常用培养基的制备技术和应用
培养基制备
培养基制备一、概述培养基是生物实验中必不可缺的基础设施，它为微生物、细胞等生物种群的繁殖和生长提供了必要的营养物质。
本文将介绍常用的培养基配方和制备方法，以及如何根据中国国情进行优化。
二、常用培养基1.大肠杆菌培养基（LB）配方：10克蛋白胨、5克酵母提取物、10克氯化钠、加水至1L。
特点：优点是制备方便、易于培养，多数菌株生长良好。
缺点是含有大量营养物质，若用于长期贮存菌株，容易导致突变风险增加。
2.液体麦康凯发酵培养基（BHI）配方：将500克肉汤蛋白胨培养基、10克氯化钠、2克二氢磷酸氢二钠、2克葡萄糖溶解在1L蒸馏水中。
特点：适合多种微生物的生长，包括厌氧微生物。
BHI较LB富含营养物质，可提供较好的生长环境，适合繁殖菌株。
3.青霉素酸糖盐地衣芽孢杆菌培养基（PDA）配方：20克琼脂、4克葡萄糖、0.75克潮霉素、0.125克青霉素钾盐、0.05克维生素B1、加水至1L。
特点：适用于分离和培养种类繁多的真菌、放线菌等微生物，能有效地防止杂菌的污染。
三、优化培养基由于中国的气候、温度等环境条件与西方国家有所不同，因此需要进行针对性的优化，以满足不同微生物的生长需求。
1.调整pH值许多微生物生存和生长所需的pH值范围在7.0-7.5之间。
但是，我们在制备培养基时应从当地水质的酸碱性入手，适当调整pH值，以便营养物质的有效吸收。
2.添加一些特殊成分在中国有些地区，水质有问题，例如含有高浓度的重金属和有机物污染，这些都会影响微生物的生长和繁殖。
因此，在制备培养基时，要添加些许抗菌剂和抗氧化剂，保证培养环境的纯净度和稳定性。
3.注意制备温度对于不同的菌株，其适宜的生长温度也有所不同。
在制备培养基时，应根据菌株的特点，以及所处的生态环境，调整制备温度，将传统的37度下的浸渍式消毒改为高温滤器灭菌法，避免纳米材料产生自拍。
四、结论在国内微生物学、生物医学和生物工程研究领域中，培养基是至关重要的实验基础设施。
实训五 常用培养基的制备
实训五常用培养基的制备目的要求熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH。
仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。
方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。
(一)肉膏汤培养基1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后，加热溶解。
矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。
置高压蒸汽灭菌器内，121.3℃20min灭菌即成。
3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。
(二)营养琼脂培养基1．成分肉膏汤1000ml，琼脂粉20～30g。
2．制法将琼脂粉加入肉膏汤内，煮沸使其完全溶解，矫正pH7.4～7.6，过滤分装于试管或三角烧瓶中，以121.3℃灭菌20min。
可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。
此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。
(三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。
供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。
(四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或细菌运动性观察。
(五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2～3g牛肉渣及肉膏汤5～6ml，液面盖以一薄层石蜡油，经121.3℃20～30min灭菌后保存冰箱备用。
此培养基用于厌氧菌的培养，必须注意，此培养基在使用时，将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min，以驱除管内存留的氧气。
(六)pH的测定与矫正1．精密pH试纸法取精密pH试纸一条，浸入欲测的培养基中，半秒后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。
常用10种培养基的配置和质控标准
小结：常用10种培养基的配置和质控标准（1）基础肉汤成分和配制方法：蛋白胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母膏3gDW1LpH～15磅30min高压灭菌，倾注无菌试管备用。
每次新配制时做质控阳性质控：ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中，35℃温箱24h肉汤混浊。
无菌试验：<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的基础肉汤35℃温箱24h培养，无细菌生长。
平行试验：质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供培养对营养要求不高的细菌增菌用；作其他选择培养基的基础液。
