临床生化检验方法的选择和评价
临床生物化学检验质量控制流程图
临床生物化学检验质量控制流程临床生化检验室全面质量控制（TQC）是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。
一、分析前质量保证(一) 人员的素质和稳定性凡进入生化专业的工作人员上岗前应培训，了解本专业的实验室工作流程，掌握各种设备的操作、维护、保养，熟练应用实验室LIS系统，掌握各项目检测原理及影响因素，熟练应用比对方法。
(二) 实验室的设置和工作环境实验室布局合理，环境整洁，仪器间应进行防尘处理，温度15~30°C，相对湿度<65%。
(三) 实验仪器的质量保证1. 分析仪器的性能检查1.1 波长校正在更换光源灯、重新安装、搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。
就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次，这样才能保证读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。
1.2 线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。
线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。
这种偏离，一是溶液本身不符合比耳定律，此现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度之间不成线性关系，这种现象叫做仪器偏离。
仪器偏离的因素很多，如杂光、有限宽带、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。
1.3 稳定性检查当电源电压在220~230V围变化时，仪器读数漂移不应超过透光度标尺上限值的±1.5%。
在电源电压不变的条件下，在3分钟其读数漂移不应超过标尺上限值的±0.5%。
1.4 重复性检查在波长、工作状态、电源电压、比色杯等合格的前提下，可进行重复性检查。
用重铬酸钾溶液（30、60、90、190mg/L）在波长440nm，将各浓度管连续测3~5次，各浓度管中最大差值误差小于1%T为合格。
1.5 灵敏度检查将重铬酸钾液配制成30和32.5mg/L及120和122.5mg/L的4种应用液（浓度差两组各为2.5mg/L）。
临床生化检验试题库
一、名词解释1、抗凝剂：应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。
阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂。
2、决定性方法：准确度最高，系统误差最小；经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的方法。
主要有重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。
3、参考方法：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。
这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。
4、常规方法：具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要的方法。
5、标准品：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。
6、一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。
主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。
7、二级标准品：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。
可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。
主要用于常规方法的标化和控制物的定值。
8、控制物：控制物用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。
有定值血清和未定值血清两种。
控制物不能用于标定仪器或方法。
9、实验误差：简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
10、系统误差：是指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。
它具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。
当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。
11、随机误差：是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。
方法学评价
方法学评价文件（3）
• EP10-A：定量实验室方法的初步评价 核准 指南（Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods; Approved Guideline），提供了用于分析方 法和设备操作的初步评价的实验设计和数 据分析。
三、方法选择的步骤
•1.提出要求 •2.获取资料 •3.选定候选方法 •4.候选方法的初步试验 •标准曲线的线性范围和重复性； •重复试验——精密度； •对比试验——准确度；
评价临床方法的文件
• 核准（approved），编号为A ：核准文件是 修改后的最终文件。
