放射免疫试验详解演示文稿
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《放射免疫分析实验》课件
放射免疫分析的灵敏度和准确性。
3
放射免疫分析的操作步骤
深入了解放射免疫分析的操作步骤，包 括离心、反应时间控制和放射性测量。
结果分析与讨论
1 利用放射免疫分析结果进行定量分析
学会如何利用放射免疫分析的结果进行定量数据分析，并研究结果的意义和影响。
2 讨论实验中可能出现的误差，并提出改进方法
探讨实验中可能出现的误差来源，并提出改进方法以提高实验的准确性和可靠性。
《放射免疫分析实验》 PPT课件
欢迎来到《放射免疫分析实验》PPT课件！在这个课程中，我们将介绍放射免 疫分析实验的基本原理、实验步骤以及结果分析与讨论。让我们一起开始探 索这个有趣的领域！
实验介绍
放射免疫分析实验的基本原理
我们将学习放射免疫分析实验的基本原理，了解其在生物医学研究中的应用。
放射性示踪剂的选择和制备方法
探索放射性示踪剂的选择和制备方法，以及如何确保实验结果的准确性和可靠性。
试剂和仪器介绍
了解实验中使用的试剂和仪器，包括其功能、使用方法和常见注意事项。
实验步骤
1
样品准备和标准曲线的制作
学习如何准备样品并制作标准曲线，以
样品基质的处理和分离
2
便后续实验的数据分析和定量计算。
探索如何处理和分离样品基质，以提高
3 分析结果与预期目标的对比
将实验结果与预期目标进行对比，评估实验的成功程度和可行性。
实验应用与展望
实验应用
了解放射免疫分析实验在生物医学研究中的应用， 以及其对人类健康的域中的应用， 以及未来发展的前景。
放射免疫分析-课件
第4讲 放射免疫分析的应用
RIA除了用于测定胰岛素、胃泌激素外，还被用于测定维 生素B12和甲状腺素等。在临床上，用放射免疫分析可检 测β2-微球蛋白和铁蛋白等。可用RIA测定的物质如下： 一、肽类激素 垂体激素：生长激素、促肾上腺皮质素、促黑激素(α-促 黑激素、β-促黑激素)、糖蛋白类(促甲状腺素、促卵泡激 素、促黄体激素)、催乳素、促脂素、加压素、催产素 绒毛膜激素：人绒毛膜促性腺激素、人绒毛膜生长促乳素 胰腺激素：胰岛素、胰高血糖素、胰多肽
B/F
0
[Ag0]
标准曲线
根据加样顺序与温育次数的不同，放 射免疫分析可分为如下三种。 平衡法：将非标记抗原、抗体、标记抗原 依次加入反应管，混匀后一次性温育至反 应达到动态平衡，再加分离剂使B与F分离。
顺序加样法：先将非标记抗原与抗体在反 应管内作第一次温育，待反应达到动态平 衡后，加入标记抗原，作第二次温育，然 后分离B与F。
(1)液相双标记IRMA技术：将两株mAb分别 标记125I和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothicyanate，FITC)作为标记试剂，检测时 将样品和标记试剂加至试管中，温育后加 入磁性固相抗FITC，5 min后，置于磁性分 离器上，洗涤后即测量放射性。抗原和标 记抗体在液相中反应生成双抗体夹心复合 物，免疫反应达到平衡所需时间比固相试 管法更短，各项技术参数均超过目前广泛 采用的IRMA法。
为了验证这种观点，S.A. Berson和R.S. Yalow等人(1956)给非糖尿病和糖尿病 受试者静脉注射131I标记胰岛素以研究其 代谢，他们比较了接受胰岛素治疗的病 人和从未接受过胰岛素的受试者的血浆， 发现前者胰岛素的消失速度比后者慢得 多，提出外源胰岛素的注射使病人体内 产生了抗体，与抗体的结合导致胰岛素 消失速度降低。
《放射免疫分析》课件
用于研究生物分子间的相互作用和动 力学过程。
药物研发与药效评估
用于药物筛选、药代动力学研究和治 疗效果评估。
THANKS
感谢观看
酶联免疫分析也是常用的免疫分析方法，与放射免疫分析相比，酶联免疫分析不需要使用放射 性同位素，操作更加简便，但灵敏度相对较低。
与化学发光免疫分析的比较
化学发光免疫分析是近年来发展较快的免疫分析方法，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等 优点，但成本也相对较高。
放射免疫分析的未来发展与
05
展望
新技术与新方法的探索
02 反应动力学
抗原-抗体反应速度受多种因素影响，如温度、 pH值、离子强度等，通过控制这些因素可以加速 或减缓反应速度。
03 抗原-抗体浓度的关系
在一定范围内，抗原和抗体浓度的比例影响反应 的灵敏度和特异性，因此需要合理选择抗原和抗 体的浓度。
放射免疫分析的分离技术
01
沉淀法
利用抗原和抗体结合后形成的大分子复合物在离心或重力作用下沉降，
溶液。
实验环境
确保实验室环境整洁 、安全，符合实验要
求。
实验人员培训
所有参与实验的人员 都应经过相关培训， 熟悉实验操作流程和
注意事项。
样本处理
01 样本收集
按照规定的程序和方法收 集样本。
03 样本标识
对每个样本进行唯一标识
