版中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制34页PPT
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培养基的配制-PPT
摆斜面:
◇ 成扎摆放,不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面,以免形 成大量冷凝水
无菌检查:
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时,以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位,放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时,打开排气 阀,排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值(通常为
1.03kg/cm2),保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基:
把马铃薯洗净去皮,取200克切成小 块,加水1000毫升,煮沸半小时后, 补足水分。在滤液中加入15克琼脂, 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2~7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方:
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基(高氏培养基) :
可溶性淀粉 20 g
分装:
操作步骤 (continued)
《培养基及其配制》课件
2 选择性培养基
添加抗生素或抑菌剂,选择性培养特定的微生。
3 固体培养基
用于在培养皿中培养微生物,便于观察和分离。
培养基的消毒方法
1 高温灭菌
2 化学消毒
通过高温蒸汽或干热处理, 将细菌、病毒等微生物杀 灭。
使用化学物质如酒精、次 氯酸钠等消毒培养基。
3 辐射消毒
利用紫外线或电离辐射对 培养基进行消毒处理。
3 研究工具
培养基在微生物学和细胞 学等领域中广泛应用,是 研究的重要工具。
培养基的配制方法
1
添加营养物质
2
根据细胞需要,在基质中添加有机或无
机营养物质。
3
消毒处理
4
通过高温、辐射等方法对培养基进行消 毒,以杀灭潜在的微生物。
选择基质
根据实验需求选择适当的基质作为培养 基的基础配方。
调整pH值
使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
培养基的主要组分及其功能
营养物质
提供细胞生长所需的碳水化合物、氮源和无机盐 等。
生长因子
促进细胞分裂和增殖,维持细胞的正常功能。
胺基酸
作为蛋白质的组成单元,参与细胞代谢。
染色剂
用于观察和分析细胞的形态和结构。
常用培养基类型及适用领域
1 富养基
提供丰富的营养物质和生长因子,适用于细胞的扩增和生物制剂的生产。
《培养基及其配制》PPT 课件
欢迎来到《培养基及其配制》的PPT课件!本课件将带你深入了解培养基的定 义、配制方法以及常用类型和适用领域。让我们开始学习吧!
培养基的定义和作用
1 定义明确
了解培养基的具体定义和 主要作用,为后续内容提 供基础。
2 支撑细胞生长
培养基为细胞提供营养和 环境条件,促进其正常生 长和分裂。
添加抗生素或抑菌剂,选择性培养特定的微生。
3 固体培养基
用于在培养皿中培养微生物,便于观察和分离。
培养基的消毒方法
1 高温灭菌
2 化学消毒
通过高温蒸汽或干热处理, 将细菌、病毒等微生物杀 灭。
使用化学物质如酒精、次 氯酸钠等消毒培养基。
3 辐射消毒
利用紫外线或电离辐射对 培养基进行消毒处理。
3 研究工具
培养基在微生物学和细胞 学等领域中广泛应用,是 研究的重要工具。
培养基的配制方法
1
添加营养物质
2
根据细胞需要,在基质中添加有机或无
机营养物质。
3
消毒处理
4
通过高温、辐射等方法对培养基进行消 毒,以杀灭潜在的微生物。
选择基质
根据实验需求选择适当的基质作为培养 基的基础配方。
调整pH值
使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
培养基的主要组分及其功能
营养物质
提供细胞生长所需的碳水化合物、氮源和无机盐 等。
生长因子
促进细胞分裂和增殖,维持细胞的正常功能。
胺基酸
作为蛋白质的组成单元,参与细胞代谢。
染色剂
用于观察和分析细胞的形态和结构。
常用培养基类型及适用领域
1 富养基
提供丰富的营养物质和生长因子,适用于细胞的扩增和生物制剂的生产。
《培养基及其配制》PPT 课件
欢迎来到《培养基及其配制》的PPT课件!本课件将带你深入了解培养基的定 义、配制方法以及常用类型和适用领域。让我们开始学习吧!
培养基的定义和作用
1 定义明确
了解培养基的具体定义和 主要作用,为后续内容提 供基础。
2 支撑细胞生长
培养基为细胞提供营养和 环境条件,促进其正常生 长和分裂。
培养基配制技术ppt课件
概述
一、微生物的概念及种类
(一)什么是微生物?
