血凝和血凝抑制实验 PPT

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实验四血凝及血凝抑制实验428课件

实验四血凝及血凝抑制实验428课件

血凝抑制是指血液凝固过程中 某些因素对凝血过程的抑制作 用。
血凝抑制可由多种原因引起, 如血液中抗凝物质增多、纤维 蛋白溶解系统活性增强等。
血凝抑制作用对于防止血栓形 成和维持血液循环具有重要意 义。
实验中涉及的生物化学反应
01
实验中涉及的生物化学反应包括 凝血酶原的激活、凝血因子的级 联反应、纤维蛋白多聚体的形成 等。
感谢您的观看
THANKS
02
通过观察这些反应的进程和变化 ,可以了解血液凝固和血凝抑制 的机制,从而为临床诊断和治疗 提供依据。
03
实验材料与试剂
实验动物或血液样本来源
实验动物
小白鼠、大白鼠、豚鼠和家兔是最常 用的实验动物,其血液样本可用于血 凝实验。
血液样本
人类或动物的全血、血清或血浆样本 可用于血凝抑制实验。
实验所需的试剂和器材
相关领域的拓展阅读材料推荐
材料1
作者5,年份5,标题5,出版社5。这是一 本关于血液凝固和免疫学的专业书籍,深入 浅出地介绍了相关领域的基本知识和最新进 展。
材料2
作者6,年份6,标题6,出版社6。这本教 材详细介绍了血液凝固和免疫学实验技术, 为相关领域的研究人员提供了实用的操作指 南和技术支持。
准确性和一致性。
统计分析
运用选定的分析方法对 数据进行分析,得出结
论。
结果解释与报告
将分析结果进行解释, 并以书面形式提交实验
报告。
结果解读与可能的误差分析
结果解读
根据分析结果,对实验结果进行解释和推理,得出科学结论。
误差分析
对实验过程中可能出现的误差进行分析,找出误差来源,提高实验的准确性和可靠性。
血凝抑制的基本原理

鸡新城疫血凝和血凝抑制实验ppt

鸡新城疫血凝和血凝抑制实验ppt
取鸡免疫血清。
-
鸡群卵黄抗体的制备
1.取鸡蛋卵黄20ml,加入等量生理盐水, 振荡,摇匀。
2.加入等量氯仿40ml,振荡30分钟。 3.取振荡的卵黄液3000~4000rpm30分钟。 4.取上清液作为抗体检测材料
-
二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【方法】 • 1. 根据HA试验结果,确定病毒的血凝价,配制出4个血凝单位的病毒液。 • 2. 在96孔微量反应板上进行,用固定病毒稀释血清的方法,先在第1孔加50L生
(第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 5分钟)洗去血清及白细胞。 ⒋ 取纯红细胞0.6ml,加生理盐水稀释99.4ml,即 成1%的鸡红细胞悬液。
-
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
(二)加样
1. 在96孔微量反应板上进行,自左至右各孔加50L 生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液,混合均匀后,吸 50L至第2孔,依次倍比稀释至第11孔,吸弃50L; 第12孔为红细胞对照。
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该- 病毒血凝价,即为一个凝集单位
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【 结果判定 】
• 置于振荡器上振荡1分钟,静置后30 min开始观察结果,待对照孔 红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集,沉于孔底, 平铺呈网状,即为100% 凝集(++++),不凝集者(-)红细胞沉 于孔底呈点状。
-
• 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价,即为一个凝集单 位。从表4-1看出,该新城疫病毒液的血凝价为1:128,则l:128为 1个血凝单位,1:64、l:32分别为2、4个血凝单位,或将128/4=32, 即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。

