粗多糖检测方法
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
多糖含量的测定
多糖含量的测定1.原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2.适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5mol/LNaOH溶液：100gNaOH加蒸馏水稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50ml，加水50ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50ml，加入10ml铜应用溶液，10ml2.5mol/LNaOH溶液，混匀。
（6）1.8mol/LH2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
5.操作方法5.1样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml（V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml（V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
多糖检测方法
多糖的检测方法关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。
一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。
这种方法是科研级的多糖测定。
另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。
注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。
但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。
包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。
但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。
粗多糖测定多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。
一般说来，比色法的优点是灵敏度高，样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。
所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。
滴定法1.样品预处理取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。
粗多糖含量测定方法学验证
粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药 (1)二、方法的研究 (2)1.检测波长的测定 (2)2.样品及对照制备方法 (2)三、方法学验证 (3)1.线性 (3)2.精密度实验 (4)3.稳定性实验 (4)4.重复性试验 (5)5.中间精密度实验 (5)6.准确度试验 (6)芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；(2) 离心管：50ml；(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。
(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
3、试样v1.0 可编辑可修改(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。
[课程]资料-多糖含量测定的各种方法优缺点
![[课程]资料-多糖含量测定的各种方法优缺点](https://img.taocdn.com/s3/m/6e32b30a58eef8c75fbfc77da26925c52cc59139.png)
苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
2）离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
4）定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
定容至25毫升的容量瓶中。
阿胶口服液中粗多糖含量测定方法的研究
