蛋白质组学思考题答案
生化各章思考题及答案
各章思考题及答案一糖类化学糖蛋白中的寡糖链有些什么功能？糖蛋白的种类繁多，功能也十分广泛。
一般来说，糖蛋白的寡糖链可保护其蛋白部分免遭蛋白酶的水解，而延长其生物半衰期。
此外寡糖链还影响蛋白质构象、聚合和溶解性等。
在某些糖蛋白中寡糖链参与蛋白质在细胞内的分拣和运输。
一些属于糖蛋白的酶，其寡糖链结构可影响酶的活性。
许多激素为糖蛋白，其寡糖链的结构与激素的生物活性密切相关。
存在于细胞表面的糖蛋白，其寡糖链还参与蛋白质分子之间的相互识别和结合作用。
二脂类化学试述生物膜的两侧不对称性。
生物膜的不对称性表现在：a) 磷脂成分在膜的两侧分布是不对称的。
b) 膜上的糖基（糖蛋白或糖脂）在膜上分布不对称，在哺乳动物质膜都位于膜的外表面。
c) 膜蛋白在膜上有明确的拓扑学排列。
d) 酶分布的不对称性。
e) 受体分布的不对称性。
膜的两侧不对称性保证了膜的方向性功能。
三蛋白质化学1 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6?氨基酸在固体状态时以两性离子形式存在。
某氨基酸溶于pH7的水中，pH从7下降到6，说明该氨基酸溶解于水的过程中放出了质子，为了使该氨基酸达到等电点，只有加些酸，因此氨基酸的等电点小于6。
2 一系列球状的单体蛋白质，相对分子质量从10 000到100 000，随着相对分子质量的增加，亲水残基与疏水残基的比率将会发生什么变化?随着蛋白质相对分子质量的增加，表面积与体积的比率也就是亲水残基与疏水残基的比率必定减少。
假设这些蛋白质是半径为r的球状蛋白质，由于蛋白质相对分子质量的增加，表面积随r2的增加而增加，体积随r3的增加而增加，体积的增加比表面积的增加更快，所以表面积与体积的比率减少，因此亲水残基与疏水残基的比率也就减少。
3 从热力学上考虑，一个多肽的片段在什么情况下容易形成α-螺旋，是完全暴露在水的环境中还是完全埋藏在蛋白质的非极性内部?为什么?当多肽片断完全埋藏在蛋白质的非极性内部时，容易形成氢键，因为在水的环境中，肽键的C＝O和N－H基团能和水形成氢键，亦能彼此之间形成氢键，这两种情况在自由能上没有差别。
《现代仪器分析》思考题
《现代仪器分析》思考题1.有机质谱的用途（杨松成）a)确定分子量b)阐明化合物结构c)确定未知化合物d)对已知化合物进行定量2.有机质谱的离子源有哪些（杨松成）a)电子轰击（EI）b)化学电离（CI）c)场解析（FD）d)电喷雾电离（ESI）e)基质辅助激光解吸附电离（MALDI）f)快原子轰击（FAB)g)热喷雾电离（thermospray ionization）3.质量分析器的种类（杨松成）a)磁式分析器b)四级杆分析器c)离子阱分析器d)飞行时间分析器e)傅立叶变换-离子回旋共振分析器4.质量数的定义（杨松成）平均质量（average mass）：按元素的平均原子质量计算得到的分子量(所用同位素按权重计算出的平均效应质量)，适用于大分子。
平均质量= ∑（平均原子量*原子数）精确质量（exact mass）或单同位素质量（monoisotopic mass）：全部元素均按丰度最高的天然同位素的质量计算得到的分子量，适用于较小分子。
单同位素质量=∑（单同位素原子量*原子数）名义质量（nominal mass）: 全部元素均按丰度最高的天然同位素的质整数量计算得到的分子量5.质谱分辨率（杨松成讲义）分辨率是质谱仪对质量的鉴别能力，指的是分开两个峰的能力。
通常分辨率R定义为：R=M/ΔM对于磁质谱的定义，要求相邻两峰10％峰谷分开才算真正分开，其分辨率（即M/∆M）不随质量变化，所以磁质谱都用R＝M/∆M来表示分辨率。
磁质谱中，R不变，∆M是变化的，质量M越大，∆M越大。
所以，磁质谱表示分辨率都用R，常常可以见到R＝10,000的说法今天我们讨论的有机质谱，都是要求50％峰谷刚刚分开就算分开，这个定义没有磁质谱严格。
同时，这个分辨率R随质量变化，而∆M不变，即M越小，R越小。
因为实际工作中很难找到恰好在50％峰谷分开的峰，所以又简化为用单峰法表示，即测定一个峰半峰高处的全峰宽Full width half Maximum（简写为FWHM），则分辨率定义为R＝M/FWHM这种定义适用于四级杆、离子阱和飞行时间质谱。
