结缔组织病相关自身抗体的解读

抗体水平与疾病活动度相关
活动期阳性率80-100%，非活动期<30%
抗ENA抗体
抗ENA抗体
可提取性核抗原，为核中一类蛋白质，均不含有 DNA、组蛋白 可以被盐水提取 ENA抗原可以从多种组织中获得，无种属间差异， 但有明显的组织不均一性
免疫对流电泳CIE Ab Ag O O O O O | O O | O O O O | O 阳极+ - 阴极
29
抗CCP与类风湿因子（RF）的区别
现行临床上熟悉的实验室诊断指标是类风 湿因子，由于RF受某些抗原、抗体物质的
干扰，常出现假阳性，特异性不高。
自1964年以来陆续证实抗核周因子抗体 （APF）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗丝 集蛋白抗体（AFA）以及抗Sa抗体对RA 具有高度特异性，可在疾病早期出现。 进一步研究发现，上述抗体在化学结构上 具有相关性，他们识别表位的主要抗原决 定簇都含有瓜氨酸，被称为瓜氨酸相关自 身免疫系统，并认为此系统可能在RA的
C反 应蛋 白
得分（0-1分）
0 1
34
1
取各项评分最高分加和，总分≥6分可确诊RA
•中华风湿病学杂志2010年4月第14卷第4期《类风湿关
抗CCP抗体体检筛查应用建议
检测套餐
免疫性疾病基础检验项 目 骨检测项目增加抗CCP 抗体联合检测
结果比类风湿因子更可 靠 早于影像学诊断 持续阳性提示骨破坏持
T. Sokka, T. Pincus:A historical perspective concerning populationbased and clinical studies of early arthritis and early rheumatoid arthritis.Clin Exp Rheumatol 2003; 21 (Suppl. 31): S5-S14.
ELISA，79%，阳性预测值84%
抗角蛋白抗体（AKA）：IF 抗核周因子抗体（APF）：IF MCV
类风湿关节炎
多关节炎
-关节变形
-偶见脏器累及 (肺纤维化,胸膜炎, 心 包炎, 巩膜炎, 类风湿结节, 血管炎) - 30-50% RA患者在发病第一年可见 关节损坏 - 40%RA患者5年内病情发展导致丧 失劳动力 - 根据病情的严重程度，寿命缩短3 到14 年
增加项目
抗CENP-B抗体：ACA共包括4型，以B型为主 抗核小体抗体：多见于活动性SLE，尤其是狼疮肾炎， 可能是SLE的特异性抗体，Se 58-71%，Sp 97-99%
初步筛查
临床考虑CTD，但具体分型未明
类风湿关节炎相关抗体谱
类风湿因子
灵敏度高，特异度差（63%）
抗环瓜氨酸多肽抗体CCP
重点群体
男性、女性普遍适用（ 女性、家族有疾病史潜 在风险更高）
续加重 持续阳性致残率极高 （两年内70%）
抗磷脂抗体谱
广义抗磷脂抗体谱包括：
抗心磷脂抗体：ACL 抗磷脂结合血浆蛋白抗体：
β2GP1 凝血酶原（PT），蛋白C，蛋白S 膜联蛋白 Annexin A2和A5
抗磷脂-蛋白复合物抗体
免疫双扩散(ID)
已知Ab
1:64
1:1待测血清 U1-RNP
Ag
1:16
1:4
已知Ab
SSA
Sm
SSB
双扩散法解读
免疫双扩散(ID)检测结果判断 上图为抗Sm、U1-RNP抗体阳 性
滴度均为1:4
下图为抗SSA、SSB抗体阳性
抗SSA抗体滴度1:64 抗SSB抗体滴度1:16
最先发现的抗磷脂自身抗体之一，和血小板减少有明显相关性
ACL阳性者，血小板减少3倍于ACL阴性者
习惯性流产与IgG型ACL关系密切，并可能和抗体的滴定度有关 检测方法：ELISA 目前尚无金标准 两种类型：
