儿茶药材化学成分分析_反相高效液相色谱法测定儿茶中儿茶素和表儿茶素的含量
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提取方法的选择 : 由于儿茶素及表儿茶 素为同分异构体 , 儿茶素经长时间加热易发 生差向立体异构化反应[4 ] , 使表儿茶素向儿 茶素转化 。实验也表明 , 加热回流提取后提 取液中的儿茶素含量较高 , 表儿茶素的含量 较少 。故采用室温条件下超声提取 , 避免了
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因加热对样品测定产生的影响 。 412 曾采用甲醇 - 水 (28∶72 , 冰醋酸调 p H 至 310) , 乙腈 - 011 %磷酸 (20∶80) 等作为 流动相 , 但分离效果不好 , 以 0104 mol·L - 1 柠檬酸 - N , N2二甲基甲酰胺 - 四氢呋喃 (45∶8∶2) 为流动相 , 样品可以得到较好的分 离。 413 由于儿茶素类化合物在加热条件下不稳 定 , 我们曾对对照品溶液和供试品溶液的稳 定性进行考察 。结果表明 : 为保证测定工作 的准确性 , 对照品溶液最好在制备的当天使 用 , 如果测定工作不能在当天完成 , 应将对 照品溶液在低温冰箱中保存 (2～3 d) 。但时 间不宜过长 , 因长时间放置后 , 溶液颜色会 逐渐变深 (可能系由于化合物发生缔合反应 所致) ; 由于供试品溶液的提取方法较为简 单 , 测定周期较短 (40 min) , 通常在 1 个工 作日内可完成 3～4 批样品的测定 , 故对供试
图 1 儿茶 HPL C 色谱图 A1 对照品 B1 样品
11 儿茶素 21 表儿茶素
212 线性关系试验 精密称取儿茶素对照品 1128 mg 及表儿茶素对照品 3164 mg , 分别 置于 10 mL 容量瓶中 , 加甲醇超声溶解并稀
3 本项研究由九五国家重点科技攻关项目资助 (编号 962903202202)
19 (2) , 1999
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释至 刻 度 , 摇 匀 , 各 吸 取 2 、4 、6 、8 、10 μL , 进样 测 定 , 以 对 照 品 的 含 量 X (μg ) 对峰面积积分值 Y 作图 , 各得到一条直线 。 结果表明 : 儿茶素及表儿茶素分别在 01256 ～1128 、01728 ～31641 μg 范围内线性关系 良好 , 2 种成分的回归方程分别为 : Y = 61111 ×106 X + 215 ×104 r = 019999 Y = 71296 ×105 X - 218 ×103 r = 019998 213 精密度考察 取同一样品溶液反复进样 5 次 (每次 5 μL ) 进行测定 , 计算 。结果儿 茶素 、表儿茶素峰面积积分值的 RS D 分别 为 319 %、412 %。 214 重现性考察 取儿茶样品 6 份 , 每 份 0102 g , 分别精密称定 , 置 50 mL 容量瓶中 , 加甲醇 - 水 (1∶1) 40 mL 超声 20 min 溶解 , 并以甲醇 - 水 (1 ∶1) 稀释至刻度 , 溶液过 0145μm 滤膜 , 精密吸取此溶液 5μL , 进样 , 测定 , 计算儿茶素和表儿茶素的含量 。结果 儿茶素及表儿茶素含量的 RS D 分别为 112
%、119 %。 215 回收率的测定 精密称取儿茶素对照品 16107 mg 及表儿茶素对照品 13121 mg , 置 25mL 容量瓶中 , 以甲醇 - 水 (1∶1) 超声溶 解并稀释至刻度 , 摇匀即得对照品溶液 。取 已知含量的儿茶样品 5 份 , 每份 0101 g , 分 别精密称定 , 精密加入对照品溶液 3 mL , 按 “214”项下从 “置 50 mL 容 量 瓶 中”起 操 作 , 进样 10 μL , 测得儿茶素及表儿茶素的 平 均 回 收 率 分 别 为 10011 % 和 9610 % , RS D 分别为 214 %和 217 % , n = 5 。 3 样品测定
参考文献 1 中国药典 1 19951 一部 : 6 2 卫生部进口药材质量标准 1 1986 3 于健东 , 王钢力 , 田金改 1 儿茶的化学成分及药理研
究进展 , 中国中药杂志 , 1999 , 24 (增刊) : 页码待定 4 陆蕴如主编 1 中药化学 1 北京 : 学苑出版社 , 1997.