蛋白质化学思考题
第一章绪论1．基因组（genomic）:体现正常细胞功能的全套染色体中的全部基因。
蛋白质组：一种基因组所表达的全套蛋白质, 即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。
功能基因组：表达一定功能的全部基因所组成的DNA序列，包括编码基因和调控基因。
2．如何理解从基因组－蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。
基因组研究可以通过序列预测潜在的基因，从而进行研究。
但遗传信息从DNA传递到蛋白质的过程中，存在着RNA水平和蛋白质水平上遗传信息的加工，使得许多蛋白质很难找到直接对应的ORF，为研究带来困难。
基因组不论大小，其核苷酸的数量总是很明确的。
然而，对蛋白质组来说，大部分蛋白质在合成后都进行化学修饰，如磷酸化、糖基化、酰基化等，这样蛋白质组的蛋白质种类将是基因组基因数目的几倍。
在个体发育的不同阶段或细胞的不同活动时期，细胞内产生的蛋白质种类是不一样的，而且不同蛋白质的寿命不同。
蛋白质的另一个特征是，不同的蛋白质通常分布在细胞的不同部位，它们的功能与其空间定位密切相关。
更为重要的是，许多蛋白质在细胞里不是静止不动的，它们在细胞里常常通过在不同亚细胞环境里的运动发挥作用。
不同蛋白质的相互作用导致了不同的功能，或参与信号转导，或形成蛋白质复合体，成为细胞结构或参与调节转录。
使得我们无法从基因组水平对蛋白质演绎的复杂生命活动加以描述和预测。
DNA链上只有四种碱基排列，蛋白质有20氨基酸组合（不算氨基酸修饰）。
溶解度、稳定性等性质各异。
细胞内蛋白质含量差异，蛋白质之间达106数量级，存在蛋白质类型的干扰。
使得对蛋白质研究较为困难。
虽然蛋白质组学研究的支撑技术（双向凝胶电泳、质谱技术、生物信息学技当前蛋白质组学研究的瓶颈。
所以，从基因组－蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。
第二章蛋白质一级结构术等）已经取得了巨大的进步并在蛋白质组学研究中发挥着决定性的作用，但不可否认，低检测力、缺乏快速、高效的手段是1．各种氨基酸的三字母符号和单字母符号甘氨酸（Gly，G）亮氨酸（Leu，L）丙氨酸（Ala，A）异亮氨酸（Ile，I）缬氨酸（Val，V）脯氨酸（Pro，P）丝氨酸（Ser，S）苏氨酸（Thr，T）半胱氨酸（Cys，C）甲硫氨酸（Met，M）天冬氨酸（Asp，D）谷氨酸（Glu，E）天冬酰氨（Asn，N）谷氨酰氨（Gln，Q）赖氨酸（Lys，K）精氨酸（Arg，R）组氨酸（His，H）苯丙氨酸（Phe，F）酪氨酸（Tyr，Y）色氨酸（Trp，W）2．名词解释：同源蛋白质（homologous protein）：一组来自同一祖先，随着进化而分化为具有不同结构但功能相同的蛋白质。
生物化学思考题
《生物化学》思考题蛋白质一、名词：氨基酸及蛋白质等电点；蛋白质一级、二级、三级及四级结构；电泳；蛋白质分子病；别构效应；蛋白质变性作用；肽与肽键；N-端与-端；AA殘基；二、简答题1、中性、酸性及碱性氨基酸有哪些？答：20种氨基酸中的精氨酸、赖氨酸和组氨酸为3种碱性氨基酸；酸性氨基酸为天冬氨酸和谷氨酸2种；其他15种为中性氨基酸。
2、稳定蛋白质空间结构的作用力有哪些？答：氢键、盐键、疏水作用、范德华引力等是稳定空间结构的作用力；一级结构中的化学键有肽键和二硫键。
3、蛋白质在非等电点时不易形成凝集沉淀的的原理；答：一是水化层，蛋白质表面带有亲水基团，形成水化层，使蛋白质颗粒相互隔开，不易碰撞成大颗粒；二是蛋白质在非等电时带有同种电荷，使蛋白质之间相互排斥，保持一定距离，不致相互凝集沉淀4、指出下面pH条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正极，负极，还是保持原点？（1）胃蛋白酶（pI 1.0），在pH 5.0；（2）血清清蛋白（pI 4.9），在pH 6.0；（3）α-脂蛋白（pI 5.8），在pH 5.0和pH 9.0；答：（1）胃蛋白酶pI 1.0＜环境pH 5.0，带负电荷，向正极移动；（2）血清清蛋白pI 4.9＜环境pH 6.0，带负电荷，向正极移动；（3）α-脂蛋白pI 5.8＞环境pH 5.0，带正电荷，向负极移动；α-脂蛋白pI 5.8＜环境pH 9.0，带负电荷，向正极移动。