储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基：2-8℃保存一个月（2）普通营养琼脂成分和配制方法：基础肉汤100ml琼脂2g15磅30min高压灭菌，倾注平板备用。
注：可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉，按上面的说明配制。
质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控：ATCC 25923金黄色葡萄球菌或ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上，35℃温箱24h细菌生长良好。
无菌试验：<100块抽检5%,>100块随机抽取10管未接种的营养琼脂35℃温箱24h培养，无细菌生长。
平行试验：质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供培养对营养要求不高的细菌。
作无糖基础培养基。
加血成血平板。
加血加热75℃以上，再加上生长添加剂就成巧克力平板。
储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基：2-8℃保存半个月（3）葡萄糖肉汤成分和配制方法：蛋白胨10g朊胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母粉3g葡萄糖4g枸橼酸钠3g硫酸镁3gDW1LpH～%酚红5ml15磅30min高压灭菌，备用质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控：ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种葡萄糖肉汤中，35℃温箱24h肉汤混浊。
无菌试验：<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的葡萄糖肉汤35℃温箱24h培养，无细菌生长。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法;二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物;培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水;根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法;牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基;由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用; 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果;三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等;2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制;2.调pH不要过头;3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物;4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物;5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存;。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
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c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
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第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
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实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
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实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
常用培养基制备灭菌与消毒方法
消毒与灭菌
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：
物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破
坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗 生素等。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
