洁净室(区)沉降菌的测规程
沉降菌测试标准操作规程
版本号
修订原因
修订日期
01
新订
附录
测试区域 测试依据 测试日期
沉降菌测试记录
编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
测试人员 培养基用量
测试状态
培养时间
培养温度
报告日期
测试房间
现场操 采样点
房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
符合规定
更鞋间
PLES123
8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个
打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时
间为不大于4h。
9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并
以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
10、结果计算
培养时间
报告日期现场操 采样点Fra bibliotek房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
更衣 PLEQ003
缓冲间1 PLEQ004
取样间 PLEQ005
缓冲间2 PLEQ006 阴性对照
洁净度级别
AB
C
标准
＜1 5
50
沉降菌
警戒限
-- 3
40
cfu/4小时
纠偏限
-- 4
二更2 PLEZ122
缓冲间1 PLEZ123
缓冲间2 PLEZ124
微生物限度 室
PLEZ125
净化操作台 PLEZ125
阳性对照室 PLEZ126
洁净区沉降菌、浮游菌检测标准操作规程
1.目的：建立沉降菌、浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测操作。
2.范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌、浮游菌检测工作3.责任：中心检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
4.内容：浮游菌检测4.1.1 检测前的准备4.1.1.1按照药典规定制作平皿培养基。
4.1.1.2领出检测仪器，去掉防尘护罩。
4.1.1.3先用喷洒方法对仪器及采样管进行消毒，无法喷洒的地方应用擦拭或浸泡办法进行消毒，消毒后置放十分钟使仪器基本干燥。
4.1.1.4将采样器放在采样工作台面上，拧下采样盖，使整个缝隙完全暴露在空气中，便于直接采样。
4.1.1.5当在较高位置取样时，可把仪器采样盖拧紧，插上采样塑料管，把管子延伸到所要采样的空间。
4.1.1.6打开采样器透明外罩，迅速将准备好的平皿放入采样托盘内，拿去平皿上盖，立即拧上透明外罩密封。
4.1.1.7拧松外罩顶部装有指针的螺母，让指针自然下落或使指针底部刚接触到培养基为止。
4.1.1.8调节狭缝螺母，使狭缝上升直至到头，再反方向调节使狭缝面下降，将齐狭缝大螺母侧面的色标线与指针于水平线上。
（保持狭缝的底平面与培养基表面相距1-3mm）。
4.1.1.9将指针向上轻轻拔起，使其底部离开培养基表面，并拧紧螺母，使之固定不动。
4.1.2 采样操作4.1.2.1将采样器后面板上的电源插上，按下仪器面板上的电源开关，指示灯亮，时间显示窗内的数码应为“P”。
4.1.2.2根据采样现场环境的洁净度，选择采样时间中的某一档，并按下相应按钮，指示灯亮，数码由“P”显示为“Y”，约经10分钟后气泵自动开启进行采样。
当采样时间达到时，气泵自动停止运行，数码显示终点采样时间。
4.1.2.3关掉电源开关，打下仪器的活动透明外罩，迅速把平皿上盖盖上并从仪器中取出。
4.1.2.4按照上述方法，再放入新的平皿，进行第二次采样，直到采样完毕。
4.1.2.5采集样品的平皿应置入培养箱，在培养48小时后，按检验规程检查菌落数。
中华人民共和国《国家标准医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》.doc
中华人民共和国《国家标准医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》（2012-05-26 09:41:00）1范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。
2引用标准下列标准所饮食的条文，通过在木标准中引用而构成为木标准的条文。
本标准出版时, 所示版本均为不效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
YY/T0188、6 — 1995药品检验操作规程第6部分：药品生物测定法3定义本标准采用下列定义。
3、 1 洁净室（区）clean room （ area ）3.2 洁净工作台cleaning work station一神工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
3、3 洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一-粒径的悬浮粒子的允许统计数。
3.4 菌，客colony forming units细菌培养后，由…个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
3、5 沉降菌settling microbe用木标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3、6 悬浮粒子ailborne Paritical可悬浮在空气中的尺寸一般在0、001pm〜1000pm之间的固体、液体或两者的混介物质, 包括生物性粒子和非生物性粒子。
3、7单|仙流unidirectional air flow （曾称为层流laminar flow ）沿着平行流线，以单一通路以一定流速向流动的气流o3、8非单向流水线nonunidirectional air flow （曾称为乱流turbulent flow ）具有多个循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
洁净室(区)沉降菌的测规程
1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。
4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。
4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
洁净区沉降菌测试操作规程
范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。
2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。