阿胶口服液中粗多糖含量测定方法的研究刘春霖ꎬ吴晓云ꎬ谢强胜ꎬ高天阳ꎬ董蓬(山东省食品药品检验研究院ꎬ山东省食品药品安全检测工程技术研究中心ꎬ山东济南２５０１０１)摘要:目的㊀建立苯酚－硫酸法测定阿胶口服液中粗多糖的含量ꎮ方法㊀采用沉淀蛋白质法使相对分子质量大于１００００的高分子物质与阿胶分离ꎬ８０％(Ｖ/Ｖ)乙醇溶液沉淀粗多糖ꎬ比色法测定ꎮ结果㊀葡聚糖含量在１０.８~１７２.８μｇ范围内ꎬ线性关系良好ꎮ加标回收率在９７.１％~１００.１％ꎬ精密度ＲＳＤ为０.１１％ꎬ重复性ＲＳＤ为１.４％ꎮ结论㊀本方法简便准确可靠ꎬ可用于阿胶口服液中粗多糖含量的测定ꎮ关键词:阿胶口服液ꎻ粗多糖ꎻ含量测定中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２０)０７－０３９０－００４ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２０.０７.００５ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎＤｏｎｋｅｙ－ｈｉｄｅＧｅｌａｔｉｎＯｒａｌＳｏｌｕｔｉｏｎＬＩＵＣｈｕｎｌｉｎꎬＷＵＸｉａｏｙｕｎꎬＸＩＥＱｉａｎｇｓｈｅｎｇꎬＧＡＯＴｉａｎｙａｎｇꎬＤＯＮＧＰｅｎｇ(ＳｈａｎｄｏｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＳａｆｅｔｙＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎｏｆＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇꎬＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＪｉｎａｎ２５０１０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｐｈｅｎｏｌ－ｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎＤｏｎｋｅｙ－ｈｉｄｅＧｅｌａｔｉｎＯｒａｌＳｏｌｕｔｉｏｎ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｔｅｒｉａｌｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ１００００ｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｄｏｎｋｅｙ－ｈｉｄｅｇｅｌａｔｉｎｂｙｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｂｙ８０％(Ｖ/Ｖ)ｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｇｌｕｃａｎｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐａｔａｒａｎｇｅｏｆ１０.８~１７２.８μｇ.Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９７.１％~１００.１％.ＴｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎＲＳＤａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙＲＳＤｗｅｒｅ０.１１％ꎬ１.４％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅꎬａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅꎬａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎＤｏｎｋｅｙ－ｈｉｄｅＧｅｌａｔｉｎＯｒａｌＳｏｌｕｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｄｏｎｋｅｙ－ｈｉｄｅＧｅｌａｔｉｎＯｒａｌＳｏｌｕｔｉｏｎꎻＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ㊀㊀阿胶为马科动物驴(ＥｑｕｕｓａｓｉｎｍＬ.)的干燥皮或鲜皮经煎煮㊁浓缩制成的固体胶ꎮ它是我国传统的名贵补血中药ꎬ具有补血滋阴ꎬ润燥ꎬ止血ꎬ增强体质ꎬ增强免疫力等功效[１－３]ꎮ本次研究的阿胶口服液是以阿胶为主要原料ꎬ添加熟地黄㊁党参㊁枸杞子㊁黄芪等中药材ꎬ经提取㊁浓缩㊁配制㊁灌装等主要工艺制成的产品ꎬ具有增强免疫力的保健功能ꎮ上述添加的中药材均含有多糖类成分ꎬ文献研究报道具有免疫调节㊁抗氧化㊁抗疲劳的作用[４－８]ꎮ近年来ꎬ很多学者对不同中药材的粗多糖含量进行了研究[９－１０]ꎬ但是针对阿胶口服液中粗多糖的研究还比较少ꎮ本研究采用沉淀蛋白质等前处理方法ꎬ使样品中相对分子质量大于１００００的高分子物质与阿胶分离ꎬ然后在体积分数８０％乙醇溶液中沉淀ꎬ与水溶液中单糖和低聚糖分离ꎬ用苯酚－硫酸反应ꎬ其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比ꎬ在４８５ｎｍ波长下比色测定粗多糖(以葡聚糖计)含量ꎮ１㊀仪器与试药１.