实验微生物生长量的测定及生长曲线的绘制
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
实验三 二次生长曲线
2. 3. 4.
负责 人
瓶号
再培养时间
OD值
负责人
瓶号
再培养时间 OD值
1组 1组 2组
1,2,3 4,5,6 7,8,9
0 2 2:20 2:25 2:30 2:35 2:40
3组 4组 5组 6组 7组 8组 1组
22,23,24 25,26,27 28,29,30 31,32,33 34,35,36 37,38,39 40,41,42
1实验三微生物二次生长曲线一基本原理微生物生长测定方法干重法比浊法一般od在10以下时和微生物数量呈正比生理指标法稀释平板计数法血球计数法典型生长曲线延滞期对数生长期稳定期衰亡期二展曲线二次生长曲线培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一条双峰的生长曲线
实验三 微生物二次生长曲线
一、基本原理
微生物生长测定方法
培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一 条双峰的生长曲线。 条双峰的生长曲线。
第一类：如葡萄糖、甘露糖、果糖、 第一类：如葡萄糖、甘露糖、果糖、蔗糖或甘露醇等 第二类：如麦芽糖、阿拉伯糖、 第二类：如麦芽糖、阿拉伯糖、山梨醇或环己六醇等
二次生长现象的机理
微生物利用葡萄糖的酶系是固有的， 微生物利用葡萄糖的酶系是固有的，而利用乳糖 或阿拉伯糖、半乳糖等）的酶系是诱导形成的。 （或阿拉伯糖、半乳糖等）的酶系是诱导形成的。由 于合成新的酶系需要一定的时间， 于合成新的酶系需要一定的时间，所以在二次生长之 间出现了一段停滞期。 间出现了一段停滞期。 研究表明不是葡萄糖本身阻遏了乳糖分解的酶系的 合成，而是细胞内cAMP的浓度在起作用。当有葡萄糖 的浓度在起作用。 合成，而是细胞内 的浓度在起作用 细胞内cAMP水平低；当葡萄糖被利用后，cAMP 水平低； 时，细胞内 水平低 当葡萄糖被利用后， 的浓度上升。 的浓度上升。
实验报告微生物的生长曲线实验
实验报告微生物的生长曲线实验实验报告
实验目的：
本实验旨在通过监测微生物的生长曲线，研究微生物的生长规律，并探讨其对环境因素的响应。
实验材料及方法：
1. 材料：
- 微生物培养基
- 无菌培养瓶或试管
- 微量移液器或移液管
- 无菌平板
- 培养箱或恒温摇床
- 显微镜
2. 方法：
（这里使用编号列表来列出具体的实验步骤）
实验步骤：
1. 实验前准备：
（这里写明实验前的准备工作，如准备培养基、灭菌操作等）
2. 微生物获取：
（这里描述如何获取微生物样品，如从环境中采样、有选择地分离微生物菌落等）
3. 微生物培养：
（这里阐述微生物的培养过程，包括制备培养基、接种微生物样品等步骤）
4. 生长曲线检测：
（这一部分是实验的重点，需要详细记录实验过程和结果。
可以使用表格、图表等方式展示数据）
5. 结果分析：
（根据实验结果，对微生物生长曲线进行分析和解读，可结合图表进行说明）
6. 讨论与结论：
（根据实验结果的分析，进行讨论并得出结论，可以对实验中可能存在的问题进行分析，提出进一步改进的建议）
实验结论：
通过本实验对微生物的生长曲线进行监测，我们得出了如下结论：
（这里简洁地总结实验结果得出的结论，为了增加字数可以进一步展开阐述，如讨论生长曲线的不同阶段、影响微生物生长的环境因素等等）
实验报告结束。
注意：本实验报告以“实验报告”的格式为基础，根据实验内容进行适当的调整。
其中，具体的实验步骤和结果可以根据实际情况进行修改和补充，以确保文章的准确性和完整性。
实验6-2酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定
实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定1 目的要求（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。
2 基本原理生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。
不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。
但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。
测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。
测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数，对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数，亦可采用比浊法计数，但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。
比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用光电比色计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量，然后以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。
此方法所需设备简单，操作简便、迅速。
血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。
血球计数板是一块特制的厚玻璃片，中央平台比两边平台低0.1mm，上有两个被精细刻化为400个小方格的格网，面积为1mm2，加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。