加热法：
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳 培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用 间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌 135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固， 因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿 热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干 热好。
高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有
所变化。 3、适用于养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的 合成培养基。其配方如下：
可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g， K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～ 20g，水1000mL，pH7.4～7.6。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项：
1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为 “0”时方可打开。
培养基配制技术—培养基的制备
3.调pH
在未调pH 前，先用精密pH 试纸测量培养 基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐 滴加入 1mol ／L NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH 试纸测其pH，直 至 pH 达 7.4～7.6。反之， 用 1mol／L HCl 进行调节。对于要求pH 较精确 的培养基，其pH 的调节常用酸度计进行。 pH 调节不要过头，以避免回调而影响培养基内各 物质的浓度。 4.过滤
谢谢
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g， NaCL5.0g，琼脂15～20g， 水1000ml ，pH 7.4～7.6 。其中牛肉膏提供碳源、能源、磷 酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，而NaCL提供 无机盐，在配制固体培养基时需要加入一定量琼脂作凝 固剂，如果配制液体培养基则不用加入琼脂。
将灭菌的试管培养基冷至 50℃左右(以防斜 面上冷凝水太多)， 将试管口端搁在玻棒或其他 合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试 管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24～ 48h，检查确实无菌生长方可使用。
谢谢
PDA培养基配方：
马铃薯 200克、葡萄糖 20克、琼脂 15～20克、 自来水 1000毫升、自然pH。
二、控制营养物质的浓度和比例 营养物质浓度过低不能满足微生物正常生长所需，太高则可能
对微生物产生毒害，如高浓度的无机盐、重金属离子等会抑菌或杀菌。 因此，营养物质合适的浓度是微生物生长发育的必要条件之一。在生 产过程中，在不影响微生物的生理特性和代谢转化率的情况下，通常 趋向在较高浓度下进行生产，以提高产物产量，并尽可能选育高渗透 压的生产菌株。当然，培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量 降低。
培养基的制作方法
培养基的制作方法培养基是微生物学研究中常用的实验材料，用于培养和繁殖微生物。
正确的制备培养基对于保证实验结果的准确性和可重复性至关重要。
本文将介绍培养基的制作方法，以帮助读者掌握正确的制备技巧。
一、准备工作1. 清洗和消毒培养器具：包括量筒、容量瓶、烧杯、培养皿等。
使用去离子水或含0.1%次氯酸钠的消毒液进行清洗和消毒。
2. 准备所需试剂和培养基成分：包括碳源、氮源、无机盐、维生素、生长因子等。
根据实验需要选择合适的配方。
二、制备培养基步骤1. 按照配方计算所需试剂的质量或体积。
精确称量或计量试剂，避免误差。
2. 将所需试剂分别溶解于适量的去离子水中，搅拌均匀。
注意溶解过程中的温度和pH值控制。
3. 将溶解好的试剂倒入容量瓶中，加入适量的去离子水，使总体积达到容量瓶标记线。
再次搅拌均匀。
4. 用适当的容器（如烧杯）接收制备好的培养基。
注意避免污染，避免气泡的产生。
5. 进行高温高压灭菌，通常为121摄氏度，压力为15磅，时间为20分钟。
确保培养基的无菌性。
6. 灭菌后，将培养基倒入培养器具（如培养皿、试管等），根据实验需要分装适量的培养基。
7. 将培养器具密封，避免外界污染。
存放于冰箱或低温冷藏室中，避光保存。
三、常见培养基的制备方法1. 营养琼脂培养基制备方法：a. 按照配方计算所需琼脂的质量。
