实验九水中总大肠菌群的测定报告
微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测
2，EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？
EMB培养基主要包含以下几种物质：蛋白胨，乳糖，蔗糖，磷酸二氢钾，伊红Y，美蓝，蒸馏水。EMB培养基的机制就是靠微生物在发酵过程中，使培养基发生分解，产生大量的氢离子，从而改变培养基的PH，由于提前添加的指示剂，在PH值的改变下，就会发生颜色的变化，从而鉴定生长的菌种。在检测大肠菌群的时候，蛋白胨提供了氮源，磷酸二氢钾提供了磷元素和钾元素，
-3-5
变，诸如在在10，设置4个重复，而10时候，可以设置8个重复，这样可以在追求最简工作量的时候，获得最简的实验结果。
水质 总大肠菌群的测定
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学报告起始日期：2018年月日结束日期：2018年月日一、实验目的掌握水中总大肠菌群的测定方法及原理。
二、依据标准文献GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标 2 多管发酵法三、适用范围生活饮用水及水源水总大肠菌群的测定。
四、方法原理总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
多管发酵法的原理是根据统计学理论，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数，估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
试验结果以最可能数，简称MPN 表示。
计算出数量/L。
（most probable number）五、仪器设备(1)立式压力蒸气灭菌器型号：YXQ-LS-50SII 容积：50升(2)恒温培养箱，超净工作台。
(3)酒精灯、镍铬丝接种棒。
(4)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯(5)（200、500、2000mL）、锥形瓶（250、1000mL）、采样瓶。
六、试剂材料培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基，营养琼脂。
七、实验步骤 1. 试验准备乳糖蛋白胨培养液：按瓶上标志配制好液体培养基后，取10支20毫升试管，5支30毫升试管，内置小导管。
5支30毫升试管加入10 mL 2倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，10管加入10 mL 单倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，试管加硅胶塞。
伊红美蓝培养基：按瓶上标志配制好300 mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
营养琼脂：按瓶上标志配制好200mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
取采样瓶多个，接种棒，培养皿35对，密封包装。
以上物品材料于 121℃高压灭菌器中灭菌 30min 备用。
2. 样品测定取500mL 锥形瓶内的营养琼脂液体培养基，倒入约20mL 灭菌好的培养皿中，超净工作台不同位置各放1对，共10对，操作间不同位置各各放1对，共10对。
实验九 水中细菌总数,大肠
实验九 水中细菌总数,大肠菌群 数的结果观察
观察方法
• 1 先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌 态生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度 的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌 落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落 数， • 然后再计算该稀释度的平均菌落数。 • 2 首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平 均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样 的细菌总数。 • 3 若有两个希释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落 总数之比值来决定。若其比值小于2应采取两者的平均数；若大于2， 则取其中较小的菌落总数。 • 4 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均 菌落数乘以稀释倍数。 • 5 若所有稀释反的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均 菌落数乘以稀释倍数。 • 6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或 30的平均菌落数乘以稀释倍效。 • 参见课本第150页2（5）。
细菌总数实验结果
稀释度 平板 10-1 1 2 10-2 1 2 10-3 1菌总数
大肠菌群数实验结果
稀释度 菌落数 10-1 10-2 10-3
计算方法
大肠菌群 数
结果与思考题
• １ 见课本第158页六4. • ２ 你所测的水源水的污秽程度如何？ • 3 见课本第158页六2.
