此时两眼镜下的图象重合在一起，横拉板上的数字（例如：64）就是自己的瞳距，然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置。

调焦：将绿色光标移至视野中央，开始观察，如需提问，按呼叫按钮（三）、下课时的操作

①.将光源亮度调到最低“1”刻度。

②.关掉红色CCD电源开关，再关绿色主电源开关。

③.套上显微镜套。

④.耳机及凳放整齐。

2、分析在使用低倍镜、高倍镜和油镜时，对光亮度的要求。

由于从低倍镜到高倍镜的时候视野变暗，物像变大，细胞数目变少，所以光亮度应该调高，但最主要的还是应以自己的视觉舒适为主。

3、分析聚光镜在成像质量中的作用。

聚光镜是在照明光路中的重要组件，用于集中从光源来的光线，是被观察的标本得要明亮和均

匀的照明，正确使用聚光镜系统对于发挥显微镜的分辨率和增强像的反差有很大的作用。

实验二显微摄影

1.、要想得到一张完美的显微摄影照片，应注意哪些方面的问题，主要关键是什么？

要获得一张好的显微摄影照片，必须注意满足以下几个条件：1制作清晰的标本片，其中组织切片应厚薄适度，染色片不应有多余的染料等。2选择性能优良干净的载玻片和盖玻片。3使用高性能的物镜（最好用复消色差的平场物镜）和聚光器。4采用Kohler照明法。5选择好合适的拍摄胶片。⑥拍摄时应准确地聚焦和选择合理的曝光时间。⑦正确的冲印方法。关键点：为求得高分辨率的显微影像，须选用复消色差物镜与摄影专用目镜或平周目镜配合。显微摄影的照明方法，分为透射照明、落射照明（垂直照明）和明视野与暗视野照明。同时还应注意各种滤色片的选用。

2、结合数码互动显微镜摄影操作，写出操作工程、拍摄关键点以及注意事项。

过程：用数码显微镜仔细观察样品；利用实验台前面的操作面板上的呼叫按钮请求拍照；得到教师允许后，按操作面板上的拍照按钮进行摄影；将所拍摄到的照片挑选后打印出来。拍摄关键点：；注意事项：每次更换装片时要进行白平衡的调整；要注意对光线的调整；要注意屈光度的调整；摄像时要以从目镜观察到的图像为准。

实验三细胞的亚显微结构观察

1. 比较光镜与电镜工作原理的区别。

电子显微镜的高分辨率主要是因为使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源，波长一般小于0.1nm,由于光源的不同，又决定了电镜和光镜的一系列不同点：电镜使用电磁透镜聚焦，光镜使用玻璃透镜聚焦，电镜筒中要求真空而光镜筒中不要求真空，图像需要用荧光屏来显示或用感光胶皮做记录，光镜成像时利用样本对光的吸收形成明暗反差和颜色变化而电镜利用电子的散

射和透射形成明暗反差，光镜的分辨率为200nm,而电镜的分辨率为0.2nm.

2、分析扫描电镜与透射电镜的主要异同点。

结构差异：主要体现在样品在电子束光路中的位置不同。透射电镜的样品在电子束中间，电子源在样品上方发射电子，经过聚光镜，然后穿透样品后，有后续的电磁透镜继续放大电子光束，最后投影在荧光屏幕上；扫描电镜的样品在电子束末端，电子源在样品上方发射的电子束，经过几级电磁透镜缩小，到达样品。TEM:电子的穿透能力很弱，透射电镜往往使用几百千伏的高能量电子束，但依然需要把样品磨制或者离子减薄或者超薄切片到微纳米量级厚度SEM: 几乎不用制样，直接观察；透镜成像的时候是利用电子在样品表面穿透后剩余电子在荧光屏上成像而扫描电镜需要激发出二次电子收集的是二次电子；扫描电镜为了使样品能够激发出二次电子标本在固定脱水后需要喷上一层重金属膜，重金属在电子的轰击之下发出次级电子信号。相同之处：固体，尽量干燥，尽量没有油污染，都是电真空设备，使用绝大部分部件原理相同。

实验四细胞膜的渗透性

1. 讨论溶血实验在研究中应用的可能性。

比如溶血空斑实验，溶血空斑实验是体外检测B淋巴细胞的一种方法，即将经绵羊红细胞（SRBC）免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。由于溶血空斑实验具有特异性高，筛选力强，可直接观察等优点，故可用做判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。有时在提红细胞膜蛋白时要用到，先用低渗溶液让红细胞胀破，高速离心收集、纯化膜蛋白。