大黄蒽醌类成分含量的测定方法
实验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收 集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4．鉴定 （1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加 1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色 （2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中， 加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液 每次15ml萃取3～4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取 2～3次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
蒽 醌 的 提 取 与 分 离
蒽苷的分离 比苷元困难 ，分离前一 般先用溶剂 法除去大部 分杂质，得 较纯的总苷 后，再用柱 色谱分离。
（3）薄层检识
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
药渣（弃）
氯仿提取液
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（1）
蒽醌类成分的缓冲纸色谱
层析材料：3×12㎝滤纸 样 品：大黄氯仿提取液 展 开 剂：氯仿（水饱和） 显 色：自然光下观察
3%NaOH 5%Na2CO3:5%NaOH(9:1) PH9.9 pH8 pH3
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（2）
思
考
题
1.大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何 排列？为什么？ 2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成 分的分离？
蒽醌类成分的鉴定
实验原理
提取： 蒽醌苷
酸 水 解
氯仿提取
苷元(溶于热氯仿)
总蒽醌苷元
实验原理
分离：
OH O OH
R1 O
R2
由于各羟基蒽醌结构上的不同所 表现的酸性不同，用pH梯度萃 取法分离他们；大黄酚和大黄素 甲醚酸性相近，利用其极性的差 异，用柱色谱分离之。
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱） 上样（干法上样）
洗脱剂1 石油醚-乙酸乙酯（98：2）
洗脱
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定 （2）色谱鉴识
实 验 内 容（三）
A大黄酚（chrysophanol） R1=H B大黄素（emodin） R1= OH C大黄素甲醚（physcion） R1=OCH3 D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H E大黄酸（rhein） R1=H
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究
收稿日期:20042112141大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究魏玉辉1,武新安1,陈 岚1,张承忠2(兰州大学第一医院药剂科,甘肃兰州 730000;21兰州大学药学院,甘肃兰州 730000)摘要:目的 建立大黄蒽醌类成分含量测定的方法。
方法 对三种蒽醌类成分提取方法进行实验对比研究,利用分光光度法进行含量测定。
结果 蒽醌类浓度在01856～251680μg/ml 范围内与吸收度呈良好的线形关系(r =019999),平均回收率为10018%,RSD 为0134%。
结论 改进的方法简便、准确可靠,可用于大黄及其制剂的蒽醌类成分的含量测定。
关键词:光茎大黄;蒽醌类成分;提取方法;分光光度法;含量测定Study on determination methods of anthraquinones component of rhubarbW EI Yu 2hui 1,W U X i n 2an 1,C H EN L an 1,Z H A N G Chen g 2z hong2(11Depart ment of Pharmacy ,First Ho spital of Lanzhou University ,Lanzhou ,730000;21College of Pharmacy ,Lanzho u University ,Lanzhou ,730000,China )【Abstract 】 Objective To establish a determination met hod of ant hraquinones of rhu 2barb 1Methods To cont rast t hree ext ract met hods of ant hraquinones component of rhubarb ,de 2veloped a met hod ,ant hraquinones were determined using UV spect rop hotometry met hod 1R esults Ant hraqiunones component had a good linearily in t he concent ration range of 01856～251680μg/ml (r =019999)1The average recovery was 10018%wit h RSD of 0134%1Conclusion This met hod is simple ,Accurate and reliable ,and can be used for t he determination of ant hraquinones component of rhubarb 1K ey w ords : rheum glabricaule G 1;ant hraquinones ;ext ract met hods ;UV spect rop hotomet ry ;content deteimination 大黄为我国传统药材之一,并为我国重要的出口商品。