是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见, 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才 能观察到的微小生物。
(二)微生物有什么特点?
个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、 容易变异等特点
在整堂课的教学中,刘教师总是让学 生带着 问题来 学习, 而问题 的设置 具有一 定的梯 度,由 浅入深 ,所提 出的问 题也很 明确
二、微生物与人类的关系
• 绝大多数微生物对人和动植物是有益的,有些则是必需 的。
自然界中N、C、S等 元素循环
有少数微生 物能引起人 类和动、植 物的病害
工业,微生物应用于食 品、皮革、纺织、石油、 化工、冶金等
污水处理,利用微生物 降解有机磷、氰化物等
农业,以菌造肥, 以菌催长,以菌 防病,以菌治病
在整堂课的教学中,刘教师总是让学 生带着 问题来 学习, 而问题 的设置 具有一 定的梯 度,由 浅入深 ,所提 出的问 题也很 明确
• 抑制剂
培养基的类型(作用)
• 作用:鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖,增加待检菌的 检出率
• 种类:
• 盐类:氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾(钠)。
• 染色剂类:煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、玫瑰红。
回顾
• 微生物培养基的类型 • 微生物培养基配制原则、配制步骤 • 常用的几种培养基的适用微生物 • 牛肉膏蛋白胨培养基中琼脂的作用
在整堂课的教学中,刘教师总是让学 生带着 问题来 学习, 而问题 的设置 具有一 定的梯 度,由 浅入深 ,所提 出的问 题也很 明确
培养基的类型
按物理性状划分:
• 固体培养基:适合于菌种和孢子的培养和保存,也用于有子 实体的真菌类(香菇、白木耳)的生产
中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制PPT课件
21
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
22
灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
23
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
24
菌种
大肠埃希菌 [CMCC(B)26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC(B)98001] 黑曲霉 [CMCC(F)98003]
14
二、培养基的质量控制
目前,许多实验室为了操作方便,多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备,采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏,从而影响试验 结果的可靠性。
15
所有配制好的培养基均应进行验证,验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
18
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂, 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前,选择正确的标准 质控菌,按使用说明上的要求进行质控试 验。
19
用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
22
灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
23
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
24
菌种
大肠埃希菌 [CMCC(B)26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC(B)98001] 黑曲霉 [CMCC(F)98003]
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二、培养基的质量控制
目前,许多实验室为了操作方便,多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备,采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏,从而影响试验 结果的可靠性。
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所有配制好的培养基均应进行验证,验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
18
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂, 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前,选择正确的标准 质控菌,按使用说明上的要求进行质控试 验。
19
用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
培养基及其配制PPT课件
氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢
的调节。
第11页,共50页。
缺铁症状:叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展,叶片 失绿程度加重,出现整叶变为白色,叶缘枯焦,引起落 叶。严重缺铁时,新梢顶端枯死。
桃 树
第12页,共50页。
缺铜症状:
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄,叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色,引起落叶。
◆对生长,分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
第18页,共50页。
5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
第19页,共50页。
6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页,共50页。
母液的配制方法: 单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量,分别溶解后再混合成母液。
第42页,共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3
的调节。
第11页,共50页。
缺铁症状:叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展,叶片 失绿程度加重,出现整叶变为白色,叶缘枯焦,引起落 叶。严重缺铁时,新梢顶端枯死。
桃 树
第12页,共50页。
缺铜症状:
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄,叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色,引起落叶。
◆对生长,分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
第18页,共50页。
5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
第19页,共50页。
6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页,共50页。
母液的配制方法: 单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量,分别溶解后再混合成母液。
第42页,共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3
微生物培养基的配制和灭菌 PPT课件
化學藥劑消毒滅菌: 微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒 精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液, 它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,詳見表6—4。
實驗程式18
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題? 培養基中加瓊脂的作用是什麼? 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同? 如何檢查培養基滅菌是否徹底?
實驗程式16
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
實驗程式17
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
紫外線滅菌法: 一般30W燈管,9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h, 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑, 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力,但穿透力弱,即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
(培養基的配製)
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
(培養基的種類)
據組成成分可分為:
1.合成培養基:由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基:有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基:利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
(三種培養基的配方及配製)
澱粉瓊脂培養基(高氏一號Gause´1),用於分離 和培養放線菌,是一種合成培養基。配方如下:
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
實驗程式18
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題? 培養基中加瓊脂的作用是什麼? 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同? 如何檢查培養基滅菌是否徹底?