b. 将琼脂溶解于适量的去离子水中，加热至完全溶解。
c. 加入所需营养成分，如葡萄糖、胰蛋白酶胨等。
搅拌均匀。
d. 倒入容器中，高温高压灭菌后分装。
2. 非琼脂培养基制备方法：a. 按照配方计算所需试剂的质量或体积。
b. 将所需试剂溶解于适量的去离子水中，搅拌均匀。
c. 调整pH值至所需的范围，使用盐酸或氢氧化钠溶液进行调节。
d. 倒入容器中，高温高压灭菌后分装。
四、培养基制备中的注意事项1. 注意实验室的洁净环境，避免外界污染。
2. 注意试剂的质量和纯度，避免影响培养基的质量。
3. 注意培养基的pH值控制，不同微生物对pH值有不同的要求。
实验室常用培养基
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
常用细菌培养基制备及注意事项
常用细菌培养基制备及注意事项细菌培养是生物学研究中一种重要的实验技术。
精准的细菌培养技术，可以让我们快速、准确地获得细菌样品，方便细菌的种类鉴定和活性测定。
因此，熟练掌握细菌培养基制备及其使用方法及注意事项，对于生物学研究来说是非常重要的。
一、常用细菌培养基的分类常用的细菌培养基可以分为两大类：标准培养基和特殊培养基。
标准培养基由四种基础成分构成，即营养源、碳源、离子源和碱源，重点是碱培养基。
标准培养基可以满足一般细菌的培养需求，但对于某些特殊细菌而言，可能不够充分，这时就需要特殊培养基。
特殊培养基是根据细菌的特殊需求而设计的，它可以弥补标准培养基的不足。
二、细菌培养基的制备1、准备培养基的原料首先，我们需要根据配方准备好必要的原料，比如，营养源、碳源、离子源，以及其他必要的调味料。
2、将原料进行混合然后，将所有原料放入容器中，使用搅拌器混合成细菌培养基溶液，以防止原料结块。
3、细菌培养基灭菌接下来，需要对混合好的细菌培养基进行灭菌处理，以杀灭所有混入的细菌菌株，避免对样品的污染。
一般采用蒸馏水或甲醛的方法进行灭菌处理。
4、灭菌后的细菌培养基存储至此，细菌培养基制备完毕，需要将其存放在室温下，避免阳光直射，以防菌种被破坏。
如果长期不用，应将细菌培养基冷藏或冷冻保存。
三、细菌培养基使用注意事项1、实验室清洁卫生实验室在使用细菌培养基时，应当保持良好的清洁卫生，以免在实验过程中污染样品。
2、实验前样品处理在实验前，应对样品进行必要的处理：将溶液过滤，以去除杂质；对固体样品进行消毒，以免被细菌污染。
3、避免污染在使用细菌培养基时，要谨慎操作，以避免被污染；操作过程中，应尽量避免气流，以减少培养基中的细菌数量；在使用细菌培养基后，要及时将容器盖好，以免空气中的微生物进入容器。
四、总结细菌培养基是实验研究中一种重要的实验技术，需要科学准确地进行制备和使用。
常用的细菌培养基可以分为标准培养基和特殊培养基。
细菌培养基的制备包括准备原料、混合、灭菌和存储等步骤。
常用培养基实验报告总结
一、实验目的1. 熟悉培养基的制备方法及原理。
2. 掌握培养基灭菌的基本操作。
3. 了解培养基在微生物培养中的应用。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基础，其制备方法及质量直接影响微生物的生长和实验结果。
本实验主要制备牛肉膏蛋白胨培养基，该培养基含有微生物生长所需的各种营养物质，适用于多种微生物的培养。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、蒸馏水、pH试纸、无菌水、高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 配制培养基（1）称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等试剂，按比例加入蒸馏水。
（2）将混合液加热溶解，用pH试纸检测pH值，调整至7.0-7.2。
（3）将溶解后的培养基倒入三角瓶中，分装至每瓶100mL。
2. 灭菌（1）将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，设定灭菌参数：121℃，15分钟。
（2）待压力升至所需值后，开始计时，灭菌完成后关闭电源，自然冷却至室温。
3. 冷却与倒平板（1）将灭菌后的培养基取出，待其冷却至50-55℃。
（2）将冷却后的培养基倒入无菌平板中，用玻璃棒搅拌均匀。
（3）待培养基凝固后，用无菌镊子取出平板，标记并放置于培养箱中。
4. 接种与培养（1）将待分离的微生物接种于平板上，采用平板划线法或稀释涂布法。
（2）将接种后的平板放入培养箱中，根据微生物生长特点调整培养温度和时间。
五、实验结果与分析1. 成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，符合实验要求。
2. 培养基灭菌效果良好，未发现污染现象。
3. 在培养过程中，观察到微生物生长旺盛，说明培养基质量合格。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了培养基的制备方法及原理，了解了培养基在微生物培养中的应用。
2. 熟悉了培养基灭菌的基本操作，提高了无菌操作技能。
3. 通过实验，了解了不同微生物对培养基的需求，为今后的实验研究奠定了基础。
常用培养基的制备
实训目标
熟悉培养基制备的基本程序 会制备常用的培养基
仪器材料