• 提议（proposed），此类文件编号为P ：“ 提议文件”的内容通常要接受广泛、细致、 全面的评论；
• 它在发展相关的标准和指南时采取了特有的一致化 过程（consensus process）。
• NCCLS的自愿一致化过程是一个建立正式标准的过 程，包括：方案的认可；建立和公开对有关文件的 评论；根据使用者的意见修改文件。
方法学评价文件（1）
• EP5-A：临床化学设备操作精密度评价 核准指南（ Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline）。用于 临床化学设备进行精密度评价的实验设计及如何与 生产厂声明的精密度进行比较。
• 2．二级标准品（次级参考物， secondary reference material ） 包括用于 常规分析的标准液。这类标准品可由实 验室自已配制或为商品，它的示值必须 用一级标准品和参考方法并由训练有素 的，能熟练掌握参考方法的操作者确定 ；主要用于常规方法的评价或为控制物 定值和常规测定的结果计算。
生化检验各项目参考范围及临床意义
生化检验各项目参考范围及临床意义目录一、生物化学检验 (2)1.1 血糖测定 (4)1.2 血脂测定 (5)1.3 电解质测定 (6)1.4 血清铁蛋白测定 (7)1.5 肌酐测定 (8)1.6 尿素氮测定 (9)1.7 胆红素测定 (10)二、免疫学检验 (11)2.1 肝功能检查 (12)2.2 乙肝病毒表面抗原测定 (13)2.3 丙肝病毒抗体测定 (14)2.4 甲状腺功能测定 (15)2.5 肿瘤标志物测定 (16)三、分子生物学检验 (17)3.1 基因检测 (18)3.2 药物代谢酶测定 (19)3.3 病毒抗体测定 (20)四、血液学检验 (22)4.1 血细胞计数 (23)4.2 出血时间测定 (24)4.3 血块收缩时间测定 (25)4.4 血小板计数 (25)五、尿液检验 (26)5.1 尿液常规分析 (27)5.2 尿沉渣分析 (29)5.3 尿液生化分析 (30)六、体液检验 (31)6.1 脑脊液检验 (32)6.2 精液检验 (34)6.3 阴道分泌物检验 (35)七、其他生化检验项目 (36)7.1 血清蛋白电泳 (38)7.2 免疫球蛋白测定 (39)7.3 血清酶学测定 (41)一、生物化学检验生物化学检验是指通过检测人体内的生化指标，如酶、蛋白质、糖类、脂质、电解质等，来了解人体生理功能和病理变化的一种检验方法。
生物化学检验在临床诊断中具有重要的参考价值，可以帮助医生判断患者的病情、制定治疗方案以及评估治疗效果。
酶是生物体内催化生化反应的重要物质，其活性水平的异常可能反映出机体的病理变化。
常见的酶类指标包括：谷丙转氨酶(ALT):主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，其水平升高提示肝损伤。
谷草转氨酶(AST):同样主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，AST 也会释放到血液中，其水平升高也提示肝损伤。
乳酸脱氢酶(LDH):存在于各种组织细胞中，其水平升高可能与组织坏死、缺氧、炎症等有关。
常规生化检验项目各项指标参考范围和临床意义
常规生化检验项目各项指标参考范围和临床意义常规生化检验项目是临床医学中常用的一种实验室检验方法，用于评估人体内各种生物化学过程的正常与异常状况，有助于诊断疾病、监测疗效和预测疾病进展等。
以下是常规生化检验项目中一些重要指标的参考范围和临床意义。
1.血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）：参考范围：ALT：男性≤50U/L，女性≤35U/L；AST：男性≤40U/L，女性≤35U/L。
临床意义：ALT和AST通常用于评估肝功能，出现异常意味着肝细胞损伤，并且可以帮助区分肝炎、肝病毒感染、肝细胞癌等。
2.血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）：参考范围：TP：60-80g/L；ALB：35-55g/L。
临床意义：TP和ALB是评估肝功能和营养状况的重要指标，异常可提示肝脏疾病、营养不良等。
3.血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）：参考范围：BUN：2.86-8.21 mmol/L；Cr：53-106 μmol/L。
临床意义：BUN和Cr是评估肾功能的重要指标，异常可以提示肾脏功能损伤，如急性肾衰竭、慢性肾病等。
4.血清总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）：参考范围：TBIL：3.4-20.5 μmol/L；DBIL：0-6.8 μmol/L。
临床意义：TBIL和DBIL常用于评估肝胆系统功能，异常可以提示肝胆疾病，如黄疸、胆结石等。
5.血清钠（Na）、钾（K）和钙（Ca）：临床意义：这些电解质指标常用于评估水电解质平衡和神经肌肉功能，异常可以提示肾功能障碍、电解质紊乱、神经肌肉病等。
6.血清葡萄糖（GLU）：参考范围：空腹血糖：3.6-6.1 mmol/L。
临床意义：血糖是评估糖代谢的指标，异常可以提示糖尿病、胰岛素抵抗等。
7.血清甲状腺素（T3、T4）和甲状腺刺激素（TSH）：参考范围：T3：1.2-3.1 nmol/L；T4：63-165 nmol/L；TSH：0.55-4.78 mIU/L。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
临床生物化学检验
临床生物化学检验：既是一门研究人体健康和疾病时的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法检验机体健康和疾病的医学应用学科。
