临床生化检验方法的选择和评价

第五章临床生化检验方法的选择和评价

临床生化检验方法的选择和评价，是临床生化检验质量控制的重要基础工作。当建立一个新的方法，或引进新的方法、都应对它们的技术性能作出评价，以便科学的选择和应用。它们之间的关系可用图5-1 来表示。

图5-1 方法选择和评价与其它实验之间的关系

图5-1 方法选择和评价与其它实验之间的关系

第一节检验方法的正确选择

一检验方法和标准品的分级

（一）方法的分级

临床生化检验方法根据其准确度与精密度的不同可以分为决定性方法、参考方法、常规方法等三级。

1．决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，

没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。用于发展及评价参考方法和一级标准品。

2．参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因

素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法在条件许可的实验室中应经常使用。用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。

3．常规方法（routine m ethod）指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、

准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法（recommended method），推荐方法应具有足够的实验证据。

临床化学决定性方法及参考方法见表5-1。

表5-1 临床化学决定性方法及参考方法

（Tietz，clin chem. 1979, 25: 834）

项目决定性方法参考方法

钙ID-MS 原子吸收分光光度法

氯电量滴定法、中子活化法电流滴定法

镁ID-MS 原子吸收分光光度法

磷ID-MS ——

钾ID-MS、中子活化法火焰光度法

钠重量分析法、中子活化法火焰光度法

白蛋白——免疫化学法

总蛋白——双缩脲法

肌酐ID-MS、离子交换层析法离子交换层析法

尿素ID-MS 尿素酶法

尿酸ID-MS 尿酸酶法（紫外法）

胆红素——重氮反应法

葡萄糖ID-MS 己糖激酶法

胆固醇ID-MS Abell-Kendall 法，胆固醇氧化酶法

甘油三酯ID-MS 酶法

AST（GOT）——MDH-NADH 法

ALT（GPT）——LDH-NADH 法

转肽酶（r-GT）——连续监测产物生成法

肌酸激酶——NAD+偶联法

注：ID-MS：同位素稀释一质谱法MDH：苹果酸脱氢酶LDH：乳酸脱氢酶

（二）标准品的分级

国际标准化委员会将标准品（参考物）的定义暂定为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定；被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。

1．一级标准品（原级参考物）是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，且有证书；用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标准品定值。

2．二级标准品（次级参考物）也称校准品，包括用于常规分析的标准液。这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素的，能熟练掌握参考方法的操作者确定；主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结果计算。

3．校准品用二级标准品和常规方法测定得到校准品，用于常规测定中的标准。

各级测定方法及标准品之间的相互关系及准确度传递见图5-2。

图5-2 方法与标准品之间的准确度传递

二常规方法的选择

（一）常规方法的性能指标

国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标，至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。

（1）实用性：一般应具备微量快速，便于急诊；费用低廉；应用安全。

（2）可靠性：一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。精密度即变异系数（CV%）一般应小于5%。准确度是指测定值与“真值”的符合程度，一般偏差系数（CB）应小于5%。特异

性是指只对待测物质起化学反应，不与其他结构类似的化合物发生反应。检测能力即“检测限度”

或“检出限”。检出限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小量。

（二）常规方法的选择程序

首先根据方法选择的要求对已发表的各种检测方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，要熟悉该法的原理、性能指标及相应的条件等。然后进行初步试验，为了实用的目的，初试应该评价候选方法所有的性能指标。

第二节临床生化检验方法学评价

方法学评价（evaluation of methodology）的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的

精密度与准确度，在实验中测定的是不精密度与不准确度，无论是精密度还是准确度，强调的都是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。

一、方法评价方案

美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）制订了一套评价方案（evaluation Protocols）,能客

观而正确地对方法的技术性能作出评价。它不仅可用来评价临床生化检验方法，而且还可用以评价试剂盒和分析仪器的性能。

（一）精密度评价

1．目的要求评价方法给出结果的可重复程度即精密度。反映精密度好坏的指标是变异系数CV，CV 越小精密度越好，反之则差，故有人称其为不精密度。用本方案评价可以计算出批内、