，确保后续实验结果的准
确对应。
02 样本处理方法
根据实验需求，对样本进 行适当的处理，如离心、 稀释、分离等。
04 样本保存
确保样本在适当的条件下
保存，以保持其有效性。
实验操作步骤
标记抗体
将抗体与放射性物质进行标记，以便后续 的检测。
药物研发与药效评估
用于药物筛选、药代动力学研究和治 疗效果评估。
THANKS
感谢观看
酶联免疫分析也是常用的免疫分析方法，与放射免疫分析相比，酶联免疫分析不需要使用放射 性同位素，操作更加简便，但灵敏度相对较低。
与化学发光免疫分析的比较
化学发光免疫分析是近年来发展较快的免疫分析方法，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等 优点，但成本也相对较高。
放射免疫分析的未来发展与
05
展望
新技术与新方法的探索
02 反应动力学
抗原-抗体反应速度受多种因素影响，如温度、 pH值、离子强度等，通过控制这些因素可以加速 或减缓反应速度。
03 抗原-抗体浓度的关系
在一定范围内，抗原和抗体浓度的比例影响反应 的灵敏度和特异性，因此需要合理选择抗原和抗 体的浓度。
放射免疫分析的分离技术
01
沉淀法
利用抗原和抗体结合后形成的大分子复合物在离心或重力作用下沉降，
溶液。
实验环境
确保实验室环境整洁 、安全，符合实验要
求。
实验人员培训
所有参与实验的人员 都应经过相关培训， 熟悉实验操作流程和
注意事项。
样本处理
01 样本收集
按照规定的程序和方法收 集样本。
03 样本标识
对每个样本进行唯一标识
，确保后续实验结果的准
确对应。
02 样本处理方法
根据实验需求，对样本进 行适当的处理，如离心、 稀释、分离等。
04 样本保存
确保样本在适当的条件下
保存，以保持其有效性。
实验操作步骤
标记抗体
将抗体与放射性物质进行标记，以便后续 的检测。
《放射免疫技术》课件
放射免疫技术的应
06
用案例
肿瘤标志物的检测
肿瘤标志物
放射免疫技术用于检测与肿瘤相 关的生物活性物质，如癌胚抗原 （CEA）、甲胎蛋白（AFP）等 ，有助于肿瘤的早期发现和诊断 。
应用范围
放射免疫技术广泛应用于临床肿 瘤的筛查、诊断、病情监测以及 疗效评估，为肿瘤患者提供个性 化的治疗方案。
内分泌激素的检测
试剂的验证
对试剂进作流程的规范
制定详细、规范的操作流程，确保检测过程的准确性和可靠性。
操作人员的培训
对操作人员进行专业培训，提高其技能水平和责任心。
操作过程的监控
对操作过程进行实时监控，及时发现并纠正操作中的问题。
放射免疫技术的优
05
缺点
优点
高灵敏度
放射免疫技术具有很高的灵敏度，可 以检测出极低浓度的蛋白质、激素和 其他生物分子。
特异性
该技术利用抗体与抗原的特异性结合 ，能够准确地检测目标分子，减少了 背景干扰。
可定量
通过测量放射性计数，可以定量分析 样本中目标分子的浓度，提供更准确 的定量数据。
易于自动化
随着技术的发展，放射免疫分析已经 实现了自动化，提高了检测效率。
。
放射性标记物通常为放射性同位 素标记的抗原或抗体，与未标记 的抗原或抗体竞争性结合特异性
抗体或抗原。
通过测量放射性标记物的信号强 度，可以推算出待测抗原或抗体
的浓度。
放射免疫分析的类型
竞争性放射免疫分析
在待测抗原和标记抗原同时存在的条 件下，竞争性地与有限量的特异性抗 体结合。
非竞争性放射免疫分析
缺点
放射性危害
半衰期限制
使用放射性同位素作为标记物可能对实验 人员和环境造成潜在的危害，需要采取严 格的防护措施。
放射免疫技术(免疫学检验课件)
放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞 争性结合限量的抗体;免疫放射分析是将放射性物 质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。
IRMA和RIA的比较
反应方式
IRMA
非竞争结合
RIA
竞争结合
标记物质
抗体
抗原
标记物用量 过量
限量
B、F分离方法 固相抗体法等 第二抗体法等
其他
只能测具有2个 可测大、小分子 以上抗原表位 量的物质 物质
第一节 放射性核素和放射性标记物的制备
• 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物， 选择何种放射性核素以及如何制备放射标 记物（将放射性核素与抗原或抗体连接）， 是建立放射免疫技术的基础。
一、放射性核素的概述
• 基本概念 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种 放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时 释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 • 基本类型 依据其衰变方式
➢Ag*和Ag具有等同的
与Ab结合能力