高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量 筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等
方法步骤
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
制备培养基 方法步骤
计算 称量 溶化 调PH 分装 灭菌 无菌检验 备用
将合格的培养基放入冰箱, 在0-4℃中保存备用。
（三）半固体培养基
肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成, 用于菌种的保存或观察细菌的运动性。
（四）血液琼脂培养基
将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃, 以无菌操 作, 加入5%～10%的无菌血液（或脱纤维 血）, 然后倾注平皿或分装试管制成斜面。
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
（一）肉汤培养基
1. 成分 牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水 1000ml。
2. 制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热溶 解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭菌 器内，121.3℃灭菌20min即成。
3. 用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的 基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供 溶血性的观察和保存菌种。
（二）固体琼脂培养基 1．计算:
1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基 的需要量确定营养琼脂粉的用量。
营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 （g） 其中:
4．分装: 倒平板或倒试管
若做平板培养基应倒于培养皿中, 每板约15ml左右, 以 刚好覆盖平皿底为易。 若做斜面培养基应倒入试管中, 量为试管的1/3
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
常用细菌培养基制备及注意事项
常用细菌培养基制备及注意事项细菌培养基制备是细菌繁殖和生长的唯一途径，它是细菌数量检测、菌液量检验、药物敏感性测定和细菌学研究等细菌学实验的基础。
细菌培养基可以为细菌提供营养元素，使细菌获得有生命活动所必需的营养成分，从而使菌落的生长和增殖。
此外，还可以用来维持支持细菌的正常生理环境，如温度和酸碱度等。
细菌培养基的制备需要满足一定的技术要求，可以采用配制、消毒和培养使用。
首先，根据配方和实验要求，将碱、游离氨基酸、脂类、氨基葡萄糖和磷酸钙等营养元素以适当的重量称取，用普通净水溶解，然后按照配比，用收到的细菌消毒器将培养基管消毒，加热处理掉落的细菌，再将可溶性的物质混合溶于普通净水中，搅拌混匀内容物，然后放入培养基瓶，长时间搅拌，升温到室温，放置培养箱中均匀灭菌。
在细菌培养基制备时应注意以下几点：1、在配制时，首先应采用熔融技术将各种营养元素混合，混合前应先将各元素严格称取，费精心搅拌，以防出现混淆，造成不必要的偏差。
2、在混合时，应注意混杂物质的温度应保持在常温左右，尽量减少成分的损失，以保证培养基的质量。
3、在培养前，应将培养基瓶灭芽，以免细菌的污染，同时应把被实验的细菌以消毒仪处理，以防细菌感染。
4、培养器应用时应小心谨慎，以防细菌受到污染，培养箱中的细菌应调整到室温以及合适的温度、湿度和酸碱度。
5、在细菌培养时，应定期对细菌进行检测，以检查培养基是否被污染，如果出现异常，应立即将其清除更换。
6、细菌培养实验完成后，应及时进行清洗彻底消毒，防止培养基污染，使其保持原有质量。
综上所述，细菌培养基制备应注意操作规范、材料的准确量取和温度控制，消毒使用，检测异常和及时清洗消毒等。
只有这样，才能有效地保证培养基质量，使细菌繁衍生息，有利于实验结果的准确性。
常用培养基的制备
常用培养基的制备常用培养基是生物科学中必不可少的工具，它们可以提供一系列必要的营养物质和条件，使微生物、植物和动物细胞可以繁殖和生长。
在实验室中，我们通常需要制备一些常用培养基，以满足我们的实验需求。
本文将分步骤介绍如何制备常用培养基。
第一步：准备培养基成分首先，需要准备所需的培养基成分，例如碳源、氮源、维生素、无机盐、生长因子等。
其中，常用的碳源包括葡萄糖、蔗糖等；常用的氮源包括氨、硝酸盐、尿素等；常用的无机盐包括磷酸盐、铁、钙、钾、镁等。
这些成分的用量和配比可以根据需要进行调整。
第二步：加入水将准备好的培养基成分加入适量的水中，待成分溶解后，用玻璃棒或磁力搅拌子充分搅拌，让混合物均匀混合。
注意，加水时要注意水质的纯净度，保证培养基的质量。
第三步：调节pH值根据需要，调节溶液的pH值。
常用的调节剂包括酸和碱，例如盐酸、氢氧化钠等。
将调节剂滴加到溶液中，并用pH计测定溶液的pH值，适当调整pH值，直到达到所需的值。
