人体血清中的多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚 A的连续

第××卷分析化学（FENXI HUAXUE）第×期

××××年×月Chinese Journal of Analytical Chemistry ~

人体血清中的多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A的连续在线分离及气

相色谱-质谱测定

邵敏陈永亨*李晓宇

（广州大学环境科学与工程系，广州510006）

摘要建立了人体血清中多种环境雌激素: 多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A快速和可靠的连续在线分离及在

气相色谱-质谱上的分析方法。血清样品经过用浓盐酸使蛋白质变性[1]，用乙醚萃取，经硅胶柱分离出多个族组分：多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers,即PBDEs)、邻苯二甲酸酯(phthalate esters, 即PAEs)和双酚A(Bisphenol A,即BPA)，最后由气相色谱-质谱的选择离子检测测定。PBDEs、PAEs和BPA标准曲线回归方程拟合度R2均＞

0.99，表明在测试的浓度范围内线性关系良好。PBDEs目标化合物的检出限为0.005～0.048 ng/mL, PAEs目标化

合物的检出限为0.103～0.833 ng/mL, BPA的检出限是0.035 ng/mL。标准样品重复样中，PBDEs的RSD（relative standard deviation）值分别为2.76%～10.9%，PAEs的RSD值分别为5.63%～9.90%,BPA的RSD值为3.03%。实际

血清样品中，PBDEs的加标回收物PCB209（polychloride diphenyl ether 209）的回收率范围是74.8 %～88.5%；PAEs 中的加标回收物DBP-D4（Dibutyl phthalate-Deutorium 4）的回收率范围是78.7%～97.0%；BPA中的加标回收物

BPA-D16（Bisphenol A-Deutorium 16）的回收率范围是76.3%～93.1%。该方法检测血液中多种环境雌激素灵敏度

高、重现性好和回收率良好。

关键词人体血清；多溴联苯醚；邻苯二甲酸酯；双酚A；气相色谱-质谱

1引言

近年来，随着对环境污染问题的日益关注，环境内分泌干扰物[2]，作为一类污染源引起了环境科研人员的研究兴趣，环境雌激素尤其成为这类干扰物的研究热点[3]。研究证明，环境雌激素对人类的健康与生殖，神经系统有着直接的危害作用[3-5]。它们主要通过模拟内分泌激素的作用与下丘脑垂体、子宫等器官的雌激素受体结合，从而干扰人体和其它动物的内分泌系统的正常运作，导致生殖系统的发育不良，肿瘤及畸形，生育能力下降。

环境雌激素多溴联苯醚（polybrominated diphenyl ethers,即PBDEs）、邻苯二甲酸酯（phthalate esters,即PAEs）和双酚A(Bisphenol A,即BPA)作为重要的化工原料[6-7,8-10,11]，广泛应用于生产人们日常生活中的消费用品，对人们的生活环境与健康有着直接与深刻的影响。

多溴联苯醚的重要用途是阻燃剂，应用于电子、电器、化工、建材、纺织等领域，是家用电器、计算机、泡沫塑料、地毯和布料、汽车内饰不可缺失的成分。常用的为五溴、八溴和十溴联苯醚，其中十溴联苯醚用途最广，因其价格低廉、性能优越、急性毒性在所有溴代联苯醚中最低。

邻苯二甲酸酯是一种增塑剂，通过改变高聚物分子间的结构来增加其成型时的可逆性与流动性，改变其成品的柔韧性，被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、清洁剂、润滑剂、指甲油、头发喷雾剂、香皂、农药载体驱虫剂、塑料与橡胶产品中。

双酚A是生产聚碳酸酯（polycarbonate,即PC）树脂及环氧树脂的主要原料，广泛应用于婴儿奶瓶、塑料容器、罐头内壁、黏合剂等。

迄今为止，这些雌激素对环境、人体的污染研究都是对某种单一的雌激素进行检测和分析[6-11,12-14]，所以有必要开展多种雌激素在血清中的污染研究。由于临床血清样品待测组分含量低，组分复杂且干扰严重，给定量分析的精确度带来一定的难度。本研究用浓盐酸有效地除去血清中的大分子蛋白质，利用硅胶柱分离与纯化血清中的三种族组分PBDEs、PAEs和BPA，降低了背景干扰，利用GC-MS选择性离子检测方法结合内标法，建立了可靠与快速同时检测血清样品中多种环境雌激素PBDEs、PAEs和BPA的分析方法。________________________________

