大黄蒽醌类成分含量的测定方法

医药化工化 工 设 计 通 讯

Pharmaceutical and Chemical

Chemical Engineering Design Communications

·191·

第44卷第10期

2018年10月

大黄作为传统药材和出口商品之一，蒽醌类衍生物为其发挥作用主要活性物质，用于测定蒽醌类成分含量的方法有很多，但在操作上存在差异，导致测定结果存在很大的偏差。1 实验部分

1.1 实验仪器与药品

实验仪器主要为紫外分光光度计和电子天平；实验药品包括：1，8-二羟基蒽醌、大黄酚、大黄素、光茎大黄。

1.2 显色剂制备

用甲醇将醋酸镁溶解，制备显色剂，即醋酸镁甲醇，浓度为0.6%，将其摇晃均匀后备用。

1.3 标准曲线制备

用甲醇将1，8-二羟基蒽醌充分溶解，然后定容到25mL ，制备标准液，1，8-二羟基蒽醌的用量为10.7mg 。分别取20μL 、40μL 、80μL 、160μL 、200μL 、300μL 和400μL 标准液，将其放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂将其定容到刻度，摇晃均匀后对其吸收度进行测定，并用一组显色剂作为空白对照。测定结果为：浓度为0.855mg/mL 时，吸收度为0.033；浓度为1.711mg/mL 时，吸收度为0.070；浓度为3.423mg/mL 时，吸收度为0.145；浓度为6.847mg/mL 时，吸收度为0.292；浓度为8.561mg/mL 时，吸收度为0.370；浓度为12.841mg/mL 时，吸收度为0.561；浓度为17.121mg/mL 时，吸收度为0.700；浓度为25.682mg/mL 时，吸收度为1.100。

1.4 稳定性考察

分别取160μL 和300μL 标准液，将其放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂将其定容到10mL 。然后放到室内灯光条件下，对其吸收度进行测定。

2 大黄蒽醌类成分含量测定方法

2.1 蒽醌类成分提取与含量测定2.1.1 游离蒽醌

借助热氯仿回流进行直接提取，其提取率较高。在烧瓶中

放入80mg 光茎大黄，再用氯仿进行水浴回流，持续提取2h 。将药渣过滤干净后，用甲醇将氯仿残渣完全溶解，同时定容到10mL ，取1mL 放置到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。测定结果为：药量为82.1mg 时，吸收度为0.512，蒽醌含量为1.44%；药量为85.9mg 时，吸收度为0.567，蒽醌含量为1.55%；药量为84.4mg 时，吸收度为0.535，蒽醌含量为1.48%；平均含量为1.49%，RSD 为0.03。

2.1.2 总蒽醌

（1）方法一：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，用甲醇将残渣溶解，同时定容至10mL 。然后取1mL 放到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。测定结果：药量为51.8mg ，平均含量为1.58%，RSD 为5.6。（2）方法二：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，将氯仿合并后，水洗三次，采用与方法一相同的方法测定含量，测定结果：药量为51.5mg ，平均含量为2.66%，RSD 为2.0。

（3）方法三：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用盐酸和冰醋酸混合液溶解，沸水浴回流持续2h ，用氯仿分三次进行萃取，将氯仿合并后，采用与方法一相同的方法测定含量，测定结果：药量为52.1mg ，未能得出平均含量与RSD 。（4）方法四：取50mg 光茎大黄放到烧瓶当中，用硫酸与氯仿溶解，沸水浴回流持续2h ，使氯仿层分离出。在氯仿中使用污水硫酸钠将氯仿脱水，将其回收后，用甲醇将残渣溶解，同时定容至10mL 。然后取1mL 放到10mL 容量瓶当中，用显色剂溶解、定容，在摇晃均匀后对其吸收度进行测定。将测定结果代入到回归方程当中，对含量进行计算。测定结果：药量为51.6mg ，平均含量为2.97%，RSD 为0.33。

2.2 结合蒽醌的提取与含量测定2.2.1 方法一

所谓结合蒽醌，即总蒽醌和游离蒽醌的差值，测定结果：平均含量为1.48%。

2.2.2 方法二

将氯仿提取尽游离蒽醌的药渣加入到烧瓶当中，之后与上述方法四相同，测定结果：平均含量为1.52%。

2.3 加样回收率

取已经提取完蒽醌类的粉末，添加大黄素与大黄酚，采

用以上方法进行实验，结果：加入量为4.2mg 时，实测值为4.5mg ，回收率为102.2%；加入量为4.0mg 时，实测值为4.0mg ，回收率为97.7%；加入量为3.8mg 时，实测值为4.0mg ，回收率为102.6%；平均回收率为100.8%，RSD 为0.33。3 结论

因方法一氯仿含酸液，所以测定结果偏小；方法二尽管考虑到酸液影响，但结果也偏小；方法三无法获得测定结果；方法四为改进方法，能在简化步骤的同时，保证萃取效率，并用无水硫酸钠避免酸液造成影响。

参考文献

[1] 王有森，王智亮.HPLC 法同时测定大黄-黄连药材中5种蒽醌类成分的含量及最优配伍研究[J].中国药房，2017，28（34）：4818-4821.摘　要：采用实验的方法，分析、对比四种大黄蒽醌类成分含量测定方法，得出改进方法效率高、结果准确的结论。关键词：大黄；蒽醌类成分；含量测定中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1003–6490（2018）10–0191–01

Determination Method of Anthraquinones in Rhubarb

Dong Li-na ，Wang Zhao

Abstract ：The experimental methods were used to analyze and compare the determination methods of four kinds of rhubarb glycosides ，and the conclusion was drawn that the improved method had high ef ficiency and accurate results.

Key words ：rhubarb ；terpenoids ；content determination 大黄蒽醌类成分含量的测定方法

董李娜，王　昭

（正大天晴药业集团股份有限公司，江苏南京 210023）

收稿日期：2018–06–10

作者简介： 董李娜（1983—），女，江苏南京人，工程师，主要研究

中药有效部位和有效成分的分离和含量测定。在子宫内膜异位症术后治疗中的应用[J].广东医学，2013，34（06）：962-965.[4] 商铁刚，高岑，宋俊生，等.当归四逆汤与西药治疗糖尿病周围神

经病变疗效比较的系统评价[J].天津中医药大学学报，2011，30（03）：155-159.