第四步：灭菌将制备好的培养基装入适当容量的烧瓶或培养皿中，密封好，进行高温高压灭菌。
高温高压灭菌能够有效地杀死培养基中的细菌、真菌等微生物，防止污染，保证培养基的质量。
通常，高温高压灭菌需要在121℃下进行30分钟左右。
第五步：贮存将高温高压灭菌后的培养基放置在恒温箱中，控制在4℃下保存。
也可以将其按瓶、罐装装起来，进行冻存，保存期可达1年以上。
总之，制备常用培养基是生物学研究中的基本技能，熟练掌握制备方法，能够保证实验的结果准确可靠。
当然，不同的实验需要不同的培养基，在制备前需要进行充分的查询和准备，确保使用的培养基能够达到实验的要求。
常用培养基的制备技术及应用
实验一常用培养基的制备技术及应用一实验目的要求1 •掌握培养基的概念和分类。
2 •掌握常用培养基制备的一般程序。
3 •熟悉常用培养基的制备技术和用途。
二实验原理培养基（culture medium）是根据微生物生长繁殖所需要的一定比例的营养物质（碳源、氮源等）、氢离子浓度（pH值）以及渗透压等条件，用人工方法制成的无菌营养基质。
主要用于微生物分离培养、生化鉴定和保存菌种等。
培养基按物理性状不同可分为固体、半固体和液体培养基；按性质和用途不同又可细分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和特殊培养基。
根据物理性状和用途等不同常将培养基分装于试管或平皿等容器中。
常用培养基制备的一般程序是：调配成分溶解较正pH值过滤分装灭菌质量检验保存。
配制培养基时可以按照培养基配方调配各种基本成分，也可购买半成品的商品培养基干粉制剂直接配制。
三器材与试剂1•试剂普通营养琼脂干粉、脱纤维羊血、半固体培养基、SS培养基干粉、克氏双糖铁培养基干粉、1 mol/L NaOH溶液、麦康凯培养基成分（蛋白胨、氯化钠、胆盐、乳糖、5 g/L中性红水溶液、琼脂粉）、蒸馏水。
2•器材小型药物天平、药匙、称量纸、三角烧瓶、量筒、吸管、精密pH值试纸试管、硅胶塞、牛皮纸（或报纸）、棉线、玻璃棒、玻璃纸、无菌平皿、高压蒸汽灭菌锅、微波炉等。
四步骤与方法1 •常用培养基制备的一般程序及方法1）调配成分根据培养基配方或用法，准确计算、称量所需培养基各基本成分或干粉制剂，装于三角烧瓶中，加入定量蒸馏水充分混合。
2）溶解将盛有混合物的三角烧瓶置于沸水浴或流动蒸汽灭菌器中加热溶解，呈半透明状。
3）校正pH值即将培养基pH值校正到适合细菌生长的最适pH值，一般病原菌的最适pH值为7.2〜7.6。
校正培养基pH值的常用试剂有 1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L NaCO3 溶液和1 mol/L HCl溶液（注意：培养基高压灭菌后，用NaOH和HCI校正的pH值会下降0.1〜0.2，而用NaCO3溶液校正的pH值会上升0.1〜0.2）;校正培养基pH值的方法常用精密pH 值试纸法、比色法和电子pH计法等。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项制备常用培养基的步骤：1.准备所需材料和试剂：包括原材料、化学试剂、水质等。
2.按照配方准备培养基的成分，称取所需质量的每种成分，并放入容器中备用。
需要注意的是，成分的配比应严格按照配方比例进行。
3.取一定容积的纯化水，进行加热和搅拌。
加热需注意温度控制，以避免高温引起成分变性和水的蒸发。
4.将加热的纯化水慢慢倒入容器中的培养基成分中，同时用搅拌器搅拌，以保证成分均匀溶解。
5.溶液温度降至室温后，通过过滤器或高温高压灭菌器对培养基进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
6.消毒后，将培养基分装到适当的容器中，如试管、琼脂培养皿等，并密封好，以免受到外界的污染。
7.对于固体培养基，添加适量的琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖固化成体，用压力灭菌器灭菌。
8.储存培养基要注意避光、防潮和防火，并在相关容器上标明名称、配方和制备日期。
1.成分准确：制备培养基时，需要准确称取每种成分的质量，确保配方比例准确。
不同的微生物和细胞需要不同的营养成分，所以要了解不同微生物和细胞的需求，选择适当的配方。
2.水质净化：培养基的制备需要使用纯化水，如去离子水、超纯水等，以确保水质的纯净。
水质若不符合要求，会影响培养基的质量。
同时，加热时要控制温度，以避免成分变性和水的蒸发。
3.消毒杀菌：培养基在制备完成后需进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
可以通过过滤器或高温高压灭菌器进行消毒。
消毒过程中要做到严格的操作规范，保证培养基的纯度。
4.容器选择：对于不同的培养基，选择合适的容器也非常重要。
常用的容器包括试管、琼脂培养皿、培养瓶等。
选用容器时要考虑到培养的需求，如气体交换、液体混合等。
5.储存注意：制备完成的培养基需要正确储存，避免光照、潮湿和高温。
同时要在容器上标明名称、配方和制备日期，以便管理和使用。
总结：制备常用培养基需要严格按照配方比例进行，控制水质和温度，并进行消毒处理。
在容器选择和储存过程中也要注意一系列的注意事项，以确保培养基的质量和纯度。
实验二常用基础培养基的制备