量值溯源：用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。
实验室信息管理系统：是对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验发展等方面所产生及所需求的信息，通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。
临床诊断试验：是指临床上用于确定或排除疾病的方法或项目。
临床生物化学诊断试验：是指临床生物化学实验室中用于疾病诊断、筛查和监测的方法或项目。
参考值区间：指所有参考值剔除离群值并补充数据后在95%的分布范围。
金标准：指当前为临床医学界公认的诊断某种疾病最可靠的诊断方法，可通过活检、尸检、外科手术、随访等所作出的决定性诊断，又称确诊试验。
临界值：指划分诊断试验结果正常与异常的界值，又称阈值、分界值等。
医学决定水平：临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。
ROC曲线：以真阳性率为纵坐标，假阴性率为横坐标，将相对应的各临界值连接起来的折线图。
国际单位（IU）:是指在特定条件下，将1min 内能转化1umol底物的酶量定为一个国际单位。
定时法：是将酶与底物在特定条件下孵育一定时间后，用终止夜终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间后，计算出底物消耗速度或产物生成速度。
连续监测法：是将酶与底物在特定条件下孵育，每隔一定时间连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率。
最适条件：是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。
代谢物酶法分析技术：是指用酶法分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物的技术。
酶法分析：是以酶为试剂测定酶促反应的底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂，以及利用酶偶联法测定酶活性的一类方法。
肿瘤标志物：是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。
检测系统的评价与验证
详见教材P8 为了实用的目的，初试应该包括
（三）侯选方法的初步试验：
①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验；
③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方
法的测定值作对比；
21
④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。
第二节 实验方法的评价
初步试验 判断符合实验要求
系统评价 分析评价试验测得结果和 比较方法性能判断的标准
❖ ①在进行临床化学常规方法的评价时，最好 选择参考方法作为比较方法
❖ ②若采用已知偏差法，则有部分误差来自比 较方法（与已知偏差 一致的那部分误差）， 剩余的则属于侯选方法。
❖ ③若采用未知偏差法，分析误差可能来源于 二者之一或两者都有，难以分析。
39
方法学评价实验小结
重复性试验：
测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。
可直接测定
误差
方法评价试验
28
(二)方法评价步骤
评价前实验:研究候选方法的最适条件。
初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验
随机误差
系统误差
最后评价:依顺序作日间重复性试验，方法比较试验和总体判断方法
是否可接受 。
方法性能
判断
评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究.
诊断学评价
（五）线性范围
实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围。
31
四、评价试验
评价试验包括
❖ 重复性试验 ❖ 回收试验 ❖ 干扰试验 ❖ 方法比较试验
32
（一）重复性试验
试验的目的:
检测候选方法的随机误差
试验的方法:
对同一材料（标准液、质控液、标本等）分成数份试验标本进行多次分 析测定，并计算其均数、标准差与变异系数。
临床化学分析方法选择与评价
临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。
使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。
有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。
第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。
评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
临床生化检验临床应用性能评价
注意事项：
①正确选择受检对象，以受检对象的确对所反映的总体具有 代表性和不存在对指标具有影响的因素为原则；
②合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族、职业、 女性的月经期、妊娠和哺乳，以及标本采集的时间和地区 因素等；
③保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若指标分 布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30例以上；