Ab限量，Ag*定量, Ag*和Ag的量大于 Ab结合位点，二者 通过竞争方式与Ab 结合；随着Ag增加， Ag*与Ab结合形成 Ag*Ab复合物的放 射量降低,二者变化 成函数关系。
二、方法与类型
两种类型
(标准Ag/样品Ag)
平衡法，即标记抗原、标准品抗原（或 待检样本）、特异性抗体同时加入反应 体系中。
（二）分离结合标记物
活性炭吸附法 双抗体沉淀法
聚乙二醇（PEG )沉淀法
PR 试剂法
➢分离彻底，迅速 ➢分离试剂和过程不 影响反应平衡 ➢效果不受反应介质 影响 ➢操作应简单、重复 性好 ➢经济
（三）数据处理
➢晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器
IRMA和RIA的比较
反应方式
IRMA
非竞争结合
RIA
竞争结合
标记物质
抗体
抗原
标记物用量 过量
限量
B、F分离方法 固相抗体法等 第二抗体法等
其他
只能测具有2个 可测大、小分子 以上抗原表位 量的物质 物质
第一节 放射性核素和放射性标记物的制备
• 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物， 选择何种放射性核素以及如何制备放射标 记物（将放射性核素与抗原或抗体连接）， 是建立放射免疫技术的基础。
一、放射性核素的概述
• 基本概念 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种 放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时 释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 • 基本类型 依据其衰变方式
➢Ag*和Ag具有等同的
与Ab结合能力
Ab限量，Ag*定量, Ag*和Ag的量大于 Ab结合位点，二者 通过竞争方式与Ab 结合；随着Ag增加， Ag*与Ab结合形成 Ag*Ab复合物的放 射量降低,二者变化 成函数关系。
二、方法与类型
两种类型
(标准Ag/样品Ag)
平衡法，即标记抗原、标准品抗原（或 待检样本）、特异性抗体同时加入反应 体系中。
（二）分离结合标记物
活性炭吸附法 双抗体沉淀法
聚乙二醇（PEG )沉淀法
PR 试剂法
➢分离彻底，迅速 ➢分离试剂和过程不 影响反应平衡 ➢效果不受反应介质 影响 ➢操作应简单、重复 性好 ➢经济
（三）数据处理
➢晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器
放射免疫测定法课件
对标记抗原的要求 (1)标记抗原的免疫活性与待测抗原及标准品必须一致。 (2)标记抗原要有适当高的放射性比活度。 (3)标记抗原应具有足够高的放射化学纯度
衡量抗体质量的指标
亲和力:抗体结合的强度是RIA的前提 特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时的稀释倍数
非标记抗原的竞争力相应增强，有利于提高灵敏度。 2、抗原、抗体结合反应的平衡结合常数K与温度有关，必须
通过实验来确定最佳工作条件。 ◆ 与F分离方法选择 ◆ 样品采集与保存
六、放射免疫分析的质量控制
◆ 误差和放射免疫误差的来源 (1)误差及其分类 (2)放射免疫分析误差来源
◆ 掌握质量控制与质控样品 (1)放射免疫分析的质量控制内容 (2)质量控制样品
RIA方法学研究进展
1959年 Yalow和Berson建立放射免疫测定（RIA） 1960年 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1968年 Miles和Hales建立免疫放射量度分析（IRMA） 1968年 放射受体分析法(RRA) 1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
（二）、固相法
1. 直接法IRMA示意图
离心
标记抗体 抗原
固相抗原
测定
2. 双位点法IRMA示意图
洗涤
抗体 抗原
标记抗体
测定
八、免疫放射分析（ IRMA ）
• 基本原理：用过量的核素标记抗体与待测抗原形成复 合物，并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段除去 多余的游离抗体，测量抗原抗体复合物的放射性。
反应试剂
三种 标记抗原
二种 标记抗体
分离方法
抗原只需一个 抗原决定簇
一般需单抗作分离剂，抗原需 两个或两个以上决定簇
衡量抗体质量的指标
亲和力:抗体结合的强度是RIA的前提 特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时的稀释倍数
非标记抗原的竞争力相应增强，有利于提高灵敏度。 2、抗原、抗体结合反应的平衡结合常数K与温度有关，必须