实验四血凝和血凝抑制试验课件

实验四血凝和血凝抑制试验课件

02
实验材料
实验器材
01
02
试管
用于血样的采集、分离和反应 。
吸管
用于吸取试剂和血样。
03
离心机
用于血样的分离。
04
显微镜
用于观察血凝现象。
实验试剂
生理盐水
用于稀释血样和作为反应介质 。
抗血清
用于血凝抑制试验,针对特定 病毒或细菌。
凝血酶
促使血液凝固的酶。
抗凝剂
如肝素,防止血液凝固。
实验样本
出了抗体滴度与病毒滴度之间的关系。这一发现有助于评估抗体治疗效
果和制定抗病毒治疗方案。
05
注意事项与安全须知
实验安全须知
01
实验操作应在专业人员 的指导下进行,确保安 全。
02
实验过程中应穿戴实验 服和防护眼镜,避免意 外伤害。
03
实验器材应保持清洁, 避免交叉污染。
04
实验废弃物应按照规定 进行处理,避免对环境 和人体造成危害。
血凝抑制试验
利用抗体与相应抗原结合后,抑 制红细胞发生凝集的现象。
实验步骤
准备试剂和器材:包括抗 原、抗体、红细胞、生理 盐水等。
制备不同浓度的抗原溶液。
取适量红细胞,加入不同 浓度的抗原溶液中,观察 红细胞是否发生凝集。
记录实验结果,分析数据, 得出结论。
对于血凝抑制试验,先加 入抗体,再加入抗原溶液, 观察红细胞是否发生凝集。
实验结果
实验结果一
实验结果三
血凝试验中,不同稀释度的病毒液与 红细胞混合后,红细胞迅速凝结成块, 形成明显的血凝现象。
通过比较不同稀释度的病毒液与加入 特异性抗体后的血凝抑制情况,可以 得出抗体滴度与病毒滴度之间的关系。

血凝与血凝抑制实验 PPT

血凝与血凝抑制实验 PPT

三、实验原理
1、血凝试验(HA)原理:某些病毒或病毒的血凝 素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集,这种 凝集红细胞的现象称为血凝(HA),也称直接血凝 反应。



颗细粒胞源自2、血凝抑制试验(HI)原理:当病毒的悬液中加入 特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其 血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或 血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制, 称为红细胞凝集抑制(HI)反应,也称血凝抑制反应。
5、结果判定
大家应该也有点累了,稍作休息
大家有疑问的,可以询问和交流
血凝效价测定
结果判定标准
1、++++:红细胞呈细沙样均匀铺于孔底,即100 %凝集;
2、+++:红细胞均匀铺于孔底,当边缘不整齐而 稍向孔底集中,即75%凝集; 3、 ++ :红细胞形成一个环状,四周有凝集块,即 50%凝集; 4、 + :红细胞于孔底形成圆团,边缘不够光滑,四 周稍有凝集块,即25%凝集; 5、- :红细胞于孔底形成圆团,边缘光滑整齐,即 无凝集;
1、概 述
ND是由ND病毒(Newcastle disease Virus, NDV) 引起的高度接触性和高度毁灭性的急性败血性传 染病。
❖1926年首先发生于印尼,同年发现于英国新城 ❖我国1928年有该病记载 ❖是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一 ❖被国际兽疫局(OIE) 列为A类传染病
别名: 新城疫、亚洲鸡温、伪鸡瘟
抗原
抗体
I am late!
四、实验材料
1、血凝板(2人/块) 2、新城疫阳性血清 3、被检血清(1份) 4、1%红细胞悬液 5、稀释液 6、移液器(50ul, 2人/把) 7、枪头
五、实验方法与结果判定

鸡新城疫血凝和血凝抑制实验PPT课件

鸡新城疫血凝和血凝抑制实验PPT课件

• 【病毒血凝抑制试验的操作方法(单位:L) 】
孔号 滴度lg2 材料
8单位病毒 4单位病毒 被检鸡血清
0.6%红细胞
结果观察
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

1
2 3 4 56 78
9
10
毒对 照
对照
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50 震荡混匀,室温30-40min - - - - - - + ++
50 50 50 50
50 50
+++
++ ++
50
生理盐水 50
弃50 50 50
++ ++ ++ ++
以100%抑制凝集(完全不凝集)的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价,即HI效价14。
10
二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【材料】 除血球凝集试验所用材料外,血清
取鸡免疫血清。
11
鸡群卵黄抗体的制备
1.取鸡蛋卵黄20ml,加入等量生理盐水, 振荡,摇匀。
2.加入等量氯仿40ml,振荡30分钟。 3.取振荡的卵黄液3000~4000rpm30分
钟。 4.取上清液作为抗体检测材料
2019/10/25
9
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【 结果判定 】
• 置于振荡器上振荡1分钟,静置后30 min开始观察结果,待对照 孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集,沉于孔底, 平铺呈网状,即为100% 凝集(++++),不凝集者(-)红细胞 沉于孔底呈点状。