通常用于
①拟诊为严重但疗效好的疾病，以防漏诊；
②拟诊为有一定治疗效果的恶性肿瘤，以便 早期确诊及时治疗；
③存在多种可能疾病的诊断，可排除某一诊 断；
④普查或定期健康体检，能筛选某一疾病, 以防漏诊。
2、诊断特异度与误诊
用诊断试验检出的阴性结果的百分率，表示非患病者中诊断 试验正确确定非患病者的能力，又称为真阴性率。
“金标准”
是指当前临床医学界公认的，诊断疾病最可靠的、在 临床上能获得肯定结论的方法。
使用金标准的目的就是准确区分受试对象是否为某病 患者。
临床上常用的金标准包括组织病理学检查（活检、尸 体解剖）、外科手术发现、病原体分离培养鉴定、特 殊检查和影像学检查（CT、核磁共振、彩色B超）、 生物学标志检查和长期随访所得的结论等。
确认试验：确诊试验主要是指在实验如果是阳性（定性）的情况下，需要做的一种
确诊实验，以肯定对疾病的诊断。
筛查实验与诊断实验的区别
一、检验项目临床应用性能评价的意义
1.检验项目临床应用面临的问题 2.临床生物化学检验学科发展的需要 （1）决定新检验项目的临床应用 （2）合理选择检验项目的适用范围 （3）为制定临床检验实践指南提供依据 3.临床生物化学检验工作的基本任务之一
例如，诊断冠心病的标准诊断方法是冠状动脉造影， 诊断肾炎的标准方法是肾组织活检和尸体解剖，诊断 胆结石的标准方法是手术所见。
临床生化诊断试验的诊断性能评价
临床生化诊断试验的诊断性能评价第一节概述临床诊断试验(diagnostic test)是指临床上用于某种疾病诊断的诊断方法。
广义上讲，临床诊断试验不仅包括各种实验室检查、影像诊断和仪器诊断，也包括一些病史及临床检查提供的资料。
随着科学技术的进步与发展，用于疾病诊断的临床诊断试验层出不穷，但是，并不是所有的新的临床诊断试验均比常规方法或旧的方法好。
新的临床诊断试验的性能如何，必须用合理的评价方法进行评价确定。
临床诊断试验的性能评价内容包括技术性能评价、诊断性能评价、临床效应评价和经济效益评价。
诊断性能评价的方法是基于有关流行病学调查为基础，对某种疾病的诊断方法进行评价的临床试验。
它侧重于对一种新的诊断方法，包括症状、体征、检查和检验等进行临床试验评价。
临床生化诊断试验是指临床生化实验室中用于某种疾病诊断、筛查和监测的检查方法或项目。
临床生化诊断试验的诊断性能评价，不同于技术性能的方法学评价，它以流行病学调查为基础，评价某种临床生化诊断项目在某种疾病诊断方面的诊断价值。
一、临床诊断试验的数据与患病情况的关系诊断试验分定性试验和定量试验。
定性试验的结果分为阳性和阴性结果，定量试验的结果为一系列连续的计量数据，这些数据可被分界值将其分为两个部分，也可判断为阳性和阴性结果。
一般情况下，由quot;正常人"与"病人"的诊断试验的结果的分布有部分重叠，因此，诊断试验的结果和患某病的情况之间可能出现四种关系：①真阳性（True positive，TP）指经试验而被正确分类的患者的数目。
②假阳性（False positive，FP）指经试验而被错误分类的非患者的数目。
③真阴性（True negative，TN）指经试验而被正确分类的非患者的数目。
④假阴性（False negative，FN）指经试验而被错误分类的患者的数目。
结果见图8-1。
二、临床诊断试验的诊断性能评价的层次（一）诊断试验对疾病诊断的准确性、有效性和可靠性诊断试验提供的数据有两个方面的作用：①对疾病的状态识别，即鉴别有无疾病。
临床生物化学检验-第4章 方法与试剂盒
1
1
2
1
…
1
1
1 … Sums
1
1
22
2 1
22
(1)
(2)
2
1-
2 2
(3)
18
4. 统计分析 ② 统计计算：首先计算参数A、B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。
A
I:
Xi1 •
i1
Xi2 •
i2
(Xi1 • − Xi2 • )2 A=
2I
B
Xi••
i
X•••
(Xi•• − X•••) 2
1
… 40
Xi1/2表示第i号样品第1次/第2次用比较方法测定的结果 Yi1/2表示第i号样品第1次/第2次用候选方法测定的结果
24
2. 统计分析 ② 离群点的检查
1 2
25
2. 统计分析 ③ 候选方法（Y）与比较方法（X）相关回归分析
r = σ σ(Xij − X)(Yij − Y) σ σ ( Xij − X ) 2 σ σ ( Yij − Y ) 2
28
3. 统计分析 (1) 数据整理与离群点的检查： 4次重复测定结果由高到低排序（见表5）。 (2) 多项式线性回归分析： 首先假设数据是非线性的。 (3) 组内变异试验：计算各组内变异均方差 (SS组内)，判断组内变异是否可接受
计算公式： SS组内 = ∑Y2 – ( ∑Y)2/4； P = 最大SS组内/总SS组内 若 P> P0.05 ，则组内变异可接受。
16
2. 评价步骤 用2个样品每天测定2批， 批间测定间隔不得少于2h。每批测定均作2份，至少共测
定20天。每批测定至少做一个质控。
3. 批内精密度计算公式
临床生化方法学评价
仪器、试剂误差
• 偶然误差：
定义：指以偶然的和不可预料的方式出现的不易测定 的偏差。 特点：
误差的大小或正负相等，在均数两侧对称分布，增加测定次 数可以减小，可以控制在一定范围内，但不可避免。表示不精 密度。
主要见于：操作误差
方法的线性范围不够宽 实验条件随机改变 注：引起SE与RE的因素是相对的。
4、回收试验注意事项：
① 准确吸量 ②作高、中、低三个浓度（线性范围内）的回收实验， 计算平均回收率。 ③分析样品终浓度最好达医学决定水平。 ④加入标准液的体积要在10％以内。 ⑤ 一般标准液浓度比欲增加的浓度至少高10倍。 ⑥最好重复测定几次。 ⑦病人样品数视具体情况而定。 ⑧最好同时用对比方法测回收。
