HPLC 法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量

HPLC 法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量

摘要：目的：通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。方法:在色谱条件：选择Hypersil CN (200 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（30:70）,检测波长：232nm, 进样量10μl，1.0 mL/min 为流速,柱温为30℃条件下进行检测。结果：二甲双胍在1.14ug·mL-1～57.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =46657X-341531（r=0.9993）, 平均回收率为100.12%，RSD 为 1.4%。结论:采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量,本法简单、灵敏度高、结果准确。

关键词：HPLC法;盐酸二甲双胍;含量

二甲双胍是治疗2型糖尿病的首选药物，该药可通过多种作用机制控制空腹及餐后血糖，且能改善患者血脂代谢[1]，目前主要用于饮食和运动控制血糖不满意的2型糖尿病患者，尤其是胰高血糖素和肥胖患者[2]。此类药物的质量控制对于临床用药安全至关重要，本文由此出发，考察高效液相法在盐酸二甲双胍片剂含量测定中的应用，结果报道如下：

1 材料

1.1 仪器与试药

岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；磷酸、磷酸二氢钾均为色谱纯；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：151113-160117）；盐酸二甲双胍片（华润双鹤药业股份有限公司，国药准字H11020541，规格：0.25g，批号为：151223、160316、160721）。

2 方法与结果

2.1 方法学验证

2.1.1 色谱条件

波长选择：以流动相做空白对照，于200-400nm波长下对盐酸二甲双胍对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在232nm处盐酸二甲双胍有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在232nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长232nm。

色谱柱选择Agilent C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（30∶70）,检测波长：232 nm, 进样量10μl，1.0 mL/min流速,柱温为室温（30℃）。

2.1.2 溶液的制备

2.1.2.1 供试品溶液的制备

精密称取20颗盐酸二甲双胍片，粉碎后混合均匀，精密称取上述供试品0.1g置于50ml 容量瓶中，加入流动相20ml稀释，超声处理10min，至澄清后，放置室温，稀释至对应刻度，取适量溶液经微孔滤膜（0.25um）过滤后，待用。

2.1.2.2 对照品溶液的制备

采用十万分之一天平称取盐酸二甲双胍对照品10.19mg于20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3 高效液相色谱法

2.1.

3.1 精密度试验

在相同色谱条件下，重复进样6次，每次10ul，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为 1.3%<2.0%，符合药典规定[3]，提示，本组方法精密度良好。

2.1.

3.2 重复性试验

选择同批号盐酸二甲双胍胶囊6份，精密称定后，根据供试品“2.1.2.1”项操作制备溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD = 1.2% （小于2.0%），符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。

2.1.

3.3 稳定性试验

于0h、4h、8h、12h、24h分别取供试品与对照品溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，根据测得的色谱峰面积，对照品组RSD为1.4%<2.0%，供试品组RSD为1.2%<2.0%，提示对照品及供试品溶液在24h内较为稳定。

2.1.

3.4 回收率考察

取“2.1.2.1”项供试液于，保存至3个锥形瓶内，依次加盐酸二甲双胍对照品2.17mg、5.46和10.19mg，根据制作“2.1.2.1”项步骤，进样10ul，对峰面积进行测定，得到回收率分别为：100.18%、100.22%和99.97%，平均100.12%，RSD 1.4%，与药典标准相符[3]。

2.1.4 线性关系考察

采用移液管精密移取“2.1.2.2”下对照品溶液0.20ml、0.50ml、0.80ml、1ml、2ml、5ml 于10ml容量瓶中，使用流动相稀释至刻度，澄清后，采用微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10ul，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y =46657X-341531（r=0.9993），提示，盐酸二甲双胍浓度在

1.14ug·mL-1～57.00ug·mL-1范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2 样品中盐酸二甲双胍含量测定

结合“2.1.1项”下色谱条件，分别测定盐酸二甲双胍对照品溶液与3批盐酸二甲双胍片供试品溶液，供试品制备同“2.1.2.1”项操作，采用自身对照法对供试品内含有的盐酸二甲双胍含量进行测定。

3 结果

结果显示，高效液相法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍平均含量（与标识量比较）为（101.55±0.47）%，见下表1。

表１盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量测定结果（%）

批号

盐酸二甲双胍含量

151113 151216 160117

高效液相色谱法101.22 101.26 101.25

4.讨论

盐酸二甲双胍（C4H12ClN5）属双胍类降糖药物，目前在糖尿病疾病控制中应用广泛，其含量监测一直备受医药工作者所重视。本文首先通过对其进行全波段扫描，确定232nm 作为其检测波长，因此时吸收最大，且经色谱分离后，无杂峰干扰。同时，前期试验及文献调查显示[4]，由于本药物属盐类物质，分离过程极易出现拖尾或者双头峰，故而考虑加入缓冲盐，使其测定过程酸碱保持平衡态，利于测量及分离，经分析可知，在乙腈、磷酸二氢钾溶液缓冲盐条件下，所测色谱峰行较好，分离度高，故选择其为流动相[5]。

通过本文结果我们可知，高效液相色谱法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，高效液相法通过色谱柱的分离作用，将盐酸二甲双胍制备过程中的有关物质、杂质等干扰有效分离，故而能方便的定位主要成分含量，从而更好的用于此类物质的质量控制，确保用药安全。

参考文献

[1] 邵雪力, 侯森. 高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量[J]. 中国中医药咨讯, 2011, 03(12):116-117.

[2] 王长丹, 臧恒昌, 左艳红. 二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量测定方法改进[J]. 药学研究, 2015, 34(10): 574-576.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京: 化学工业出版社,2010.附录XIX