高效液相色谱_离子阱_飞行时间质谱鉴定决明子化学成分_骆宜
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抗炎、 利尿、 降血压、 降血脂、 免疫调节及致泻作用; 萘并吡喃酮类化合物具有降血脂 、 抗突变、 保肝及雌 激素样作用, 并且对于糖尿病性肾病并发症的预防 有一定药理活性。近年来决明子的研究工作主要集 中在化学成分的分离鉴定、 含量测定及药理作用研 究等方面, 使用液相色谱 - 质谱联用技术进行决明
可以得到较好的分离, 对其进行正、 负离子模式分 得 到 决 明 子 的 HPLC - IT - TOF MS 总 离 子 流 析, ( TIC ) 色谱图如图 1 所示。 其中, 萘并吡喃酮类化 合物在正离子模式下具有较多碎片离子, 而蒽醌类 化合物在负离子模式下具有较好的质谱响应 。 因 此, 以正离子模式结果分析鉴定萘并吡喃酮类化合 物, 而蒽醌类化合物的鉴别以负离子模式结果为主 要依据, 以正离子模式结果为辅助。 结合分子式预 测软件对每个谱峰的多级质谱碎片作综合分析 , 得 到化合物的分子式及碎片信息, 并对比对照品的保 留时间、 紫外光谱数据及参考文献, 共鉴别了 17 个 化学成分。
Components identification in Cassiae Semen by HPLC-IT-TOF MS*
* LUO Yi1 ,ZHANG Le1 ,WANG Wei-hua2 ,LIU Bin1*
( 1. Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102 ,China; 2. National Institute of Metrology,Beijing 100102 ,China)
( HPLC-IT-TOF MS) 联用技术, 在电喷雾离子源的正、 负离子模式下, 以甲醇 - 乙腈 ( 2 1 ) 混合溶液 ( A) - 水 ( B) 梯度洗脱, 流
-1 速为 1. 0 mL·min , 柱温为 35 ℃ 。根据决明子的一级和二级质谱图 , 对比对照品保留时间并结合文献 , 推测化合物可能的
北京中医药大学自由选题项目 ( 2015-JYB-XS107 ) Tel: ( 010 ) 84738629 ; E-mail: liubinyn67@ 163. com Tel: 18810941504 ; E-mail: luoyi1991@ hotmail. com 第一作者
[2 - 4 ] 。现 白质类、 脂肪酸类化合物及多种微量元素 [12 - 19 ] , 蒽醌类化合物具有较强的抗菌、 代研究表明
13
[20 ]
混匀, 过 0. 22 μm 微孔滤膜, 即得。 失的量, 3 实验条件 3. 1 色谱条件 5 μm) ; 色谱柱: Sunfire C18 ( 250 mm × 4. 6 mm, -乙腈( 2∶ 1 ) 为流动相 A, 流动相: 以甲醇 以水为流动
17% A →30% A; 10 ~ 65 梯度洗脱 ( 0 ~ 10 min, 相 B, min, 30% A; 65 ~ 70 min, 30% A → 42% A; 70 ~ 85 min, 42% A→47% A; 85 ~ 90 min, 47% A →63% A; 90 ~ 102 min, 63% A →68% A; 102 ~ 120 min, 68% A → 85% A; 120 ~ 130 min, 85% A → 100% A ) ; 流 速: 1. 0 mL·min - 1 ; 柱温: 35 ℃ ; 检测波长: 280 nm; 进 样量: 10 μL。 3. 2 质谱条件 负 电喷雾电离: 正离子模式喷雾电压 4. 5 kV, 离子模式喷雾电压 - 3. 5 kV。 加热模块 ( BH ) 温度 200 ℃ ; 曲形脱溶剂管( CDL) 温度 200 ℃ 。 使用自动采集模式, 采集范围 m / z 100 ~ 2 000 , 每一级质谱自动选择基峰离子作为下一级质谱的母 离子进一步裂解。 4 决明子中的主要化学成分鉴定 “ 3. 1 ” 采用 项的分析条件, 决明子中的化合物
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35 ( 8 ) 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015 ,
* 高效液相色谱 -离子阱 -飞行时间质谱鉴定决明子化学成分
1 1 2 1 * 骆宜 , 张乐 , 王卫华 , 刘斌 *
( 1. 北京中医药大学, 北京 100102 ; 2. 中国计量科学研究院, 北京 100013 ) 摘要 目的: 建立高效、 准确鉴定决明子中化学成分的液质联用方法 。 方法: 采用高效液相色谱- 离子阱 - 飞行时间质谱
Abstract
Objective: To develop a facile method for identification of components in Cassiae Semen by HPLC-MS.
