槐米中芸香苷

槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定

【实验目的】

1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。

2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。

【实验原理】

采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。

【实验材料】

设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。

药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁

【实验步骤】

实验1、芸香苷的提取：

称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。

实验2、芸香苷的精制：

称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。

实验3、芸香苷的水解和鉴定：

取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。（可省略重结晶过程）

4、鉴定：

（1）糖的纸色谱鉴定：

样品：取上述滤去槲皮素的水解母液20ml，搅拌加饱和的氢氧化钡水溶液中和至pH7，滤去沉淀，滤液浓缩至1～2ml得样品液对照品：葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液

支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm×7cm）

展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）上层液

显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试剂喷雾，105℃烘10分钟，显棕色或棕红色斑点

（2）芸香苷、槲皮素的纸色谱鉴定：

样品：1）自制芸香苷乙醇液

2）自制槲皮素乙醇液体

对照品：1）芸香苷标准品乙醇液

2）槲皮素标准品乙醇液

支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm×7cm）

展开剂：1）正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）上层液

2）15%醋酸水溶液

显色剂：1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色

2）经氨气熏后再观察

3）喷三氯化铝试剂后再观察

（3）Molish反应：

取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml 振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。以同法试验槲皮素，比较二者的不同。

（4）酸性实验：

取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每试管中加入槲皮素1mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。

（5）镁粉-盐酸反应：

取芸香苷1mg，加乙醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。

（6）三氯化铝反应：

取芸香苷1mg，加甲醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液2～3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。

（7）醋酸镁反应：

取芸香苷1mg，加甲醇1～2 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2～3滴，呈黄色反应。以同法试验槲皮素。

【实验说明】

1、硼砂的作用，芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在

空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。但其价格较高，工业上用较大量的石灰加少量硼砂，同样达到提高质量要求。

2、加入石灰乳，使pH8～9，既可以达到碱溶解芸香苷的目的，又可以除去

槐米中含有的大量多糖黏液质。但pH不能过高，碱处理时间尽短，以减少酚类氧化分解。

3、用浓盐酸调pH4～5，pH过低会使芸香苷降低得率。

4、提取时也可以不加碱，直接用沸水提取，得率也比较高。

【实验思考】

1、芸香苷经硫酸溶液水解后得到槲皮素沉淀，试分析其水解母液加饱和的

氢氧化钡水溶液的目的是什么？

2、为什么用碱溶酸沉法提取芸香苷时，要注意pH的控制？

实验4从八角中提取茴香油

水蒸汽蒸馏法

将新鲜的八角枝叶或干果剪碎后,用分凝器、冷凝器、油水分离器合理组合快速分离制备八角茴香油,此法可使油水自动快速分离,操作简便,提油时间短、得油率高,油质量高。

主要仪器设备及安装: 切碎机(1 台)，蒸馏锅，分凝器，冷凝器，油水分离器

取50g新鲜八角枝叶或干果于烧瓶中（八角干果加蒸馏水浸泡过夜），用水蒸气蒸馏提取，直至馏出液约500mL为止，共耗时4h，放置冷却后用NaCl 盐析，分出油状物，再用无水Na2S04干燥，称重，计算产率。