取实验用样品各 2 份 , 每份 0102g , 照 “214”项下方法操作 , 进样 5～10 μL , 测定 结果见表 1 。 4 讨论 411 提取方法的确定
提取溶剂的选择 : 虽然儿茶素及表儿茶 素同为黄酮化合物 , 但它们的母核上连有 5 个酚羟基 ,增加了它们在水和强极性溶剂中
表 1 儿茶中儿茶素及表儿茶素的含量
6
5
茜草科 (进口)
2416 2118
7 10 豆科 药材自制
219 1183
8 5 茜草科 江西樟树 (进口) 2118 1192
长沙制药二厂提供
9
5
茜草科 (进口)
2418 2126
10 5 豆科 云南红河 11 5 茜草科 云南 (进口) 12 5 豆科 云南 13 5 豆科 成都药材公司 14 5 豆科 云南思茅
( N ational I nstit ute f or t he Cont rol of Pharm aceutical and Biological Products , Beiji ng 100050)
Abstract Objective : To determine two component s catechin and epicatechin in Catechu . Method : Using RP - HPL C wit h catechin and epicatechin as standards1 Results : According to t he selected chromatograp hic conditions , t he linear range of t hese two compounds are 01256～1128 μg and 01728～31641μg respectively1 The average recoveries of catechin and epicatechin are 10011 % and 9610 % , RS D are 214 % and 217 % ( n = 5 ) , respectively1Conclusion : The met hod is easy and rapid , wit h good repeatability1 Key words Catechu , catechin , epicatechin , RP - HPL C
关键词 儿茶 儿茶素 表儿茶素 反相高效液相色谱法
儿茶 ( Catechu) 为传统药物 , 中国药典 (1995 年版一部) 收载的儿茶为豆科金合欢 属植物儿茶树 A cacia catechu (L1) Willd1 去 皮后的枝干煎汁浓缩而成的干燥浸膏[1 ] , 卫 生部进口药材质量标准收载有除豆科儿茶外 , 还有 茜 草 科 钩 藤 属 植 物 儿 茶 钩 藤 U ncaria gam bier Roxb1 带叶嫩枝煎汁浓缩而成的干 燥浸膏 , 商品上前者称为儿茶膏 , 后者称为 棕儿茶[2 ] 。现有的药材质量标准中含量测定 项均为测定儿茶中总鞣质的含量 , 操作繁琐 , 不能很好地控制药材质量 。药理研究表明 , 儿茶素类化合物具有明显的清除体内自由基 、 阻断 N - 亚硝基化合物形成 、抑制脂氧化酶 活性和脂质过氧化物作用 , 并有防突变 、防 癌等药理活性[3 ] 。本文采用反相高效液相色 谱法 , 按选定的色谱条件 , 同时测定豆科和 茜草 科 ( 进 口) 儿 茶 药 材 中 儿 茶 素 ( cate2 chin) 及表儿茶素 (epicatechin) 的含量 。该 法操作简便 , 灵敏度高 , 分离度好 , 适用性 强 , 可用于检测和控制该药的内在质量 。 1 仪器和试药
1816 2612 1612 1116 1912
1112 2194 1219 7156 1412
本所馆藏 (进口 15 5 茜草科
496025)
3012 1157
16 5 豆科 缅甸 17 5 豆科 缅甸 18 5 茜草科 友谊医院 (进口) 19 5 茜草科 天坛医院 (进口)
1512 1515 2214 2418
1015 8141 3184 2127
注 : 表中样品均经中国药品生物制品检定所中药标本馆张 继主管药师鉴定
的溶解度 , 而且儿茶药材本身为水煎液的浓 缩浸膏 , 因而采用强极性溶剂提取 。曾采用 甲醇 、水 、甲醇 - 水 (1∶1) 作为提取溶剂 , 结果表明采用甲醇 - 水 (1∶1) 作为溶剂的提 取效果最佳 , 并可将儿茶样品充分溶解 。
135 (本文于 1998 年 5 月 26 日收到)
Study on Chemical Composition of Catechu —Quantitative Determination of Catechin and Epicatechin by RP - HPLC
Wang Gangli , Yu Jiandong , Tian Jingai and Zhang Ji
