发酵岗位标准操作规程
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生物工程股份有限公司
发酵岗位标准操作规程
1.目的
建立GM-CSF工程菌发酵岗位标准操作规程。
2.范围
实用与GM-CSF工程菌从二级种子培养液上罐、发酵、离心收菌的操作。
3.职责
发酵岗位操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程实施负责。
4.规程
4.1.生产前的准备:
4.4.1.根据生产指令开出领料单。领取时,核对物料名称、数量、批号、有效期等,然后将其送到传递窗。
4.1.2.岗位生产操作人员按《进出十万级洁净区更衣标准操作规程》进行更衣,然后进入岗位。
4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性,设备、容器、工具、室内卫生是否有清洁合格证,清洁合格证是否在有效期内,如不合格按其清洁标准操作规程重新清洁。
4.2操作方法
4.2.1培养基配制
LB培养基按比例配制(100L)
蛋白胨 16g/L
酵母粉 10g/L
氯化钠 5g/L
4.2.3 实罐灭菌
4.2.3.1 按《BI0SATA-D型发酵罐标准操作规程》将配制好的培养基加入到发酵罐
中,加入5ml消泡剂,121℃、30min灭菌。
设定搅拌速度为150rpm左右,保证培养基加热均匀。
4.2.3.2灭菌时当温度升至121℃时,打开DO电极电源,设定DO电极零点。当灭菌温度降至30℃时,设定DO电极百点。
4.3上罐
4.3.1 调节通气量到15L/min,搅拌速度为150rpm,稳定3分钟后设定DO电极
100%。
4.3.2 调节通气量,使罐内保持正压。
4.3.3 通过接种管道从种子管向发酵罐中打入二级种子液,整个过程注意无菌操
作。
值。
4.3.4 取样测OD
600
4.4培养
4.4.1 上罐后,设定通气量为10L/min、搅拌速度为150rpm、温度为30℃,开始
培养。
4.4.2 培养过程中,注意DO值和pH值的变化,调节通气量和搅拌速度使DO值为
40%。
4.4.3 每隔1小时取样测量OD
值。取样前后取样管用纯蒸汽流通灭菌10分钟。
600
做好生产记录。
4.4.4 生产过程中,注意及时用蘸有0.1%新洁尔灭溶液的抹布擦去洒落在不锈钢
罐体表面及地面的液体,维持发酵罐清洁和生产车间的整洁。
4.4.5 诱导
为2左右时,将温度在3分钟内升高至42℃,继4.4.5.1培养8-10小时后,OD
600
续培养4小时。
4.4.
5.2 培养过程中,注意DO值和pH值的变化,调节通气量和搅拌速度使DO值
为35%。
4.4.6 收菌
4.4.6.1 诱导培养4小时后,OD
值为5-6,取1ml菌液检测。
600
4.4.6.2 降低搅拌速度为120rpm、通气量为10L/min。
4.4.6.3 连接发酵罐和离心机之间的软管。
4.4.6.4 按《Z61型管式离心机标准操作规程》安装离心机,确认安装正确后,试
启动离心机,确认无异常声音。
4.4.6.5 待转速达到恒定后,打开发酵罐下料阀,发酵液在压力的推动下进入离心
机,离心收菌。
<0.1。
4.4.6.6 调节下料阀,控制发酵液的流出速度,使上清液的OD
600
4.4.6.7 收菌完毕后,上清液重新泵入发酵罐中,经过121灭菌30分钟后排放。
4.4.6.8 菌体离心后装入灭菌后的不锈刚容器内称重,-20℃冻存。
4.5.清场:
4.5.1.每次操作完成后,按照《清场标准操作规程》和《发酵罐清洁标准操作规程》
进行清场、清洁。
4.5.2.清场结束后填写清场及清洁记录,并由QA检查员检查确认清场合格后,贴挂
《清洁合格》标志。
4.6物料平衡的计算按《物料平衡管理规程》计算。
4.7注意事项
4.7.1发酵罐长期不用时,应卸下电极,将pH、DO电极放入电极液中进行保养。
同时对罐体进行彻底的清洗,加入约30升去离子水,灭菌一次,将水放掉。
4.7.2发酵罐更换菌种发酵时,应对罐体进行彻底的清洗,加入约30升去离子水,
灭菌一次,将水放掉。进行新菌种发酵。
4.7.3使用过程中,注意检查pH、DO电极平衡液的情况,按照电极说明书及时
补充电极平衡液。
4.7.4.岗位操作人员在生产操作过程中发现异常情况按《紧急情况处理管理制度》
处理。