生化反应曲线-PPT
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） ▪ 三点终点法（3-point end）
2020/3/25
17
17
两点终点法
在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一 个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度， 此两点吸光度之差用于计算结果。
2020/3/25
18
18
Endpoint assays
两点终点法的特点 去除了样本的本底
2020/3/25
3
3
cobas® 8000 模块化组合分析系统 强劲
智能、高效、
2020/3/25
4
4
物质对光吸收的基本定律－ Lambert- Beer定律
-------光吸收的基本定律
Lambert－Beer定律表达为:
当一束平行的单色光通过含有均匀吸光物质的溶液时,溶液 的吸光度(A)与溶液的浓度(C)和光透过液层厚度(L)的乘积成正 比。物质对光吸收的吸光系数（e）为常数。
12
12
Reaction sequence
2020/3/25
13
13
Instrument cycle
Mod P
Sample pipetting 1st
Reagent 1
1st
2nd reagent
5th
3rd Reagent
16th
4th reagent
33rd
C 501 Cycle No
1st
☆其数学表达式：A = e*C*L
I0
I
=
2020/3/25
透射光 light =detector
5
5
根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度
如若吸光系数 (ε )未知，我们就需要采用定标曲线 来计算待测物的浓度。
此值为定值
Concx =Δ Absx x Concs Abss
70 60 待测样本 50 40 30 20 10
生化反应曲线
2020/3/25
1
1
内容概况
生化分析基本原理 生化反应曲线
2020/3/25
2
2
罗氏生化分析系统产品线
Cobas c111 180T/H
Cobas c311 300T/H
Cobas 6000 (c501) 600T/H
Modular P 800T/H Modular D 2400T/H Cobas 8000 2000T/H
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 Cycles
primary λ
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16
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终点分析法（Endpoint assays）
▪ 两点终点法（2-point end） ▪ 一点终点法 （1-point end）
一点终点单试剂（1-point endpoint assay – one reagent） 一点终点双试剂（1-point endpoint assay – two reagents
分光光度法定量分析的依据
Lambert-Beer 定律
适合于任何均匀非散射的介质
生化比色分析 特定蛋白透射比浊分析
2020/3/25
7
7
Roche Hitachi Photometer
2020/3/25
8
8
Reaction sequence
当相应的比色杯每一次通过光路系统时，光路系统会测量 并记录下相应的吸光度
Bichromatic Difference
2020/3/25
ห้องสมุดไป่ตู้11
11
仪器读数的原理
2020/3/25
反应转盘不停的周期旋转 当相应的比色杯通过光路系统时，光 路系统会测量并记录下相应的吸光度
在不同的时间点加入相应的反应试剂
不同仪器每个循环周期的时间间隔 Modular P 18秒 Cobas c702 16秒 Cobas C501 8秒 Modular D 12秒 C311 12秒
采用两个测量点
针对两个或多个试剂的项目
第一个读数点一般选在添加最后一个试剂之前
第二个读数点一般选在加入最后一个试剂之后且已经达到了反应终点
A (样本) + B1 (试剂1) + B2 (试剂 2)
▪ 光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。 12 有效波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600,
660, 700, 800nm ▪ 多数检测项目都使用双波长检测方法。（可去除干扰物对检测结果
的影响）
2020/3/25
9
9
7000
Reaction Monitor Trig
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10
10
7000
Bichromatic Difference
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 cycles
Endpoint and rate (kinetic) assays
2020/3/25
15
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终点分析法
基于 被测物质在反应过程中到达反应终点或平衡点，
根据该点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。
吸光度 S+R1
• 终点法的计算：
A1
t 时间
从时间-吸光度曲线来看，到达反 应终点时，吸光度将不再变化。在达 到终点时任取一点进行测定，此时底 物和产物的量都不再变化。
Concx = 待测样本浓度
Concs = 标准品浓度
Δ Absx
= 样本吸光度
Abss
Calibrator/standard 标 准品 (cfas)
= 标准品吸光度
(amount of color)
吸 光 度
1
2
3
4
5
6
2020/3/25 浓度 (amount of substance)
6
6
Lambert-Beer 定律
C702 1st
1st
1st
11th
7-8th
34th
19-20th
n/a
n/a
时间 T0 = 0 min T1 ≈ 0 min T2 (≈ 1.5 min) T3 (≈ 5.0 min) T4 (≈ 10 min)
2020/3/25
14
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自动生化分析常用的方法有:
▪ 终点法（End Point Assays）：一般在整个反应完成后再来检测吸光度 ▪ 速率法（Rate assays） ：一般在反应的过程中监测吸光度的变化情况
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两点终点法
在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一 个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度， 此两点吸光度之差用于计算结果。