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药物分析杂志
儿茶药材化学成分分析 ——— 反相高效液相色谱法测定儿茶中儿茶素和表儿茶素的含量 3
王钢力 于健东 田金改 张 继
(中国药品生物制品检定所 北京 100050)
摘要 目的 : 测定儿茶中主要成分儿茶素及表儿茶素的含量 。方法 : 采用反相高效液相色谱法 , 以 儿茶素及表儿茶素为对照品 。结果 : 按选定的色谱条件 , 儿茶素及表儿茶素分别在 01256～1128 、 01728～31641μg 范围内线性良好 。2 种成分的平均加样回收率分别为 10011 %和 9610 % , RS D 分 别为 214 %和 217 % ( n = 5 ) 。结论 : 本方法操作简便 、快捷 , 重现性好 。
PE L C - 200 高 效 液 相 色 谱 仪 ; L C295 紫外可见检测器 ; HP3295 积分仪 。
柠檬酸 、 N 、 N - 二甲基甲酰胺 , 四氢 呋喃均为分析纯 。
儿茶素对照品 (纯度 > 98 %) 及表儿茶 素对照品 (纯度 96 %) 购自 Sigma 公司 。 2 分析条件的确定 211 色谱条件 色谱柱 : Phenomenex ODS (2) 柱 (5μm , 416 mm ×150 mm) ; 理论塔 板数 按 儿 茶 素 计 算 大 于 3000 。流 动 相 : 0104mol·L - 1 柠檬酸 - N , N2二甲基甲酰胺 - 四 氢 呋 喃 ( 45 ∶8 ∶2 ) , 流 速 : 018 mL · min - 1 。柱 温 : 35 ℃。检 测 波 长 : 280 nm 。 进样量 : 5～10μL 。灵敏度 : 6 。在本色谱条 件下 , 对照品与样品色谱图见图 1 。
进样量
编号
种类
/μL
来源
含量/ % 儿茶素 表儿茶素
1 5 豆科 云南西双版纳
2016 1217
云南药材公司
2
5
茜草科 (进口)
2514 1186
3 5 茜草科 安国药市 (进口) 3310 2171
4 5 茜草科 安国药市 (进口) 2516 2198
5 5 豆科 海南
2110 1313
云南药材公司
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
药物分析杂志
品采取的方法为制备的当天测定 。 414 据从事儿茶产地加工的人员介绍 : 该药 材加工方法系选用新鲜砍伐的植物树干 , 立 即砍成碎块 , 加水煎煮 8 h , 浓缩水煎液后制 成 。如木材放置一段时间后加工 , 药材质量 明显下降 。表 1 中 7 号样品系我们选用陈旧 木材 (放置 1 年以上) 按上述方法加工提取 所制 , 其儿茶素类化合物的含量明显较其它 样品低得多 。可见儿茶素类化合物的含量与 儿茶药材质量有着直接的关系 。
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因加热对样品测定产生的影响 。 412 曾采用甲醇 - 水 (28∶72 , 冰醋酸调 p H 至 310) , 乙腈 - 011 %磷酸 (20∶80) 等作为 流动相 , 但分离效果不好 , 以 0104 mol·L - 1 柠檬酸 - N , N2二甲基甲酰胺 - 四氢呋喃 (45∶8∶2) 为流动相 , 样品可以得到较好的分 离。 413 由于儿茶素类化合物在加热条件下不稳 定 , 我们曾对对照品溶液和供试品溶液的稳 定性进行考察 。结果表明 : 为保证测定工作 的准确性 , 对照品溶液最好在制备的当天使 用 , 如果测定工作不能在当天完成 , 应将对 照品溶液在低温冰箱中保存 (2～3 d) 。但时 间不宜过长 , 因长时间放置后 , 溶液颜色会 逐渐变深 (可能系由于化合物发生缔合反应 所致) ; 由于供试品溶液的提取方法较为简 单 , 测定周期较短 (40 min) , 通常在 1 个工 作日内可完成 3～4 批样品的测定 , 故对供试
图 1 儿茶 HPL C 色谱图 A1 对照品 B1 样品
11 儿茶素 21 表儿茶素
212 线性关系试验 精密称取儿茶素对照品 1128 mg 及表儿茶素对照品 3164 mg , 分别 置于 10 mL 容量瓶中 , 加甲醇超声溶解并稀
3 本项研究由九五国家重点科技攻关项目资助 (编号 962903202202)
19 (2) , 1999