１㊀仪器㊀ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＭｓ十万分之一电子天平(德国梅特勒公司)ꎻ恒温水浴锅(上海树立仪器仪表有限公司)ꎻＴＤＺ５－ＷＳ离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)ꎻＸＫ９６－Ｂ涡旋混合器(姜堰市新康医疗器械有限公司)ꎻＴＵ－１９０１紫外分光光度计(北京普析通用公司)ꎮ㊀作者简介:刘春霖ꎬ男ꎬ主管药师ꎬ研究方向:保健食品㊁化妆品检验ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｃｈｕｎｌｉｎ０３２０＠１２６.ｃｏｍ㊀通信作者:董蓬ꎬ女ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:保健食品质量控制ꎬTel:130****3937ꎬE－mail:138****6847＠１６３.ｃｏｍ１.２㊀试剂试药㊀乙酸锌㊁亚铁氰化钾㊁苯酚㊁无水乙醇㊁浓硫酸ꎬ分析纯ꎻ水为去离子水ꎻ乙酸锌溶液:称取乙酸锌[Ｚｎ(ＣＨ３ＣＯＯ)２ ２Ｈ２Ｏ]２１.９ｇꎬ加冰乙酸３ｍＬꎬ加水溶解并稀释至１００ｍＬꎻ亚铁氰化钾溶液:称取亚铁氰化钾{Ｋ４[Ｆｅ(ＣＮ)６] ３Ｈ２Ｏ}１０.６ｇꎬ加水溶解并稀释至１００ｍＬꎻ８０％(Ｖ/Ｖ)乙醇溶液:２０ｍＬ水中加入无水乙醇８０ｍＬꎬ混匀ꎻ苯酚溶液(５０ｇ Ｌ－１):称取精制苯酚５.０ｇꎬ加水溶解并稀释至１００ｍＬꎬ混匀ꎬ备用ꎮ葡聚糖标准品:相对分子量５０００００ꎬ批号:ＢＣＢＮ７８６３Ｖꎬ购自Ｓｉｇｍａ公司ꎮ葡聚糖标准储备液:准确称取干燥至恒重的葡聚糖对照品０.５ｇꎬ加水溶解ꎬ并定容至５０ｍＬꎬ混匀ꎬ置冰箱中保存ꎮ此溶液１ｍＬ含葡聚糖１０ｍｇꎮ葡聚糖标准使用液:吸取葡聚糖标准储备液１.００ｍＬꎬ置１００ｍＬ容量瓶中ꎬ加水至刻度ꎬ混匀ꎬ置冰箱中保存ꎮ此溶液１ｍＬ含葡聚糖１００μｇꎮ阿胶:某阿胶制品公司提供ꎬ和样品来源为同一家公司ꎮ样品:某阿胶制品公司提供ꎬ３批编号分别为１㊁２㊁３ꎮ２ 方法与结果２.１㊀标准曲线系列溶液制备㊀精密吸取葡聚糖标准使用液０ ００㊁０ １０㊁０.２０㊁０.４０㊁０.６０㊁０.８０㊁１.００㊁１.２０㊁１.４０㊁１.６０ｍＬ(相当于葡聚糖０㊁１０㊁２０㊁４０㊁６０㊁８０㊁１００㊁１２０㊁１４０㊁１６０μｇ)ꎬ分别置于２５ｍＬ比色管中ꎬ准确加水补充至２.０ｍＬꎬ加入５０ｇ Ｌ－１苯酚溶液１.０ｍＬꎬ在旋转混合器上混匀ꎬ小心加入浓硫酸１０.０ｍＬꎬ于旋转混合器上小心混匀ꎬ置沸水浴中煮沸２ｍｉｎꎬ冷却后用分光光度计在４８５ｎｍ波长处ꎬ以试剂空白为试验参比ꎬ１ｃｍ比色皿测定吸光度值ꎮ以葡聚糖浓度(μｇ)为横坐标ꎬ吸光度值为纵坐标ꎬ绘制标准曲线ꎮ２.２㊀样品溶液的制备２.２.１㊀试样沉淀蛋白质处理㊀取混合均匀的试样１５ｍＬꎬ置２５０ｍＬ容量瓶中ꎬ加水５０ｍＬꎬ缓慢加入乙酸锌溶液５ｍＬ和亚铁氰化钾溶液５ｍＬꎬ加水至刻度ꎬ混匀ꎬ静置３０ｍｉｎꎬ用干燥滤纸过滤ꎬ取续滤液备用ꎮ２.２.２㊀沉淀粗多糖㊀准确吸取上一步滤液５ｍＬꎬ置于５０ｍＬ离心管中ꎬ加入无水乙醇２０ｍＬꎬ混匀ꎬ置４ħ冰箱中冷藏过夜ꎬ以４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎꎬ弃去上清液ꎬ残渣用体积分数８０％乙醇溶液数毫升洗涤ꎬ以４０００ｒｐｍ离心１５ｍｉｎꎬ离心后弃上清液ꎬ反复操作２次ꎬ残渣用水溶解并定容至２５ｍＬꎬ混匀ꎬ此溶液为样品测定液ꎮ２.２.３㊀样品测定㊀分别吸取２.０ｍＬ样品测定液置２５ｍＬ比色管中ꎬ加入５０ｇ Ｌ－１苯酚溶液１.０ｍＬꎬ混匀ꎬ加入浓硫酸１０.０ｍＬꎬ混匀ꎬ密塞ꎬ沸水浴加热２ｍｉｎꎬ立即冷却至室温得待测溶液ꎮ在４８５ｎｍ波长处测定吸光度值ꎮ从标准曲线上查出葡聚糖的质量ꎬ计算ꎬ即得样品粗多糖含量ꎮ２.３㊀标准曲线回归方程线性范围㊀取标准曲线系列溶液进仪器测定ꎬ结果表明葡聚糖的标准溶液在１０.８~１７２.８μｇ范围内具有良好的线性关系ꎬ相关系数为０.９９９９ꎬ结果见表１ꎮ表１ 线性试验结果线性范围/μｇ线性回归方程相关系数ｒ１０.８~１７２.８Ｙ＝０.００４１６Ｘ－０.０１０７２０.９９９９２.４㊀取样量考察㊀分别量取同一批号的样品５㊁１０㊁１５㊁２５ｍＬ各２份ꎬ按上述样品溶液的制备方法制得待测溶液ꎬ测得葡聚糖含量分别为２４４.６㊁２５３ １㊁２８５.７㊁２８０.９ｍｇ (１００ｍＬ)－１ꎬ结果表明取样量为１５ｍＬ时蛋白质沉淀完全ꎬ粗多糖沉淀量适当ꎬ样品溶液吸光度值在标准曲线中段ꎬ所以确定１５ｍＬ为取样量ꎮ２.５㊀重复性考察㊀精密量取同一批号混合均匀的样品６份ꎬ按上述方法制得待测溶液ꎬ比色测定后计算葡聚糖含量ꎬ结果６份样品葡聚糖含量的ＲＳＤ为１.４％ꎬ表明该方法重复性良好ꎮ２.６㊀精密度考察㊀取制得的待测溶液ꎬ按上述方法连续测定６次吸光度ꎬ利用标准曲线计算葡聚糖含量ꎬ结果６次葡聚糖含量的ＲＳＤ为０.１１％ꎬ表明该方法精密度良好ꎮ２.７㊀稳定性考察㊀取制得的待测溶液ꎬ按上述方法分别于比色后０㊁１㊁２㊁４ｈ测定吸光度ꎬ结果４次葡聚糖含量的ＲＳＤ为０.９６％ꎬ表明比色后供试品溶液在室温条件下４ｈ内稳定ꎮ２.８㊀回收率考察㊀精密量取同一批号混合均匀的样品９份ꎬ分为３组浓度ꎬ每组浓度３份样品ꎬ每组分别精密称取葡聚糖对照品约１８㊁２２.５㊁２７ｍｇꎬ置２５０ｍＬ容量瓶中ꎬ分别精密加入混匀的试样７.５ｍＬꎬ依法制备加标样品ꎮ按上述方法进行测定ꎬ结果平均回收率在９７.１％~１００.１％ꎬ表明该方法回收率好ꎬ结果见表２ꎮ２.９㊀方法检出限㊀参照ＧＢ/Ｔ５００９.１－２００３«食品卫生检验方法理化部分总则»中附录Ａ.