血球计数板有两种规格：一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格，每个大格再分成16个小格，既25´16；另一种为16´25。
计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室，待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数，用下面公式算出菌液中细胞数。
单细胞微生物细胞数/mL=5个中格内细胞数¸5´25（或16）´104´菌液稀释倍数3 实验材料3．1 菌种酵母菌和大肠杆菌。
微生物的典型生长曲线
（3）实践意义
• 对以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物 （乳酸等）为目的的某些发酵生产来说，稳定期 是最佳的收获期；对维生素、碱基、氨基酸等物
质进行生物测定来说，稳定期是最佳测定时期。
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4、衰亡期
衰亡期
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4、衰亡期ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定义：营养物质耗尽和有毒代谢产物的大量积累， 细菌死亡速率超过新生速率，整个群体呈现出 负增长。
7
（2）应对办法
1
通 过 遗 传 学方法改变 种的遗传特 性使延滞期 缩短。
2
利 用 对 数 生长期的细 胞作为“种 子”
3
尽 量 使 接种前后 所使用的 培养基组 成不要相 差太大。
4
适当扩大 接种量等方 式缩短延滞 期
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2、指数生长期
指数期
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2、指数生长期
定义：又称对数生长期，微生物以最大的速率生长和分裂 ，细菌数量呈指数增。
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（1）特点
➢生 长 速 率 常 数 等 于 零。 ➢细 胞 形 态 变 大 或 增 长。 ➢细 胞 内 RNA 尤 其 是 rRNA含量增加，原生 质呈嗜碱性。
➢合 成 代 谢 活 跃 ， 核 糖 体 、 酶 类 和 ATP 的 合成加快，易产生诱 导酶。 ➢对 外 界 不 良 条 件 如 氯化钠溶液浓度、温 度和抗生素等理化因 素反应敏感。
微生物的典型生长曲线
1
1、定义及绘制方法
定义：定量描述液体培养基中微生物群体生 长规律的实验曲线，称为生长曲线。
绘制方法：微生物接种到定量的液体培养基 中，定时取样测定细胞数量，以培养时间 为横座标，以菌数的对数为纵座标作图， 得到的一条反映微生物在整个培养期间菌 数变化规律的曲线。
细菌生长特点及生长曲线的测定
实验原理（分光光度计与比浊法）
朗伯-比尔定律 A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
比浊法虽只能测相对数量，但便捷。某些情况 下，我们重在数量的变化而不在数量本身
三、实验内容
1、分光光度计的使用
2、大肠杆菌生长曲线的测定与绘制
四、实验材料
1. 试剂
蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉等。 2. 仪器 托盘天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、恒温箱、恒温振荡 器。 3. 玻璃器皿 试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、移液管等。 4. 其它物品
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、耐高温皮筋、 报纸等。
恒温振荡器（摇床）
五、实验流程
接种→培养→取样→比浊
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:50
第三组： LB 培养基，1:20 第四组： LB 培养基，1:100 第五组： LB 培养基，1:10 第六组： LB 培养基，1:5
二、实验原理
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4
数 量
n y=2
0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
八、讨论
1.接种龄如何影响大肠杆菌生长？
2.培养基营养成分/浓度如何影响大肠杆菌生长？ 3.实验为何观察不到稳定期和衰退期？ （请3选1，作答在实验报告上）
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:20
实验4测定细菌生长曲线
仪器：
摇床、分光光度计、取液器。
微生物材料
大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基
肉汤蛋白胨液体培养基
用具
玻璃比色皿，三角瓶，酒精灯，接种环。
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五、准备步骤