2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。
2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。
2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。
3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。
4.培养
第1页共2页
所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。
5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。
5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。
第2页共2页。
洁净室沉降菌测试标准操作规程
5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。
5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。
5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。
5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。
5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。
编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。
5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。
5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。
5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。
5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。
5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。
计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。
6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。
6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。
6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。
附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
洁净区沉降菌操作规程
洁净区沉降菌操作规程洁净区沉降菌操作规程1. 概述洁净区沉降菌操作规程是为了确保洁净区域内的空气质量符合规定标准而制定的。
洁净区是进行微生物检测和培养工作的重要区域，任何存在细菌或其他微生物的污染都可能对结果产生影响。
因此，严格遵守该操作规程对于保证数据的准确性和可靠性至关重要。
2. 操作人员要求2.1. 操作人员必须经过相关培训，了解并熟悉本操作规程的内容。
2.2. 操作人员应具备良好的个人卫生习惯，必须在进入洁净区前进行必要的清洁操作，如洗手、更换工作服等。
2.3. 操作人员在操作过程中应保持安静，避免尘埃、气流等对样品产生污染。
3. 设备要求3.1. 洁净区内的设备必须定期进行消毒和清洁，保证操作环境的洁净度。
3.2. 设备必须符合相关的规定标准，确保其在操作过程中不会对样品产生污染。
3.3. 洁净区内必须配备必要的检测设备，如微生物培养箱、无菌平板等。
4. 操作流程4.1. 操作人员必须穿戴好个人防护装备，包括面罩、手套和工作服等。
4.2. 操作人员应在工作台上摆放必要的试剂和培养基。
4.3. 操作人员在摆放试剂和培养基的过程中应避免尘埃和颗粒物的产生。
4.4. 操作人员在取样过程中应使用无菌工具，避免污染样品。
4.5. 操作人员在操作完成后应及时清理工作台和设备，保持洁净区的干净和整洁。
5. 质量控制5.1. 洁净区内的空气质量必须定期进行检测，确保其符合规定的标准。
5.2. 洁净区内进行的实验必须进行严格的质量控制，包括阳性对照和负性对照的设置等。
5.3. 实验结果必须进行正确的解读和记录，确保数据的准确性和可靠性。
6. 废弃物处理6.1. 操作人员在操作过程中产生的废弃物必须进行正确的分类和处置。
6.2. 废弃物应按照相关规定进行正确的包装和封存，并交由专门的机构进行处理。
6.3. 废弃物的处理过程中必须避免对环境造成二次污染。
7. 紧急情况应对7.1. 在发生紧急情况时，操作人员必须立即停止操作，并按照相关规定采取应急措施。
洁净区沉降菌、浮游菌检测标准操作规程
1.目的：建立沉降菌、浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测操作。
2.范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌、浮游菌检测工作3.责任：中心检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
4.内容：浮游菌检测4.1.1 检测前的准备4.1.1.1按照药典规定制作平皿培养基。
4.1.1.2领出检测仪器，去掉防尘护罩。
4.1.1.3先用喷洒方法对仪器及采样管进行消毒，无法喷洒的地方应用擦拭或浸泡办法进行消毒，消毒后置放十分钟使仪器基本干燥。
4.1.1.4将采样器放在采样工作台面上，拧下采样盖，使整个缝隙完全暴露在空气中，便于直接采样。
4.1.1.5当在较高位置取样时，可把仪器采样盖拧紧，插上采样塑料管，把管子延伸到所要采样的空间。
4.1.1.6打开采样器透明外罩，迅速将准备好的平皿放入采样托盘内，拿去平皿上盖，立即拧上透明外罩密封。
4.1.1.7拧松外罩顶部装有指针的螺母，让指针自然下落或使指针底部刚接触到培养基为止。
4.1.1.8调节狭缝螺母，使狭缝上升直至到头，再反方向调节使狭缝面下降，将齐狭缝大螺母侧面的色标线与指针于水平线上。
（保持狭缝的底平面与培养基表面相距1-3mm）。
4.1.1.9将指针向上轻轻拔起，使其底部离开培养基表面，并拧紧螺母，使之固定不动。
4.1.2 采样操作4.1.2.1将采样器后面板上的电源插上，按下仪器面板上的电源开关，指示灯亮，时间显示窗内的数码应为“P”。
4.1.2.2根据采样现场环境的洁净度，选择采样时间中的某一档，并按下相应按钮，指示灯亮，数码由“P”显示为“Y”，约经10分钟后气泵自动开启进行采样。