Methods: The method was performed on HPLC-IT-TOF MS with electrospray ionization in both positive and negative ion modes with the mobile phase of mixed solution of methanol and acetonitrile in proportion 2 1 ( A) -water ( B ) by gradient elution. The column temperature was at 35 ℃ and the flow rate was 1. 0 mL·min - 1 . According to first and multi-stage mass spectrum diagrams,retention time of standard materials and published reports,the components in Cassiae Semen were identified and their fragmentation pathways were concluded. Results: A total of 17 components were identified,including 7 naphthopyrones, 7 anthraquinones and 3 naphthols. Among them,cassialactone gentiobioside was found for the first time in Cassiae Semen. Conclusion: The application of IT-TOF MS in determining components in TCM is useful and will provide essential data for further research. Keywords: ion trap-time of flight-mass spectrometry ( IT-TOF MS ) ; Cassiae Semen; chemical components; structure identification; therapeutic material basis; fragmentation pathways 决明子为豆科植物决明 ( Cassia obtusifolia L. ) [1 ] 或小决明( Cassia tora L. ) 的干燥成熟种子 。始载 《神农本草经 》 , 于 列为上品, 性甘、 苦、 咸、 微寒、 无 毒, 归肝、 肾、 大肠经, 具有清肝明目、 润肠通便的功 效, 是我国卫生部首批公布的药食同源食物之一 。 临床上多用于治疗目赤涩痛、 羞明多泪、 头痛眩晕、 目暗不明、 大便秘结。 决明子中主要含有蒽醌类化 合物、 萘并吡喃酮类化合物, 此外, 还含有多糖类、 蛋
图1 Fig. 1
决明子甲醇提取物的总离子流色谱图 Total ion current chromatogram of methanol extract of Cassiae Semen
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来自百度文库
35 ( 8 ) 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015 ,
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决明子中萘并吡喃酮类成分鉴定 结合质谱裂解碎片、 紫外光谱信息及参考文献
*
* * 通信作者
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子化学成分鉴别的报道较少, 其中张开庆 等采用 - 低分辨质谱的方法鉴别并得到了决 高效液相色谱 明子中的 9 个 成 分。 离 子 阱- 飞 行 时 间 质 谱 ( IT - TOF MS) 是将离子阱与飞行时间质谱结合使用, 不 仅具有质量范围宽, 扫描速度快, 灵敏度高的优点, 又可提供母离子和大量的多级碎片离子及其精确的 [21 ] 相对分子质量 。本文根据 IT-TOF MS 获得的高 分辨质谱数据、 色谱保留时间并结合文献, 高效、 准 确地鉴定了决明子中化合物的结构 。这项工作对于 丰富决明子化学成分的研究内容, 促进药材开发利 。 用及质量评价均具有重要的意义 仪器与材料 LCMS-IT-TOF 仪 ( 日本岛津公司 ) , 配备 SIL- 20AC 自动进样器, LC-20AD 二元泵, CTO-20A 柱温 1 SPD-M20A 二极管阵列检测器等。 箱, 乙腈、 甲醇均为色谱纯( 美国 Fisher 公司) , 流动相 用水由 MilliQ 纯水系统( 美国 Millipore 公司) 制得。 H1-NMR 和 红镰霉素龙胆二糖苷自制, 经 MS、 C -NMR 确定结构, HPLC 峰面积归一化法测得纯 度大于 98% 。 决明子药材购于北京同仁堂, 经北京中医药大 学中药学院刘春生教授鉴定为小决明 C. tora L. 的 干燥成熟种子。 2 溶液制备 2. 1 对照品供试液 称取红镰霉素龙胆二糖苷对照品 10 mg, 用甲 -1 醇定容至 10 mL, 配成质量浓度为 1 g · L 的储备 液; 取储备液 25 μL, 用甲醇定容至 25 mL, 配制成质 -1 量浓度为 1 mg·L 的供试液, 即得。 2. 2 决明子药材供试液 取决明子药材粉末 ( 过 60 目筛 ) 1. 0 g, 置于具 塞圆底烧瓶中, 加入甲醇 50 mL, 称量。水浴回流提 取出后放置至室温, 称量。加甲醇补充减 取 60 min,
7 个蒽醌类化合物 共鉴别了 17 个化合物, 包括 7 个萘并吡喃酮类化合物 、 裂解途径和结构。结果: 通过分析各组分质谱数据 , 和 3 个萘酚类化合物, 其中有决明子内酯龙胆二糖苷为首次从该植物中发现 。结论: 采用 IT-TOF MS 技术有利于新化合物的 发现和鉴别, 为中药化学成分、 质量控制研究提供了新内容 。 关键词: 离子阱 -飞行时间质谱; 决明子; 化学成分; 结构鉴定; 药效物质基础; 裂解途径 中图分类号: R917 文献标识码: A 文章编号: 0254-1793 ( 2015 ) 08-1408-09 doi: 10. 16155 / j. 0254-1793. 2015. 08. 15
[ 2 - 9] 鉴别了 7 个萘并吡喃酮类化合物, 分别为图 1 2、 4、 6、 8、 9 和 11, 中的化合物 1、 表 1 详细总结了 7 个 化合物的保留时间、 多级质谱数据及相应的鉴定结 果。 4. 1. 1 去甲红镰霉素苷类化合物质谱解析 化合 物 6 的保留时间为 44. 090 min, 其准分子离子峰 m / z 421 [ M + H]+ 直接失去 162 ( 葡萄糖, glc ) 中性碎
片得到苷元碎片 m / z 259 。 对苷元碎片离子进行二 级质谱分析, 母离子 m / z 259 相继失去一分子 H2 O 和 CO 得到 m / z 241 和 m / z 213 离子; 以 m / z 213 碎 片为母离子经 RDA 裂解生成 m / z 156 离子, 或通过 -CH2 和 CO 得到 m / z 199 和 m / z 171 碎片。 依次失去 以上裂解过程( 如图 2 所示) 符合去甲红镰霉素苷元 -6-O -β - 特征, 故推测化合物 6 可能为去甲红镰霉素 D-葡萄糖苷。