血凝HA和血凝抑制试验课件

血凝HA和血凝抑制试验课件
25-5µL鸡的红细胞到500µL血清中;4℃,用微量振荡器振荡 20-30min;4000转离心1min。
23
3. 热灭活法
3.1鸡血清
取100µL血清样品放入一灭菌离心管中;
各取100µL阳性血清和阴性血清加入到另2个灭 菌离心管中;
56℃水浴30min。
3.2 其它禽类血清
血清用鸡的红细胞处理后,分别取100µL样品、 阳性血清、阴性血清放入灭菌离心管中,56℃水 浴30min。
4000转离心1min;
取出上清,进行HI试验;
用阳性对照血清和阴性对照血清验证处理的彻底性
用于消除除鸡以外的其它禽类的血清非特异性反应。
22
2.RDE(受体裂解酶)消除法 2.1试剂: RDE:用20mL无菌PBS稀释,小量分装,-20℃保存一周,注
意避免反复冻融; PBS: pH7.5,4℃保存; 阳性对照血清; 阴性对照血清。 2.2方法: 2.2.1鸡血清 加3倍体积的RDE到1倍体积的血清中; 充分混合; 56℃水浴30-60min; 加入6倍体积于血清体积的PBS。 2.2.2其它禽类血清 依据用RDE处理鸡血清方法处理后,继续按下列方法进行:用
三、实验步骤 (以禽流感为例, 参照禽流感防治 技术规范)
1 阿氏(Alsevers)液配制 称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化
钠0.42g, 加蒸馏水至100mL, 散热溶解后调pH值至6.1, 69kPa 15min高压灭菌, 4℃保存备用。
14
•2 1%鸡红细胞液的制备
Hale Waihona Puke 全不凝集能使红细胞完全凝集(100%凝集,++++)的抗原最高
稀释度为该抗原的血凝效价,此效价为1个血凝单位

血凝和血凝抑制实验课件PPT

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7
抗原效价测定
12345
67
8
9
10
11 12
2 4 8 16 32 64 128 ×××× × × ×
生 25 25 25 25 25
理 盐 水
抗 25 25 25 25 25


理 25 25 25 25 25
盐 水
红 25 25 25 25 25
细 胞
结 ++ ++ ++ ++ ++ 果 ++ ++ ++ + + + +
2021/3/10
3
2021/3/10
4
实验原理
1、HA原理:某些病毒或病毒的血凝素能选择性地 使某种动物地红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的 现象称为血凝(HA),也称直接血凝反应(红细胞 不流淌)。







2021/3/10
5
2、HI原理:当病毒的悬液中加入特异性抗体,且这 种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细 胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑 制(HI)反应,也称血凝抑制反应。
3、每孔再次加入生理盐水25ul
4、每孔加入1%鸡红细胞悬液25ul
5、在振荡器上振荡均匀后,放于室温(20-25°C) 下静置30分钟,或2-8℃45-60分钟,红细胞对照孔 呈纽扣状时判定结果。
6、结果判定。将反应板倾斜60°,观察红细胞有无
泪滴状流淌,完全凝集无泪珠状流淌(100%)的最
2高021/稀3/10 释倍数为抗原血凝价。
6、 振荡,放于室温静置30分钟,或2-8℃45-60分钟; 7、 结果判定。以完全抑制的4个单位抗原的最高稀释倍数为该