２.２规定ꎬ检出限为３倍空白值的标准偏差(测定次数ｎȡ２０)相对应的质量ꎬ吸光法按国际理论与应用化学家联合(ＩＵＰＡＣ)规定ꎮ检出限按下式进行计算:检出限＝Ｋｓ/ｂꎻｂ－标准曲线回归方程中的斜率ꎻｓ－２０次空白值的标准偏差ꎻＫ－一般为３ꎬ结果见表３ꎮ表２㊀回收率试验结果(ｎ＝３)回收水平回收率(％)平均回收率(％)ＲＳＤ(％)低浓度９８.９７９７.１１.６９６.１４９６.３０中浓度９９.０６９７.６１.７９５.７５９８.０９高浓度１０１.００１００.１２.０９７.７５１０１.５２表３㊀检出限试验结果试验次数吸光度试验次数吸光度标准偏差ｓ３ｓ斜率ｂ检出限/μｇ１０.００３１１０.００２０.００１６３０.００４８９０.００４１６１.２２０.００４１２０.００３３０.００７１３０.００２４０.００４１４０.００２５０.００２１５０.００２６０.００５１６０.００２７０.００５１７０.０００８０.００１１８０.００２９０.００２１９０.００２１００.００１２００.００２２.１０㊀样品测定２.１０.１㊀沉淀蛋白质方法㊀精密量取３批混合均匀的样品１５ｍＬꎬ按上述方法进行测定ꎬ计算葡聚糖含量ꎬ结果见表４ꎮ表４㊀沉淀蛋白质方法样品测定结果样品编号含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１平均含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１１２４５.５６２４７.２２４８.９０２２６６.７１２６５.０２６３.３７３２５４.４６２５２.８２５１.１２２.１０.２㊀未沉淀蛋白质方法㊀按样品企业标准规定的检测方法ꎬ精密量取３批混合均匀的样品５ｍＬꎬ置于１００ｍＬ容量瓶中ꎬ加水８０ｍＬ左右ꎬ于沸水浴上加热２ｈꎬ冷却至室温后补加水至１００ｍＬ刻度ꎬ混匀ꎬ过滤ꎬ弃去初滤液ꎬ收集续滤液供沉淀粗多糖ꎮ沉淀粗多糖及样品测定等步骤均同 ２.２ 项下方法ꎬ结果见表５ꎮ㊀㊀由表４~５可知ꎬ未沉淀蛋白质方法比沉淀蛋白质方法测得的葡聚糖含量高约１０６ｍｇ (１００ｍＬ)－１ꎬ结果差异较大ꎮ为找到结果差异的原因ꎬ我们做了以下方面的研究ꎮ表５㊀未沉淀蛋白质方法样品测定结果样品编号含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１平均含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１１３４６.７８３５０.８３５４.８０２３８０.１８３７６.２３７２.１６３３６１.４８３５６.８３５２.１２２.１１㊀含阿胶阴性空白对照溶液测定及比较㊀根据企业提供３３ｋｇ阿胶制成２００００支口服液(２０ｍＬ/支)的配方量ꎬ计算得口服液中阿胶浓度为８２.５ｍｇ ｍＬ－１ꎮ为得到和样品相同阿胶含量的阴性空白对照ꎬ本研究取阿胶ꎬ粉碎ꎬ过筛ꎬ精密称定８.２５ｇꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ加水８０ｍＬꎬ水浴煮沸溶解ꎬ冷却ꎬ加水ꎬ定容至刻度ꎬ４０００ｒ ｍｉｎ－１ꎬ离心２０ｍｉｎꎬ取上清液备用ꎮ２.１１.１㊀含阿胶沉淀蛋白质阴性空白溶液的制备㊀精密量取上述上清液１５ｍＬꎬ按 ２.２ 项下方法制得样品测定液ꎮ２.１１.２㊀含阿胶未沉淀蛋白质阴性空白溶液的制备㊀精密量取上述上清液５ｍＬꎬ按 ２.１０.２ 项下方法制得样品测定液ꎮ将上述两种样品测定液按 ２.２.３ 项下方法进行测定ꎬ计算葡聚糖含量ꎬ结果见表６ꎮ表６㊀含阿胶阴性空白对照溶液测定结果编号含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１平均含量/ｍｇ (１００ｍＬ)－１Ⅰ９.５０８.９８.３９Ⅱ１００.９２９９.６９８.２５㊀注:Ⅰ:阿胶溶液沉淀蛋白质阴性空白ꎻⅡ:阿胶溶液未沉淀蛋白质阴性空白㊀㊀由表６可知ꎬ阿胶中的蛋白质对粗多糖测定干扰显著ꎬ未沉淀蛋白质的样品溶液比沉淀蛋白质的样品溶液测定结果高约９１ｍｇ (１００ｍＬ)－１ꎬ这与表４~５两种方法测定结果差值约１０６ｍｇ (１００ｍＬ)－１相吻合ꎬ验证了本研究采用的沉淀蛋白质前处理方法ꎬ能够有效去除阿胶口服液中蛋白质对粗多糖测定的严重干扰ꎮ３ 讨论３.１㊀本研究中阿胶口服液企业标准规定的粗多糖检测方法有提取步骤ꎬ该操作是针对固体样品的ꎬ且长时间沸水浴可能引起糖结构变化ꎬ甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低ꎮ阿胶口服液是均匀澄清的液体ꎬ经验证本法采用沉淀蛋白质的前处理可有效避免上述问题ꎬ且能够有效去除蛋白质带来的测定干扰ꎮ３.２㊀比色法测定多糖并非特异性反应ꎬ出现测定结果平行偏差较大ꎬ所以试验中沉淀㊁洗涤㊁弃上清液㊁样液的转移等操作都要严谨ꎬ实际操作时可增加平行样的测定[１１]ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０１５年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０１５:１８９－１９０. 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南瓜多糖提取方案