当采样时间达到时，气泵自动停止运行，数码显示终点采样时间。
4.1.2.3关掉电源开关，打下仪器的活动透明外罩，迅速把平皿上盖盖上并从仪器中取出。
4.1.2.4按照上述方法，再放入新的平皿，进行第二次采样，直到采样完毕。
4.1.2.5采集样品的平皿应置入培养箱，在培养48小时后，按检验规程检查菌落数。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
洁净区沉降菌检测方法标准操作规程
目的：建立洁净室区沉降菌的测试方法。
应用范围：适用于洁净区的沉降菌测定和环境的验证。
责任人：QC、QC主任、质量部经理。
引用标准：《中华人民共和国国家标准》医药工业洁净区沉降菌的测试方法（GB／T16294－2010）、药品检验操作规程附录、药品生物测定法。
内容：1 定义1.1 沉降菌用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
1.2 沉降菌菌落数规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
2 测试方法2.1 方法提要采用沉降法，既通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净的洁净度。
2.2 人员的的要求测试人员应经过微生物相关知识培训并培训合格方可进行测试。
2.3 仪器培养皿、培养基、恒温培养箱、高压消毒锅。
2.3.1 培养皿一般采用直径φ90mm×15mm的硼硅玻璃培养皿。
2.3.2 培养基大豆酪蛋白琼脂培训基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或经验证的培养基。
2.3.2.1 培养基配制及灭菌2.3.2.1.1 大豆酪蛋白琼脂培养基可以按以下处方制备，也可使用按此处方生产的符合要求的脱水培养基。
配制后按培养基规定的经验证合格的灭菌程序灭菌。
取上述在分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.2，加入琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿中，加盖后在室温放至凝固。
2.3.2.1.2沙氏琼脂培养基取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌为5.6±0.2，加入琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿中，加盖后在室温放至凝固。
2.3.2.2 培养基平皿培养及保存制备好的培养基平皿宜在2℃～8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供标准执行。
SOPQC-ZG-2025洁净室沉降菌的测试标准规程.doc
1.目的：根据国家标准《医药工业洁净室（区）悬浮粒子沉降菌的测试方法》2010 版建立洁净区悬浮粒子测试操作规程，确保测试员正确操作。
2.范围：洁净区沉降菌的测试。
3.责任：质控部、QA现场监督检查4.内容：4.1测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿, 经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.2仪器应包括：a）培养皿；b）培养基（见本标准附录B）；c）恒温培养箱；d）高压蒸汽灭菌器。
4.2.1培养皿，一般采用4）90mmX 15mm规格的培养皿。
4.2.2培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或其他用户认可并经验证了的培养基。
其配制方法见附录B。
4.2.3恒温培养箱，必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.3测试步骤4.3.1测试前培养基表面必须严格消毒。
4.3.2将己制备好的培养皿按采样点布置图（附录A）逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.3.3静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时H培养皿暴露时间为不大于4ho4.3.4全部采样结束后，将培养皿盖盖好倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30°C~35°C培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养基经采样后，在20 °C〜25°C培养箱中培养，时间不少于5d。
4.3.6每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.4菌落计数4.4.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
4.5.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
2019最新版洁净区沉降菌测定操作规程
ABC药品有限公司药品生产质量管理体系质量控制文件2019年最新版编制: 日期:审核: 日期:批准: 日期:发放范围：公司各部门 2020年01月01日生效目录目的： (3)范围： (3)责任： (3)依据： (3)内容： (3)1测试方法： (3)2测试规则 (4)3结果计算 (5)文件更改履历 (7)目的：建立一个沉降菌测试操作规程。
范围：洁净区沉降菌检测。
责任：检验员、质检科长、质保科长、质量总监。
依据：《中华人民共和国药典》2000年版内容：1 测试方法：1.1 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
1.2 所用的仪器和设备：1.2.1 高压灭菌锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。
1.2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
1.2.3 培养皿：一般采用由90mm×15mm的玻璃培养皿。
1.2.4 培养基：药典认可的培养基。
1.3 测试步骤：1.3.1 采样方法：将已制备好的培养皿放置于采样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
1.3.2 培养1.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
1.3.2.2 在30℃－35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
1.3.2.3 培养应作对照培养。
1.3.3 菌落计数1.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5—10倍放大镜检查，有否遗漏。