通过实验来确定最佳工作条件。 ◆ 与F分离方法选择 ◆ 样品采集与保存
六、放射免疫分析的质量控制
◆ 误差和放射免疫误差的来源 (1)误差及其分类 (2)放射免疫分析误差来源
◆ 掌握质量控制与质控样品 (1)放射免疫分析的质量控制内容 (2)质量控制样品
RIA方法学研究进展
1959年 Yalow和Berson建立放射免疫测定（RIA） 1960年 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1968年 Miles和Hales建立免疫放射量度分析（IRMA） 1968年 放射受体分析法(RRA) 1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
（二）、固相法
1. 直接法IRMA示意图
离心
标记抗体 抗原
固相抗原
测定
2. 双位点法IRMA示意图
洗涤
抗体 抗原
标记抗体
测定
八、免疫放射分析（ IRMA ）
• 基本原理：用过量的核素标记抗体与待测抗原形成复 合物，并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段除去 多余的游离抗体，测量抗原抗体复合物的放射性。
反应试剂
三种 标记抗原
二种 标记抗体
分离方法
抗原只需一个 抗原决定簇
一般需单抗作分离剂，抗原需 两个或两个以上决定簇
演示文档放射免疫分析.ppt
酶免疫分析 发光免疫分析
化学发光免疫分析 酶放大化学发光免疫分析 电化学放光免疫分析
荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析 BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析 酶促放荧光免疫分析 微粒子酶荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析
金属离子免疫分析
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11
单位换算
1 g=1000mg 1mg=1000µg 1µg=1000ng 1ng=1000pg
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12
非放射性体外分析技术
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13
非同位素标记的条件
灵敏度 结合特性 均一性 稳定性 环境因素的不敏感性 临床应用 安全性 应用性
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14
非放射性体外分析技术
放射免疫分析
Radioimmunoassay
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1
一、原理：
竞争结合
Ag + Ab +
* Ag
AgAb + Ag
* AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定
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2
+
—6 X100=75%
8
+
—4 X100=50%
8
+
—2 X100=25%
8
+
—1 8
X100=12.5%
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3
结论
测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分 子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓 度为坐标，制作标准曲线
待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
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5
80 70 610
02 4
8 16 32 64 128
最新第六章--放射免疫实验ppt课件
• 降钙素（CT）和甲状旁腺激素（PTH）
• CT及PTH参与钙稳态调节机制：当血钙降低时， PTH分泌增加，作用于骨促进溶骨，钙自骨释出， 同时作用于肾使肾小管对钙回吸增多。血钙上升则 刺激甲状腺分泌CT抑制骨钙释放，同时促进肾小球 对钙的排出。
• CT和PTH的分泌功能彼此成反馈关系，机体通过它 们互相拮抗作用维持代谢的内环境稳定。降钙素和 甲状旁腺激素对钙代谢的调节不仅取决于它们在血 中含量的绝对值，更重要是它们的比值。因此测定 它们的比值对内分泌代谢病研究很有价值。
• 1,25二羟基维生素D及25羟基维生素D
• 体内维生素D经日光紫外线照射、且在C1和C25位 羟基化后，才能转变为有活性的维生素D代谢物。