三、何谓蛋白质的变性与沉淀？二者在本质上有何区别？答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，使其失去原有的生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。
变性的本质：分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。
蛋白质变性后的表现：① 生物学活性消失；② 理化性质改变：溶解度下降，黏度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。
蛋白质化学作业-答案
蛋⽩质化学作业-答案蛋⽩质化学作业⼀：名词解释：等电点：在某⼀种特定PH的溶液中，某物质以两性离⼦形式存在，所带的正负电荷总数相等，静电荷数为零，在电场中它即不向正极移动也不向负极移动，此时的PH值为该物质的等电点。
盐析和盐溶：蛋⽩质溶液中加⼊中性盐后，因盐的浓度不同可产⽣不同的反应。
低盐浓度时，随盐浓度的增加，蛋⽩质溶解度增加的现象，称为盐溶。
⽽⾼浓度中性盐可使蛋⽩质分⼦脱⽔并中和其电荷，从⽽使蛋⽩质从溶液中沉淀出来，称为盐析。
蛋⽩质变性：天然蛋⽩质分⼦由于受到物理或化学因素的影响使次级键断裂，引起天然构象的改变，导致其⽣物活性的丧失及⼀些理化性质的改变，但未引起肽键的断裂，这种现象称为蛋⽩质的变性。
结合蛋⽩：由简单蛋⽩质即只有氨基酸成分的蛋⽩质与⾮蛋⽩质组分结合⽽成，其⾮蛋⽩质组分通常称为辅基。
蛋⽩质亚基：是组成蛋⽩质四级结构最⼩的共价单位。
在具有四级机构的蛋⽩质中有三级机构的球蛋⽩称为亚基。
它可由⼀条肽链组成，也可由⼏条肽链通过⼆硫键和次级键连接在⼀起组成。
酰胺平⾯：肽键中C-N具有双键的性质，因⽽C-N不能⾃由旋转，这样使得与它相连的原⼦都固定在⼀个平⾯，这个平⾯就称为酰胺平⾯。
诱导契合：酶分⼦活性中⼼的结构原来并⾮和底物的结构互相吻合，但酶的活性中⼼是亲性的⽽⾮刚性的，当底物与酶相遇时，可诱导酶活性中⼼的构象发⽣相应的变化，其上有关的各个集团达到正确的排列和定向，因⽽使酶和底物契合⽽结合成中间络合物，并引起底物发⽣反应。
反应结束当产物从原酶上脱落下来后，酶的活性中⼼有恢复了原来的构象。
⼆：判断题：2题对，其余错三：填空题：1. ⾊氨酸、酪氨酸2. ①⼆硫键②疏⽔键③范得华⼒3. ①协同②变构4. ①α--氨基②α-羧基③侧链可解离基团四：选择题：（1）：1；（2）：3；（3）：2五：问答题：1，什么叫蛋⽩质的⼀级、⼆级、三级、四级结构？维持以上各层次结构的作⽤⼒有哪些？蛋⽩质⼀级结构：由氨基酸在多肽链中的数⽬、类型和顺序所描述的多肽链的基本结构。
分子生物学chapter1绪论
定向改造某些生物的基因组结构、使它们所具 有的特殊经济价值或功能得以成百上千倍地提 高。
进行基础研究。
2、基因表达调控研究
蛋白质分子控制了细胞的一切代谢活动，而 决定蛋白质结构和合成时序的信息都由核酸 （主要是脱氧核糖核酸）分子编码，所以， 基因表达实质上就是遗传信息的转录和翻译 过程。
基本定理：
1.构成生物体有机大分子的单体在不同生物 中都是相同的；
2.生物体内一切有机大分子的建成都遵循着 各自特定的规则；
3.某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质分 子决定了它的属性。
1、DNA重组技术
是20世纪70年代初兴起的技术科学，目的是将 不同DNA片段（基因或基因的一部分）按照人 们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中 与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细 胞的新的遗传性状。
DNA重组技术是核酸化学、蛋白质化学、酶工 程及微生物学、遗传学、细胞学长期深入研究 的结晶，而限制性内切酶DNA连接酶及其他工 具酶的发现与应用则是这一技术得以建立的关 键。