大黄不同炮制品中游离蒽醌的含量测定
摘要:目的：通过HPLC法比较大黄不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量。
方法：采用Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相为甲醇-水（70:30，磷酸调至pH值＝3）；柱温：24℃；流速：1.0ml/min；检测波长：437nm。
结果：大黄酸线性范围为0.0132~0.132mg，r＝0.9991，大黄素线性范围为0.0066~0.132mg，r＝0.9999。
结论：大黄的不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量不同，以生大黄中大黄素、大黄酸的含量最多，大黄炭中大黄素的含量最少，酒大黄中大黄酸的含量最少。
关键词:大黄酸大黄素HPLC生大黄熟大黄酒大黄大黄炭大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tenguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎。
2005版药典一部规定大黄饮片为大黄除去杂质，洗净，润透，切厚片或块，晾干；酒大黄为取净大黄块，加酒拌匀，闷透，至锅内，用文火炒至规定的程度时，取出，放凉。
照酒炙法炒干；熟大黄为取净大黄块，照酒炖法或蒸至内外均呈黑色，加酒拌匀，加入液体辅料拌匀，置适宜的容器内，加热蒸透或至规定的程度时，取出，干燥；大黄炭为取净大黄块，照炒炭法炒至表面焦黑色、内部焦褐色。
酒大黄善清上焦血分热毒。
用于目赤咽肿，齿龈肿痛。
熟大黄泻下力缓，泻火解毒。
用于火毒疮疡。
大黄炭凉血化瘀止血。
用于血热有瘀出血症。
大黄中其主要活性成分为大黄蒽醌衍生物如大黄素、大黄酸、大黄酚等。
本文考察了大黄不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量，经测定在不同炮制品中大黄酸、大黄素在生大黄中的含量最多，大黄炭中大黄素的含量最少，酒大黄中大黄酸的含量最少。
实验部分1仪器与材料岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，SPD-10A紫外分析仪，CTO-10AS柱温箱，DGU-12A脱气机。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
大黄游离蒽醌实验报告
大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告引言：大黄是一种常见的中药材，被广泛用于治疗便秘和胃肠道问题。
它的主要成分是蒽醌类化合物，其中最主要的成分是大黄素。
本实验旨在通过提取大黄中的大黄素，并通过游离蒽醌实验验证提取物中的有效成分。
实验步骤：1. 材料准备：我们使用的材料包括大黄粉末、乙醇和氯化钠。
2. 提取大黄素：首先，我们将大黄粉末与乙醇混合，并在常温下搅拌30分钟，以使大黄素充分溶解。
然后，用滤纸过滤混合物，收集滤液。
接下来，将滤液转移到蒸发皿中，用低温蒸发法除去乙醇，得到提取物。
3. 游离蒽醌实验：我们将提取物与氯化钠溶液混合，并用酸性醇溶液进行萃取。
然后，我们将萃取液进行离心分离，并收集上层溶液。
最后，我们用紫外可见光谱仪测量上层溶液的吸光度，以确定其中游离蒽醌的含量。
实验结果：通过游离蒽醌实验，我们测量了提取物中游离蒽醌的含量。
根据测量结果，我们发现提取物中的游离蒽醌含量为XX mg/mL。
这表明我们成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并且提取物中的游离蒽醌含量较高。
讨论：大黄素是一种具有抗炎、抗菌和抗氧化等多种药理作用的物质。
游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄素的含量。
通过本实验，我们确定了大黄提取物中游离蒽醌的含量，这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。
然而，本实验存在一些局限性。
首先，我们只测量了游离蒽醌的含量，而没有对其他蒽醌类化合物进行测量。
因此，提取物中可能还存在其他有效成分。
其次，我们只使用了一种提取方法，可能有其他更有效的提取方法可以提高提取物中游离蒽醌的含量。
结论：本实验成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并通过游离蒽醌实验测量了其含量。
提取物中游离蒽醌的含量为XX mg/mL。
这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。
然而，还需要进一步研究以确定提取物中其他有效成分的含量，并尝试其他更有效的提取方法。
总结：大黄游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄中游离蒽醌的含量。
大黄主要蒽醌类成分的闪式提取及HPLC检测
大黄主要蒽醌类成分的闪式提取及HPLC检测目的建立简便的闪式提取法提取中药大黄中蒽醌类成分，并用HPLC法测定其中5种主要游离蒽醌的含量，为大黄蒽醌类化合物高效提取和工业生产提供依据。
方法建立闪式提取法提取大黄中蒽醌类成分，与常规的回流提取法进行比较研究，采用C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸为流动相，梯度洗脱，建立HPLC 检测方法，同时检测五种蒽醌的含量，并比较两种方法的提取效率。
结果建立的HPLC法能够同时检测5种蒽醌成分，方法准确、可靠。
与回流提取方法比较，闪式提取法在短时间内可以达到相近的提取率，显示了闪式提取大黄蒽醌类化合物的优势。
结论在相同实验条件下，闪式提取法显示了快速简便、节能高效的特点，可为大黄蒽醌类有效成分成分的高效提取和工業生产提供理论依据。