• 测定血清中1,25二羟基维生素D及25羟基维生素D 的浓度可鉴别与维生素代谢有关的疾病。目前国内 用维生素D放免药盒用于维生素D缺乏症、骨营养 不良、肝炎和药物性维生素D紊乱、甲状旁腺功能 亢进或减退的测定。
临床化学分析
10-3
10-0
mg/mL
g/L
Therapeutic Drugs
Thyroid Hormone
Fertility Hormone Allergy
Cancer Markers Infectious Disease
Vitamins Serum Proteins
基本原理
竞争结合：放射性标记的抗原（Ag*）和非 标记的抗原（Ag）在同一反应系统中与特异 性抗体（Ab）的竞争性结合。
• 测量仪器： • （1）γ 计数仪 • （2）β液体闪烁计数器
两种标记方法的优缺点
3H标记物
货架期长
以3H置换H，对原物质 免疫活性无改变
标记难度大，比活度低 Β射线测量效率低 废弃物处理较困难
临床免疫学检验-课件-第7章-放射免疫技术RIA
②免疫活性 标记时总有部分抗原活性损失，因而应尽量避免。检查方法是
用小量的标记抗原加过量的抗体，反应后分离Ｂ、Ｆ，分别测定放 射性，算出百分结合率。此值[Ｂ／（Ｂ＋Ｆ）]应在８０％以上， 最大可超过９０％。该值越大，表示损伤抗原越少。 ③放射强度（比活度SA）
指单位质量标记物中所含的放射性强度。 标记抗原必须有足够的放射强度。
2~8℃避光保存
四、放射性125I放射活性检测
晶体闪烁计数器
五、放射性检测的防护
第二节 放射免疫分析（RIA）
(一)基本原理：Ａg＊与Ａb固定且微量
Ａg＊＋ Ａg ＋Ａb─Ａg＊.Ａb＋Ａg.Ａb
(Ｆ) （标本）
（Ｂ）
Ｂ：Ag-Ab复合物的放射性强度。
F：游离标记抗原的放射性强度。
Ｂ/Ｆ值或Ｂ/(Ｂ＋Ｆ)值 与标本中的Ａg 含量呈反比，可用竞争结合抑制曲线来
表示。
结合相B 游离相F
结 合、40 游 离 相 30 放 射 性 20 含 量 比 10 值
B/
1
F
2
5 10 20 50 100
标本中抗原含量
3、检测步骤
用RIA进行测定时分三个步骤: 抗原、抗体反应; Ｂ和Ｆ的分离; 放射性强度测定。
（１）抗原抗体反应 将标本(含非标记抗原)、标记抗原和抗血
清顺序定量加入小试管中，让其竞争结 合（平衡法、非平衡法）。 反应的时间主要有24小时和7小时二种。 不同反应时间其温度要求亦不同。 24小时：4℃ 7小时：37℃或室温（15－30℃）
（２）Ｂ、Ｆ分离技术
在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体 含量极微，形成的标记抗原抗体复合物 （Ｂ）不能自行沉淀，因此需用一种合 适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游 离标记抗原（Ｆ）的分离。
放射免疫-荧光标记免疫(共43张PPT)
液相法
平衡法（一步法）
顺序加样法
固相法
免疫放射分析技术
（immunoradiometric assay，IRMA）
1968年，Miles 和Hales应用同位素标记胰岛素抗体，成功检
测牛血清中的胰岛素。
Type 被标记物质
IRMA 抗体
抗体用量
过量
被检抗原相对分子量 相对较大
反应方式 B、F分离方法
胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数等更为准确。
固相抗原免疫吸附剂 通过延续时间，使特异性荧光与非特异性荧光分辨开来，使理论本底达到0。
流式细胞技术应用
测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性
对抗原吸附力强，对非特异性蛋白吸附少，结合过程中高度 125I -标记物的鉴定
但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA将逐渐被取代。
分步结合 固相洗涤分离
RIA 抗原
限量 相对较小
竞争结合
液相沉淀/吸附分离
2.1 免疫放射技术基本条件 纯度---纯度90%以上（免疫纯）
免疫标记技术的主要特点：
免疫放射分析技术
（immunoradiometric assay，IRMA）
是一项集液流喷射技术、激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的检测仪器
检测范围
mg~μg（10-3 ~10-6 g） μg~ng（10-6 ~10-9 g） ng~pg（10-9 ~10-12 g） pg~fg（10-12 ~10-15 g）
标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。
免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原
平衡法（一步法）