1.南瓜粗多糖的提取：准确称取100g 新鲜南瓜，加入200ml蒸馏水，在榨汁机中搅拌5min，置于烧杯，放入70℃恒温水浴中加热2h，搅拌提取多糖，然后抽虑，滤液80℃真空浓缩至固形物含量约30%，在浓缩液中加入5倍体积95%酒精搅拌均匀，冰箱放置过夜，离心得沉淀物。
沉淀物以水溶解重复醇析1次，然后将沉淀物用无水酒精、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥得南瓜粗多糖。
2.Sevag法除蛋白质取粗多糖的样品，用蒸馏水溶解，按多糖水溶液体积的1/3-1/4加入氯仿：正丁醇（4：1）混合液剧烈震荡，离心分离30min，除蛋白质，反复操作5次，直至紫外光谱分析在蛋白质280nm和核酸260nm处无特征吸收峰，说明含氮物质已除去。
3. 南瓜多糖降糖组分的分离、纯化（三氯乙酸）将南瓜多糖粗品饱和溶解至0.1 mol/L 氯化钠溶液中,4 ℃放置24 小时,离心,弃去沉淀,滤液中加入40 %三氯乙酸使其终浓度达到10 % ,4 ℃冷藏24小时, 离心, 沉淀用0.1 mol/L NaCl 溶液溶解, 经Sepharose CL24B 柱层析,用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱、分离,采用硫酸- 蒽酮法跟踪检测,收集含多糖的组分,再用0.1 mol/L NaOH 中和,将洗脱液适当浓缩,透析,用Sephadex A2200 柱层析分离、纯化, 用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱(洗脱液流速: 0.55 mL/min) ,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥得白色粉末状南瓜多糖精品,测定其多糖含量。
4.南瓜多糖精品的纯度鉴定柱层析法将多糖精品溶解在0.05 mol/L磷酸缓冲液(PH=7.0 的PBS 2mol/l 的91.4ml磷酸一氢钠+8.6ml磷酸二氢钠为100mlPBS) 中, 质量浓度为0.3g/dL , 经用0.05 mol/L PBS 平衡后的Sephadex G2200 层析柱洗脱,体积流量为4.8 mL/h ,每管收集洗脱液2 mL ,硫酸- 苯酚法部分收集检测，分析多糖组分。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
植物多糖的提取和分析方法
植物多糖的提取和分析方法鲁瑞娟【摘要】多糖是由很多单糖分子通过糖苷链相连而形成的天然高分子化合物,多糖结构复杂,种类繁多,并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物,提取和分析困难.植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等.多糖的检测方法可分为两大类,直接测定多糖包括高效毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法和酶法等,利用单糖的性质进行测定,其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多,如滴定法,比色法.本文重点介绍植物多糖的提取方法和分析方法,旨在促进植物多糖的开发利用.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2015(027)002【总页数】3页(P67-69)【关键词】植物多糖;提取方法;分析方法【作者】鲁瑞娟【作者单位】天津市药品检验所,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R284.2多糖是由单糖聚合成的天然生物大分子，结构复杂，分子量大，极性大。
随着人们对多糖研究的深入，越来越多的多糖被分离出来，并且发现这些多糖具有很多的生物学活性和潜在的应用价值[1，2]。
但多糖结构复杂，种类繁多，并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物，这给植物多糖的提取和分析带来不少困难。
本文对植物多糖的提取方法和分析方法进行简要综述。
植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等[3-10]。
1.1 溶剂提取法溶剂提取法是提取多糖的最常用的方法。
常用的粗多糖的提取方法有水提取、碱提取和酸提取。
水提法是多糖传统的提取方法，因为酸法和碱法提取中，易破坏多糖的结构，增加多糖损失。
李艳红[11]提取山楂多糖采用传统热水法的最佳条件为：提取时间6 h，温度80 ℃，液固比15∶1，山楂多糖的提取率为1.67%。
Ai等[12]用水在70 ℃提取3 h得到水溶性苹婆籽多糖，残渣再使用0.05 mol/L NaOH溶液采用40 ℃提取2 h，得到碱溶性多糖，碱提取的浓度不应太高，太高会破坏多糖的结构增加多糖的损失。
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量一、本文概述多糖作为一种重要的生物大分子，广泛存在于自然界中，具有多种生物活性，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。