回收率计算，以测定血清钙为例：
(1)样品制备：
①基础样品：血清2ml＋蒸馏水0.1ml
②分析样品：血清2ml＋4mmol/L钙标准液0.1ml
③分析样品：血清2ml＋ 25mmol/L钙标准液0.1ml
(2)计算公式及计算结果：
加入浓度=
标准液浓度×
标准液量(ml) 血清量(ml)+标准液量(ml)
(1)系统误差(SE)： 恒定系统误差(CE)：误差大小与被测物浓度无关。 比例系统误差(PE)：误差大小与被测物浓度有关。
(2)偶然误差/随机误差(RE)
允许误差
• 系统误差：
定义：指一系列测定结果与真值或靶值 相比存在同一倾向的偏离。
特点：重复检验时，按一定规律重复出 现，增加测定次数不可消除，但改进方法 等可以校正。表示不准确度。
指经过充分证实认为精密度与准确度稍低于决 定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方 法。用于鉴定常规方法与二级标准品，及为质控 血清定值，评价商品试剂盒。
--临床生化检验方法学评价试验
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
7
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
计算
用Grubbs检验准则，检验离群值的统 计学公式是：
G d S
式中，Xd为离群值； X为包括离群值在内 的测定值的均数；s为包括离群值在内的测 定值的标准差
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
8
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
计算
如计算的G值大于系数表中相应显著水平的a和 测定次数n时的临界值Ga.n，则将Xd作为异常值舍弃， 可按下列三种情况来处理：
（1）只有一个离群值的情况：设有n个测定数 （X1<X2<X3<X4<……<Xn）其中X1为离群值，即可 利用上述公式，直接对X1进行检验。
2
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
一、重复性实验 二、回收试验 三、干扰试验 四、方法比较试验 五、方法性能决定图绘制 六、最低检测限实验
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
3
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
一、重复性实验
实验原理
批内重复性试验是指在同一条件下（用同样的 方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一 实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变） 对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n 次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。 其结果能反映测定方法的随机误差大小。
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
实验27 临床生化检验方法学评价试验
操作步骤
临床生化检验方法与试剂盒评价 医学课件
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价
③确定对比检测系统 ④初步评价检测系统
⑤比对
步内 骤容
可接受性判断
第23页
允许不精密度、允许 偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或 公认的测定系统
性能指标
40-100例
测定系统的关键要素
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
2.对仪器性能进行评价 保证仪器处于良好 的工作状态，具备可接受的精密度和准确 度。 3. 确定对比检测系统 比如具有溯源文件 的HK法测定血糖的配套检测系统，并对该 检测系统的性能进行验证，核实其准确度 和精密度。
第20页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第29页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）于2005年更 名为临床和实验室标准研究院（CLSI）。制订了一系列评 价方案（evaluation protocols，EP），包括: 临床化学设备精密度评价（EP5-A） 定量分析方法的线性评价（EP6-A） 干扰试验（EP7-A） 方法对比评价及偏差评估（EP9-A2） 定量方法的初步评价（EP10-A2） 定性方法的评价（EP12-A） 基质效应评价（EP14-A）、。 EP不仅可用来评价临床生物化学检验方法性能，也可用以 评价试剂盒和分析仪器的性能。
标准计量局、参考实验室、试剂盒供应
商、临床实验室
3
保证仪器良好的工作状态、严格的操作
规程和质量控制、实验室内部测定系统
的比对、实验室间的比对
第25页
临床生化检验方法的选择和评价课件
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测定方法结果 差异（试验－比较）
零 线
比较方法结果
差异分析图
比较方法结果
对比分析图
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❖2．回收试验 所谓回收即分析方法正确 测定加入常规分析样品中的纯分析物的 能力。目的是测定比例系统误差，以衡 量候选方法的准确度。 （1）方法：将被分析的纯品标准液加 入样品中，成为分析样品，原样品加入 同量的无分析物的溶液作基础样品，然 后用实验方法分析，两者测定结果的差 值为回收量。