ACL 2-GP1依赖 非2-GP1依赖 Ig类型 高滴度IgG型 低滴度IgM型 与血栓形成 密切相关 不引起血栓 常见疾病 自身免疫病、APS 梅毒、AIDS等感染性疾病
感染等
主要抗原:
髓过氧化物酶 (MPO) 其它抗原:
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
显微镜下多血管炎(MPA): 敏感性: 67 % 特异性: 99 % IBD, RA, SLE等
HLE, LF, CG等
ANCA阳性患者的疾病谱
CTD患者如RA、SLE和肌炎， 偶可表现出ANCA阳性，但大多 是非MPO-ANCA, 和非PR3ANCA 感染性心内膜炎、HIV感染， 偶尔会出现ANCA阳性。 这有特 殊的临床意义，感染可以出现酷 似血管炎的症状
着丝点型：ACA阳性 胞浆型：分裂间期细胞细胞浆颜色阳性，线粒体型，核糖
体型，Jo-1型，细颗粒型
混合型
抗dsDNA抗体临床意义
致病作用
在SLE患者的肾脏病变处发现了抗DNA抗体 在具有抗dsDNA抗体的人中，85%会在约5年内发展成 为SLE
SLE中阳性率60-90%
对于未治疗SLE患者，Sp 90%，Se 70%
自身免疫性疾病相关抗体的解读
赵久良 北京协和医院风湿免疫科
弥漫性结缔组织病的特点
产生高滴度的 自身抗体或与自身 组织起反应的T细胞
自身免疫应答反应强 度与病情密切相关
组织器官病理性损伤和相 应的功能障碍
自身抗体临床意义
临床上具有多种常用自身抗体
诊断特异性
抗Sm抗体 抗CCP抗体 抗SSA/SSB
活化部分凝血酶原时间(APTT) 白陶土凝血时间(KCT)
稀释蛇毒凝血时间(dRVVT)
稀释凝血酶原时间(dPT)
通过纠正试验确诊：若有LA，缺乏血小板正常血清不能纠正凝血时间 ，只有加入过量磷脂或血小板溶解物后，延长的APTT可被纠正
需排除其他原因，如肝素、Ⅷ因子复合物等
抗心磷脂抗体（ACL）
自身抗体的解读
单单出现自身抗体并不一定会发展成为有临床症 状的CTD 试验结果阴性常常不能除外某种CTD，而结果阳 性也往往不足以确诊 必须要根据临床才能做出CTD的诊断 对结果的解释时一定要考虑到临床特点
谢谢！
•北京协和医院风湿免疫科
常用实验室检查方法
间接免疫荧光法
间接免疫荧光下不同核型
ANA染色模型分析（25种）
均质型H：抗DNP，dsDNA，组蛋白，核小体 斑点型S：ENA 核仁型N：SSc相关抗体，RNA多聚酶I，PM-SCl,u3nRNP 核模型M：
抗核包膜蛋白抗体（gp210，板层素），部分dsDNA
免疫印迹法(WB法)
与抗ENA抗体特异性结合多肽抗原表位
抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗rRNP 28/29、13.5KD 52、60KD 45、47、48KD 38、16.5、15KD
抗U1RNP 73、32、17.5KD
抗Jo-1
55KD
抗ScL-70 86、70KD
抗ENA抗体临床意义
标记抗体
抗Sm 系统性红斑狼疮（SLE）
系统性硬化症 抗Scl-70
抗SSA/SSB 干燥综合征
病情活动度相关
细胞浆抗原 抗Jo-1 抗rRNP JO-1
预测疾病预后和临床亚型
皮肌炎合并肺间质病变 狼疮脑病
特殊问题
ANA18项
除外性诊断
对于临床不考虑CTD患者
发病及发展中起作用。
抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体
2000年,荷兰学者
Schellekons等首次合成
由21个氨基酸残基组成、 含瓜氨酸的环肽(CCP) 为
抗原,用ELISA方法检测RA
病人血清的抗CCP抗体并 取得令人满意的结果
•抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体