1.3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
1.4 注意事项：1.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
1.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
1.4.3 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的茵落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
沉降菌检测
洁净区微生物检测操作规程名称：洁净区微生物检测操作规程关键词：洁净区、微生物检测目的：规范洁净区微生物检测背景知识：略原理：略适用范围：100级、1万、10万、30万级洁净区环境。
1.沉降菌检测1)在万级洁净区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次沉降菌和浮游菌；在10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。
30万级每季度检测一次沉降菌。
2)由微生物检测员按《养基的配制操作规程的要求配制肉汤琼脂培养基，培养皿使用Φ90mm×15mm，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。
3)做好洁净区消毒工作，开启洁净区净化空调系统，正常运行不少于30分钟；对单向流如100级的净化工作台和层流罩要在净化系统运行10min后开始。
4)静态测试在除测试人员外，室内无生产人员的情况下进行，动态测试在已处于正常生产状态下进行。
5)采样点布置选用对角线法，要求布置地面四个方向，工作线上左右，关键设备顶上放置一个。
6)万级、10万级、30万级的最少采样点数可按下表确定。
在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表7)百级区只有净化工作台下的局部范围，其面积小于10m2，因此百级区取样点至少为3个。
8)测试人员按洁净室级别规定的程序更换洁净服进入洁净区；静态测试时，室内人员不得多于2人。
9)将制备好的肉汤琼脂培养基按采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。
10)盖好皿盖，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。
11)用透射光于培养皿背面或正面仔细观察平皿上所有菌落数，要注意菌落与培养基沉淀物的区别，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。
12)计算平均菌落数=（M1＋M2……＋Mn）／n，式中M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n：培养皿数。
13)用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物，洁净区的平均菌落数（静态测试）：100级≤1个/皿，万级≤3个／皿，10万级≤10个／皿，30万级≤15个／皿。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
1. 目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。
2. 范围适用于洁净区沉降菌的检测。
3. 职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。
3.2 质量监督员负责监督本规程的执行情况。
4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。
4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
4.2 检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。
制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。
4.3采样4.3.1 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。
表2 最少培养皿数注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。
4.4采样注意事项4.4.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。
4.4.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。
4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。
4.4.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别。
4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.5 测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。
空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。
确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。
测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
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1 目的
确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围
适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任
QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容
4.1 参考标准
中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。
4.2 监测程序
4.2.1 设备
高压消毒锅
恒温培养箱
培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.2 培养基及平皿制备
4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基
4.2.2.2 制备过程如下：
◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；
◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
4.2.3 采样点和监测频次
4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。
4.2.4 测试规则
4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.2.4.4 测试时间：
◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
◆对非单向流，如B级、C级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
4.3 测试步骤
4.3.1 采样
将已制备好的培养皿按要求放置，使培养基表面暴露0.5小时。
4.3.2 培养
全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30～35℃培养，时间不少于48小时。
每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿作对照培养。
4.3.3 菌落计数
用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，并用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。
4.3.4 注意事项
测试时应注意如下事项：
◆防止人为对样本的污染。
◆对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
◆般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，应注意培养皿边缘生长的菌
落，并注意菌落与培养基沉淀物的区别。
◆采样时应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.3.5 结果计算
用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：
平均菌落数M＝M1＋M2＋------Mn／n
式中：M1＝1号培养皿菌落数
M2＝2号培养皿菌落数
Mn＝n号培养皿菌落数
n＝培养皿总数
4.3.6 结果评定
4.3.6.1
沉降菌最大允许值（菌数/皿）洁净度级别
静态
A级≤1
C级≤3
D级≤10
4.3.6.2 用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
◆洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
◆若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区预先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.3.7 警戒限度和纠偏限度
洁净度级别沉降菌警戒限度（菌数/皿）
动态
A级＜1
C级≤2
D级≤5
沉降菌纠偏限度（菌数/皿）
洁净度级别
动态
A级＜1
C级≤2.5
D级≤8
4.3.8 异常情况的处理
4.3.8.1 当连续三次样品测试结果超过警戒标准或单个样品的结果特别高时调查原因，必要时采取相应纠偏措施。
4.3.8.2 当空调系统维修（如更换高效过滤器）或停用超过30天时，重新启用空调系统后应及时对洁净室（区）进行环境监测。
5 修订记录
版本号主要变更内容描述变更原因生效日期备注——新建文件——2004.03.01
01 增加文件版号文件版本升级2006.01.01
02 变更登记号文件版本升级2009.10.26
03 洁净区更改洁净级别客户审计2010.08.01
04 增加异常情况处理的描述客户审计2012.06.20
05 增加了警戒限度和纠偏限度，升级文件版本升级
洁净区级别，同时调整文件格式
6 附录
附件1 沉降菌监测的最少采样点数目
附件2 沉降菌监测的最少培养皿数
附件3 沉降菌监测的采样点布置
附件4 房间编号一览表
SOP-ZL-006-FJ1 洁净室（区）沉降菌监测记录
附件1 沉降菌监测的最少采样点数目
面积m2
洁净度级别
A级C级D级
＜10
≥10～< 20
≥20～< 40 ≥40～< 100 ≥100～< 200 ≥200～< 400 ≥400～< 1000 ≥1000～< 2000
≥2000 2—3
4
8
16
40
80
160
400
800
2
2
2
4
10
20
40
100
200
2
2
2
2
3
6
13
32
63
注：对于单向流洁净室，是指送风面积。
对于非单向流洁净室是指房间面积。
附件2 沉降菌监测的最少培养皿数
洁净度级别所需Φ90mm培养皿数（以沉降0.5小时计）
A级C级D级14 2 2
附件3 沉降菌监测的采样点布置
“ .”为采样点
. .
. .
. .
. . . .
. .
附件4 房间编号一览表
盐酸二甲双胍洁净区
女二更101 男二更102 气闸室（人）103 洗衣间104 走廊105 结晶离心室106 洁具间107 干燥间108 待检室109 粉碎间110 容器清洗间111 包材间112 气闸室（包材）113 内包间114 气闸室（成品）115
格列齐特洁净区二楼
楼梯间（二楼）201 走廊202 洁具间203 干燥间204 结晶离心室205 粉碎间206 容器清洗间207 ——————
格列齐特洁净区一楼
女二更208 男二更209 手消毒室210 气闸室（人）211 走廊212 洗衣间213 容器清洗间214 洁具间215 包材间216 内包间217 成品暂存间218 ————————
异氟烷洁净区
女一更301 手清洁间（女）302 女二更303 男一更304 手清洁间（男）305 男二更306 气闸室（人）307 洗衣间308 走廊309 洁具室310 容器清洗间311 气闸室（包材）312 瓶暂存间313 瓶洗间314 烘瓶室315 灌装间316 待检室317 气闸室（成品）318 ————
.
综合洁净区
女二更401 男二更402 气闸室（人）403 洗衣间404 走廊405 洁具间406 结晶离心室（北）407 干燥间408 结晶离心室（南）409 粉碎间410 混料间411 待检室412 容器清洗间413 包材间414 气闸室（包材）415 内包间416 成品暂存间417 ——————
微生物室
二更01 走廊02 效价室03 微生物限度检查04 阳性对照05
中试洁净区
女二更501 男二更502 气闸室（人）503 洗衣间504 走廊505 洁具间506 内包间507 包材间508 混料间509 粉碎间510 结晶离心一室511 干燥一室512 结晶离心二室513 干燥二室514 干燥三室515 结晶离心三室516 容器清洗间517 ——————
.。