2020/3/25
18
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Endpoint assays
两点终点法的特点 去除了样本的本底
2020/3/25
3
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cobas® 8000 模块化组合分析系统 强劲
智能、高效、
2020/3/25
4
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物质对光吸收的基本定律－ Lambert- Beer定律
-------光吸收的基本定律
Lambert－Beer定律表达为:
当一束平行的单色光通过含有均匀吸光物质的溶液时,溶液 的吸光度(A)与溶液的浓度(C)和光透过液层厚度(L)的乘积成正 比。物质对光吸收的吸光系数（e）为常数。
12
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Reaction sequence
2020/3/25
13
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Instrument cycle
Mod P
Sample pipetting 1st
Reagent 1
1st
2nd reagent
5th
3rd Reagent
16th
4th reagent
33rd
C 501 Cycle No
1st
☆其数学表达式：A = e*C*L
I0
I
=
2020/3/25
透射光 light =detector
5
5
根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度
如若吸光系数 (ε )未知，我们就需要采用定标曲线 来计算待测物的浓度。
此值为定值
Concx =Δ Absx x Concs Abss
70 60 待测样本 50 40 30 20 10
生化反应曲线
2020/3/25
1
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内容概况
生化分析基本原理 生化反应曲线
2020/3/25
2
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罗氏生化分析系统产品线
Cobas c111 180T/H
Cobas c311 300T/H
Cobas 6000 (c501) 600T/H
Modular P 800T/H Modular D 2400T/H Cobas 8000 2000T/H
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 Cycles
primary λ
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终点分析法（Endpoint assays）
▪ 两点终点法（2-point end） ▪ 一点终点法 （1-point end）
一点终点单试剂（1-point endpoint assay – one reagent） 一点终点双试剂（1-point endpoint assay – two reagents
分光光度法定量分析的依据
Lambert-Beer 定律
适合于任何均匀非散射的介质
生化比色分析 特定蛋白透射比浊分析
2020/3/25
7
7
Roche Hitachi Photometer
2020/3/25
8
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Reaction sequence
当相应的比色杯每一次通过光路系统时，光路系统会测量 并记录下相应的吸光度
Bichromatic Difference
2020/3/25
ห้องสมุดไป่ตู้11
11
仪器读数的原理
2020/3/25
反应转盘不停的周期旋转 当相应的比色杯通过光路系统时，光 路系统会测量并记录下相应的吸光度
在不同的时间点加入相应的反应试剂
不同仪器每个循环周期的时间间隔 Modular P 18秒 Cobas c702 16秒 Cobas C501 8秒 Modular D 12秒 C311 12秒
采用两个测量点
针对两个或多个试剂的项目
第一个读数点一般选在添加最后一个试剂之前
第二个读数点一般选在加入最后一个试剂之后且已经达到了反应终点
A (样本) + B1 (试剂1) + B2 (试剂 2)
▪ 光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。 12 有效波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600,
660, 700, 800nm ▪ 多数检测项目都使用双波长检测方法。（可去除干扰物对检测结果
的影响）
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7000
Reaction Monitor Trig
2020/3/25
10
10
7000
Bichromatic Difference
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 cycles
Endpoint and rate (kinetic) assays
2020/3/25
15
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终点分析法
基于 被测物质在反应过程中到达反应终点或平衡点，
根据该点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。
吸光度 S+R1
• 终点法的计算：
A1
t 时间
从时间-吸光度曲线来看，到达反 应终点时，吸光度将不再变化。在达 到终点时任取一点进行测定，此时底 物和产物的量都不再变化。
Concx = 待测样本浓度
Concs = 标准品浓度
Δ Absx
= 样本吸光度
Abss
Calibrator/standard 标 准品 (cfas)
= 标准品吸光度
(amount of color)
吸 光 度
1
2
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2020/3/25 浓度 (amount of substance)
6
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Lambert-Beer 定律
C702 1st
1st
1st
11th
7-8th
34th
19-20th
n/a
n/a
时间 T0 = 0 min T1 ≈ 0 min T2 (≈ 1.5 min) T3 (≈ 5.0 min) T4 (≈ 10 min)
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自动生化分析常用的方法有:
▪ 终点法（End Point Assays）：一般在整个反应完成后再来检测吸光度 ▪ 速率法（Rate assays） ：一般在反应的过程中监测吸光度的变化情况