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释至 刻 度 , 摇 匀 , 各 吸 取 2 、4 、6 、8 、10 μL , 进样 测 定 , 以 对 照 品 的 含 量 X (μg ) 对峰面积积分值 Y 作图 , 各得到一条直线 。 结果表明 : 儿茶素及表儿茶素分别在 01256 ～1128 、01728 ～31641 μg 范围内线性关系 良好 , 2 种成分的回归方程分别为 : Y = 61111 ×106 X + 215 ×104 r = 019999 Y = 71296 ×105 X - 218 ×103 r = 019998 213 精密度考察 取同一样品溶液反复进样 5 次 (每次 5 μL ) 进行测定 , 计算 。结果儿 茶素 、表儿茶素峰面积积分值的 RS D 分别 为 319 %、412 %。 214 重现性考察 取儿茶样品 6 份 , 每 份 0102 g , 分别精密称定 , 置 50 mL 容量瓶中 , 加甲醇 - 水 (1∶1) 40 mL 超声 20 min 溶解 , 并以甲醇 - 水 (1 ∶1) 稀释至刻度 , 溶液过 0145μm 滤膜 , 精密吸取此溶液 5μL , 进样 , 测定 , 计算儿茶素和表儿茶素的含量 。结果 儿茶素及表儿茶素含量的 RS D 分别为 112
%、119 %。 215 回收率的测定 精密称取儿茶素对照品 16107 mg 及表儿茶素对照品 13121 mg , 置 25mL 容量瓶中 , 以甲醇 - 水 (1∶1) 超声溶 解并稀释至刻度 , 摇匀即得对照品溶液 。取 已知含量的儿茶样品 5 份 , 每份 0101 g , 分 别精密称定 , 精密加入对照品溶液 3 mL , 按 “214”项下从 “置 50 mL 容 量 瓶 中”起 操 作 , 进样 10 μL , 测得儿茶素及表儿茶素的 平 均 回 收 率 分 别 为 10011 % 和 9610 % , RS D 分别为 214 %和 217 % , n = 5 。 3 样品测定
参考文献 1 中国药典 1 19951 一部 : 6 2 卫生部进口药材质量标准 1 1986 3 于健东 , 王钢力 , 田金改 1 儿茶的化学成分及药理研
究进展 , 中国中药杂志 , 1999 , 24 (增刊) : 页码待定 4 陆蕴如主编 1 中药化学 1 北京 : 学苑出版社 , 1997.
取实验用样品各 2 份 , 每份 0102g , 照 “214”项下方法操作 , 进样 5～10 μL , 测定 结果见表 1 。 4 讨论 411 提取方法的确定
提取溶剂的选择 : 虽然儿茶素及表儿茶 素同为黄酮化合物 , 但它们的母核上连有 5 个酚羟基 ,增加了它们在水和强极性溶剂中
表 1 儿茶中儿茶素及表儿茶素的含量
6
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茜草科 (进口)
2416 2118
7 10 豆科 药材自制
219 1183
8 5 茜草科 江西樟树 (进口) 2118 1192
长沙制药二厂提供
9
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茜草科 (进口)
2418 2126
10 5 豆科 云南红河 11 5 茜草科 云南 (进口) 12 5 豆科 云南 13 5 豆科 成都药材公司 14 5 豆科 云南思茅
( N ational I nstit ute f or t he Cont rol of Pharm aceutical and Biological Products , Beiji ng 100050)
Abstract Objective : To determine two component s catechin and epicatechin in Catechu . Method : Using RP - HPL C wit h catechin and epicatechin as standards1 Results : According to t he selected chromatograp hic conditions , t he linear range of t hese two compounds are 01256～1128 μg and 01728～31641μg respectively1 The average recoveries of catechin and epicatechin are 10011 % and 9610 % , RS D are 214 % and 217 % ( n = 5 ) , respectively1Conclusion : The met hod is easy and rapid , wit h good repeatability1 Key words Catechu , catechin , epicatechin , RP - HPL C
关键词 儿茶 儿茶素 表儿茶素 反相高效液相色谱法