标签：大黄；蒽醌；闪式提取；HPLC；回流提取[Abstract] Objective To establish a simple flash extraction to extract the anthraquinones component of rhubarb and the content of 5 kinds of main free anthraquinones was measured by the HPLC method thus providing basis for the effective extraction and industrial production of anthraquinones component of rhubarb. Methods The anthraquinones component of rhubarb was extracted by the flash extraction，and compared with the routine reflux extraction，and the C18 chromatographic column was used and the acetonitrile -0.1% phosphoric acid was used as the mobile phase and the content of five kinds of anthraquinones was tested by the HPLC test method and the extraction effect was compared. Results Five kinds of anthraquinones could be tested by the HPLC，and the method was accurate and reliable，and the flash extraction could reach the similar extraction rate in a short time，which showed that the advantages of it in extraction of rhubarb anthraquinone analogues. Conclusion The flash extraction is rapid，simple，energy-saving and effective under the same experimental conditions，which can provide theoretical basis for the effective extraction and industrial production of anthraquinones component of rhubarb.[Key words] Dahuang；Anthraquinone；Flash extraction；HPLC；Reflux extraction大黄有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经及利湿退黄的功效[1]。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
分光光度法
利用游离蒽醌在特定波长下具有特征吸收光谱的性质，通 过比较标准品和样品的吸光度值，计算游离蒽醌的含量。
薄层色谱法
基于不同物质在薄层板上的吸附和展开性能不同进行分离，通 过显色反应呈现特定颜色，测量斑点面积并与标准品比较，确
定游离蒽醌的含量。
测定过程
高效液相色谱法
01
制备大黄提取液、过滤、进样、色谱分离、检测、数据处理和
通过测量大黄提取液在特定波长 下的吸光度，计算游离蒽醌的含 量，操作简便，适合大量样品分 析。
薄层色谱法
将大黄提取液点在薄层板上，通 过展开、显色和测量斑点面积， 计算游离蒽醌的含量，适用于定 性分析和少量样品定量分析。
测定原理
高效液相色谱法
基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离 ，通过紫外检测器检测蒽醌类化合物的特征吸收光谱，确定其
抗氧化作用
大黄中的多种化合物具有抗氧化作用，可以清除 自由基，保护细胞免受氧化损伤。
ABCD
抗炎作用
大黄中的苯乙烯苷类化合物具有抗炎作用，可以 抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应。
抗肿瘤作用
研究表明，大黄中的某些化合物可以抑制肿瘤细 胞的生长和扩散。
02
游离蒽醌的提取
提取方法
溶剂提取法
01
利用有机溶剂如乙醇、乙醚等从大黄中提取游离蒽醌
对大黄中游离蒽醌提取和含量测定的展望
01
深入研究
02
扩大应用范围
03
加强国际交流与合作
未来可以进一步深入研究大黄中游离 蒽醌的提取工艺、含量测定方法以及 药效作用机制，提高对大黄的认知水 平和应用能力。
可以将大黄中游离蒽醌的提取和含量 测定方法应用到其他中药材中，推动 中药材的质量控制和标准化发展。
大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
b.醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的 氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色 带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。
4.鉴定
(1)蒽醌类成分化学鉴定
a.碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加2％氢氧化钠溶 液l ml，观察颜色变化。凡有互成邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色， 其它羟基蒽醌呈红色。
b.大黄素的分离和精制
pH 8缓冲液萃取过的氯仿层，用pH 9.9缓冲液300 ml振摇萃取，静置至 彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH 3，析出棕黄色 沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15 ml丙酮热 溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶， 得大黄素。
（2）分离与精制
a.大黄酸的分离和精制
将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴 加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗 出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液 放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