實驗程式16
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
實驗程式17
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
紫外線滅菌法: 一般30W燈管,9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h, 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑, 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力,但穿透力弱,即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
(培養基的配製)
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
(培養基的種類)
據組成成分可分為:
1.合成培養基:由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基:有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基:利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
(三種培養基的配方及配製)
澱粉瓊脂培養基(高氏一號Gause´1),用於分離 和培養放線菌,是一種合成培養基。配方如下:
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
培养基质量保证与质量控制.ppt
适用菌种
病毒 支原体 各类细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌 蓝藻 动物细胞
液体石蜡覆盖保存法
传代保存的变相方法 能够适当地延长保存时间 优质石蜡121℃高压灭菌2小时,160℃
干燥箱中灭菌1—2小时,放冷备用 液体石蜡的深度以1cm左右 保存期通常6个月至一年
适用菌种
霉菌、酵母菌、放线菌、部分细菌。如: 大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌 等需氧性细菌
目标菌的生长指标G大于6时,培养基可
接受
定性测试方法
用3mm接种环取测试菌培养物,在测试 培养基表面划平行直线。可同时在一个 平板上接种多个菌株,但划线不能交叉
按标准中规定的培养时间和温度对接种 后的平板进行培养
结果解释
培养后按以下方法计分:
0表示无生长 1表示微弱生长 2表示生长良好
不能用于低温冷冻保存的微生物(如孢 子形成能力极差的丝状菌)
不适于用菌种:固氮菌、乳酸杆菌、明 串珠菌、分枝杆菌、沙门法:菌种悬浮在10%(体积分数)甘油蒸 馏水中。置于低温(-70)保藏。
注意事项:所要保藏的菌种,最好先培养至对 数期;使用液体培养基时,可直接加到已灭过 菌的甘油中,并使甘油的终浓度在l0%~30% 左右。为避免反复冻溶,可分装于小离心管中, 置低温保藏。
性能评价 所用测试菌株
实验室验收:
产品标签:
名称和批号 有效期
接收日期 包装及其完整性
SN/T1538.1-2005中4.1;对应 CNAS/CL01 4.6.2内容,通常要 记录(采购服务和供给)
储存要求
例行常规检查内容:
容器密闭性复查 首次开封日期 内容物的感官检查
使用前检查(即用型培养基):
方法和螺旋平板涂布法效果较好。
第四章微生物培养基的类型及配制PPT课件
无菌操作台 (Laminar flow)
35
培养基的配制 – 装水
1. 以量筒装取适当量蒸 馏水于玻璃容器中
2. 于玻璃容器上标示培
养基名称
精选课件
36
培养基配制 – 秤药
精选课件
1. 放上秤药纸
並归零
2. 以秤药匙舀 出适当量药 品 (请看培 养基配方上 說明)
37
培养基配制 – 溶解培养基
安全吸球隨意放置桌面,菌 液容易流出至桌上
灭菌
41
注意事項 – 杀菌锅的使用
放东西
调整温度时间
加水盖过铁板
精选关课门件
关紧泻压伐42
注意事項 – 杀菌锅使用
灭菌结束后,等
压力降回零
时才可打开门
进入杀菌锅 之物 品,盖子不可关 太紧或太松
精选课件
43
注意事項 – 杀菌锅使用
拿灭菌后物品请记得带耐热手套
精选课件
44
培养基配制 – 平板培养基
用途
沙门氏和志贺氏菌属分离
志贺氏菌分离鉴别
大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别
肠道致病菌分离
绿脓杆菌分离鉴别
志贺氏、沙门氏菌分离
肠道菌分离鉴别
霍乱弧菌分离
真菌、酵母菌分离
精选课件
21
3、鉴别培养基
在培养基中加入某种试剂或化学药品,使难以区 分的微生物经培养后呈现出明显差别,因而有助 开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴 别培养基。
盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
精选课件
57
无菌操作
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)
接种 (6)塞好棉塞
微生物实验室培养基质量控制课件-PPT
回收率测定法(定量和定性)
➢例1:XLD培养基
回收率测定法
选取适宜的3-4个连续稀释度接种于9mL待检测培养基中,每个稀释度3管,35℃-37 ℃培养3d。
➢ 例2:沙门氏菌显色培养基 分类:物理状态、功能和制备工艺
养基质量控制应该形成的记录 C:斜面变碱/大量H2S/气体+
• 沙门氏菌:紫红色菌落 定义:按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质,由人工配置的营养基质,专供微生物培养及分离鉴别、研究和保
菌种鉴定记录
菌毒株入库登记表
菌毒株使用记录
食品检测记录
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称量 配制 分装 矫正pH
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养 基质量,培养基灭菌方法和条件,应通過 无菌性试验和促生长试验进行验证,验证 方法同《中國药典2019年版》附录灭菌 法。。
不同种类培养基应采用不同的灭菌方 法,配制好的培养基灭菌一般多用流通 蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.