2种方法分别作双份测定，如临床标本 的量太少可将2份含量相近的标本混合。 ❖ ②每天测定8个标本，双份测定时第一 次按顺序1，2……7，8，第二次8， 7……2，1，共测试5天。
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结果分析
(1)作图分析 1)差异分析 2)对比分析
–– 差异图: Y轴:试验方法与比较方法之差 X轴:比较方法的测定值 –– 对比图:
❖方法学评价（evaluation of methodology）通过实验途径测定分析 方法的技术性能，并评价其是否能接 受。 评价实验的过程就是对误差的测定。
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主要的方法技术性能指标： 准确度(accuracy) 灵敏度(sensitivity) 特异度(specificity) 分析测量范围(analytical measure range, AMR)评价实验的过程就是对误 差的测定。
④干扰可能是造成误差的一个重要原因， 如果干扰物是恒定的将引起恒定误差， 如干扰物随病理生理因素影响，将引起 随机误差。
因此，实验室应了解各种测定方法的干扰 情况
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❖ 2．试验前准备 ❖ ①应做的主要干扰物为病人标本中常常
出现的黄疸，脂血和溶血；某些药物如 维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐 剂和稳定剂。 ❖ ②质量保证，不存在系统误差；批内精 密度在可接受范围内；应不存在前后结 果的交叉污染；实验过程有质控监督。
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第五章临床生化检验方法的选择和评价临床生化检验方法的选择和评价，是临床生化检验质量控制的重要基础工作。
当建立一个新的方法，或引进新的方法、都应对它们的技术性能作出评价，以便科学的选择和应用。
它们之间的关系可用图5-1 来表示。
图5-1 方法选择和评价与其它实验之间的关系图5-1 方法选择和评价与其它实验之间的关系第一节检验方法的正确选择一检验方法和标准品的分级（一）方法的分级临床生化检验方法根据其准确度与精密度的不同可以分为决定性方法、参考方法、常规方法等三级。
1．决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。
用于发展及评价参考方法和一级标准品。
2．参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。
这类方法在条件许可的实验室中应经常使用。
用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。
3．常规方法（routine m ethod）指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。
这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法（recommended method），推荐方法应具有足够的实验证据。
临床化学决定性方法及参考方法见表5-1。
表5-1 临床化学决定性方法及参考方法（Tietz，clin chem. 1979, 25: 834）项目决定性方法参考方法钙ID-MS 原子吸收分光光度法氯电量滴定法、中子活化法电流滴定法镁ID-MS 原子吸收分光光度法磷ID-MS ——钾ID-MS、中子活化法火焰光度法钠重量分析法、中子活化法火焰光度法白蛋白——免疫化学法总蛋白——双缩脲法肌酐ID-MS、离子交换层析法离子交换层析法尿素ID-MS 尿素酶法尿酸ID-MS 尿酸酶法（紫外法）胆红素——重氮反应法葡萄糖ID-MS 己糖激酶法胆固醇ID-MS Abell-Kendall 法，胆固醇氧化酶法甘油三酯ID-MS 酶法AST（GOT）——MDH-NADH 法ALT（GPT）——LDH-NADH 法转肽酶（r-GT）——连续监测产物生成法肌酸激酶——NAD+偶联法注：ID-MS：同位素稀释一质谱法MDH：苹果酸脱氢酶LDH：乳酸脱氢酶（二）标准品的分级国际标准化委员会将标准品（参考物）的定义暂定为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定；被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。
1．一级标准品（原级参考物）是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，且有证书；用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标准品定值。
2．二级标准品（次级参考物）也称校准品，包括用于常规分析的标准液。
这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素的，能熟练掌握参考方法的操作者确定；主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结果计算。
3．校准品用二级标准品和常规方法测定得到校准品，用于常规测定中的标准。
各级测定方法及标准品之间的相互关系及准确度传递见图5-2。