儿茶 ( Catechu) 为传统药物 , 中国药典 (1995 年版一部) 收载的儿茶为豆科金合欢 属植物儿茶树 A cacia catechu (L1) Willd1 去 皮后的枝干煎汁浓缩而成的干燥浸膏[1 ] , 卫 生部进口药材质量标准收载有除豆科儿茶外 , 还有 茜 草 科 钩 藤 属 植 物 儿 茶 钩 藤 U ncaria gam bier Roxb1 带叶嫩枝煎汁浓缩而成的干 燥浸膏 , 商品上前者称为儿茶膏 , 后者称为 棕儿茶[2 ] 。现有的药材质量标准中含量测定 项均为测定儿茶中总鞣质的含量 , 操作繁琐 , 不能很好地控制药材质量 。药理研究表明 , 儿茶素类化合物具有明显的清除体内自由基 、 阻断 N - 亚硝基化合物形成 、抑制脂氧化酶 活性和脂质过氧化物作用 , 并有防突变 、防 癌等药理活性[3 ] 。本文采用反相高效液相色 谱法 , 按选定的色谱条件 , 同时测定豆科和 茜草 科 ( 进 口) 儿 茶 药 材 中 儿 茶 素 ( cate2 chin) 及表儿茶素 (epicatechin) 的含量 。该 法操作简便 , 灵敏度高 , 分离度好 , 适用性 强 , 可用于检测和控制该药的内在质量 。 1 仪器和试药
1816 2612 1612 1116 1912
1112 2194 1219 7156 1412
本所馆藏 (进口 15 5 茜草科
496025)
3012 1157
16 5 豆科 缅甸 17 5 豆科 缅甸 18 5 茜草科 友谊医院 (进口) 19 5 茜草科 天坛医院 (进口)
1512 1515 2214 2418
1015 8141 3184 2127
注 : 表中样品均经中国药品生物制品检定所中药标本馆张 继主管药师鉴定
的溶解度 , 而且儿茶药材本身为水煎液的浓 缩浸膏 , 因而采用强极性溶剂提取 。曾采用 甲醇 、水 、甲醇 - 水 (1∶1) 作为提取溶剂 , 结果表明采用甲醇 - 水 (1∶1) 作为溶剂的提 取效果最佳 , 并可将儿茶样品充分溶解 。
135 (本文于 1998 年 5 月 26 日收到)
Study on Chemical Composition of Catechu —Quantitative Determination of Catechin and Epicatechin by RP - HPLC
Wang Gangli , Yu Jiandong , Tian Jingai and Zhang Ji
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药物分析杂志
儿茶药材化学成分分析 ——— 反相高效液相色谱法测定儿茶中儿茶素和表儿茶素的含量 3
王钢力 于健东 田金改 张 继
(中国药品生物制品检定所 北京 100050)
摘要 目的 : 测定儿茶中主要成分儿茶素及表儿茶素的含量 。方法 : 采用反相高效液相色谱法 , 以 儿茶素及表儿茶素为对照品 。结果 : 按选定的色谱条件 , 儿茶素及表儿茶素分别在 01256～1128 、 01728～31641μg 范围内线性良好 。2 种成分的平均加样回收率分别为 10011 %和 9610 % , RS D 分 别为 214 %和 217 % ( n = 5 ) 。结论 : 本方法操作简便 、快捷 , 重现性好 。
PE L C - 200 高 效 液 相 色 谱 仪 ; L C295 紫外可见检测器 ; HP3295 积分仪 。
柠檬酸 、 N 、 N - 二甲基甲酰胺 , 四氢 呋喃均为分析纯 。
儿茶素对照品 (纯度 > 98 %) 及表儿茶 素对照品 (纯度 96 %) 购自 Sigma 公司 。 2 分析条件的确定 211 色谱条件 色谱柱 : Phenomenex ODS (2) 柱 (5μm , 416 mm ×150 mm) ; 理论塔 板数 按 儿 茶 素 计 算 大 于 3000 。流 动 相 : 0104mol·L - 1 柠檬酸 - N , N2二甲基甲酰胺 - 四 氢 呋 喃 ( 45 ∶8 ∶2 ) , 流 速 : 018 mL · min - 1 。柱 温 : 35 ℃。检 测 波 长 : 280 nm 。 进样量 : 5～10μL 。灵敏度 : 6 。在本色谱条 件下 , 对照品与样品色谱图见图 1 。
进样量
编号
种类
/μL
来源
含量/ % 儿茶素 表儿茶素
1 5 豆科 云南西双版纳
2016 1217
云南药材公司
2
5
茜草科 (进口)
2514 1186
3 5 茜草科 安国药市 (进口) 3310 2171
4 5 茜草科 安国药市 (进口) 2516 2198
5 5 豆科 海南
2110 1313
云南药材公司
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
药物分析杂志
品采取的方法为制备的当天测定 。 414 据从事儿茶产地加工的人员介绍 : 该药 材加工方法系选用新鲜砍伐的植物树干 , 立 即砍成碎块 , 加水煎煮 8 h , 浓缩水煎液后制 成 。如木材放置一段时间后加工 , 药材质量 明显下降 。表 1 中 7 号样品系我们选用陈旧 木材 (放置 1 年以上) 按上述方法加工提取 所制 , 其儿茶素类化合物的含量明显较其它 样品低得多 。可见儿茶素类化合物的含量与 儿茶药材质量有着直接的关系 。