免疫分析法PPT课件

全抗原： 指同时具有免疫原性和抗原特异性的
物质。 作为全抗原的物质其分子量必须足够
大（分子量>1000），且要求化学结构较 复杂，如蛋白质、多肽等。
半抗原（Hapten）：指只能与特异抗体作用
但不引起机体免疫应答的物质。
人工抗原 ：药物(半抗原) 本身不具免疫原性，
只有当它们与某些大分子的载体物质(如蛋白质 或多肽)共价结合后，才具有免疫原性。这种小 分子半抗原和大分子载体物质结合后所形成的全 抗原。人工抗原直接免疫动物可产生特异抗体。
2. 可逆性
抗原与抗体的特异性结合是由于两者 的分子结构及立体构型相互吻合，它仅发 生在分子的表面，并依靠抗原-抗体分子 间的静电力作用、疏水作用、氢键作用及 范德华引力等而存在。这种结合具有相对 稳定性，但仍为可逆反应。
3. 最适比例性
抗原抗体的结合反 应具有一定的量比关 系。只有当抗原抗体 两者的分子比例合适 时，才能发生最强的 结合反应。
抗体： (antibody ， Ab)
机体是在抗原物质的刺激下形成的一类能与 抗原特异性结合的活性球蛋白，又称免疫球蛋白 (immunoglobin ， Ig) ，由细胞合成并分泌。抗体 是机体对抗原物质产生免疫应答的重要产物，具 有各种免疫功能，主要存在于动物的血清、淋巴 液、组织液及其它外分泌液中。
免疫分析基于抗体与药物结合时所具有的 专一性和可饱和性，利用被测药物同标记药物 之间竞争抗体结合原理，建立药物浓度和响应 值（如RIA中的放射性强度）之间的函数关系， 用于体内药物分析。
抗体（Ab）、标记抗原（标记药物， Ag*）和非标记抗原（非标记药物，Ag） 三种试剂是所有免疫分析必需的基本试 剂，也是任何免疫分析试剂盒应提供的 试剂。
抗原和对应抗体在一定条件下特异结合形 成可逆性抗原-抗体复合物的过程。抗原-抗体 是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子 上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子间的引 力参与发生的。
抗原抗体反应的基本类型
反应类型
实验技术
检测方法
敏感度
免疫标记技术
荧光免疫技术 放射免疫技术 酶标免疫技术 发光免疫技术
免疫分析法
第一节 概 述
免疫分析法（Immunoassay，IA） 是指以特异性抗原-抗体反应为基础的分 析方法。
一、基本概念
抗原(antigen, Ag) 是一类能诱导免疫系统发生免疫应答，
并能与免疫应答的产物(抗体或效应细胞)发 生特异性结合的物质。抗原具有免疫原性 和反应原性两种性质。
标记抗原一抗体的结合率（B％） 随着未标记抗原量（待测物）的增加 而减少（呈负相关）。这种现象称作 竞争抑制作用，即未标记抗原量的增 加抑制了标记抗原与抗体的竞争性结 合。
显然，在抗原抗体反应中，标记抗 原-抗体结合物减少的程度取决于未标记 抗原（被测物）的量，被测物的量越大， 标记抗原与抗体的结合率就越小。这种 竞争性抑制的数量关系就成为免疫分析 的定量基础。
以沉淀免疫反应 为例：
三、免疫分析方法产生的背景
1959年，由美国Yallow和Berson等人 将放射性同位素示踪技术的高灵敏性和免 疫反应的高特异性结合起来，首先测定了 糖尿病人血浆中的胰岛素含量，从而创立 了放射免疫分析方法(Radioimmunoassay， RIA)。
四、基本原理
（一）竞争抑制原理
B% B 100% B 100%
BF
T
三、基本条件
（一）抗原及其制备 1. 全抗原与半抗原 抗原（Antigen）是指能在机体中引
起特异性免疫应答反应的物质。
免疫原性（Immunogenicity）是指 抗原注入动物体内后能促使动物产生特 异抗体。
抗原特异性（Antigenic specificty） 是指抗原能与特异抗体相作用的性质。
+ K2
Ag*
K
' 2
K1'
Ag *Ab
根据质量定律，当反应达到平衡时， 反应可表示为：
K

K1 K2

K1' K2'

Ag Ab AgAb

Ag* Ab
Ag* Ab
抗原-抗体反应时，须满足以下条件： 1. Ag*与Ag（待测物）必须是相同的生物 活性物质； 2. 所加入Ag*和Ab的量应是固定的； 3. Ag*与Ag的量之和应大于Ab的结合位点； 4. Ag*、Ag及Ab须处在同一反应底物显色 测定发光强度
++++ ++++ ++++ ++++
二、抗原-抗体反应的特点
1. 特异性 抗原与抗体的结合具有高度特异性，
即一种抗原分子只能与由它刺激产生 的抗体发生特异性结合反应。
在实验条件下，抗原-抗体的反应常会 受到结构相近似的其它药物或化合物的干 扰，影响待测药物（抗原）与抗体的结合。 这种干扰物与抗体的结合称为交叉反应 （cross reaction）。交叉反应进行的程度 越大，则免疫分析产生的误差也越大。
IgG分子由四条以二硫键相连的多肽链构成，有三个功能区。 抗体在Fab区结合抗原分子，同时通过hi区的转动以适应不 同距离的抗原决定簇。与抗原结合后，IgG分子构象改变， 暴露出Fc上的活性位点，从而表现出固定和激活补体以及粘 结单核细胞等亲细胞反应的功能。
抗原-抗体反应 (antigen-antibody reaction)
三种试剂的作用分别是： 1. 抗体是作为标记药物和非标记药物竞争结合 的蛋白； 2. 标记药物提供可检测的信号（响应值）； 3. 非标记药物在标准曲线制备时是药物标准品， 在样品中则为被测药物。它用于建立被测药物 量（浓度）与响应值之间的函数关系，是样品 中药物浓度计算的依据。
Ag Ab K1 Ag Ab
（二）竞争抑制曲线 （或称剂量反应曲线）
样品定量测定时，先用待测物的标准 品配置一系列已知浓度的标准溶液．再加 入一定量的标记抗原和抗体，待抗原抗体 反应达到平衡后，测定系列标准溶液的 Ag*-Ab的结合率。
以标准抗原Ag的浓度为横坐标，以结 合率（B％）等为纵坐标绘制标准竞争曲 线。然后取一定量样品，按同法操作，根 据样品中标记抗原-抗体结合率，即可从标 准曲线上查出相应的待测物的含量。