水中大肠菌群的测定
实验水中大肠菌群的测定及结果分析一、目的要求1、学习测定水中大肠菌群检测程序、方法.2、掌握大肠菌群检测结果的报告方式.二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标,也是反映水体被生活无水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃生长时，能在48小时发酵乳糖并产酸才产气。
食品中大肠菌群数是以每100mL（g)检样内大肠菌群最近似数(The most probable number，简称MPN）表示。
据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均以100mL(g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。
检查大肠菌群数,一方面能表明食品中有无粪便污染，另一方面还可以根据数量的多少，判定食品受污染的程度。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过3个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验器材1、培养基：乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管2、器皿：1ml吸管、10ml吸管、试管（15×150）、三角锥瓶500ml、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml）3、其他：酒精灯，牛皮纸或报纸,棉花，高压蒸汽菌锅，水浴锅，显微镜，香柏油，二甲苯等四、操作方法1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.2、检样稀释（1)以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀,做成1：10的均匀稀释液。
(2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管,混合均匀，做成1∶100稀释液。
水中大肠杆菌的检测实验报告
1. 掌握水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 了解水中大肠杆菌污染的严重性及预防措施。
3. 培养实验操作技能，提高对水质监测的认识。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种条件致病菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在水质监测中，大肠杆菌常作为粪便污染的指示菌。
本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌的检测，通过观察菌落特征，确定水中大肠杆菌的存在。
三、实验材料1. 实验器材：无菌试管、移液器、培养箱、酒精灯、无菌棉签、试管架、培养皿、显微镜等。
2. 实验试剂：伊红美蓝培养基、无菌水、水样、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。
四、实验步骤1. 水样采集：采集待检测水样，用无菌容器盛装，避免污染。
2. 水样稀释：将水样进行适当的稀释，以便在培养基上形成单菌落。
3. 接种：取适量稀释后的水样，用无菌棉签均匀涂布于伊红美蓝培养基表面。
4. 培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在37℃条件下培养24小时。
5. 观察：观察培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断是否存在大肠杆菌。
6. 鉴定：对疑似大肠杆菌的菌落进行进一步的鉴定，如革兰氏染色、生化试验等。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈深紫色（黑色），边缘整齐，有金属光泽。
2. 鉴定结果：经革兰氏染色和生化试验，证实所观察到的菌落为大肠杆菌。
1. 大肠杆菌是水质监测中的重要指标，其存在表明水质可能受到粪便污染，存在健康风险。
2. 本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌检测，操作简便，结果准确。
3. 在实际水质监测中，还需结合其他指标，如粪大肠菌群、耐热大肠菌群等，全面评估水质状况。
七、实验总结1. 本实验成功检测了水中大肠杆菌，掌握了水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 通过实验，提高了对水质监测的认识，增强了环保意识。
3. 在今后的学习和工作中，将继续关注水质问题，为保护水资源、保障人民群众健康贡献力量。
实验八九水中细菌总数与大肠菌群数的测定
例次
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2
10-3
仅有一个稀释度在此范围： 1365
164
20
菌落数×稀释倍数 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比<2，取平均值
2760
295
46
有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值
3890
271
60
所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者
入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样 ，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培 养24h，24h未产气继续培养至48h。
普通浓度发酵管中参加20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中参 加乳糖0.75ml
实验方法
多管发酵法测定水中总大肠菌群
3.平板别离： 〔1〕制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml 〔2〕选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板〔分区划线
无法计数 1650 513
所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者
27
11
5
没有任何稀释度在30-300之间 无法计数 305
12
选最接近该范围者
两个稀释度 菌落之比
菌落总பைடு நூலகம் （CFU/ml）
——
1.6×104
1.6
3.8×104
2.2
2.7×104