流通蒸汽灭菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
当批培养基不符合促生长试验,应寻找造 成不合格的原因。这个调查包括采取适当 的行动以防止问题的重复出现。如果未找 到原因或还没有解决有关培养基的促生长 问题,那么任何不符合要求的批次均不能 使用。
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂, 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前,选择正确的标准 质控菌,按使用说明上的要求进行质控试 验。
滤膜过滤除菌
3、培养基的贮藏
⑴商品化培养基应根据使用说明书上的 要求进行储存。培养基标签上应标有批号, 生产日期、有效期及培养基的有关特性。 所采用的保藏和运输条件应使培养基最低 限度失去水分并提供机械保护。
⑵配制好的培养基应保存在2~25℃避 光的环境。若保存于非密闭容器中,一般
在三周内使用;若保存于密闭容器中,一
所有配制好的培养基均应进行验证,验证
方法参照《中国药典2019年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进
行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
培养基的有效期是指已通过促生长试验的 培养基在整个有效期内均需符合这些相应 的标准。每批培养基储存的时间将取决于 一定存放条件(包括容器和密封性)的培 养基组成成分的稳定性。
⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水, 特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水, 对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容 器配制与分装,配制时若需加热助溶应 注意温度不要过高
⑸、对配制培养基的过程作详细的记录, 记录内容包括:配制日期、培养基名称、 成分、配制数量、质量监控结果等进行全 面详细记录。
1、培养基的制备方法结源自判定被检培养基上的菌落平均数不得小于 对照培养基菌落平均数的70%,且菌 落形态、大小应与对照培养基上的菌落 一致。判该培养基的适用性检查符合规 定。
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
用于环境监控的培养基应特别小心防护。
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
灵敏度检查
参照 2019年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
菌种
大肠埃希菌 [CMCC(B)26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC(B)98001] 黑曲霉 [CMCC(F)98003]
菌悬液制备后在室温下放置应在2小时 内使用,若保存在2~8℃可以在24小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2~ 8℃,在验证过的贮存期内使用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因 此,培养基的质量是微生物试验成功与否 的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮 藏条件和质量控制试验是提供优质培养基 的保证。
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生 产的符合规定的商品化成品培养基,脱水 培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌 株和用途。配制时应按使用说明上的要求 操作,受潮结块不能使用,以确保培养基 的质量符合要求。
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
⑸固体培养基灭菌后的再融化应在加热的
水浴中或采用流通蒸汽进行,只允许一次, 融化的培养基应放在45~50℃的水浴中, 不得超过8小时。
二、培养基的质量控制
目前,许多实验室为了操作方便,多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备,采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏,从而影响试验 结果的可靠性。
般在一年内使用,琼脂培养基不得在0℃ 或0℃以下存放,防止冷冻破坏凝胶特性。 若培养基要长期保存,琼脂平板应密闭包
装或置于密闭容器中以防止水分流失。
⑶培养基灭菌后应立即取出,不得储藏在 高压 菌器中,避免影响培养基的质量。
制备好的培养基应保存在2~25℃、避光 的环境。
⑷保存于密闭容器中,可防止水分流失以 延长保存时间。
⑵配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或 搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧 瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的 器皿应 洗净,用蒸馏水冲净,烘干后方可 使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器, 避免金属离子与培养基成分结合,生成有 害物质,影响细菌生长。
⑶培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备, 可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物 质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂 或之前玻璃器皿所盛装的物质。因此。应 使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁 剂和外来物质的残留,并进行清除污物的 确认。
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养 基质量,培养基灭菌方法和条件,应通過 无菌性试验和促生长试验进行验证,验证 方法同《中國药典2019年版》附录灭菌 法。。
不同种类培养基应采用不同的灭菌方 法,配制好的培养基灭菌一般多用流通 蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.