通过DNA连接酶把不同的DNA片段连接成一个整体。a. DNA的 粘性末端; b. DNA的平末端; c. 化学合成的具有EcoRI粘性末端的 DNA片段。
1．拥有特定的空间结构（三维结构）；
2．在它发挥生物学功能的过程中必定存在着 结构和构象的变化。
4、基因组、功能基因组与生物信息学研究
2001年2月，Nature 和Science同时发表了人类基因组 全序列。
已有数十种生物基因组被基本破译。
测定基因组序列只是了解基因的第一步，在基因组计 划的基础上提出了蛋白质组计划（又称后基因组计划 或功能基因组计划），旨在快速、高效、大规模鉴定 基因的产物和功能。
生化实验思考题参考答案[1]
![生化实验思考题参考答案[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/fb5e0b19f7ec4afe04a1dff5.png)
生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。
实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法（1）本实验制备得到的是粗脂肪，若要制备单一组分的脂类成分，可用什么方法进一步处理？答：硅胶柱层析，高效液相色谱，气相色谱等。
（2）本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?答：防止脂质被氧化。
实验六蛋白质等电点测定1、在等电点时蛋白质溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。
蛋白质是两性电解质，在等电点时分子所带净电荷为零，分子间因碰撞而聚沉倾向增加，溶液的粘度、渗透压减到最低，溶解度最低。
结果中pH约为4.9时，溶液最浑浊，达到等电点。
答：2、在分离蛋白质的时候，等电点有何实际应用价值？答: 在等电点时，蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加，所以处于等电点的蛋白质最容易沉淀。
在分离蛋白质的时候，可以根据待分离的蛋白质的等电点，有目的地调节溶液的pH使该蛋白质沉淀下来，从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。
分子生物学第五章课后思考题答案【修订版】
分子生物学第五章作业1、哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的产生及发展？答：近半个世纪来，分子生物学主要取得了三大成就：第一，20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；第二，50年代提示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题；第三，50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。
但事实上，DNA分子体外切割与连接技术及核苷酸序列分析技术的进步直接推动了重组DNA技术的产生和发展。
其中，限制性内切核酸酶和DNA连接酶等工具酶的发现和应用是现代生物工程技术史上最重要的事件。
DNA重组技术的产生及发展过程中比较重要的科学发现和实验如下：1957年A.Kornberg从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶I。
1965年S. W. Holley完成了酵母丙氨酸tRNA的全序列测定；科学家证明细菌的抗药性通常由"质粒"DNA所决定。
1967年年世界上有五个实验室几乎同时宣布发现了DNA连接酶。
1970 年H.O.Smith，K.W.Wilcox和T.J.Kelley分离了第一种限制性核酸内切酶。
H.M.Temin和D.Baltimore从RNA肿瘤病毒中发现反转录酶。
1972-1973 年H.Boyer，P.Berg等人发展了DNA重组技术，于72年获得第一个重组DNA分子，73年完成第一例细菌基因克隆。
1978 年首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。