实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。
这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。
基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。
实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。
肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。
(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。
(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。
高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。
利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。
注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。
好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。
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实验一常用培养基的制备技术及应用
一实验目的要求
1．掌握培养基的概念和分类。
2．掌握常用培养基制备的一般程序。
3．熟悉常用培养基的制备技术和用途。
二实验原理
培养基（culture medium）是根据微生物生长繁殖所需要的一定比例的营养物质（碳源、氮源等）、氢离子浓度（pH值）以及渗透压等条件，用人工方法制成的无菌营养基质。
主要用于微生物分离培养、生化鉴定和保存菌种等。
培养基按物理性状不同可分为固体、半固体和液体培养基；按性质和用途不同又可细分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和特殊培养基。
根据物理性状和用途等不同常将培养基分装于试管或平皿等容器中。
常用培养基制备的一般程序是：调配成分♉溶解♉较正pH值♉过滤♉分装♉灭菌♉质量检验♉保存。
配制培养基时可以按照培养基配方调配各种基本成分，也可购买半成品的商品培养基干粉制剂直接配制。
三器材与试剂
１．试剂普通营养琼脂干粉、脱纤维羊血、半固体培养基、SS培养基干粉、克氏双糖铁培养基干粉、1 mol/L NaOH溶液、麦康凯培养基成分（蛋白胨、氯化钠、胆盐、乳糖、5 g/L中性红水溶液、琼脂粉）、蒸馏水。
２．器材小型药物天平、药匙、称量纸、三角烧瓶、量筒、吸管、精密pH值试纸试管、硅胶塞、牛皮纸（或报纸）、棉线、玻璃棒、玻璃纸、无菌平皿、高压蒸汽灭菌锅、微波炉等。
四步骤与方法
１．常用培养基制备的一般程序及方法
１）调配成分根据培养基配方或用法，准确计算、称量所需培养基各基本成分或干粉制剂，装于三角烧瓶中，加入定量蒸馏水充分混合。
２）溶解将盛有混合物的三角烧瓶置于沸水浴或流动蒸汽灭菌器中加热溶解，呈半透明状。
３）校正pH值即将培养基pH值校正到适合细菌生长的最适pH值，一般病原菌的最适pH值为7.2～7.6。
校正培养基pH值的常用试剂有1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L NaCO3溶液和1 mol/L HCl溶液（注意：培养基高压灭菌后，用NaOH和HCl校正的pH值会下降0.1～0.2，而用NaCO3溶液校正的pH值会上升0.1～0.2）；校正培养基pH值的方法常用精密pH值试纸法、比色法和电子pH计法等。
４）过滤培养基中若存在杂质或沉淀物时则需要过滤澄清。
液体培养基用滤纸趁热过滤，固体培养基用双层纱布夹脱脂棉趁热过滤。
５）分装
（１）液体培养基、半固体培养基灭菌前分装于洁净试管中，分装到试管的下1/4～1/3处，加塞，5～10支试管用牛皮纸盖帽，棉线扎捆，标明培养基名称、制作日期。
灭菌后直立放置。
（２）固体斜面培养基灭菌前分装于洁净试管中，分装到试管的下1/3～1/2处，加塞，5～10支试管用牛皮纸盖帽，棉线扎捆，标明培养基名称、制作日期。
灭菌后趁热摆成斜面，斜面长度为试管长度的2/3，并保持斜面下端距离管底有1 cm以上柱高，同时斜面上端距离试管塞1 cm以上。
（３）琼脂高层培养基灭菌前分装于洁净试管中，分装到试管的下2/3处，加塞，5～10支试管用牛皮纸盖帽，棉线扎捆，标明培养基名称、制作日期。
灭菌后直立放置。
（４）固体平板培养基将培养基分装于三角烧瓶（培养基的量要小于三角烧瓶最大容量），先用玻璃纸或棉塞封口，再用牛皮纸盖帽、棉线扎口。
灭菌后将培养基冷却至50 ℃左右，以无菌操作，倾注于平皿内（内径为9 cm的平皿倾注15～20 mL培养基），马上水平旋转1～2周，使培养基均匀平铺于皿底。
待培养基凝固后，在皿底面上标明培养基名称、制作日期，底上盖下倒置保存。
６）灭菌根据培养基中营养物质耐热性的不同分别采取相应的物理灭菌法
（１）培养基成分均耐高热时常用高压蒸汽灭菌法，这也是最常用、最可靠的培养基灭菌方法。
常用灭菌条件为103.43 kPa（121.3 ℃）15～20 min；含糖培养基用68.95 kPa （115.6 ℃）10～15 min，以免破坏糖类物质。
