血凝和血凝抑制实验 PPT
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工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
一、重要性
01 有效预防动物疫情的发生 02 有效判断动物疫情发生的原因 03 有效推动动物免疫程序的制定
二、检测内容和方法
检测内容
猪
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病：蓝耳、 细小、圆环、 伪狂犬、乙脑
羊
O型口蹄疫 小反刍兽疫
牛
O型口蹄疫 A型口蹄疫
鸡
禽流感 新城疫
四单位抗原是血凝抑制试验的重要环节，其准确性对 试验结果有重要的影响。抗原浓度高时，HI抗体效价 就会降低；反之则会有所升高。抗原效价测量是否准 确，决定了配制而得的四单位抗原准确性。
血凝抑制试验操作步骤
血凝抑制试验结果判定：
以完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度为该血清的 HI滴度（注：看结果时96孔板倾斜45度）。
注意：确定度数的孔要与前一孔的流速及形状完全一 样，即泪珠样流挂。读数要快，可以读到结束，一组 （一板）时间不要超过30秒。
目的：测定病毒的血凝效价，采用 一定的病毒量，通常采用4个血凝 单位
血凝素（HA） 柱状
刺突：亚型特异性抗原，易变异
血凝素（HA） 柱状
血凝素（HA，从H1—H15):呈柱状 功能：
①吸附细胞：与细胞上受体结合,使病毒 侵入细胞
②凝集多种动物的红细胞（血凝试验） ③具抗原性：其抗体能中和病毒---中和抗体
4.吸取压积红细胞泥与生理盐水以1:99进行配制1%鸡红细胞悬液。
5.在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔 加入相同数量的红细胞。
6.制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可 再使用。
血凝试验操作步骤
四、血凝试验操作步骤
①
②
③
④
倒 加
4个100%血凝单位（即4HA100） 抗原的稀释倍数=使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数/4
2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水以 2000~3000r/min，5~10min离心3-5次。
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液， 上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心 弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
血凝和血凝抑制实验 PPT
内容
一、重要性 二、检测内容和方法 三、血凝和血凝抑制试验
一、重要性
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动 物进行有效的免疫接种后， 才能在产生一定的保护力， 从而防止 疫病的侵入和蔓延。因此在畜禽生产过程中, 在群体接种疫苗前后 对抗体水平进行检测， 准确了解动物疫病发生、 传播和流行情况， 掌握全市畜禽规模养殖场的免疫抗体水平和动物疫病保护情况， 从而更有效地采取综合防控措施。因此，做好动物免疫抗体检测
阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散 热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌， 4℃保存备用。
1%红细胞的配制：
1.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好 选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。（抗凝剂与 血液比例为1:4）
继续保持安静
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
Baidu Nhomakorabea
血凝试验：某种病毒的血凝素， 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集，叫做血凝试验，也称直接血 凝反应，利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
抑制血凝（血凝抑制试验）
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
血凝抑制试验： 当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑 制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 目的：检测实验用鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态。
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验（HI）原理
+
+
？
病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现 象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。
主要实验器材：
○普通离心机
微量振荡器
微量移液器
96孔血凝反应板
禽用采血器
试验主要试剂： 标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液（阿氏液） 四单位抗原 生理盐水（PBS液）
二、检测内容和方法
检测方法
血凝与血凝抑制
禽流感： （H5+H7）三价 灭活疫苗 （H5N1 Re-8株 +H7N9 H7-Re1 株）
鸡新城疫
酶联免疫吸附
ELISA
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病：蓝耳、 细小、圆环、伪 狂犬、乙脑 小反刍兽疫
虎红平板和试 管凝集
布病
大家学习辛苦了，还是要坚持
结果判定
1.在各组对照均正确的情况下，按下列标准判定
血凝反应强度示意图 “4＋” 红细胞呈片状凝集，均匀布满孔底，边缘有时不整齐或皱 缩。 “3＋” 红细胞呈片状凝集，但面积略小于“4+”。 “2＋” 红细胞呈片状凝集，但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。 “＋” 红细胞大部分沉于孔底中央，周围有少量散在凝集颗粒。 “－” 红细胞均沉于孔底呈小圆点状，边缘整齐。 2.对照孔正常的情况下，红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的 终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集 价。