—— —— ——
5.1×105 2.7×102 3.1×104
实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数
目的要求
1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数 的方法 3、学习使用大肠菌群检索表
水中大肠杆菌检测实验报告
水中大肠杆菌检测实验报告水中大肠杆菌检测实验报告水是人类生活中不可或缺的资源，但是水中的污染物对人体健康造成了严重的威胁。
其中，大肠杆菌是一种常见的水质污染指标，其存在表明水体可能受到粪便污染。
本实验旨在通过检测水样中的大肠杆菌含量，评估水质的安全性。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 水样：从自然水源中采集的水样。
- 大肠杆菌检测试剂盒：包括培养基、试剂和培养皿等。
- 实验室设备：包括离心机、恒温培养箱等。
2. 实验方法：- 采集水样：在适当的采样点采集水样，保持样品的原始性。
- 准备培养基：按照检测试剂盒说明书的要求，准备好培养基。
- 培养大肠杆菌：将水样加入培养基中，经过适当的培养条件（如温度、时间等），使大肠杆菌得到生长。
- 检测大肠杆菌：根据检测试剂盒的指引，使用试剂对培养后的水样进行检测。
实验结果：经过实验，我们得到了水样中大肠杆菌的检测结果。
根据检测试剂盒的指示，如果水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险；如果水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全。
讨论：本实验的目的是评估水质的安全性，通过检测大肠杆菌的存在与否来判断水样的卫生状况。
大肠杆菌是一类存在于动物和人类的肠道中的细菌，其存在于水中可能是由于粪便污染。
因此，水中大肠杆菌的检测是评估水质卫生状况的重要指标。
通过本实验，我们可以得出以下结论：1. 水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全，可以放心饮用或使用。
2. 水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险，不宜直接饮用或使用。
然而，需要注意的是，本实验只是初步的水质评估方法之一，仅能提供关于大肠杆菌存在与否的信息，并不能全面评估水质的安全性。
在实际应用中，还需要综合考虑其他水质指标，如化学物质、重金属等的含量，以及水源的来源和处理情况等因素。
此外，本实验中使用的大肠杆菌检测试剂盒是一种常见的快速检测方法，其操作简单、结果迅速，适用于实验室和野外条件下的水质检测。
水中大肠杆菌的检测实验报告
水中大肠杆菌的检测实验报告水中大肠杆菌的检测实验报告一、引言水是人类生活中不可或缺的重要资源，然而，水中可能存在着各种微生物，其中包括一些对人体健康具有潜在威胁的病原菌。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，其存在于水中可能意味着水源受到了污染。
因此，本实验旨在通过对水样中大肠杆菌的检测，评估水质的安全性。
二、实验方法1. 样品采集：在实验室中，我们选择了不同来源的水样进行采集，包括自来水、河水和湖水。
每个样品分别采集三个重复样品，以保证实验的可靠性。
2. 细菌培养基准备：我们使用了大肠杆菌培养基，并按照说明书的要求进行了制备。
3. 细菌培养：将采集到的水样分别接种到培养基中，然后在恒温箱中培养24小时。
4. 结果观察：观察培养皿中是否有大肠杆菌的生长，若有，则说明水样中存在大肠杆菌。
三、实验结果经过24小时的培养，我们观察到了以下结果：1. 自来水样品：在自来水样品中，没有观察到任何细菌的生长，说明自来水的水质符合卫生标准。
2. 河水样品：在河水样品中，我们观察到了一些培养皿中有大肠杆菌的生长，说明河水可能存在污染风险。
3. 湖水样品：在湖水样品中，几乎所有的培养皿中都观察到了大肠杆菌的生长，这表明湖水的水质存在严重污染。
四、讨论与分析1. 自来水的安全性：根据实验结果，我们可以得出结论，自来水的水质是安全的，不会存在大肠杆菌的污染。
这可能是因为自来水经过了严格的处理和消毒，以确保水质的安全性。
2. 河水的污染风险：由于河水样品中观察到了一些大肠杆菌的生长，说明该河水存在一定的污染风险。
可能是由于附近的人类活动或者其他因素导致了河水的污染，因此需要采取相应的措施来保护河水的水质。
3. 湖水的严重污染：湖水样品中观察到了大肠杆菌的大量生长，这表明湖水的水质存在严重的污染。
湖水是人们常用的水源之一，如果湖水受到污染，将对周围的环境和人们的健康造成严重影响。
因此，我们需要加强对湖水的保护和治理，以确保水质的安全性。
水中总大肠菌群的测定
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
实验九 水中大肠菌群数的测定
实验九水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。
3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。
取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。
取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。
如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。
2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。
3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。
实验九多管发酵法测定水中大肠菌群
证实有大肠菌群存在后，再根据复发酵的阳性管
（瓶）数查表，即得每升水样中的大肠菌群数。
▲ 将100、10、1、0.1（10-1）ml水样的发酵管 结果查水 样的发酵管结果查表4
五 实验报告
实验课程论文
封面格式 《水处理微生物学》课程实验
水样管/ml 100 10 1 0.1 0.01
发酵结果
2 思考题
(1) 大肠菌群的定义是什么? (2) EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查 大肠菌群时，各起什么作用？
存在于肠道中的正常菌群,在正常生理情 况下不致病.
（1）大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli） E.coli
（2）产气杆菌（Aerobacter aerogenes） （3）枸橼酸盐杆菌（Coli citrovorum） （4）副大肠杆菌（Paracoli） 大肠菌群的生理习性与病原菌相似，并且外界 存活时间基本一致.