准备菌种：将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤 蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养14-18h。 另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。
• 将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于 光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显）。
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微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期，Ⅱ.指数期，Ⅲ.稳定期，Ⅳ.衰亡期
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四、实验仪器、材料和用具
细菌的生长曲线分为：迟缓期、对数期、稳定期和 衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
生长规律是很有帮助的。
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• 测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落 计数法、称重法和比浊法等。
• 比浊法：由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可 用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
接种：分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有 100ml培养液的三角瓶中，放摇床37℃，200rmp振 荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌 接种于100ml培养液中，同样条件培养。
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测定（OD）
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀， 以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD值） 的测定（注意应测定0h的光密度值）。
细胞生长曲线的绘制实验报告范文
细胞生长曲线的绘制实验报告细胞生长曲线的绘制实验报告范文篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的学习了解微生物生长量测定的方法学习了解细菌生长曲线的绘制方法学习掌握血细胞计数板的使用方法（一）微生物生长量的测定计数法重量法生理指标法1、显微镜直接计数法（1）利用血细胞计数板计数（2）涂片计数2、活菌菌落计数法3、滤膜法（二）细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growth curve）篇二：细胞生长曲线的测定细胞生长曲线的测定一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的.方法。
二、实验器具24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。
2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。
为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。
3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。
篇三：MTT法绘制生长曲线实验材料：1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml 离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液（1ml/管）实验步骤：1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。
接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养（每孔1x104细胞）。
微生物的生长曲线
获得同步生长的方法
同 步培养法
诱 导法
筛 选法
化学诱导 物理诱导
过滤法 区带密度梯度离心法
膜洗脱法
➢ 获得同步生长的方法主要有两类： （1）环境条件诱导法：抗生素、变换温度、光线、
培养基等，造成与正常细胞周期不同的周期变化。 （2）机械筛选法：选择性过滤、梯度离心或膜洗
最高生长温度：指微生物能进行生长繁殖的最高温度界限。微 生物处于这个温度，尚能生长，但生长慢，若高于此温度，则易 于衰老和死亡。一般80-95℃，极端105-150℃
最适生长温度：指微生物生长速率最高时的温度。
最适生长温度不等于积累代谢物最高时的培养温度。例：乳酸 链球菌的生长最适温度为34℃， 发酵产酸最快的温度为30℃
(2)灼烧灭菌 利用火焰直接把微生物烧死 应用范围：适合于对接种针、环、试管口及不 能用的污染物品或实验动物尸体等的灭菌 。
