版中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制34页PPT

抑制能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
菌悬液制备后在室温下放置应在2小时 内使用，若保存在2～8℃可以在24小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用。
⑸固体培养基灭菌后的再融化应在加热的
水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次， 融化的培养基应放在45～50℃的水浴中， 不得超过8小时。
二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
称量 配制 分装 矫正pH
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养 基质量，培养基灭菌方法和条件，应通過 无菌性试验和促生长试验进行验证，验证 方法同《中國药典2019年版》附录灭菌 法。。
不同种类培养基应采用不同的灭菌方 法，配制好的培养基灭菌一般多用流通 蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.
流通蒸汽灭菌
滤膜过滤除菌
3、培养基的贮藏
⑴商品化培养基应根据使用说明书上的 要求进行储存。培养基标签上应标有批号， 生产日期、有效期及培养基的有关特性。 所采用的保藏和运输条件应使培养基最低 限度失去水分并提供机械保护。
Fra Baidu bibliotek
⑵配制好的培养基应保存在2～25℃避 光的环境。若保存于非密闭容器中，一般
在三周内使用；若保存于密闭容器中，一
⑵配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或 搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧 瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的 器皿应 洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可 使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器， 避免金属离子与培养基成分结合，生成有 害物质，影响细菌生长。
⑶培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备， 可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物 质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂 或之前玻璃器皿所盛装的物质。因此。应 使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁 剂和外来物质的残留，并进行清除污物的 确认。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因 此，培养基的质量是微生物试验成功与否 的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮 藏条件和质量控制试验是提供优质培养基 的保证。
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生 产的符合规定的商品化成品培养基，脱水 培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌 株和用途。配制时应按使用说明上的要求 操作，受潮结块不能使用，以确保培养基 的质量符合要求。
结果判定
被检培养基上的菌落平均数不得小于 对照培养基菌落平均数的70%，且菌 落形态、大小应与对照培养基上的菌落 一致。判该培养基的适用性检查符合规 定。
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水， 特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水， 对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容 器配制与分装，配制时若需加热助溶应 注意温度不要过高
⑸、对配制培养基的过程作详细的记录， 记录内容包括：配制日期、培养基名称、 成分、配制数量、质量监控结果等进行全 面详细记录。
1、培养基的制备方法
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
当批培养基不符合促生长试验，应寻找造 成不合格的原因。这个调查包括采取适当 的行动以防止问题的重复出现。如果未找 到原因或还没有解决有关培养基的促生长 问题，那么任何不符合要求的批次均不能 使用。
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
般在一年内使用，琼脂培养基不得在0℃ 或0℃以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。 若培养基要长期保存，琼脂平板应密闭包
装或置于密闭容器中以防止水分流失。
⑶培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在 高压 菌器中，避免影响培养基的质量。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光 的环境。
⑷保存于密闭容器中，可防止水分流失以 延长保存时间。
所有配制好的培养基均应进行验证，验证
方法参照《中国药典2019年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进
行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
培养基的有效期是指已通过促生长试验的 培养基在整个有效期内均需符合这些相应 的标准。每批培养基储存的时间将取决于 一定存放条件（包括容器和密封性）的培 养基组成成分的稳定性。
用于环境监控的培养基应特别小心防护。
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
灵敏度检查
参照 2019年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
微生物限度检查(计数培养基)