图5-2 方法与标准品之间的准确度传递二常规方法的选择（一）常规方法的性能指标国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标，至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。
（1）实用性：一般应具备微量快速，便于急诊；费用低廉；应用安全。
（2）可靠性：一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。
精密度即变异系数（CV%）一般应小于5%。
准确度是指测定值与“真值”的符合程度，一般偏差系数（CB）应小于5%。
特异性是指只对待测物质起化学反应，不与其他结构类似的化合物发生反应。
检测能力即“检测限度”或“检出限”。
检出限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小量。
（二）常规方法的选择程序首先根据方法选择的要求对已发表的各种检测方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。
经初步选定的方法称为候选方法。
候选方法确定后，要熟悉该法的原理、性能指标及相应的条件等。
然后进行初步试验，为了实用的目的，初试应该评价候选方法所有的性能指标。
第二节临床生化检验方法学评价方法学评价（evaluation of methodology）的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的精密度与准确度，在实验中测定的是不精密度与不准确度，无论是精密度还是准确度，强调的都是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。
一、方法评价方案美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）制订了一套评价方案（evaluation Protocols）,能客观而正确地对方法的技术性能作出评价。
它不仅可用来评价临床生化检验方法，而且还可用以评价试剂盒和分析仪器的性能。
（一）精密度评价1．目的要求评价方法给出结果的可重复程度即精密度。
反映精密度好坏的指标是变异系数CV，CV 越小精密度越好，反之则差，故有人称其为不精密度。
用本方案评价可以计算出批内、批间、日间和总CV，其中总CV 最重要，它代表整个分析体系的可重复程度。
2．评价前的准备①对于评价对象和评价方案均应熟悉。
②实验用试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态。
③实验用标本一般选择2 个（亦可更多），一个在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值，被测物在疾病时增高者用高值，降低者用低值；实验标本的介质应与临床标本一致，并应妥善保存，应保证在整个实验过程中稳定。
④先作一个初步的批内精密度测定，即一个标本重复测定20 次，计算出均值，标准差和变异系数。
3．评价步骤用2 个标本每天测定2 次（2 次测定间隔不得少于2 小时），每次测定均作双份，共测定20 天。
每次测定至少做一个质控。
（二）准确度评价1．方法比较试验目的是评价方法所给出的结果是否准确，采用的是方法比较试验。
在实验的范围内两方法间的平均差异，并确定偏差。
(1)要求方法比较试验理论上是两种方法间的差异均作为试验方法的偏差。
因此比较方法应是参考方法或推荐方法，如该测定没有参考方法或推荐方法亦可用公认的常规方法。
但须具备：①比较试验方法有更好的精密度。
②干扰影响已知。
③与试验方法使用相同的计算单位。
(2)比较前准备①实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和评价方案。
②实验标本应收集新鲜的正常和异常的临床标本，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。
如不能及时测定，标本应妥善保存并应在分析物的稳定期内测定。
(3)方法比较步骤①样本数至少为40 个标本，每个标本用2 种方法分别作双份测定，因此样本应有足够的量，如临床标本的量太少可将2 份含量相近的标本混合。
②每天测定8 个标本，双份测定时第一次按顺序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，共测试5 天。
方法比较中实验质料的分配建议见表5-2。
2．回收试验所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。
目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。
（1）方法：将被分析的纯品标准液加入样品中，成为分析样品，原样品加入同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。
（2）回收率计算：理想的回收率为100%，如某法测血钙的回收率为95.7%，有4.3%的比例误差，表明一个含钙真值为2.5mmol/l 的标本,若用该方法测定,约为2.39mmol/l(2.5×95.79% )，误差为0.11mmol/L(2.5Χ4.3%)。
（3）注意事项：①准确吸量,因为被分析物的理论值是根据加入标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响结果；②样品中加入标准液后,总的浓度必须在方法的分析范围内，一般须加入高、中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收率；③加入标准液后，最好使实验样品的被测浓度达到医学决定浓度；④加入标准液的体积一般在10%以内。
若稀释过大，误差将发生改变，甚至消失。