2、湿热灭菌 1、常压法 (1) 巴氏消毒法 条件:60-85℃,维持15S-30min(传统法:6065℃,30min) 效果：可杀死大多数细菌、真菌，孢子及酵母仍存活。 应用范围：短期保存食品。 (2) 煮沸消毒法 条件：100℃，加热10-30min。 效果：可杀死全部细菌、真菌，不能杀死孢子 应用范围：饮用水、注射器、毛巾及解剖用具的消 毒；水果罐头、果酱等食品。 (3) 间歇灭菌法 条件：80-100℃,加热15-60min,冷却后37℃保温,重 复三次 。效果：可杀死全部细菌及芽孢。 应用范围：不耐热培养基灭菌。
只最大收 获量受影响
生长速度和最大 收获量受影响
8.0mg/ml 6.0mg/ml 4.0mg/ml 2.0mg/ml
微生物的生长曲线
过高或过低的pH值都会抑制微生物的生长，甚至 03 导致微生物死亡。
溶解氧
溶解氧是影响好氧微生物 生长的重要因素之一。
溶解氧浓度过低或过高都 会抑制好氧微生物的生长 。
在适宜的溶解氧浓度下， 好氧微生物的生长速率会 加快。
微生物生长曲线的未来研究
微生物的生长曲线
汇报人：
202X-01-03
目录
• 微生物生长曲线的概念 • 微生物生长曲线的实验方法 • 微生物生长曲线的应用 • 微生物生长曲线的影响因素 • 微生物生长曲线的未来研究展望
01
微生物生长曲线的概念
定义
微生物生长曲线是描述微生物在特定环境条件下，随时 间变化生长繁殖情况的一种曲线图。
3
生态恢复
通过研究微生物生长曲线，可以了解微生物在生 态系统中的作用和贡献，为生态恢复提供科学依 据。
在生物医学研究中的应用
药物筛选
利用微生物生长曲线，可以筛选 具有抗癌、抗菌等活性的药物候 选物，为新药研发提供支持。
疾病诊断
通过观察特定病原微生物的生长 曲线，可以辅助诊断和监测疾病 的发展和治疗效果。
解释与结论
根据分析结果解释微 生物生长的规律和影 响因素，得出结论。
03
微生物生长曲线的应用
在工业生产中的应用
发酵过程控制
01
微生物生长曲线可用于指导发酵过程的控制，通过调整培养条
件，提高发酵产物的产量和纯度。
生物催化剂制备
02
利用微生物生长曲线，可以优化生物催化剂的制备过程，提高
其活性和稳定性。
02 在营养物质浓度适宜的条件下，微生物的生长速 率会加快，细胞数量会增多。
实验一 生长发育的计算与生长曲线的绘制
实验一 生长发育的计算与生长曲线的绘制一、实验目的（一）熟悉几种生长发育的计算方法。
（二）掌握几种生长曲线的绘制方法。
二、内容与方法（一）绝对生长的计算 绝对生长，是利用一定时期内的平均日增重，来表示家畜生长速度情况的。
其公式：日/0101g t t W W G --=例如，一头黑白花犊牛，初生重为40kg ，一月后增到55kg ，代入公式304055-，得出该犊牛的日增重为500g 。
（二）相对生长的计算 相对生长，是利用一定时期内的增长量与原来体重相比，来表示家畜生长强度情况的。
其公式：%10001⨯-=W W W R 例如上述黑白花奶牛，在生后最初一个月中的相对生长，按公式计算应为：%5.37%100404055=⨯-=R（三）生长系数的计算 生长系数，也是说明生长强度的一种指标。
它是利用末重与始重（一般习惯以初生时的重量为基准）直接相比，单位可用百分数或直接用倍数。
其公式：%10001⨯=W W C 如果为了进一步研究个别组织器官生长和全部组织器官生长之间的关系，此时可通过相对生长系数的计算来说明：%100)'()(⨯=全部器官的生长系数个别器官的生长系数相对生长系数C C例如，来航鸡一周龄时其心脏重为0.515g 。
全部器官的总重为9.916g 。
五周龄时，其心脏重为1.515g ，全部器官的总重为32.62g 。
∵ 心脏生长系数94.2515.0515.1)(==C全部器官生长系数29.3916.962.32)'(==C ∴ %89%10029.394.2=⨯=相对生长系数 说明来航鸡在五周龄时，其心脏增加重量为初生的2.94倍，而与全部器官的周期重相比，其相对生长系数为89%。
（四）分化生长的计算 分化生长，亦称相关生长或异速生长，是指家畜个别部分和整体相对生长间的相互关系。
其公式：y = bx a例：牛前肢骨骼生长发育的材料如下，求a解：y 1 = 223.4g y 2 = 807.3g x 1 = 1729.1 - 223.4 = 1505.7g x 2 = 4120.7 - 807.3 = 3313.4g 63.13427.05580.07.1505lg 4.3313lg 4.223lg 3.807lg ==--=a说明肩胛骨在前肢诸骨中是最晚熟的部位。
[课件]微生物生长曲线的制作及特点PPT
![[课件]微生物生长曲线的制作及特点PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/8ae4f4e0d5bbfd0a79567340.png)
1)接种：取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管， 贴上标签，按无菌操作法用吸管向每管准确加入 0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌 体混匀。另一支不接种的培养管用作对照。 2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、 4、6、8、10、12和14h后取出，放冰箱 中贮存。
3)比浊：将培养不同时间、形成不 同细胞浓度的细菌培养液进行适当稀 释，使光密度值在0.0-0.4范围内，以 未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调 零点，在光电比色计上，选用400440nm波长的滤光片进行比浊，从最 稀浓度的菌悬液开始，依次测定。最 后，以细菌悬液的光密度值(OD)为纵 坐标，培养时间为横坐标，绘制大肠 杆菌的生长曲线。
生 长 曲 线
怎样绘制微生物的生长曲线？