1981 年R. D. Palmiter和R. L. Brinster获得转基因小鼠；A. C. Spradling和G. M. Rubin得到转基因果蝇。
1982 年美、英批准使用第一例基因工程药物--胰岛素；Sanger等人完成了入噬菌体48,502bp全序列测定。
生物化学蛋白质化学复习题1
第二章蛋白质化学(1)一、单项选择题1．测得某一蛋白质样品的氮含量为0．40g，此样品约含蛋白质多少？A．2．00g B．2．50g C．6．40g D．3．00g E．6．25g2．下列含有两个羧基的氨基酸是：A．精氨酸 B．赖氨酸 C．甘氨酸 D．色氨酸 E．谷氨酸3．维持蛋白质二级结构的主要化学键是：A．盐键 B．疏水键 C．肽键 D．氢键 E．二硫键4．关于蛋白质分子三级结构的描述，其中错误的是：A．天然蛋白质分子均有的这种结构B．具有三级结构的多肽链都具有生物学活性C．三级结构的稳定性主要是次级键维系D．亲水基团聚集在三级结构的表面bioooE．决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基5．具有四级结构的蛋白质特征是：A．分子中必定含有辅基B．在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上，肽链进一步折叠，盘曲形成C．每条多肽链都具有独立的生物学活性D．依赖肽键维系四级结构的稳定性E．由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成6．蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列哪种条件下不稳定：A．溶液pH值大于pIB．溶液pH值小于pIC．溶液pH值等于pID．溶液pH值等于7．4E．在水溶液中7．蛋白质变性是由于：A．氨基酸排列顺序的改变 B．氨基酸组成的改变C．肽键的断裂 D．蛋白质空间构象的破坏E．蛋白质的水解8．变性蛋白质的主要特点是：A．粘度下降 B．溶解度增加 C．不易被蛋白酶水解D．生物学活性丧失 E．容易被盐析出现沉淀9．若用重金属沉淀pI为8的蛋白质时，该溶液的pH值应为：A．8 B．＞8 C．＜8 D．≤8 E．≥810．蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸？A．半胱氨酸 B．蛋氨酸 C．胱氨酸 D．丝氨酸 E．瓜氨酸二、多项选择题（在备选答案中有二个或二个以上是正确的，错选或未选全的均不给分）1．含硫氨基酸包括：A．蛋氨酸 B．苏氨酸 C．组氨酸 D．半胖氨酸2．下列哪些是碱性氨基酸：A．组氨酸 B．蛋氨酸 C．精氨酸 D．赖氨酸3．芳香族氨基酸是：A．苯丙氨酸 B．酪氨酸 C．色氨酸 D．脯氨酸4．关于α-螺旋正确的是：A．螺旋中每3．6个氨基酸残基为一周B．为右手螺旋结构C．两螺旋之间借二硫键维持其稳定D．氨基酸侧链R基团分布在螺旋外侧5．蛋白质的二级结构包括：A．α-螺旋 B．β-片层 C．β-转角 D．无规卷曲6．下列关于β-片层结构的论述哪些是正确的：A．是一种伸展的肽链结构B．肽键平面折叠成锯齿状C．也可由两条以上多肽链顺向或逆向平行排列而成D．两链间形成离子键以使结构稳定7．维持蛋白质三级结构的主要键是：A．肽键 B．疏水键 C．离子键 D．范德华引力8．下列哪种蛋白质在pH5的溶液中带正电荷？A．pI为4．5的蛋白质 B．pI为7．4的蛋白质C．pI为7的蛋白质 D．pI为6．5的蛋白质9．使蛋白质沉淀但不变性的方法有：A．中性盐沉淀蛋白 B．鞣酸沉淀蛋白C．低温乙醇沉淀蛋白 D．重金属盐沉淀蛋白10．变性蛋白质的特性有：A．溶解度显著下降 B．生物学活性丧失C．易被蛋白酶水解 D．凝固或沉淀三、填空题1．组成蛋白质的主要元素有_________，________，_________，_________。
生物化学复习思考题答案2022
生物化学复习思考题答案2022一、是非题1.一种氨基酸在水溶液中或固体状态时都是以两性离子形式存在的。
对2.亮氨酸的非极性比丙氨酸大。
对，由侧链基团决定3.肽键能自由旋转。
错，肽键有部分双键性质4.蛋白质表面氢原子之间形成氢键。
错，氢键一般保藏在蛋白质的非极性内部 5.从热力学上讲，蛋白质最稳定的构象是最低自由能时的结构。