减压回收乙醇至糖浆状，将浓 缩物转移至250ml三角瓶中
乙醇总提物
放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将 乙醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
乙醚层
浸膏
乙醚总提液
2、游离蒽醌的分离
乙醚总提液
5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、 30、30ml，至水层颜色变浅
它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？
大黄中蒽醌类成分的提取分 离与鉴定
实验目的
1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技术； 2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；
实验原理
利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分 提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提 取物可用乙醚提取总苷元；
乙醚层
5%Na2CO3水溶 液萃取3次，每 次40、35、35ml
碱水层
酸化，抽滤 水洗，干燥
沉淀Ⅱ 大黄素
乙醚层
碱水层
滴加HCl酸化，静置沉淀，抽 滤，水洗至中性，干燥
沉淀I，大黄酸 乙醚层
2%NaOH水溶液萃取3次， 每次30ml，
碱水层
酸化，抽滤 水洗Biblioteka 干燥沉淀Ⅲ 大黄素甲醚、大黄酚
3、蒽醌类化合物的检识
（1）薄层鉴别 吸附剂：硅胶 展开剂：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水 （25：75：5：35：6：25） 显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色
（2）呈色反应 ① 滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化 ② 滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 ③ 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化
紫外-可见分光光度法测定大黄中蒽醌类成分的含量
取大 黄 蒽 醌 类 成 分 后 ， 分 别建 立 了游 离 蒽 醌 与 总 蒽 醌 的 紫外 一可 见 分 光光 度法 的 分析 方 法 ， 并 测 定 其 中 总 蒽醌 与游 离 蒽 醌 的 含 量 。 １ ０ ０ ｍＬ容 量 瓶 中 ， 加适量乙醚 ， 振摇使 其溶解 ， 定容 ， 摇匀， 得 标 准 品储 备 １ ． 试 验 部 分 液 。精 确 吸 取 标 准 品 储 备 液 １ ０ ｍＬ， 置于 ２ ５ ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 加 适 量 乙 醚 定
容， 制得标准品溶液． 分别 精 密吸 取 １ ． ０ ， ２ ． ０ ， ３ ． ０ ， ４ ． ０ ， ５ ． ０ ｍＬ标 准 品 溶 液 ｕＶ～ １ ７ ０ ０型紫 外 分 光 光 度 计 ， ｓ ＨＩ ＭＡＤｚ ｕ公 司生产 ； Ｓ Ｋ２ ２ Ｏ Ｏ Ｈ 型 置 于 １ ０ ｍＬ容 量 瓶 中 ， 水 浴挥 去 乙醚 ， 残渣加质量分数 ０ ． ５ 的 醋 酸 镁 一 甲 摇匀 。以质量分数 ０ ． ５ 的 醋 酸 镁 一 甲 醇 溶 液 为 空 白 对 超声 波 清洗 仪 （ ９ ０ Ｗ， ５ ９ ｋ Ｈｚ ） ， 上海 科 导 超 声 仪 器 有 限 公 司生 产 ； 标 准品 １ ， 醇溶 液 至 刻 度 ，
大 黄为 蓼 科 植 物 掌 叶 大 黄 Ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ｐ ａ ｌ ｍａ ｔ ｕ ｍ Ｌ ． 唐 古特 大 黄 Ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ 结 果 样 品 在 ６小 时 内 吸光 度 值 基 本 恒 定 ， 而标 准 品在 ８小 时 内吸 光 度 值 基 ｔ ａ ｎ ｇ ｕ ｔ ｉ ｃ ｕ ｍ Ｍａ ｘ ｉ ｍ．Ｅ ｘ Ｂ ａ ｌ ｆ ． 或 药 用 大 黄 Ｒｈ ｅ ｕ ｍ ｏ ｆｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｅ Ｂ ａ ｉ ｌ １ ． 的 干燥 根 本 恒 定 。 及根 茎， 具 有 泻 下攻 积 ， 清热 泻火 ， 凉血解 毒， 逐瘀通 经的功效Ｅ １ ］ ， 是 中 医 １ ． ３ ． ５重 复 性 试 验 临床 常用 泻 下 类 中药 的 代 表 。现 代 药 理 研 究 表 明 大 黄 有 清 热 泻 下 、 抗 菌、 照 提 取 液 制 备 方 法项 将 ８ ０ 的 乙 醇 提 取 液 连 续 做 ５次 含 量 测 定 ， 测 消炎、 退热 、 止血 、 保肝 、 利胆、 强心 、 降压 、 抗 肿瘤 、 抗 高脂 血症 ， 清 除 自 由 定 总蒽 醌 含 量 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 ２ ． ７ ８ 。 基、 调节免疫等重要功能 ， 其 主要 有 效 成 分 是 其 蒽 醌 类 ［ 。 ］ 。 而 其 抗 菌 作 用 与游 离 蒽 醌 有 关 ， 泻下作用与 总蒽醌有关［ 。故 本 实 验 采 用 超 声 法 提
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。
蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。
此外，大黄还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。
可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。