流通蒸汽灭菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
MUG
促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
曙红亚甲蓝
或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌
沙门菌 营养肉汤
促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
当批培养基不符合促生长试验,应寻找造 成不合格的原因。这个调查包括采取适当 的行动以防止问题的重复出现。如果未找 到原因或还没有解决有关培养基的促生长 问题,那么任何不符合要求的批次均不能 使用。
一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂, 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前,选择正确的标准 质控菌,按使用说明上的要求进行质控试 验。
滤膜过滤除菌
3、培养基的贮藏
⑴商品化培养基应根据使用说明书上的 要求进行储存。培养基标签上应标有批号, 生产日期、有效期及培养基的有关特性。 所采用的保藏和运输条件应使培养基最低 限度失去水分并提供机械保护。
⑵配制好的培养基应保存在2~25℃避 光的环境。若保存于非密闭容器中,一般
在三周内使用;若保存于密闭容器中,一
所有配制好的培养基均应进行验证,验证
方法参照《中国药典2019年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进
行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
培养基的有效期是指已通过促生长试验的 培养基在整个有效期内均需符合这些相应 的标准。每批培养基储存的时间将取决于 一定存放条件(包括容器和密封性)的培 养基组成成分的稳定性。
⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水, 特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水, 对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容 器配制与分装,配制时若需加热助溶应 注意温度不要过高
⑸、对配制培养基的过程作详细的记录, 记录内容包括:配制日期、培养基名称、 成分、配制数量、质量监控结果等进行全 面详细记录。
1、培养基的制备方法结源自判定被检培养基上的菌落平均数不得小于 对照培养基菌落平均数的70%,且菌 落形态、大小应与对照培养基上的菌落 一致。判该培养基的适用性检查符合规 定。
控制菌检查用培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查
控制菌检查 培养基
特性
试验菌株
大肠埃希菌 胆盐乳糖 促生长能力
大肠埃希菌
用于环境监控的培养基应特别小心防护。
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
灵敏度检查
参照 2019年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
菌种
大肠埃希菌 [CMCC(B)26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC(B)98001] 黑曲霉 [CMCC(F)98003]
菌悬液制备后在室温下放置应在2小时 内使用,若保存在2~8℃可以在24小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2~ 8℃,在验证过的贮存期内使用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因 此,培养基的质量是微生物试验成功与否 的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮 藏条件和质量控制试验是提供优质培养基 的保证。
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生 产的符合规定的商品化成品培养基,脱水 培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌 株和用途。配制时应按使用说明上的要求 操作,受潮结块不能使用,以确保培养基 的质量符合要求。
四硫磺酸钠亮绿 促生长能力
乙型付伤寒沙门菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
三糖铁琼脂 培养基 指示能力
乙型付伤寒沙门菌
⑸固体培养基灭菌后的再融化应在加热的
水浴中或采用流通蒸汽进行,只允许一次, 融化的培养基应放在45~50℃的水浴中, 不得超过8小时。
二、培养基的质量控制
目前,许多实验室为了操作方便,多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备,采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏,从而影响试验 结果的可靠性。
般在一年内使用,琼脂培养基不得在0℃ 或0℃以下存放,防止冷冻破坏凝胶特性。 若培养基要长期保存,琼脂平板应密闭包
装或置于密闭容器中以防止水分流失。
⑶培养基灭菌后应立即取出,不得储藏在 高压 菌器中,避免影响培养基的质量。
制备好的培养基应保存在2~25℃、避光 的环境。
⑷保存于密闭容器中,可防止水分流失以 延长保存时间。
⑵配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或 搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧 瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的 器皿应 洗净,用蒸馏水冲净,烘干后方可 使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器, 避免金属离子与培养基成分结合,生成有 害物质,影响细菌生长。
⑶培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备, 可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物 质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂 或之前玻璃器皿所盛装的物质。因此。应 使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁 剂和外来物质的残留,并进行清除污物的 确认。