对6.用凝胶过滤柱层析分离蛋白质时总是分子量小的先下来，分子量大的后下来。
错，相反7.变性后的蛋白质分子量发生改变。
错，只是高级结构改变一级结构不变8.同工酶是一组功能与结构相同的酶。
功能相同但结构不同9.酶分子中形成活性中心的氨基酸残基在一级结构上位置并不相近，而在空间结构上却处于相近位置。
对10.Km值随着酶浓度的变化而变化。
错11.酶的最适温度是酶的特征常数。
错，不是酶的特性常数12.核苷中碱基和糖的连接一般是C——C连接的糖苷键。
错，C-N连接13.在DNA变性过程中，总是G——C对丰富区先融解分开，形成小泡。
错，是A-T对先分开14.核酸变性时，紫外吸收值明显增加。
对，增色效应15.tRNA上的反密码子与mRNA上相应的密码子是一样的。
错，是互补配对的16.双链DNA中的每条链的（G+C）%含量与双链的（G+C）%含量相等。
对17.对于生物体来说，核酸不是它的主要能源分子。
对，核酸是信息分子18.降解代谢首先是将复杂的大分子化合物分解为小分子化合物。
对19.磷酸己糖旁路能产生ATP，所以可以代替三羧酸循环，作为生物体供能的主要途径。
错，其主要功能是产生NADPH和5-磷酸核糖20.酶的竞争性抑制剂可增加Km值而不影响Vm。
对21.在糖的有氧氧化中，只有一步属于底物磷酸化。
错，三步22.糖的有氧氧化是在线粒体中进行的。
错，胞液和线粒体23.只有偶数碳原子的脂肪酸才能在氧化降解时产生乙酰CoA。
错，奇数的也行24.在有解偶链联剂存在时，从电子传递中产生的能量将以热的形式被散失。
细胞生物学思考题(含答案)
1.思考题第一章细胞概述1. 胡克和列文虎克发现细胞的动机是不同的，你对此有何感想?答：胡克当时的目的只是想弄清楚为什么软木塞吸水后能够膨胀，并且能够堵塞住暖水瓶中的气体溢出而保温。
列文虎克是为了保证售出的布匹质量，用显微镜检查布匹是否发霉。
正是由于他们的观察力和对自然现象的好奇心，以及对事业的责任感才导致细胞的发现。
2. 证明最早的遗传物质是RNA而不是DNA的证据是什么?答：核酶的发现。
所谓核酶就是具有催化活性的RNA分子。
3. 举例说明细胞的形态与功能相适应。
答：细胞的形态结构与功能的相关性与一致性是很多细胞的共同特点。
如红细胞呈扁圆形的结构，有利于O2和CO2的交换; 高等动物的卵细胞和精细胞不仅在形态、而且在大小方面都是截然不同的，这种不同与它们各自的功能相适应。
卵细胞之所以既大又圆，是因为卵细胞受精之后，要为受精卵提供早期发育所需的信息和相应的物质，这样，卵细胞除了带有一套完整的基因组外，还有很多预先合成的mRNA和蛋白质，所以体积就大; 而圆形的表面是便于与精细胞结合。
精细胞的形态是既细又长，这也是与它的功能相适应的。
精细胞对后代的责任仅是提供一套基因组，所以它显得很轻装; 至于精细胞的细尾巴则是为了运动寻靶，尖尖的头部，是为了更容易将它携带的遗传物质注入卵细胞。
4. 真核细胞的体积一般是原核细胞的1000倍，真核细胞如何解决细胞内重要分子的浓度问题?答：出现了特化的内膜系统，这样，体积增大了，表面积也大大增加，并使细胞内部结构区室化，一些重要分子的浓度并没有被稀释。
5. 相邻水分子间的关系是靠氢键维系的，这种氢键赋予水分子哪些独特的性质，对于生活细胞有什么重要性?答：首先，氢键能够吸收较多的热能，将氢键打断需要较高的温度，所以氢键可维持细胞温度的相对稳定。
第二是相邻水分子间形成的氢键使水分子具有一定的粘性，这样使水具有较高的表面密度。
第三，水分子间的氢键可以提高水的沸点，这样使它不易从细胞中挥发掉。
生物制药工艺学复习思考题答案
第一章生物药物概论1.生物药物有哪几类？DNA重组药物与基因药物有什么区别？( 1 ）重组DNA药物（又称基因工程药物）（2）基因药物：以遗传物质DNA、RNA为物质基础制造的药物（3）天然生物药物（4）合成或半合成生物药物2.生物药物有哪些作用特点？（一）药理学(pharmacology)特性：1、活性强: 体内存在的天然活性物质。
2、治疗针对性强,基于生理生化机制。
3、毒副作用一般较少，营养价值高。
4、可能具免疫原性或产生过敏反应(二)、理化特性：1. 含量低、杂质多、工艺复杂、收率低、技术要求高；2. 组成结构复杂，具严格空间结构，才有生物活性。