UVλmax436，289，266，253，222。
可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。
UVλmax429，287，254，225，202。
可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。
溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。
荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌的含量
荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌的含量【摘要】目的采用荧光分光光度法，建立了大黄中游离蒽醌类成分含量测定的方法。
方法以丙酮为溶剂，在λex =460 nm 和λem =540 nm处测定荧光强度。
结果测得游离蒽醌含量在0.25～3.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为F=122.81C +46.224(r=0.999 6)，最低检测限为0.25 μg/ml，表明该法灵敏度高、重现性较好，且操作简便。
结论该研究为测量大黄中活性成分游离蒽醌提供了一种有效可靠的分析方法。
【关键词】大黄；游离蒽醌；荧光分光光度法Fluorescence Spectrophotometry for Free Anthraquinones in Rheum emodiAbstract：ObjectiveWith the fluorescence spectrophotometry，to build up free anthraquinones in Rheum emodi method of Assay.MethodsTake acetone as solvent agent， with the λex=460 nm and λem= 540 nm determination fluorescence strength. ResultsFree anthraquinone contents were in 0.25～3.0 of μg/ml with good linear relationship. The linear equation F=122.81C+46.224(r=0.999 6)， the lowest detectability was 0.25 μg/ml. The metho d was sensitive and reproducible.ConclusionThis research for measuring live composition of free anthraquinone in Rheum emodi Wall provides a kind of effectively dependable analytical method.Key words：Rheum emodi； Free anthraquinone ； Fluorescence spectrophotometry有效成分含量是评价药材质量的重要指标，现报道的大黄中游离蒽醌检测方法主要有比色法、薄层色谱（TLC）法、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管胶束电泳色谱法（MECC）及毛细管电泳色谱法（CEC）。
实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5% NaHCO3水溶液20ml，振摇。放置分层，放出下层NaHCO3溶 液，置于另一三角瓶中，上层乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加 5%NaHCO3溶液15ml萃取一次，每次振摇提取后，放置分层时 间应稍久，以免乙醚溶液混在下层水液中，影响分离效果。提取 过程中，如乙醚挥发，可酌量补加。合并NaHCO3提取液，注意 其呈色，在搅拌下小心滴加盐酸调pH2~3，观察酸化过程中的呈 色变化，析出物抽滤收集，干燥后称重。
（3）薄层检识
吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（8∶2）；苯-甲醇（8∶1） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
④
大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
蒽 醌 的 提 取 与 分 离
提取方法
有机溶剂提取法
碱溶酸沉法
游离蒽醌 的分离
利用PH梯度萃取 法分离 利用色谱法分离
分离方法
蒽醌苷和游离 蒽醌的分离
蒽醌苷 的分离
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
提取方法 分离方法
有机溶剂 提取法 常用甲醇或 乙醇提取， 可将不同极 性或类型的 醌类成分都 提取出 来，得到总 醌类再进行 分离。
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医药化工化 工 设 计 通 讯
Pharmaceutical and Chemical
Chemical Engineering Design Communications
·191·
第44卷第10期
2018年10月
大黄作为传统药材和出口商品之一，蒽醌类衍生物为其发挥作用主要活性物质，用于测定蒽醌类成分含量的方法有很多，但在操作上存在差异，导致测定结果存在很大的偏差。
1 实验部分
1.1 实验仪器与药品
实验仪器主要为紫外分光光度计和电子天平；实验药品包括：1，8-二羟基蒽醌、大黄酚、大黄素、光茎大黄。
1.2 显色剂制备
用甲醇将醋酸镁溶解，制备显色剂，即醋酸镁甲醇，浓度为0.6%，将其摇晃均匀后备用。
1.3 标准曲线制备
用甲醇将1，8-二羟基蒽醌充分溶解，然后定容到25mL ，制备标准液，1，8-二羟基蒽醌的用量为10.7mg 。
分别取20μL 、40μL 、80μL 、160μL 、200μL 、300μL 和400μL 标准液，将其放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂将其定容到刻度，摇晃均匀后对其吸收度进行测定，并用一组显色剂作为空白对照。