经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢 杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通 浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一 初发酵管的同类型菌落1--3个，37℃培养24h，结果 若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。
同类型菌落① 深紫黑色、有金属光泽。 ② 紫黑色、不带或略带金属光泽。 ③ 淡紫红色、中心颜色较深。
3 复发酵试验
以上大肠菌群阳性菌落，经涂片革兰氏染 色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再 进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24h培养产酸 又产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
水样 接种
初步 发酵
产酸 产气
大肠菌群
厌氧芽孢杆菌
好氧芽孢杆菌
平 板 分 离
鉴 别 培 养 基
产酸 复发酵
任务二水中大肠菌群数的测定
EC肉汤 44.5士0.5℃
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
总大肠菌群
• MPN （most probable number）
– 最可能数或最近似数
• 总大肠菌群MPN
– 100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数 或最可能数
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
指示菌（总大肠菌群）
实验内容
1 培养基制备 2 乳糖发酵试验 13 乳分糖离发培酵养试验 4 证实试验 5 结果分析与报告
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
实验器材
• 水样
– 生活饮用水、水源水
• 培养基
– 乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基
• 试剂
– 革兰氏染色液、稀释剂等
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
各10ml
水样 各1ml
乳 糖 发 酵
试 验1ml
各1ml
1:10稀 释水
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
一、乳糖发酵（初发酵）试验
• 培养
ห้องสมุดไป่ตู้– 36℃士l℃ – 24h士2h
• 观察产酸产气情况
– 不产酸产气 – 产酸产气
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
第二天
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
水中总大肠菌群的测定
• 检验依据：GB/T5750.12-2006 • 方法：多管发酵法
项目九 综合实训---水中总大肠菌群的测定
总大肠菌群
• 总大肠菌群
– 37℃、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏 阴性、无芽孢杆菌
粪大肠菌群（耐热--）
实验九 水中总大肠菌群的测定
（2）检测池水、河水或湖水
应取距水面10－15cm的深层水样，先将灭菌带玻璃塞的空瓶瓶口向下 浸入水中，然后翻转过来，拨开玻璃塞，水即流入瓶中，满后将玻璃塞塞
好，再从水中取出。有时需用特制的采样器取水样。采取的水样最好立即
维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降
低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打 开灭菌器盖，取出物品。
手提式高压蒸 汽灭菌锅
高压蒸汽自动 灭菌锅
斜面摆放与冷凝
倒平板操作法示意图
五 操作步骤 1 水样的采取
（1）检测自来水
4 分离培养
将初发酵的阳性管(产酸产气)的菌液分别划线接种于伊红美蓝琼脂培 养基平板。置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态。 选择符合大肠菌群菌落特征的菌落:① 深紫黑色，有金属光泽；② 紫黑色， 不带或略带金属光泽；③ 淡紫红色，中心颜色较深, 挑取一部分，进行革 兰氏染色。
思考题
1. 何谓大肠菌群？它主要包括哪些细菌属 ？ 2. 假如水中有大量致病菌，如：痢疾、伤 寒、霍乱等病原菌，用多管发酵法检测总 大肠菌群，能否得到阳性结果？为什么？ 3. 为什么接种100、10 mL水样，用的是3 倍 浓缩的乳糖蛋白胨培养基，而接种1.、 0.1、0.01、0.001 mL水样，则用乳糖蛋白 胨培养基？
（2）水源水
在装有5ml 3倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基的试管中加入10ml水样品；于各装有 10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL水样；再于各 装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL 1：10 稀释的水样。共计15管，三个稀释度。将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养 48h。 （可以根据水的污染程度选择3个稀释度）
总大肠菌群的检测实训报告
一、实训目的1. 了解总大肠菌群的概念及其在水质检测中的重要性；2. 掌握总大肠菌群检测的基本原理和方法；3. 提高水质检测的实验操作技能；4. 培养严谨的科学态度和团队合作精神。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX大学实验室四、实训器材与试剂1. 器材：恒温培养箱、水浴锅、天平、无菌操作台、无菌吸管、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、火柴等；2. 试剂：总大肠菌群检测培养基、无菌水、乳糖、溴甲酚紫、2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）、指示剂、阳性对照、阴性对照等。
五、实训原理总大肠菌群是一类存在于肠道中的细菌，其代谢产物对水质产生污染。
检测总大肠菌群可以反映水体的卫生状况。
本实训采用酶底物法检测总大肠菌群，该方法具有快速、准确、简便等优点。
六、实训步骤1. 准备工作：将总大肠菌群检测培养基、无菌水、乳糖、溴甲酚紫、2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）等试剂准备齐全。
2. 样品处理：取100ml水样，加入10ml无菌水，充分振荡混匀。
3. 接种：取上述混合液1ml，接种到装有适量总大肠菌群检测培养基的培养皿中，重复接种3次。
4. 培养与观察：将培养皿放入恒温培养箱中，在37℃条件下培养24小时。