对多种物理、化学、生物学因素不稳定。
3. 活性高，有效剂量小，对制品的有效性，安全性要严格要求（包括标准品的制订）。
3.DNA重组药物主要有哪几类？举例说明之。
1）细胞因子干扰素(IFN)类药物（2）细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子（3）造血功能药物（4）生长因子类药物（5）重组蛋白和多肽类激素（6）心血管病治疗剂与酶制剂（7）重组疫苗与治疗性抗体4.术语：药物与药品生物药物，DNA重组药物:又称基因工程药物，应用基因工程和蛋白质工程技术制造的重组活多肽,蛋白质及其修饰物基因药物：这类药物是以基因物质（RNA或DNA及其衍生物）作为治疗的物质基础，包括基因治疗用的重组目的DNA片段、重组疫苗、反义药物和核酶等。
反义药物：以人工合成的10~几十个反义寡核苷酸序列与模板DNA或mRNA互补形成稳定的双链结构，抑制靶基因的转录和mRNA的翻译，从而起到抗肿瘤和抗病毒作用。
核酸疫苗：是指将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的载体上，然后直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，该抗原蛋白可直接诱导机体产生免疫应答。
RNAi ：在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。
现代分子生物学_课后思考题答案
第一章绪论1．染色体具有哪些作为遗传物质的特征？答：①分子结构相对稳定；②能够自我复制，使亲子代之间保持连续性；③能够指导蛋白质的合成，从而控制整个生命过程；④能够产生可遗传的变异。
2.什么是核小体？简述其形成过程。
答：由DNA和组蛋白组成的染色质纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。
核小体是由H2A,H2B,H3,H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bp的DNA组成的。
八聚体在中间，DNA分子盘绕在外，而H1则在核小体外面核小体的形成是染色体中DNA压缩的第一阶段。
在核小体中DNA盘绕组蛋白八聚体核心，从而使分子收缩至原尺寸的1/7。
200bpDNA完全舒展时长约68nm,却被压缩在10nm的核小体中。
核小体只是DNA压缩的第一步。
核小体长链200bp→核酸酶初步处理→核小体单体200bp→核酸酶继续处理→核心颗粒146bp3简述真核生物染色体的组成及组装过程答：组成：蛋白质+核酸。
组装过程：1，首先组蛋白组成盘装八聚体，DNA缠绕其上，成为核小体颗粒，两个颗粒之间经过DNA连接，形成外径10nm的纤维状串珠，称为核小体串珠纤维；2，核小体串珠纤维在酶的作用下形成每圈6个核小体，外径30nm 的螺线管结构；3，螺线管结构再次螺旋化，形成超螺旋结构；4，超螺线管，形成绊环，即线性的螺线管形成的放射状环。
绊环在非组蛋白上缠绕即形成了显微镜下可见的染色体结构。
4. 简述DNA的一,二,三级结构的特征答：DNA一级结构：4种核苷酸的的连接及排列顺序，表示了该DNA分子的化学结构DNA二级结构：指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构DNA三级结构：指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构6简述DNA双螺旋结构及其在现代分子生物学发展中的意义(1)DNA双螺旋是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的,多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条是5---3，另一条是3-----5。
分子生物学思考题
分子生物学思考题绪论1.简述孟德尔、摩尔根和Wstson等人对分子生物学发展的主要贡献。
2.写出DNA、mRNA和siRNA的英文全名。
3.试述“有其父必有其子”的生物学本质。
4.早期主要有哪些实验证实DNA是遗传物质？写出这些实验的主要步骤。
5.定义重组DNA技术。