（２）培养基中含有不耐高热营养物质（如糖类、明胶和牛乳等）时，常用流通蒸汽灭菌法，方法是80～100 ℃加温30 min，每天1 次，连续3 d。
（３）培养基中富含蛋白质（如血清或鸡蛋清）时需用血清凝固器灭菌，方法是将需灭菌的培养基摆放在血清凝固器内（一般做成斜面），第一天75 ℃加热30 min，第二天80 ℃加热30 min，第三天85 ℃加热30 min，在3 次灭菌间隙将培养基取出，置35 ℃恒温箱中过夜。
（４）对液态高营养的不耐热培养基，如血清、细胞培养液等，可采用滤过除菌。
７）质量检验制备好的培养基须经性状检查、无菌检验和效果检验均合格才可使用。
（１）性状检查液体培养基应外观清澈透明；半固体培养基应质地均匀，呈半固态；固体斜面培养基应质地均匀，凝固后斜面稳定，不下滑；平板培养基应质地均匀，表面光滑、平整，薄厚适宜。
（２）无菌检验将制备好的培养基置于35 ℃培养24 h，以无任何细菌生长为合格。
（３）效果检验将已知的标准菌株接种于待检培养基中，经培养后检查标准菌的生长
繁殖状况和生化反应是否与预期的结果符合。
８）保存制备好且标记清楚的培养基置于4 ℃冰箱保存备用，严格灭菌后的培养基一般可保存1 周以上，但不宜过久。
注意平板培养基应底上盖下倒置保存，以防止盖内水蒸汽落在培养基表面，使得培养基表面粘滞易污染且不易接种；液体、半固体等培养基应直立保存。
２．常用培养基的制备技术
１）营养肉汤培养基用量筒准确量取所需蒸馏水，先倒入三角烧瓶一部分，随后按照营养肉汤成分配方（蛋白胨10 g，牛肉浸出粉3 g，氯化钠5 g，蒸馏水1000 mL见附录一）或干粉制剂说明书用法准确计算、称量所需粉剂，置于已经盛有部分蒸馏水的三角烧瓶中，最后将量筒内剩余蒸馏水全部倒入三角烧瓶，充分混匀、加热溶解后，用1 mol/L NaOH校正pH值到7.5～7.6（高压后可降到培养基要求的7.4），分装于试管中，加塞扎捆标记后高压蒸汽121 ℃灭菌20 min。
取出后直立放置，待冷却后置于4 ℃保存备用。
可用于一般细菌的增菌培养。
２）营养琼脂培养基用量筒准确量取所需蒸馏水，先倒入三角烧瓶一部分，之后按照营养琼脂成分配方（蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1000 mL 见附录一）或干粉制剂说明书用法准确计算、称量所需粉剂，置于已经盛有部分蒸馏水的三角烧瓶中，最后将量筒内剩余蒸馏水全部倒入三角烧瓶，充分混匀、加热煮沸溶解后呈半透明状，校正pH值到7.2～7.4。
若制作固体斜面则先分装于试管中，加塞扎捆标记后高压蒸汽121 ℃灭菌20 min，高压后趁热摆成斜面，凝固后置于4 ℃保存，可用于一般细菌菌种的传代保存；若制作固体平板，则直接封装在三角烧瓶中，高压蒸汽121 ℃灭菌20 min，灭菌后以无菌操作倾注平板，待凝固后标记、倒置于4 ℃保存，可用于对营养要求不高细菌的分离培养和纯化。
３）半固体营养琼脂培养基：配方见附录一是蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，琼脂粉5 g，蒸馏水1000 mL，pH为7.4，具体做法同肉汤培养基。
可用于观察细菌的动力和保存菌种。
４）血琼脂平板将灭菌后的营养琼脂冷却到50 ℃左右，以无菌操作加入10%的无菌脱纤维羊血（或兔血），立即混匀，避免产生气泡，然后以无菌操作分装于无菌试管或平皿，制成血琼脂斜面或血琼脂平板。
血琼脂斜面可用于保存营养要求高的细菌；血琼脂平板可用分离培养细菌和检测其溶血性。
５）巧克力琼脂平板是基于血琼脂平板制备基础之上，特点在于灭菌后的营养琼脂冷却到70～80 ℃时加入无菌脱纤维血液，且在80 ℃水浴中摇匀15～20 min，使血液的色泽由鲜红转变为巧克力色，然后冷至50 ℃左右，以无菌操作倾注平板即制成巧克力琼脂平板。
可用于分离培养奈瑟菌属、流感嗜血杆菌属等对营养要求较高的细菌。
６）麦康凯琼脂平板按照配方基本成分（（蛋白胨20 g，NaCl 5 g，胆盐5 g，乳糖
10 g，5 g/L中性红水溶液5 mL，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL见附录一）自行配制时，先将除乳糖、中性红之外的成分混合加热溶解，调pH7.2之后，再加入乳糖、中性红，混匀后高压灭菌115 ℃ 15 min，取出冷却至50 ℃左右，以无菌操作倾注平板，凝固后标记、倒置于4 ℃保存，可用于肠杆菌科细菌的分离培养与鉴定。
五注意事项
１．要防止加热溶解时培养基粘瓶底烧结，可先在三角烧瓶底部加入部分量好的蒸馏水，再加入称量好的固体成分，最后将量筒内剩余的蒸馏水全部倒入三角烧瓶。
２．制备培养基最好用玻璃器皿（烧瓶、烧杯）。
若制备大量培养基时可用铝锅或搪瓷桶，但不能用铁、铜器皿，因为铁离子进入培养基，达到一定浓度会抑制细菌生长，而铜离子会抑制细菌毒素产生。
３．在按照配方自行配制培养基时，若培养基中有染料、胆盐和指示剂等成分，应在校正pH值之后加入。
４．倾注平板时，一定要无菌操作，最好在无菌设备中进行，倾注时平皿开口越小越好，能倒入培养基即可，以防止空气中的微生物尘埃等污染培养基。
５．倾注平板时，灭菌后的培养基要冷至50℃左右再倾注平板。
若温度过高，平板会出现很多冷凝水，不宜长期保存；若温度过低，则培养基在未倾注前就会出现凝块，倒入凝固后培养基表面会凹凸不平。