微生物生长曲线的绘制方法主要分为：生长量测量 法、微生物计数法、还原糖测定法、氨基酸测定法以 及其他生理物质的测定。其中生长量测量法又分为测 菌丝浓度法、称干重法、比浊法等；微生物计数法又 可分为血球计数板法、染色计数法、液体稀释法等。 接下来我以大肠杆菌为例给大家简单介绍 一下比浊法测定微生物生长曲线的 方法。
微生物生长 曲线的制作 及特点
什么是微生物的生长曲线？
微生物生长曲线是以微生物数量（活细菌个数或细 菌重量）为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。 一般说，微生物（细菌）重量的变化比个数的变化更 能在本质上反应出生长的过程。曲线可分为三个阶段 即生长率上升阶段（对数生长阶段）、生长率下降阶 段及内源呼吸阶段。
微生物生长曲线的特点？
典型的微生物生长曲线包括四个时期：迟缓期、 对数期、稳定期、衰亡期。
下面我带大家依次了解一下这四个时期的特点以 及形成的原因。
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
微生物生长曲线
微生物生长曲线微生物生长曲线是描述微生物繁殖过程的独特技术，它是由测定微生物数量随时间变化的图所绘制的曲线，从而表示微生物的生长率。
它是对微生物生长和繁殖的快速、准确的估计方法，是研究微生物的重要工具。
微生物的生长是一个非线性的过程，主要受到温度、氧、水分、PH等多种环境因素的影响，可能会出现多种结果。
因此，在研究微生物生长规律时，必须对这些环境因素进行有效控制，确保实验结果的可靠性。
一般来说，在制备微生物生长曲线时，要先测定微生物种类，然后根据培养环境的不同调节参数，分别在几个培养皿中加入相同数量的微生物，测定相应的参数，按照实验设计的时间间隔，定期测定微生物的数量，绘制出变化曲线，从而得到不同培养条件下微生物的数量变化趋势。
微生物生长曲线是反映微生物生长速率、临界值和出现节点现象的非线性函数，通过不同的培养条件，可以观察出微生物的生长规律。
一般情况下，微生物的生长曲线可分为三段：启动期、正常生长期和抑制期。
在启动期，微生物以一个比较低的速度生长，通常用负倾斜的线来表示，但也有可能出现波动的情况，表明微生物的数量变化并不是完全一致的。
在正常生长期，微生物数量以较快的速度增加，形成一条正倾斜的线，表明微生物在此期间以较高的速度繁殖。
在抑制期，微生物的生长减缓，可能是因为缺氧、缺碳或所加入抗性物质的影响，曲线呈现出弱正斜或负斜，表明微生物数量出现了下降。
微生物生长曲线的观察可以帮助我们更好地了解微生物的特性，如繁殖条件、生长抑制因素、致病性和重要的药物等。
另外，微生物生长曲线也可以用于研究原理，以及比较不同培养条件对微生物繁殖的影响，以便开发出有效的生产方法和工艺，从而为工业的发展提供技术支持。
总之，微生物生长曲线可以提供有效的方法来研究微生物的生长特性，为我们提供实用的信息，可以用于生产过程中的各种工艺研究。
此外，微生物生长曲线也为抗性、节点现象等研究提供了有价值的信息，为我们提供了可靠的数据，促进了生物技术的发展。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
微生物生长曲线示意图
1、延迟期 特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
五、作业
1、结果 P88 记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
微生物数量的测定方法 平板菌落计数法 显微镜直接计数法 光电比浊法
平板菌落计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。
优点：活菌计数方法，对设备要求不高。 缺点：操作复杂。 显微镜直接计数法 使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
光合细菌菌株NS的生 长曲线
三、实验器材 菌种 培养不同时段的大肠杆菌。 仪器或其他开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 nm处。 打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将 其推或拉入光路。 盖好样品室盖，按0%键调零透射比。 取出挡光体，按100%键调100%透射比。
光电比浊法 光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。 缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法。
微生物工程实验指导
微生物工程实验指导河北农业大学生命科学学院制药工程系2007年10月实验一细菌生长曲线的测定一、实验目的了解细菌生长曲线特点及测定原理；学习用比浊法测定细菌的生长曲线。
二、原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
三、实验材料1. 菌种大肠杆菌（E.coli）2. 培养基肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15-20g，水1000mL，调pH 7.0-7.2。
3. 仪器和器具721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。
四、流程种子液→标记→接种→培养→测定五、实验方法1. 种子液制备取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18h作种子培养液。