本文系国家环保部公益性行业科研专项（201109001-08）资助。

E-mail：chenyong_heng@

分析化学第××卷

2实验部分

2.1仪器与试剂

Trace DSQ气相色谱一质谱仪（美国Thermo Fisher公司），EFAA-DC 12型氮吹仪（上海安谱实验仪器有限公司），Laborota 4000 efficient型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司），SB 3200DT型超声清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。正已烷，二氯甲烷，甲醇为HPLC级试剂，丙酮、乙醚为分折纯，经二次重蒸后使用。硅胶（60-200 µm）实验前与脱脂棉均系二氯甲烷索氏抽提72h后置于干燥器中备用；镊子，药勺和氮吹针头都用甲醇超声清洗后待用；无水硫酸钠与氯化钠于450˚C焙烧4h后，密封于干燥器中待用。购自美国Accustandards(New Haven, CT)的标样有：多溴联苯醚9种混合标样（10 mg/L，其中包含2,4,4，-三溴联苯醚(BDE-28)、2,2’,4,4’ -四溴联苯醚(BDE-47)、2,3’,4,4’ -四溴联苯醚(BDE-66)、2,2’,3,4,4’-五溴联苯醚(BDE-85)、2,2’,4,4’,5-五溴联苯醚(BDE-99)、2,2’,4,4’,6-五溴联苯醚(BDE-100)、2,2’,3,4,4’,5’-六溴联苯醚(BDE-138)、2,2’,4,4’,5,5’-六溴联苯醚(BDE-153)、2,2’,4,4’,5,6’-六溴联苯醚(BDE-154)）；6种邻苯二甲酸酯混标（2000 mg/L, 其中包含邻苯二甲酸二甲酯(dimethyl phthalate，DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate，DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，DBP)、邻苯二甲酸二辛酯(dioctyl phthalate，DNOP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(benzyl butyl phthalate，BBP)和邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate)，DEHP）)；DBP-D4（100 mg/L,氘代-邻苯二甲酸二丁酯）；BPA（100 mg/L）；BDE209（50 mg/L，十溴联苯醚）。购自美国UITra Scientific(North Kingstown, RI)的标样有PCB209 （500 mg/L，十氯联苯醚）。购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH （Augsburg)公司的标样有BPA-D16（氘代-双酚A）；BB（benzyl benzoate,苯酸苄酯）。购自美国Cambridge Isotope laboratories(Andover, MA)的标样有：BDE118（50 mg/L，即2,3’,4,4’,5-五溴联苯醚）；BDE183 （50 mg/L,即2,2’,3,4,4’,5’,6-七溴联苯醚）；13C12 -BPA（100 mg/L）；13C12 -BDE209（50 mg/L）。

2.2样品的前处理

将1 mL血清倒入125 mL锥形瓶中，加入回收率指示物PCB 209，DBP-D4和BPA-D16，再加入1 mL （6 mol/L）HCl溶液，震荡，然后加入20 mL乙醚，剧烈震荡，倒入80 mL 的分液漏斗，静止，分层，分离出有机相，然后用10 mL乙醚再萃取两次，合并有机相，用40 mL饱和氯化钠溶液洗涤，弃去氯化钠溶液。有机相用无水硫酸钠脱水干燥后在旋转蒸发仪上浓缩到1 mL左右，过中性硅胶柱，用10 mL正己烷与二氯甲烷的混合液（v/v, 7:3）淋洗PBDEs组分。接着用10 mL正己烷和丙酮的混合液（v/v，8:2）淋洗PAEs组分，最后用10 mL的乙酸乙酯淋洗BPA组分。在旋转蒸发仪上把淋洗液旋干后转移入细胞瓶，用氮吹仪吹干溶剂后，在PBDEs组分中加入内标物BDE-118（除BDE-209外的PBDEs的内标，）和13C12-BDE209（BDE-209的内标），用正己烷定容至300 µL，待测。在PAEs组分中加入内标物BB，用正己烷定容至300 µL，待测。在BPA组分中加入内标物13C12-BPA，用正己烷定容至300 µL，待测。至此，完成了对血清样品中PBDEs，PAEs和BPA三种组分的连续在线分离。

2.3仪器条件

(a) 多溴联苯醚组分

PBDEs：DB-5MS（30m*0.25mm i.d*0.1µm）毛细管柱[6]，载气为He，恒流，柱流量为1.2 mL/min，无分流进样，进样量为1 µL；进样口温度270o C，升温程序为：初始温度100o C，保持1 min，然后以20o C/min 升温到210o C，再以4o C/min升温到250o C，再以2o C/min升温到290o C，并保持5mins。（标准与血清样品色谱图见图1(a),(b)）

BDE-209：BDE-209组分的耐热性不是很好，在30m色谱柱里高温时会分解，所以换用15m的色谱柱[7]。DB-5MS（15m*0.25mm i.d*0.1µm）毛细管柱，载气为He，恒流，柱流量为1.2 mL/min，无分流进样，进样量为1 µL；进样口温度270o C，升温程序：初始温度100o C，保持1 min，然后以20o C/min升温到240o C，再以10o C/min升温到300o C，并保持10mins。（标准与血清样品色谱图见图2(a),(b)）

质谱条件：PBDEs组分电离模式为：离子源温度为200o C[7]，为负化学电离源（NCI），高纯甲烷（≥99.9999%电子轰击能量为100 ev，接口温度是290o C，样品定量检测时用选择性离子扫描模式（SIM）。检测离子见表1。