因此，对多糖的纯度及分子量的准确测定对于其研究和应用具有重要意义。
高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography，HPGPC）是一种常用的多糖纯度及分子量测定方法，具有操作简便、分辨率高、重现性好等优点。
本文旨在介绍HPGPC法测定多糖纯度及分子量的原理、实验步骤、数据处理及注意事项，以期为多糖的研究和应用提供参考。
二、实验材料与方法1 多糖样品：选择待测定的多糖样品，确保其来源清晰，无杂质污染。
2 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）柱：选择适当型号的HPGPC柱，以适用于待测多糖样品的分子量范围。
3 流动相：通常选用适当的溶剂或缓冲液作为流动相，以保证多糖样品在色谱柱上的良好分离。
4 检测器：使用示差折光检测器（RI）或紫外检测器（UV）等，以监测多糖样品在色谱柱上的分离情况。
5 其他试剂与仪器：包括样品制备所需的试剂、色谱仪、注射器、进样针等。
1 样品制备：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液，以便进行后续分析。
2 色谱条件优化：通过预实验，优化色谱条件，包括流动相的选择、流速、柱温等，以获得最佳的分离效果。
3 进样与分离：将制备好的多糖样品溶液通过注射器注入HPGPC 仪中，通过色谱柱进行分离。
在分离过程中，利用检测器监测多糖样品的分离情况。
4 数据收集与处理：收集分离过程中的数据，利用相应软件对数据进行处理和分析，包括分子量计算、纯度分析等。
5 结果评价：根据分析结果，评价多糖样品的纯度及分子量分布情况，为后续研究提供依据。
通过以上实验材料与方法，可以高效地进行多糖纯度及分子量的测定，为后续多糖的结构研究、质量控制等提供重要支持。
三、实验结果与讨论在本研究中，我们采用了高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）对多糖样品的纯度和分子量进行了测定。
粗多糖检测方法
粗多糖（以葡萄糖计）的测定方法
1． 主要仪器
分光光度计；水浴锅；分析天平等
2． 试剂
蒽酮：分析纯；浓硫酸：分析纯；水为去离子水或蒸馏水。
蒽酮硫酸溶液：精密称取蒽酮0.1g ，加80%的硫酸溶液100ml 使溶解，摇匀。
3． 对照品溶液的制备
取葡萄糖对照品适量，于105℃干燥至恒重，精密称定，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。
4． 标准曲线的制备
分别精密量取对照品溶液0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml ，置10ml 具塞试管中，加水至2.0ml ，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ，摇匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5． 供试品溶液的制备
精密量取本品1ml ，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2ml 至20ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
6． 测定法
精密量取供试品溶液2ml ，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ），计算，即得。
7． 结果计算
1000
1001⨯⨯⨯=V V m X 式中 X ——样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（g/100ml ）
m ——供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ）
V ——样品稀释倍数
V 1——比色时所取的样品溶液体积（ml ）。
粗多糖检测方法(以葡萄糖计)
A.1粗多糖的测定A.1.1原理样品溶液中粗多糖经80%乙醇沉淀，粗多糖在硫酸作用下，先分解成单糖，并迅速脱水成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm成有特征吸收，与标准曲线比较计算含量。
A.1.2试剂和对照品除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682中的蒸馏水。
A.1.2.1硫酸（H2SO4）,ρ=1.84g/mlA.1.2.2无水乙醇(C2H6O)A.1.2.3苯酚(C6H6O)A.1.2.4葡萄糖（C6H12O6），使用前于105℃恒温烘干至恒重。
A.1.2.5 5%苯酚溶液：称取苯酚5g，于100ml烧杯中，加适量水溶解，定溶于100ml容量瓶中，现配现用。
A.1.2.6 100mg/L标准葡萄糖溶液：准确称量0.1000g葡萄糖（A.1.2.4）于100ml烧杯中，加水溶解，定容至1000ml容量瓶中，摇匀，至4℃冰箱密塞贮存。
