高效液相色谱_离子阱_飞行时间质谱鉴定决明子化学成分_骆宜

Components identification in Cassiae Semen by HPLC－IT－TOF MS*
＊ LUO Yi1 ，ZHANG Le1 ，WANG Wei－hua2 ，LIU Bin1＊
（ 1． Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102 ，China； 2． National Institute of Metrology，Beijing 100102 ，China）
图1 Fig． 1
决明子甲醇提取物的总离子流色谱图 Total ion current chromatogram of methanol extract of Cassiae Semen
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35 （ 8 ） 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015 ，
4. 1
决明子中萘并吡喃酮类成分鉴定 结合质谱裂解碎片、 紫外光谱信息及参考文献
7 个蒽醌类化合物 共鉴别了 17 个化合物， 包括 7 个萘并吡喃酮类化合物 、 裂解途径和结构。结果： 通过分析各组分质谱数据 ， 和 3 个萘酚类化合物， 其中有决明子内酯龙胆二糖苷为首次从该植物中发现 。结论： 采用 IT－TOF MS 技术有利于新化合物的 发现和鉴别， 为中药化学成分、 质量控制研究提供了新内容 。 关键词： 离子阱 －飞行时间质谱； 决明子； 化学成分； 结构鉴定； 药效物质基础； 裂解途径 中图分类号： Ｒ917 文献标识码： A 文章编号： 0254－1793 （ 2015 ） 08－1408－09 doi： 10. 16155 / j． 0254－1793. 2015． 08． 15
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［20 ］
混匀， 过 0. 22 μm 微孔滤膜， 即得。 失的量， 3 实验条件 3. 1 色谱条件 5 μm） ； 色谱柱： Sunfire C18 （ 250 mm × 4. 6 mm， －乙腈（ 2∶ 1 ） 为流动相 A， 流动相： 以甲醇 以水为流动
17% A →30% A； 10 ～ 65 梯度洗脱 （ 0 ～ 10 min， 相 B， min， 30% A； 65 ～ 70 min， 30% A → 42% A； 70 ～ 85 min， 42% A→47% A； 85 ～ 90 min， 47% A →63% A； 90 ～ 102 min， 63% A →68% A； 102 ～ 120 min， 68% A → 85% A； 120 ～ 130 min， 85% A → 100% A ） ； 流 速： 1. 0 mL·min － 1 ； 柱温： 35 ℃ ； 检测波长： 280 nm； 进 样量： 10 μL。 3. 2 质谱条件 负 电喷雾电离： 正离子模式喷雾电压 4. 5 kV， 离子模式喷雾电压 － 3. 5 kV。 加热模块 （ BH ） 温度 200 ℃ ； 曲形脱溶剂管（ CDL） 温度 200 ℃ 。 使用自动采集模式， 采集范围 m / z 100 ～ 2 000 ， 每一级质谱自动选择基峰离子作为下一级质谱的母 离子进一步裂解。 4 决明子中的主要化学成分鉴定 “ 3. 1 ” 采用 项的分析条件， 决明子中的化合物
可以得到较好的分离， 对其进行正、 负离子模式分 得 到 决 明 子 的 HPLC － IT － TOF MS 总 离 子 流 析， （ TIC ） 色谱图如图 1 所示。 其中， 萘并吡喃酮类化 合物在正离子模式下具有较多碎片离子， 而蒽醌类 化合物在负离子模式下具有较好的质谱响应 。 因 此， 以正离子模式结果分析鉴定萘并吡喃酮类化合 物， 而蒽醌类化合物的鉴别以负离子模式结果为主 要依据， 以正离子模式结果为辅助。 结合分子式预 测软件对每个谱峰的多级质谱碎片作综合分析 ， 得 到化合物的分子式及碎片信息， 并对比对照品的保 留时间、 紫外光谱数据及参考文献， 共鉴别了 17 个 化学成分。
北京中医药大学自由选题项目 （ 2015－JYB－XS107 ） Tel： （ 010 ） 84738629 ； E－mail： liubinyn67@ 163. com Tel： 18810941504 ； E－mail： luoyi1991@ hotmail. com 第一作者
［2 － 4 ］ 。现 白质类、 脂肪酸类化合物及多种微量元素 ［12 － 19 ］ ， 蒽醌类化合物具有较强的抗菌、 代研究表明
抗炎、 利尿、 降血压、 降血脂、 免疫调节及致泻作用； 萘并吡喃酮类化合物具有降血脂 、 抗突变、 保肝及雌 激素样作用， 并且对于糖尿病性肾病并发症的预防 有一定药理活性。近年来决明子的研究工作主要集 中在化学成分的分离鉴定、 含量测定及药理作用研 究等方面， 使用液相色谱 － 质谱联用技术进行决明
［ 2 － 9］ 鉴别了 7 个萘并吡喃酮类化合物， 分别为图 1 2、 4、 6、 8、 9 和 11， 中的化合物 1、 表 1 详细总结了 7 个 化合物的保留时间、 多级质谱数据及相应的鉴定结 果。 4. 1． 1 去甲红镰霉素苷类化合物质谱解析 化合 物 6 的保留时间为 44. 090 min， 其准分子离子峰 m / z 421 ［ M + H］+ 直接失去 162 （ 葡萄糖， glc ） 中性碎
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Hale Waihona Puke * 高效液相色谱 －离子阱 －飞行时间质谱鉴定决明子化学成分
1 1 2 1 ＊ 骆宜 ， 张乐 ， 王卫华 ， 刘斌 ＊
（ 1． 北京中医药大学， 北京 100102 ； 2． 中国计量科学研究院， 北京 100013 ） 摘要 目的： 建立高效、 准确鉴定决明子中化学成分的液质联用方法 。 方法： 采用高效液相色谱－ 离子阱 － 飞行时间质谱