（三）线性评价1．目的要求线性范围是分析方法的一个重要技术指标，它能判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。
常规方法应具有较宽的分析范围，一般应覆盖临床可能出现的高值。
2．评价前准备①熟悉仪器、评价方案和试剂。
②评价标本的介质应与实际测定的标本相一致，理想的标本是病人的低值或高值标本，这往往不易收集到，亦可用病人的混合标本加入分析物作为高值标本，用正常人标本作为低值标本（必要时可作处理如分析物为酶可以加热，小分子化合物可以透析，脂类可用超离心或多价阴离子沉淀）。
③浓度范围应以分析项目的线性要求为准。
线性评价应有5个不同浓度，可选择低值和高值标本各一个，低值标本为1号，高值标本为5号，二者3 ：1混匀为2号，等份混匀为3号，1：3混匀为4号，2-4号标本的浓度按下式计算：标本浓度= （C1V1 + C5V5）/（V1 + V5）C = 浓度，V = 体积。
（四）干扰试验1．目的要求判断评价方法给出的结果是否受非分析物影响及影响程度。
①干扰是指在测定某分析物的浓度或活性时，受另一非分析物影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。
②干扰物质可分为内源性（标本中存在的）和外源性（外界污染的）两类。
内源性的干扰物有：血清中固有的代谢产物，如甘油三酯测定时血清中的甘油，肌酐酶法测定时血清中的肌酸等；病理情况下生成的：如胆红素，脂类，蛋白质，血红蛋白等；治疗药物，肠道营养等。
外源性表5-2 方法比较中实验资料分配的建议项目 A 组 B 组 C 组 D 组 E 组Glu(mg/dl) <50(10%) 51~110(40%) 111-150(30%) 151-251(10%) 251-SL(10%)BUN(mg/dl) <15(10%) 12~25(40%) 26-50(20%) 51-100(20%) 101-SL(10%)Cr(mg/dl) <1.0(20%) 1.1~2.5(30%) 2.6-5.0(20%) 5.1-10(20%) 10-SL(10%)Na(mmol/L) 120~130(20%) 131~140(40%) 141-150(30%) 151-160(10%)K(mmol/L) <3.0(20%) 3~4.5(40%) 4.5-6.0(30%) >6(10%)Cl(mmol/L) 80~95(30%) 96~105(40%) 106-120(30%)CO2(mmol/L) <15(10%) 15~20(30%) 21-30(40%) 31-40(10%) 41-SL(10%)Ca(mg/dl) <8(10%) 8.1~9(20%) 9.1-11(40%) 11.1-13(10%) 13.1-SL(10%)Fe(μg/dl) <50(20%) 51~150(50%) 151-300(20%) 301-SL(10%)iP(mg/dl) <2.5(10%) 2.6~4.5(60%) 4.6-6.5(20%) >6.5(10%)UA(mg/dl) <3.0(20%) 3.1~5(20%) 5.1-8(20%) 8.1-10(20%) 10.1-SL(20%)TP(g/L) <50(10%) 51~70(40%) 71-90(40%) >90(10%)Alb(g/L) <30(10%) 31~40(40%) 41-50(40%) >50(10%)T-Bil(mg/dl) 0~1.0(30%) 1.1~2(30%) 2.1-5(20%) >5(10%)Cho(mg/dl) <150(10%) 151~250(40%) 251-350(30%) >350(20%)TG(mg/dl) <75(10%) 76~125(30%) 126-200(30%) 201-300(10%) 301-SL(10%)ALP(U/L) <NL/2(30%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(20%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%)r-GT(U/L) 0-NL(40%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(10%) 4NL-SL(10%)ALT(U/L) <NL/2(20%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%)AST(U/L) <NL/2(20%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%)LD(U/L) <NL/2(15%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-5NL(20%) 5NL-SL(10%)CK(U/L) <NL/2(10%) NL/2-NL(25%) NL-2NL(30%) 2NL-5NL(20%) 5NL-SL(10%)Amy(U/L) 0-NL(40%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%)Hb(g/dl) <9.0(15%) 9.1~12(25%) 12.1-17(50%) 17.1-SL(10%)RBC(×106) <3.0(10%) 3.1~4(30%) 4.1-6(50%) 6.1-SL(10%)WBC(×103) <2.0(10%) 2.1~5(20%) 5.1-11(40%) 11.1-25(20%) 25.1-SL(10%)Platlets(×103) <50(10%) 51~150(20%) 151-300(30%) 301-450(30%) 451-SL(10%)干扰有：标本收集中的添加物如抗凝剂，防腐剂，稳定剂，容器和塞子的污染等；试剂中的杂质和杂酶等。