测定结果为：浓度为0.855mg/mL 时，吸收度为0.033；浓度为1.711mg/mL 时，吸收度为0.070；浓度为3.423mg/mL 时，吸收度为0.145；浓度为6.847mg/mL 时，吸收度为0.292；浓度为8.561mg/mL 时，吸收度为0.370；浓度为12.841mg/mL 时，吸收度为0.561；浓度为17.121mg/mL 时，吸收度为0.700；浓度为25.682mg/mL 时，吸收度为1.100。
1.4 稳定性考察
分别取160μL 和300μL 标准液，将其放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂将其定容到10mL 。
然后放到室内灯光条件下，对其吸收度进行测定。
2 大黄蒽醌类成分含量测定方法
2.1 蒽醌类成分提取与含量测定2.1.1 游离蒽醌
借助热氯仿回流进行直接提取，其提取率较高。
在烧瓶中
放入80mg 光茎大黄，再用氯仿进行水浴回流，持续提取2h 。
将药渣过滤干净后，用甲醇将氯仿残渣完全溶解，同时定容到10mL ，取1mL 放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。
将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。
测定结果为：药量为82.1mg 时，吸收度为0.512，蒽醌含量为1.44%；药量为85.9mg 时，吸收度为0.567，蒽醌含量为1.55%；药量为84.4mg 时，吸收度为0.535，蒽醌含量为1.48%；平均含量为1.49%，RSD 为0.03。
2.1.2 总蒽醌
（1）方法一：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，用甲醇将残渣溶解，同时定容至10mL 。
然后取1mL 放到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。
将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。
测定结果：药量为51.8mg ，平均含量为1.58%，RSD 为5.6。
（2）方法二：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，将氯仿合并后，水洗三次，采用与方法一相同的方法测定含量，测定结果：药量为51.5mg ，平均含量为2.66%，RSD 为2.0。
（3）方法三：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用盐酸和冰醋酸混合液溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，将氯仿合并后，采用与方法一相同的方法测定含量，测定结果：药量为52.1mg ，未能得出平均含量与RSD 。
（4）方法四：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸与氯仿溶解，沸水浴回流持续2h ，使氯仿层分离出。
在氯仿中使用污水硫酸钠将氯仿脱水，将其回收后，用甲醇将残渣溶解，同时定容至10mL 。
然后取1mL 放到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。
将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。
测定结果：药量为51.6mg ，平均含量为2.97%，RSD 为0.33。
2.2 结合蒽醌的提取与含量测定2.2.1 方法一
所谓结合蒽醌，即总蒽醌和游离蒽醌的差值，测定结果：平均含量为1.48%。
2.2.2 方法二
将氯仿提取尽游离蒽醌的药渣加入到烧瓶当中，之后与上述方法四相同，测定结果：平均含量为1.52%。
2.3 加样回收率
取已经提取完蒽醌类的粉末，添加大黄素与大黄酚，采
用以上方法进行实验，结果：加入量为4.2mg 时，实测值为4.5mg ，回收率为102.2%；加入量为4.0mg 时，实测值为4.0mg ，回收率为97.7%；加入量为3.8mg 时，实测值为4.0mg ，回收率为102.6%；平均回收率为100.8%，RSD 为0.33。
3 结论
因方法一氯仿含酸液，所以测定结果偏小；方法二尽管考虑到酸液影响，但结果也偏小；方法三无法获得测定结果；方法四为改进方法，能在简化步骤的同时，保证萃取效率，并用无水硫酸钠避免酸液造成影响。
参考文献
[1] 王有森，王智亮.HPLC 法同时测定大黄-黄连药材中5种蒽醌类成分的含量及最优配伍研究[J].中国药房，2017，28（34）：4818-4821.摘 要：采用实验的方法，分析、对比四种大黄蒽醌类成分含量测定方法，得出改进方法效率高、结果准确的结论。
关键词：大黄；蒽醌类成分；含量测定中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1003–6490（2018）10–0191–01
Determination Method of Anthraquinones in Rhubarb
Dong Li-na ，Wang Zhao
Abstract ：The experimental methods were used to analyze and compare the determination methods of four kinds of rhubarb glycosides ，and the conclusion was drawn that the improved method had high ef ficiency and accurate results.
Key words ：rhubarb ；terpenoids ；content determination 大黄蒽醌类成分含量的测定方法
董李娜，王 昭
（正大天晴药业集团股份有限公司，江苏南京 210023）
收稿日期：2018–06–10
作者简介： 董李娜（1983—），女，江苏南京人，工程师，主要研究
中药有效部位和有效成分的分离和含量测定。
在子宫内膜异位症术后治疗中的应用[J].广东医学，2013，34（06）：962-965.[4] 商铁刚，高岑，宋俊生，等.当归四逆汤与西药治疗糖尿病周围神
经病变疗效比较的系统评价[J].天津中医药大学学报，2011，30（03）：155-159.。