细菌培养技术

（二）接种环境
操作需在接种罩、超净工作 台或无菌室内进行。
（三）细菌接种的基本程序
灭菌接种环 沾取标本 杀灭接种环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
细菌接种的基本程序
灭菌接种环
取菌种试管和待 接种的斜面试管
沾取标本
细菌培养技术
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
教学对象： 教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时： 实验课时：4学时 课程类型： 课程类型：专业实验课 课程要求： 课程要求：必修 每组人数： 每组人数：2人
实验目的和要求
掌握细菌的培养方法。 掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等 各种接种方法。 熟悉接种工具、接种环境要求和无菌操作要领。 学会观察平板、斜面、液体、半固体培养基中细 菌的生长现象。
微需氧培养法
适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌 培养。 可采用抽气换气法。
厌氧培养法
适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、 硫乙醇酸盐法等。
二、细菌的分离培养和接种技术 (一)接种工具
接种针和接种环：由三部分组组成，即环 （针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过 火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌，接种环 用于固体、液体培养基的细菌接种。 L型玻璃棒：用于琼脂平板涂布接种细菌。
菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌 堆积物。
菌落
菌苔
菌落与菌苔
2、细菌在液体培养基中的生长现象 、细菌在液体培养基中的生长现象 液体 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌。 菌膜：多见于厌氧菌。
细菌在液体培养基中的生长现象
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
3、细菌在半固体培养基中的生长现象 、细菌在半固体培养基中的生长现象 半固体 有鞭毛细菌：
实验内容
常用细菌培养方法。 细菌的分离培养和接种技术。 细菌生长现象观察。
一、常用细菌培养方法
需氧培养法（一般培养）
适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度：37℃（采用恒温培养箱）。 培养时间：18～24h。
二氧化碳培养法
适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。
一、常用细菌培养方法
（四）接种方法
6.倾注培ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ法：用于细菌计数。
将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温 培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生 长现象。
三、细菌在培养基上的生长现象
1、细菌在固体培养基中的生长现象 、细菌在固体培养基中的生长现象 固体
菌落
定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖， 形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、 透明度、湿润度、黏度、溶血性。
在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺 线边缘模糊。
无鞭毛细菌：
只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
（四）接种方法
2.液体培养基接种法
可观察细菌在培养基中的生长现象或用 作生化反应实验。
（四）接种方法
3.半固体培养基接种法：
穿刺接种法 ，用于保存菌 种或观察细菌动力。
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（四）接种方法
4.斜面接种法：
用于鉴定和保存菌种。
（四）接种方法
5.涂布接种法：
用于测定标本中活菌数和药敏实验细菌接种。
接种
接种后灭菌接种环
（四）接种方法
1.平板划线接种法：
目的：使混合的细菌呈单个分
散生长，形成单个菌落，以便 获得纯菌。
方法：
分区划线法：适用于含菌量 较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量 较少的标本。
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法