一、重要性
01 有效预防动物疫情的发生 02 有效判断动物疫情发生的原因 03 有效推动动物免疫程序的制定
二、检测内容和方法
检测内容
猪
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病：蓝耳、 细小、圆环、 伪狂犬、乙脑
羊
O型口蹄疫 小反刍兽疫
牛
O型口蹄疫 A型口蹄疫
鸡
禽流感 新城疫
四单位抗原是血凝抑制试验的重要环节，其准确性对 试验结果有重要的影响。抗原浓度高时，HI抗体效价 就会降低；反之则会有所升高。抗原效价测量是否准 确，决定了配制而得的四单位抗原准确性。
血凝抑制试验操作步骤
血凝抑制试验结果判定：
以完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度为该血清的 HI滴度（注：看结果时96孔板倾斜45度）。
注意：确定度数的孔要与前一孔的流速及形状完全一 样，即泪珠样流挂。读数要快，可以读到结束，一组 （一板）时间不要超过30秒。
目的：测定病毒的血凝效价，采用 一定的病毒量，通常采用4个血凝 单位
血凝素（HA） 柱状
刺突：亚型特异性抗原，易变异
血凝素（HA） 柱状
血凝素（HA，从H1—H15):呈柱状 功能：
①吸附细胞：与细胞上受体结合,使病毒 侵入细胞
②凝集多种动物的红细胞（血凝试验） ③具抗原性：其抗体能中和病毒---中和抗体
4.吸取压积红细胞泥与生理盐水以1:99进行配制1%鸡红细胞悬液。
5.在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔 加入相同数量的红细胞。
6.制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可 再使用。
血凝试验操作步骤
四、血凝试验操作步骤
①
②
③
④
倒 加
4个100%血凝单位（即4HA100） 抗原的稀释倍数=使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数/4
2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水以 2000~3000r/min，5~10min离心3-5次。
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液， 上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心 弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
血凝和血凝抑制实验 PPT
内容
一、重要性 二、检测内容和方法 三、血凝和血凝抑制试验
一、重要性
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动 物进行有效的免疫接种后， 才能在产生一定的保护力， 从而防止 疫病的侵入和蔓延。因此在畜禽生产过程中, 在群体接种疫苗前后 对抗体水平进行检测， 准确了解动物疫病发生、 传播和流行情况， 掌握全市畜禽规模养殖场的免疫抗体水平和动物疫病保护情况， 从而更有效地采取综合防控措施。因此，做好动物免疫抗体检测
阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散 热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌， 4℃保存备用。
1%红细胞的配制：
1.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好 选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。（抗凝剂与 血液比例为1:4）
继续保持安静
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
Baidu Nhomakorabea
血凝试验：某种病毒的血凝素， 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集，叫做血凝试验，也称直接血 凝反应，利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
抑制血凝（血凝抑制试验）
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
血凝抑制试验： 当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑 制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 目的：检测实验用鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态。
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验（HI）原理
+
+
？
病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现 象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。
主要实验器材：
○普通离心机
微量振荡器
微量移液器
96孔血凝反应板
禽用采血器
试验主要试剂： 标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液（阿氏液） 四单位抗原 生理盐水（PBS液）
二、检测内容和方法
检测方法
血凝与血凝抑制
禽流感： （H5+H7）三价 灭活疫苗 （H5N1 Re-8株 +H7N9 H7-Re1 株）
鸡新城疫
酶联免疫吸附
ELISA
猪瘟 O型口蹄疫 A型口蹄疫 地方病：蓝耳、 细小、圆环、伪 狂犬、乙脑 小反刍兽疫
虎红平板和试 管凝集
布病
大家学习辛苦了，还是要坚持
结果判定
1.在各组对照均正确的情况下，按下列标准判定
血凝反应强度示意图 “4＋” 红细胞呈片状凝集，均匀布满孔底，边缘有时不整齐或皱 缩。 “3＋” 红细胞呈片状凝集，但面积略小于“4+”。 “2＋” 红细胞呈片状凝集，但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。 “＋” 红细胞大部分沉于孔底中央，周围有少量散在凝集颗粒。 “－” 红细胞均沉于孔底呈小圆点状，边缘整齐。 2.对照孔正常的情况下，红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的 终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集 价。