“环状”瓜氨酸多肽抗体比“线性”瓜 氨酸多肽抗体对类风湿检测更灵敏
得分（0-5分）
0 1 2 3 5 0 2 3
抗 CCP 抗体 类风 湿因 子
得分（0-3分）
血沉
RF和抗CCP抗体均阴性（－） RF或抗CCP抗体低滴度阳性（＋） RF或抗CCP抗体高滴度阳性（＋＋） （>正常上限3倍）
RA新 四项
<6周 ≥6周
CRP和ESR均正常 CRP或ESR升高
得分（0-1分） 0
38
抗β2GP1抗体
•抗B2GP1抗体：特异度 高（94.5%），灵敏度低 24% •结构域1=Domain I •与临床价值更相关
ANCA–荧光染色模型
对应抗原 主要抗原: 蛋白酶3 (PR3) 相关疾病 肉芽肿伴多血管炎(GPA): 敏感性: 73 %
其它抗原:
BPI, AZU等
特异性: 99 %
免疫印迹法解读
抗ENA及其临床意义
抗RNP 抗Sm 抗SSA(Ro) 抗SSB(La) CTD 、 MCTD、SLE SLE 30% pSS 75%、SLE 25% pSS 40%、SLE 10%
抗rRNP
抗Scl-70 抗Jo-1
SLE
SSc 20~30% PM 30%
瓜氨酸多肽 线性 环状 对类风湿关节炎的敏感性 49% 68%
•CCP = Cyclic Citrullinated Peptide（环瓜氨酸肽） •Schellekens et al., 2000
抗CCP抗体与类风湿关节炎
抗CCP与RF联检纳入新RA分类标准
受累关节数
中大关节 小关节 至少1个小关节 1个 2-10个 1-3个 4-10个 >10个
磷脂酰肌醇 anti-PI， 磷脂酰乙醇胺 anti-PE 磷脂酰丝氨酸/凝血酶原（anti-PS/PT） 波形蛋白/心磷脂复合物：anti-vimentin
狼疮抗凝物：功能性抗体，1952年发现，1972年命名
狼疮抗凝物（LAC）
一种IgG/IgM型免疫球蛋白，作用于凝血酶原复合物，阻断活化的凝血 因子V与凝血酶原作用，抑制纤维蛋白的形成，致使凝血时间延长 初筛试验：
类风湿的关节损害——致畸的根源
在疾病发生2年内即可发生 不可逆的关节损坏，致残率 高
1966~1971 at Middlesex Hospital, London,UK. 94例病程<1年早期RA入组
90%的关节破坏（60/67） 发生在两年内，比骨关节炎 （osteoarthritis）的危害 更大
•余洁等，《中华全科医师杂志》2010；9:26-30
ANCA的临床意义
结合临床特征，ANCA阳性有助于诊断 单纯免疫荧光阳性意义有限 ANCA阴性不能排除ANCA-相关的血管炎 ANCA与疾病活动度的关系
ANCA持续阳性还是滴度升高均不能可靠预测疾病的复 发 医生不应根据ANCA滴度对患者进行预防性治疗
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常规诊断方法不能实现早期诊断
现行的美国风湿病学会（ACR）1987年的诊断标准主要
依靠临床表现、X 线以及类风湿因子（RF） 检测。
符合此标准时病人常已出现骨关节破坏，加之RF缺乏特 异性，不利于早期诊断、早期干预治疗，因此临床需要 能用于RA 早期诊断的实验室指标。 •艾脉兴，曾小峰，Chin J Rheumatol ,June 2002 ,Vol6 ,No. 3
预测预后临床亚型
抗Jo-1 抗Scl-70 抗rRNP
与病情活动相关
抗ds-DNA抗体 cANCA ACL
器官特异性
CNS：抗rRNP抗体 肺脏：抗Scl-70kDa 抗Jo-1抗体
自身抗体检测的价值
•预警
•筛选 •诊断
•已患病 •抗体阳性， 无临床表现 •抗体阳性与 特定的临床事 件
•提供治疗依 •自己不知道 据