5. 结果判定：观察培养皿中的菌落生长情况。
若出现黄色菌落，则可能为总大肠菌群。
将菌落涂片，进行革兰氏染色，观察菌落形态。
6. 计算结果：根据培养皿中菌落数量，计算总大肠菌群数。
七、实训结果与分析1. 结果：本次实训中，共检测出3个培养皿中的菌落为黄色，经革兰氏染色观察，菌落为革兰氏阴性菌，符合总大肠菌群的特性。
2. 分析：根据检测结果，本次水样中总大肠菌群数为3CFU/100ml。
八、实训总结1. 通过本次实训，掌握了总大肠菌群检测的基本原理和方法，提高了水质检测的实验操作技能。
2. 在实训过程中，发现以下问题：a. 操作过程中，无菌操作不严格，导致培养皿中出现杂菌；b. 培养过程中，温度控制不稳定，影响菌落生长。
实验水中总大肠菌群的测定多管发酵法
出现阳性份数
每 100mL 95%可信限
出现阳性份数
每 100mL 水 95%可信限
水样中细
值
样中细菌
值
10mL 1 mL 管 0.1 菌数的最 下限 上 10mL 1 mL 0.1 数的最可 下 上限
管
mL 管 可能数
限管
管 mL 管
能数
限
0
0
0
<2
2
0
1
7
1 17
0
0
1
2
<0.5 7
2
1
0
7
1 17
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别加入 10mL 水样；于各装有 10mL 乳糖蛋白胨培养液的 5 个试管中（内有倒管）， 分别加入 1mL 水样；再于各装有 10mL 乳糖蛋白胨培养液的 5 个试管中（内有倒 管），分别加入 1mL 1∶10 稀释的水样。共计 15 管，三个稀释度。将各管充分混 匀，置于 37℃恒温箱内培养 24h。
5
1
350
120 1000
5
0
2
43
15 110 5
5
2
540
180 1400
5
1
0
33
11 93 5
5
3
920
300 3200
5
1
1
46
16 120 5
5
4
1600
640 5800
5
1
2
63
21 150 5
5
5
≥2400
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2
0
14
4 34
3
2
1
水和饮料中细菌总数和总大肠菌群的测定
水和饮料中细菌总数和总大肠菌群的测定1、实验目的1.1学习水样的采取方法、了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义.1.2学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法.1.3学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
2、实验原理2.1水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。
所谓细菌总数是指1mL或1g检样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，37℃经24h培养后，所生长的菌落数。
本实验所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌(colony—forming unit,cfu）数,故其单位应是cfu/g(mL）。
它反映的是检样中活菌的数量。
2.2所谓大肠菌群，是指在37℃、24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成,即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数（MPN）表示.2。
3水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验,但操作繁琐,需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样.多管发酵法包括：初发酵试验、平板分离和复发酵试验。
2.3.1初发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉式小套管。
乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖产酸产气.培养基内加溴甲酚紫作为pH指示剂，细菌产酸后，培养基由紫变黄。
发酵管经37℃培养24h,小套管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明说中存在大肠菌群,为阳性结果。
但是,有个别其他类型的细菌此条件下可能产气，且产酸不产气的发酵管，也不一定非大肠菌群,因其也可能延迟48小时才产气，这两种情况应视为可疑结果，因此需继续进行下面实验，才能确定是否为大肠菌群.48小时后仍不产气的为阴性结果。
新项目方法能力验证报告(水中总大肠菌群的测定(B) 多管发酵法《水和废水监测分析方法》)
XXXX有限公司新项目方法验证能力验证报告项目名称：水中总大肠菌群的测定（B）多管发酵法《水和废水监测分析方法》（第四版）(B) 国家环境保护总局(2002年)第五篇第二章五（一）负责人：审核人：日期：水中总大肠菌群的测定（B）多管发酵法《水和废水监测分析方法》（第四版）(B) 国家环境保护总局(2002年)第五篇第二章五（一）方法验证能力验证报告1、方法依据及适用范围本报告依据：《水和废水监测分析方法》（第四版）国家环境保护总局(2002年)制定。
本标准规定了多管发酵法测定水和废水中总大肠菌群。
2、定义多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数日，要根据所要求数据的准确度而定。
3、主要仪器、设备及试剂3.1 培养基与试剂3.1.1 乳糖蛋白胨培养液蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。
次培养基适用于检验=大肠菌群时作发酵试验之用。
根据实际需要，也可按上述配方比例（除蒸馏水外）配成二倍、三倍或五倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。
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菌群数。
每组： 三倍浓缩乳糖蛋白胨（5 ml）15管 普通浓度乳糖蛋白胨（10 ml）15管 伊红美兰培养基 150 ml (5个平板) 三角瓶1个（装27mL蒸馏水灭菌）、 10ml吸管 2支、1ml吸管2支包扎灭菌
Байду номын сангаас
表2 最可能数(MPN)表
（接种5份10mL 水样、5份1mL水 样、5份0.1mL水 样时，不同阳性 及阴 性情况下 100mL水样中细 菌数的最可能数 和95%可信限值）
（2）水源水
在装有5ml 3倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基的试管中加入10ml水样品；于各装有 10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL水样；再于各 装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL 1：10 稀释的水样。共计15管，三个稀释度。将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养 48h。 （可以根据水的污染程度选择3个稀释度）