片得到苷元碎片 m / z 259 。 对苷元碎片离子进行二 级质谱分析， 母离子 m / z 259 相继失去一分子 H2 O 和 CO 得到 m / z 241 和 m / z 213 离子； 以 m / z 213 碎 片为母离子经 ＲDA 裂解生成 m / z 156 离子， 或通过 －CH2 和 CO 得到 m / z 199 和 m / z 171 碎片。 依次失去 以上裂解过程（ 如图 2 所示） 符合去甲红镰霉素苷元 －6－O －β － 特征， 故推测化合物 6 可能为去甲红镰霉素 D－葡萄糖苷。
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＊ ＊ 通信作者
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子化学成分鉴别的报道较少， 其中张开庆 等采用 － 低分辨质谱的方法鉴别并得到了决 高效液相色谱 明子中的 9 个 成 分。 离 子 阱－ 飞 行 时 间 质 谱 （ IT － TOF MS） 是将离子阱与飞行时间质谱结合使用， 不 仅具有质量范围宽， 扫描速度快， 灵敏度高的优点， 又可提供母离子和大量的多级碎片离子及其精确的 ［21 ］ 相对分子质量 。本文根据 IT－TOF MS 获得的高 分辨质谱数据、 色谱保留时间并结合文献， 高效、 准 确地鉴定了决明子中化合物的结构 。这项工作对于 丰富决明子化学成分的研究内容， 促进药材开发利 。 用及质量评价均具有重要的意义 仪器与材料 LCMS－IT－TOF 仪 （ 日本岛津公司 ） ， 配备 SIL－ 20AC 自动进样器， LC－20AD 二元泵， CTO－20A 柱温 1 SPD－M20A 二极管阵列检测器等。 箱， 乙腈、 甲醇均为色谱纯（ 美国 Fisher 公司） ， 流动相 用水由 MilliQ 纯水系统（ 美国 Millipore 公司） 制得。 H1－NMＲ 和 红镰霉素龙胆二糖苷自制， 经 MS、 C －NMＲ 确定结构， HPLC 峰面积归一化法测得纯 度大于 98% 。 决明子药材购于北京同仁堂， 经北京中医药大 学中药学院刘春生教授鉴定为小决明 C. tora L． 的 干燥成熟种子。 2 溶液制备 2. 1 对照品供试液 称取红镰霉素龙胆二糖苷对照品 10 mg， 用甲 －1 醇定容至 10 mL， 配成质量浓度为 1 g · L 的储备 液； 取储备液 25 μL， 用甲醇定容至 25 mL， 配制成质 －1 量浓度为 1 mg·L 的供试液， 即得。 2. 2 决明子药材供试液 取决明子药材粉末 （ 过 60 目筛 ） 1. 0 g， 置于具 塞圆底烧瓶中， 加入甲醇 50 mL， 称量。水浴回流提 取出后放置至室温， 称量。加甲醇补充减 取 60 min，
（ HPLC－IT－TOF MS） 联用技术， 在电喷雾离子源的正、 负离子模式下， 以甲醇 － 乙腈 （ 2 1 ） 混合溶液 （ A） － 水 （ B） 梯度洗脱， 流
－1 速为 1. 0 mL·min ， 柱温为 35 ℃ 。根据决明子的一级和二级质谱图 ， 对比对照品保留时间并结合文献 ， 推测化合物可能的
Abstract
Objective： To develop a facile method for identification of components in Cassiae Semen by HPLC－MS．
Methods： The method was performed on HPLC－IT－TOF MS with electrospray ionization in both positive and negative ion modes with the mobile phase of mixed solution of methanol and acetonitrile in proportion 2 1 （ A） －water （ B ） by gradient elution． The column temperature was at 35 ℃ and the flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ． According to first and multi－stage mass spectrum diagrams，retention time of standard materials and published reports，the components in Cassiae Semen were identified and their fragmentation pathways were concluded． Ｒesults： A total of 17 components were identified，including 7 naphthopyrones， 7 anthraquinones and 3 naphthols． Among them，cassialactone gentiobioside was found for the first time in Cassiae Semen． Conclusion： The application of IT－TOF MS in determining components in TCM is useful and will provide essential data for further research． Keywords： ion trap－time of flight－mass spectrometry （ IT－TOF MS ） ； Cassiae Semen； chemical components； structure identification； therapeutic material basis； fragmentation pathways 决明子为豆科植物决明 （ Cassia obtusifolia L． ） ［1 ］ 或小决明（ Cassia tora L． ） 的干燥成熟种子 。始载 《神农本草经 》 ， 于 列为上品， 性甘、 苦、 咸、 微寒、 无 毒， 归肝、 肾、 大肠经， 具有清肝明目、 润肠通便的功 效， 是我国卫生部首批公布的药食同源食物之一 。 临床上多用于治疗目赤涩痛、 羞明多泪、 头痛眩晕、 目暗不明、 大便秘结。 决明子中主要含有蒽醌类化 合物、 萘并吡喃酮类化合物， 此外， 还含有多糖类、 蛋