顺序加样法
固相法
免疫放射分析技术
（immunoradiometric assay，IRMA）
1968年，Miles 和Hales应用同位素标记胰岛素抗体，成功检
测牛血清中的胰岛素。
Type 被标记物质
IRMA 抗体
抗体用量
过量
被检抗原相对分子量 相对较大
反应方式 B、F分离方法
胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数等更为准确。
固相抗原免疫吸附剂 通过延续时间，使特异性荧光与非特异性荧光分辨开来，使理论本底达到0。
流式细胞技术应用
测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性
对抗原吸附力强，对非特异性蛋白吸附少，结合过程中高度 125I -标记物的鉴定
但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA将逐渐被取代。
分步结合 固相洗涤分离
RIA 抗原
限量 相对较小
竞争结合
液相沉淀/吸附分离
2.1 免疫放射技术基本条件 纯度---纯度90%以上（免疫纯）
免疫标记技术的主要特点：
免疫放射分析技术
（immunoradiometric assay，IRMA）
是一项集液流喷射技术、激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的检测仪器
检测范围
mg~μg（10-3 ~10-6 g） μg~ng（10-6 ~10-9 g） ng~pg（10-9 ~10-12 g） pg~fg（10-12 ~10-15 g）
标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。
免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原
放射免疫分析PPT参考幻灯片
法、颗粒法、小盘法、纸片法
10
四、放免分析的优点
灵敏度高 特异性强 精确度高 用血量少 体外测量
11
单位换算
1 g=1000mg 1mg=1000µg 1µg=1000ng 1ng=1000pg
12
非放射性体外分析技术
13
非同位素标记的条件
灵敏度 结合特性 均一性 稳定性 环境因素的不敏感性 临床应用 安全性 应用性
15
8
常用液相分离技术
双抗体法
特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价 高，但成本高
沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
9
常用液相分离技术（续）
吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末
特点 快速、简便、准确性差
盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
14
非放射性体外分析技术
酶免疫分析 发光免疫分析
化学发光免疫分析 酶放大化学发光免疫分析 电化学放光免疫分析
荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析 BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析 酶促放荧光免疫分析 微粒子酶荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析
金属离子免疫分析
放射免疫分析
Radioimmunoassay
1
一、原理：
竞争结合
Ag + Ab +
* Ag
AgAb + Ag
* AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定
2
+
—6 X100=75%
8
+
—4 X100=50%
10
四、放免分析的优点
灵敏度高 特异性强 精确度高 用血量少 体外测量
11
单位换算
1 g=1000mg 1mg=1000µg 1µg=1000ng 1ng=1000pg
12
非放射性体外分析技术
13
非同位素标记的条件
灵敏度 结合特性 均一性 稳定性 环境因素的不敏感性 临床应用 安全性 应用性
15
8
常用液相分离技术
双抗体法
特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价 高，但成本高
沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
9
常用液相分离技术（续）
吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末
特点 快速、简便、准确性差
盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