（3） 伊红美培养基：按照说明称取适量培养基，置于三角瓶中，加蒸馏
水溶解， 115℃高压灭菌15min，待冷却至45℃—50℃ ，倒平板待用。
培养基配制操作图示：
用漏斗分装培养基及摆斜面
培养基的分装：一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装 3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫 米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的
实验九
水中总大肠菌群的测定
实验八 水中总大肠菌群的测定
一 实验器材 1 培养基
乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）培养基、伊红美兰琼脂平板
2 溶液和试剂 革兰氏染色液
3 仪器和其他用品
高压湿热灭菌器、显微镜、载玻片、灭菌培养皿、灭菌吸管、试管、三角 瓶、接种环
二 目的要求
1 学习检测水中总大肠菌群的方法。 2 了解检测水中总大肠菌群各种方法的原理及其应用中的优、缺点。
思考题
1. 何谓大肠菌群？它主要包括哪些细菌属 ？ 2. 假如水中有大量致病菌，如：痢疾、伤 寒、霍乱等病原菌，用多管发酵法检测总 大肠菌群，能否得到阳性结果？为什么？ 3. 为什么接种100、10 mL水样，用的是3 倍 浓缩的乳糖蛋白胨培养基，而接种1.、 0.1、0.01、0.001 mL水样，则用乳糖蛋白 胨培养基？
维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当
降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开 灭菌器盖，取出物品。
手提式高压蒸 汽灭菌锅
高压蒸汽自动 灭菌锅
斜面摆放与冷凝
倒平板操作法示意图
五 操作步骤 1 水样的采取
（1）检测自来水
先将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再开放水龙头使水流5 min后， 在火焰旁打开灭菌三角瓶塞，以其接取水样，迅速地进行分析。
（2）检测池水、河水或湖水
应取距水面10－15cm的深层水样，先将灭菌带玻璃塞的空瓶瓶口向下 浸入水中，然后翻转过来，拨开玻璃塞，水即流入瓶中，满后将玻璃塞塞
好，再从水中取出。有时需用特制的采样器取水样。采取的水样最好立即
四 培养基的配制 （1）乳糖蛋白胨培养液：按照说明称取适量培养基，溶于蒸馏水中，分 装于试管中，每个试管10ml，倒置一德汉氏小管，于115℃高压灭菌器中
灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
（2） 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述制备方法配制，除蒸馏水外， 培养基用量增加至三倍，分装于试管中，每个试管5ml 。
检测，否则需放入冰箱中保存。
3 初发酵试验 （1）生活饮用水
在两个装有已灭菌的50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中（内有
倒管），以无菌操作各加入已充分混匀的水样100mL。在10支装有已灭菌的 5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混 匀的水样10mL，混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。
平板划线分离操作法示意图
5 复发酵试验
上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另 一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒置管），每
管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中
培养24h，有产酸、产气者，即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群 存在的阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠
与报纸约呈45º 角，并将右端多余的报纸打一小结。
4. 玻璃器皿、金属器械包扎完毕后置干燥箱160－170℃灭菌2 h.
◆
灭菌
3. 排
1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热。 除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭 排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关 闭排气阀。 4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器内的温度为1210C，
4 分离培养
将初发酵的阳性管(产酸产气)的菌液分别划线接种于伊红美蓝琼脂培 养基平板。置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态。 选择符合大肠菌群菌落特征的菌落:① 深紫黑色，有金属光泽；② 紫黑色， 不带或略带金属光泽；③ 淡紫红色，中心颜色较深, 挑取一部分，进行革 兰氏染色。
一半为宜。
◆
包扎
1．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。 2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉 花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会 下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与 报纸约呈60º 角，并将右端多余的报纸打一小结。 3．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端，
3 了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性。
三 基本原理
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指 标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。 多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具 备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检 验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数简称MPN表示。食 品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数（most probable number, MPN)表示。