实验血凝和血凝抑制试验课件

实验血凝和血凝抑制试验课件
➢ 病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象,可以 作为病毒鉴定的一个指标。
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HA试验的原理图
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病毒凝集红细胞可以分为3种类型
➢病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较 密切,不经特殊化学方法处理不能分开。 例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒,病毒 游离下来后,红细胞不能再次被凝集。
生理盐水(μl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
病毒悬液(μl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃/ 50μl /
1%红细胞(μl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
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4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀,在1~12孔中每 孔加入50μl。
5. 手工震荡,在37℃静置30min后观察结果。 6. 结果判定(血凝抑制价是1:?,被检血清为
阴/阳性)。
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HA试验
HI试验
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3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清,采自被检鸡的血清。
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四、操作步骤
(一)血凝试验(HA)
1. 在血凝板第一பைடு நூலகம்的1~12孔加入50μl生理盐水。 2. 在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀
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四单位抗原是血凝抑制试验的重要环节,其准确性对 试验结果有重要的影响。抗原浓度高时,HI抗体效价 就会降低;反之则会有所升高。抗原效价测量是否准 确,决定了配制而得的四单位抗原准确性。
血凝抑制试验操作步骤
血凝抑制试验结果判定:
以完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度为该血清的 HI滴度(注:看结果时96孔板倾斜45度)。
二、检测内容和方法
检测方法
血凝与血凝抑制
禽流感: (H5+H7)三价 灭活疫苗 (H5N1 Re-8株 +H7N9 H7-Re1 株)
鸡新城疫
酶联免疫吸附
ELISA
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病:蓝耳、 细小、圆环、伪 狂犬、乙脑 小反刍兽疫
虎红平板和试 管凝集
布病
大家学习辛苦了,还是要坚持
抑制血凝(血凝抑制试验)
三、血凝与血凝抑制实验(禽流感和鸡新城 疫)
血凝抑制试验: 当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制反应,也称血凝抑 制反应,利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 目的:检测实验用鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态。
阿氏(Alsevers)液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散 热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌, 4℃保存备用。
1%红细胞的配制:
1.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象,因此配制1%红细胞悬液时应最好 选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。(抗凝剂与 血液比例为1:4)
目的:测定病毒的血凝效价,采用 一定的病毒量,通常采用4个血凝 单位
血凝素(HA) 柱状
刺突:亚型特异性抗原,易变异
血凝素(HA) 柱状
血凝素(HA,从H1—H15):呈柱状 功能:
①吸附细胞:与细胞上受体结合,使病毒 侵入细胞
②凝集多种动物的红细胞(血凝试验) ③具抗原性:其抗体能中和病毒---中和抗体
2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中,加3-4倍体积生理盐水以 2000~3000r/min,5~10min离心3-5次。
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜,再加入十倍以上血量的PBS液, 上下缓慢颠倒(切忌用力过大使红细胞破裂),使其充分混匀,再离心 弃去上清液,反复几次直至上清液清亮透明为止。
继续保持安静
三、血凝与血凝抑制实验(禽流感和鸡新城 疫)
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
血凝试验:某种病毒的血凝素, 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集,叫做血凝试验,也称直接血 凝反应,利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
4.吸取压积红细胞泥与生理盐水以1:99进行配制1%鸡红细胞悬液。
5.在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀,使其每孔 加入相同数量的红细胞。
6.制备好的红细胞液如果放置后上清液变红,说明有溶血,不可 再使用。
血凝试验操作步骤
四、血凝试验操作步骤




倒 加
4个100%血凝单位(即4HA100) 抗原的稀释倍数=使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数/4
血凝和血凝抑制实验 PPT
内容
一、重要性 二、检测内容和方法 三、血凝和血凝抑制试验
一、重要性
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施,只有给动 物进行有效的免疫接种后, 才能在产生一定的保护力, 从而防止 疫病的侵入和蔓延。因此在畜禽生产过程中, 在群体接种疫苗前后 对抗体水平进行检测, 准确了解动物疫病发生、 传播和流行情况, 掌握全市畜禽规模养殖场的免疫抗体水平和动物疫病保护情况, 从而更有效地采取综合防控措施。因此,做好动物免疫抗体检测
注意:确定度数的孔要与前一孔的流速及形状完全一 样,即泪珠样流挂。读数要快,可以读到结束,一组 (一板)时间不要超过30秒。
结果判定
1.在各组对照均正确的情况下,按下列标准判定
血凝反应强度示意图 “4+” 红细胞呈片状凝集,均匀布满孔底,边缘有时不整齐或皱 缩。 “3+” 红细胞呈片状凝集,但面积略小于“4+”。 “2+” 红细胞呈片状凝集,但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。 “+” 红细胞大部分沉于孔底中央,周围有少量散在凝集颗粒。 “-” 红细胞均沉于孔底呈小圆点状,边缘整齐。 2.对照孔正常的情况下,红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的 终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集 价。
工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
一、重要性
01 有效预防动物疫情的发生 02 有效判断动物疫情发生的原因 03 有效推动动物免疫程序的制定
二、检测内容和方法
检测内容

猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病:蓝耳、 细小、圆环、 伪狂犬、乙脑

O型口蹄疫 小反刍兽疫

O型口蹄疫 A型口蹄疫

禽流感 新城疫
血凝试验(HA)原理:
血凝抑制试验(HI)原理
+
+

病毒的悬液中加入特异性抗体,红细胞的凝集现 象被抑制,称为红细胞的血凝抑制。
主要实验器材:
○普通离心机
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
微量振荡器
微量移液器
96孔血凝反应板
禽用采血器
试验主要试剂: 标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液(阿氏液) 四单位抗原 生理盐水(PBS液)
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