A.1.3仪器设备及装置A.1.3.1可见光分光光度计A.1.3.2分析天平，感量0.001gA.1.3.3离心机A.1.4试样制备精密量取本品软胶囊内容物10.00g，加10倍量的水，在100℃水浴中煮沸1h，重复3次.提取液过滤，浓缩至1:1（g/ml），加入3倍量无水乙醇，震荡摇匀，静止片刻使沉淀出现，在离心机中以4000r/min离心10min，小心弃去上清液，沉淀用热水溶解转移至100ml容量瓶中，离心管用水洗涤2～3次，洗涤液一并转移至容量瓶中，定容摇匀。
取上述溶液5ml 至10ml容量瓶中，加水定容，摇匀作为样品测定液。
A.1.5操作步骤A.1.5.1标准曲线分别吸取0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml的标准葡萄糖溶液（A1.2.6）置20ml具塞试管中，用蒸馏水补至1.0ml，向试液中加入1.0ml苯酚溶液（A1.2.5），然后快速加入5.0ml 硫酸（于液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合），静置10min，使用涡旋振荡器使反应液充分混合，然后将试管放置于30℃水浴中反应20min，在490nm处测定吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。
多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
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容量瓶中,加水 80ml 左右,在沸水浴中加热 2 小时,冷却至室温,过滤。加 取样品测定液的体积(ml)。
1.0ml 10%的糖化酶溶液(含 1 万 U/ml,现配现用,在离心机中以 3000rpm
②取 5ml 溶液至 50ml 的离心管中,加 20ml 无水乙醇,在离心机中以
3000rpm 离心 20min,并当心弃去上清液,再用 10ml 80%乙醇洗沉淀物,在
3 试验结果
离心机中以 3000rpm 离心 20min,反复操作 3 次。残渣(沉淀物)用蒸馏水
溶解并定容至 50ml。此溶液为样品测定液。③取 2.0ml 样品测定液于 25ml
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多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
关键词 乌药精颗粒 粗多糖 检测方法
多糖在调整血
脂、免疫功能及抗疲惫、抗肿瘤、抗放射等方面具有显著的作用[1-3]。
目前国内尚无标准方法测定多糖的含量[4],本法接受糖化酶消化,80%乙
醇沉淀,用苯酚-硫酸反应法测定含量。测定结果稳定、精确,适用于模糊
④同时做糊精对比(样品由糊精、葡萄糖各 1g 组成),假如糊精对比测定结
果,粗多糖含量不在 0.2%以下,说明酶活性不够,应增加用量重新检测。
3.2 不同方法对不同样品的粗多糖含量检测结果:详见表 2。
2.3 结果计算:X(%)=m1×v1×v3×100/(m2×v2×v4×1000)。X 为指
样品中粗多糖的含量(以葡萄糖计)(g/100g);m1 为(标准曲线查)样品测定
保健食品粗多糖的测定-二次沉淀法
A.1 保健食品中粗多糖的测定方法分光光度法本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
1.方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖含量。
2.主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器3.试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4•5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5×105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
4.测定步骤（1）样品处理：a. 样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
芦荟粗多糖实验报告
芦荟粗多糖实验报告引言芦荟是一种常见的多年生草本植物，具有丰富的药用价值。
其中，芦荟多糖是芦荟中的一种重要成分，被广泛应用于医药、化妆品、食品等领域。
本实验旨在分离纯化芦荟多糖，并通过一系列的化学实验和分析方法，对其结构和特性进行研究。
实验原理芦荟多糖主要包括葡萄糖、麦芽糖、果糖等单糖组成的聚糖。
实验采用一系列纯化方法，如水溶液提取、酒精沉淀、凝胶过滤、离子交换层析等，来分离纯化芦荟多糖。
通过HPLC、FT-IR等分析方法，来鉴别芦荟多糖的纯度和结构。
实验步骤1. 芦荟样品的制备和提取首先，取新鲜的芦荟叶片样品，清洗干净并剪碎。
然后，将芦荟叶片加入适量的纯净水中，经超声处理提取芦荟多糖。
最后，滤去固体颗粒，得到芦荟多糖提取液。
2. 酒精沉淀将芦荟多糖提取液加入等体积的95%乙醇中，静置20小时，使芦荟多糖与酒精沉淀。