14
非放射性体外分析技术
酶免疫分析 发光免疫分析
化学发光免疫分析 酶放大化学发光免疫分析 电化学放光免疫分析
荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析 BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析 酶促放荧光免疫分析 微粒子酶荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析
金属离子免疫分析
放射免疫分析
Radioimmunoassay
1
一、原理：
竞争结合
Ag + Ab +
* Ag
AgAb + Ag
* AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定
2
+
—6 X100=75%
8
+
—4 X100=50%
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放射性测量
放射性核素 125I γ射线
测量仪器 采用γ计数器
实例：
➢
图：标准曲线
第二节 免疫放射分析方法
相关知识
免疫放射分析 immunoradiometric assay， IRMA
非竞争性免疫分析 发明人：Miles and Hales 1968
一、分析原理（1）
免疫放射分析 单位点法 适合测定小分子抗原 双位点法 适合测定小分子抗原
第三节 两种方法的比较
RIA & IRMA
RIA & IRMA
放射免疫分析 液相状态的抗原与抗体反应
免疫放射分析 固相表面与液相状态之间的抗原抗体反应 抗体固相化对抗体结构和功能的影响
第四节 临床应用
历史地位
方法建立 20世纪60年代
快速发展 20世纪80年代～90年代
临床应用
体内激素水平 病原体抗原或抗体 肿瘤标志物 药物测定
放射免疫试验详解演示文稿
（优选）放射免疫试验
引言
放射免疫试验以放射性核素为特征，通过测定放射性 强度评估抗原-抗体反应的强度，从而实现对待测物质的 定量（或定性）分析。放射免疫试验将放射性核素的高灵 敏性与抗原-抗体间的高特异性结合于一体，具有较高的 分析敏感性和分析特异性。
引言
放射免疫试验创立了两种重要标记免疫分析模式即竞 争性免疫分析（放射免疫分析方法）和非竞争性免疫分析 （免疫放射分析方法），同时，也创立了固相吸附分离方 法，以及剂量-反应曲线的数学处理模型，为酶免疫试验 和发光免疫试验奠定理论和实践基础。
临床应用
现存检测项目 反三碘甲状腺原氨酸（分子量651Da）、胃泌素（分 子量2098Da）、醛固酮（分子量364Da）、血管紧张素-I （分子量1200Da）和血管紧张素-Ⅱ（分子量1046Da）
第五节 关键因素
在放射免疫试验中被测物质浓度是根据标准曲线计算 得来的。标准曲线的精确度直接影响测定结果的精确度。 获得准确测定结果不仅需要高质量的检测试剂，同时也需 要尽可能地从实验过程中把关，需要严格和精确的操作。
一、分析原理（2）
图：免疫放射分析（单位点法）测定原理示意图
一、分析原理（3）
图：免疫放射分析（双位点法）测定原理示意图
一、分析原理（4）
双位点法 一对互相匹配的抗体 捕获抗体（与固相载体连接） 检测抗体（标记放射性核素） 非竞争性免疫分析模式 体系中抗体保持过量
技术要点
抗原抗体反应 B、F的分离 放射性测量 数据处理
竞争模式 平衡法 非平衡法
温浴条件 温度 酸碱度 基质
图：非平衡法
三、分离技术
非均相免疫分析 结合标记物（Bind，B） 游离标记物（Free，F）
分离方法 聚乙二醇沉淀法 双抗体法
分离技术
图：聚乙二醇-双抗体法( 特异性和低成本）
四、放射性测量和数据处理
抗原-抗体（温浴） 分离结合标记物 放射性测量 数据处理
一、分析原理
放射免疫分析方法 竞争性免疫分析模式 标记抗原和待检抗原同质 分析体系中的抗体限量
分析原理
图：放射免疫分析方法原理示意图（1）
图：放射免疫分析方法原理示意图（2）
技术（操作）要点
抗原抗体反应 标本与试剂混合并温浴
分离技术 分离结合标记物与游离标记物
发射性测量 数据处理
二、抗原-抗体反应
本章目录
第一节 放射免疫分析方法 第二节 免疫放射分析方法 第三节 两种方法比较 第四节 临床应用 第五节 关键因素
重点提示
放射免疫分析方法（原理） 免疫放射分析方法（原理）
第一节 放射免疫分析方法
相关知识
放射免疫分析方法 radioimmunoassay, RIA； 首个用于超微量物质定量的标记免疫分析技术； 发明人： Yalow and Berson 1959
二、分离技术
固相吸附分离法 固相材料 捕获抗体将结合标记物捕获于固相材相中的游离标记 物。
固相吸附技术
固相吸附技术
包被 Coating 将捕获抗体吸附于固相材料表面的过程
封闭 blocking 用高溶度蛋白溶液封闭空白结合位点
数据处理（实例）
图：标准曲线