2. 标记编号取盛有50mL（5mL）无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶（18×180试管）11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
3. 接种培养用2mL（1mL）无菌吸管分别准确吸取2mL（0.2mL）种子液加入已编号的11个三角瓶（试管）中（可早、晚各接种一次，则均在白天取样，次日下午或晚上可测），于37℃下振荡培养。
微生物生长曲线的绘制方法
微生物生长曲线的绘制方法
微生物生长曲线是描述微生物在适宜环境条件下生长过程的一条曲线，常用的绘制方法有以下几种：
1. 对数增殖曲线方法：将微生物的数量取对数后，与时间的关系进行绘制。
通常微生物的生长过程分为潜伏期、指数期和平稳期，对数增殖曲线能较好地反映这种生长过程。
2. 直接绘制方法：在适宜环境条件下，每隔一段时间取样，直接计数或估算微生物的数量，然后以时间为横坐标，微生物数量为纵坐标进行绘制。
此方法适用于较短周期的生长曲线研究。
3. 饼图法：将微生物的生长过程分为几个不同阶段，用饼图表示每个阶段中微生物数量的比例。
通过饼图，可以直观地展示微生物数量在不同阶段的变化情况。
4. 间断绘制方法：在适宜生长条件下，每隔一段时间（如1小时）将微生物数量及相应的时间点记录下来，然后连线表示微生物数量的变化。
通过有选择地取样，间断绘制方法能够更清楚地展示微生物数量的变化规律。
以上是常用的几种微生物生长曲线绘制方法，具体选择何种方法主要根据研究目的和实验条件来决定。
生长曲线的测定
实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽姓名：高熹学号：1120152430测定细菌生长曲线一．实验目的1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。
二．实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。
将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
延迟期：又叫调整期。
细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。
此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。
此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。
此期生长曲线上活菌数直线上升。
细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。
此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。
抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。
由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。
细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。
实验八 细菌生长曲线的测定及【内容充实】
实验八细菌生长曲线的测定及血球计数板测定微生物生长一、细菌生长曲线的测定及★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。
★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。
★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。
通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。
★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。
因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。
将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。
☆实验操作1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。
2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。
3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
5、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r/min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。
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实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的
•学习了解微生物生长量测定的方法
•学习了解细菌生长曲线的绘制方法
•学习掌握血细胞计数板的使用方法
（一）微生物生长量的测定
•计数法重量法生理指标法
1、显微镜直接计数法
•（1）利用血细胞计数板计数
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•
2、活菌菌落计数法
3、滤膜法
（二）细菌生长曲线
将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线
（g r o w t h c u r v e）。