原生质体融合育种PPT课件

4）涂布于再生培养基，再生出菌落。
5）选择性培养基上划线生长，分离验证，挑取融
合子进一步试验、保藏。
6）生产性能筛选。
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3、原生质体融合育种的要点
（1）标记菌种的选择 获得标记菌种的方法是采用常规诱变育种，筛
选出营养缺陷型或／和抗药性菌株。这里最重要 的是标记必须稳定。
采用抗药性菌株除可作标记外，在实验室中还 可排除杂菌污染的干扰。为的是确证融合的成功， 可以采用多标记菌种。
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如细菌加入亚抑制剂量的青霉素。 • 菌体的培养时间
为使细胞易于原生质体化，一般选择增殖期菌体。 • 酶浓度
对于不同种属的微生物，不仅对酶的种类要求不同， 就是对酶的浓度也有差异。另外，最佳酶浓度还随不 同的生长期的菌体而变化。
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6源自文库
• 酶处理温度 • 破壁时的pH值 • 渗透压稳定剂
等渗透压在原生质体制备中，不仅起到保 护原生质体免于膨裂，而且还有助于酶和底物 的结合，渗透压稳定剂多采用甘露醇，山梨醇， 蔗糖等有机物，KCl、NaCl等无机物。
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(4) 存在着两株以上亲株同时参与融合形成融合 子的可能性。
（5）有可能采用产量性状较高的菌株作融合亲株。 (6) 提高菌株产量的潜力较大。 (7) 有助于建立工业微生物转化体系。
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2、原生质体融合育种步骤
1）标记菌株的筛选和稳定性验证。
2）原生质体制备。
3）等量原生质体加聚乙二醇促进融合。
1、原生质体融合育种的特点
(1) 杂交频率较高：细胞壁去除后在高渗条件 下形
成类似于球形的原生质体。 (2) 受接合型或致育型的限制较小：二亲株中任何一
株都可能起受体或供体的作用，因此有利于不同种 属间微生物的杂交。 (3) 遗传物质传递更为完整：原生质体融合是二亲株 的细胞质和细胞核进行类似的合二为一的过程。
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(2) 原生质体的制备
原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入 细胞壁分解酶，将细胞壁分离剥离，结果剩下 由原生质膜包住的类似球状的细胞，它保持原 细胞的一切活性。
在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用 溶菌酶；酵母和霉菌一般可用蜗牛酶或纤维素 酶等。
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影响原生质体制备的因素
• 菌体的前处理 为了使酶作用的效果好一些，可将菌作一些前处理。