然后，将混浊的溶液离心，收集沉淀，得到芦荟多糖的酒精沉淀物。
3. 凝胶过滤将酒精沉淀物溶解在适量的纯净水中，并过滤掉杂质颗粒。
得到的溶液为芦荟多糖的溶液。
4. 离子交换层析将芦荟多糖的溶液经过离子交换树脂层析柱，利用不同离子对芦荟多糖的吸附性能进行分离。
然后，用盐溶液洗脱芦荟多糖，得到纯化的芦荟多糖。
5. 芦荟多糖的纯度与结构分析通过高效液相色谱（HPLC）检测分析纯化的芦荟多糖溶液，得到其纯度数据。
同时，利用傅里叶变换红外光谱（FT-IR）对纯化的芦荟多糖进行结构分析，观察其特征吸收峰和官能团。
结果与讨论经过以上实验步骤，我们成功分离和纯化了芦荟多糖，得到了纯净的芦荟多糖溶液。
通过HPLC分析，我们测得其纯度达到90%以上，表明纯化的芦荟多糖具有较高的纯度。
通过FT-IR分析，我们观察到多糖的特征吸收峰和官能团，进一步验证了芦荟多糖的存在和结构。
芦荟多糖具有一定的生物活性和药用价值。
通过对芦荟多糖的纯化和结构分析，我们能更好地理解其药理作用机制，并为其在医药领域的应用提供基础。
结论通过实验，我们成功地分离纯化了芦荟多糖，并通过HPLC和FT-IR等分析方法对其纯度和结构进行了鉴定。
资料-多糖含量测定的各种方法优缺点
苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextra n,瑞典Pharma cia）或分析纯葡萄糖。
5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
2）离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法）本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
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粗多糖的测定方法（分光光度法）
本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要
食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器
（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂
本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
4. 测定步骤
（1）样品处理：
a．样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
b．沉淀粗多糖：准确吸取a项终滤液5.0mL或液体样品5.0mL，置于50mL 离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。
残渣用80%（体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3~4次。
残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。
c．沉淀葡聚糖：准确吸取b项终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L 氢氧化钠溶液2.0mL铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min 离心5min，弃去上清液。
残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
此溶液为样品测定液。
（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡聚糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
（3）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L 苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长
处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。
同时做样品空白实验。
5. 计算结果
（m1－m2）×V1×V3×V5
X=
m3×V2×V4×V6
式中X——样品中粗多糖含量（以葡聚糖计）（mg/g）；
m1——样品测定液中葡聚糖的质量（mg）；
m2——样品空白液中葡聚糖质量（mg）；
m3——样品质量（g）；
V1——样品提取液总体积（mL）；
V2——沉淀粗多糖所用样品提取液体积（mL）；
V3——粗多糖溶液体积（mL）；
V4——沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积（mL）；
V5——样品测定液总体积（mL）；
V6——测定用样品测定溶液体积（mL）。
6. 准确度与精密度
在不同食品中进行不同浓度的加标回收试验，回收率为87.8%~110.87%，不同实验室对同一样品进行10次测定结果的相对标准偏差为5.8%。