6.说出分子生物学的主要研究内容。
7.你认为本世纪初叶分子生物学将在哪些领域取得进展？第2章（染色体与DNA）1.染色体具备哪些作为遗传物质的特征？2.简述真核细胞内核小体的结构特点。
3.请列举3项实验证据来说明为什么染色质中DNA与蛋白质分子是相互作用的。
4.简述DNA的一、二、三级结构。
5.简述组蛋白都有哪些类型的修饰，其功能分别是什么？6.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？7.DNA双螺旋结构模型是有谁提出的？简述其发现的主要实验依据及其在分子生物学发展中的重要意义。
8.DNA以何种方式进行复制？如何保证DNA复制的准确性？9.简述原核生物DNA的复制特点。
10.什么是DNA的Tm值？它受哪些因素的影响？11.DNA复制时为什么前导链是连续复制，而后随链是以不连续的方式复制？请以大肠杆菌为例简述后随链复制的各个步骤。
12.真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？13.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？14.什么是转座子？可分为哪些种类？15.什么是SNP？SNP作为第三代遗传标记的优点。
第三章（生物信息的传递——从DNA到RNA）1.什么是编码链和模板链？2.简述RNA的种类及其生物学作用。
3.RNA的结构特点。
4.简述RNA转录的概念及其基本过程。
5.请比较复制与转录的异同点。
6.大肠杆菌的RNA聚合酶由哪些组成成分？各个亚基的作用？7.什么是闭合复合物、开链复合物及三元复合物？8.简述o因子的作用。
9.什么是Pribnow box？它的保守序列是什么？10.什么是上升突变？什么是下降突变？11.简述原核生物和真核生物mRNA的区别。
思考题2蛋白质营养
蛋白质营养思考题一、名词解释：必需氨基酸：动物体内不能合成或合成数量与速度不能满足需要，必须由饲料供给的氨基酸。
限制性氨基酸：与动物需要量相比，饲料（粮）中含量不足的氨基酸。
蛋白质饲料：干物质中粗蛋白质含量超过20%,纤维素含量低于18%的饲料.〖多肽〗含10-50个氨基酸残基的蛋白质。
〖寡肽〗含2-10个氨基酸残基的蛋白质。
蛋白质周转代谢：动物机体合成新的蛋白质时，老的组织蛋白质在不断更新，被更新的组织蛋白质降解成氨基酸，进入机体氨基酸代谢，相当一部分又可重新合成蛋白质。
氨基酸拮抗：由于某种氨基酸含量过高而引起另一种或几种氨基酸需要量提高，这就称为氨基酸拮抗作用。
美拉德反应：肽链上的某些游离氨基酸特别是赖氨酸的ε-氨基与还原糖的醛基发生反应，生成一种棕褐色的氨基糖复合物。
氮素循环：饲料蛋白质在瘤胃微生物的作用下降解成氨，经瘤胃吸收入门静脉，进入肝脏合成尿素，经唾液和血液返回瘤胃再利用，这种氨和尿素的合成和不断循环称∽。
过瘤胃蛋白：饲料中没有被微生物降解，完整通过瘤胃进入真胃、小肠的那部分蛋白。
非必需氨基酸：可不由饲料提供，动物自身合成可以满足需要的氨基酸。
理想蛋白：饲料蛋白质中的氨基酸比例与动物所需要（生长、妊娠、泌乳、产蛋等）的氨基酸比例完全一致，氨基酸既没有过多造成脱氨基供能，又没有给量不足影响动物所需的蛋白质合成。
可消化氨基酸：可消化氨基酸是指食入的饲料蛋白质经消化后被吸收的氨基酸。
二填空：1．饲料中的粗蛋白除了包括真蛋白质外，还包括（B）。
A.氨基酸B.非蛋白氮C.葡萄糖D.纤维素2．粗蛋白是饲料分析中用以估计饲料中一切含氮物质的指标，它包括了真蛋白和非蛋白氮。
3．含硫氨基酸包括：蛋氨酸，胱氨酸，半胱氨酸。
4．凡是动物体内不能合成，或者合成的数量少，合成的速度慢，不能满足动物的需要而必须由饲料中提供的氨基酸叫必需氨基酸。
5．使用禾谷类及其它植物性饲料配制家禽饲料时，（A）常为第一限制性氨基酸。
《生物化学》思考题第二章 蛋白质化学
第二章蛋白质化学学习要求一、掌握蛋白质分子平均含氮16％的意义，20种氨基酸名称(及三字符号)，R结构特点及分类法；蛋白质一、二、三、四级结构基本特点；蛋白质生物学功能。
二、熟悉蛋白质重要的理化性质；其他为应了解的内容。
习题一、名词解释1．等电点(pI) 2．肽键 3．蛋白质的变性作用 4．非编码氨基酸 5.α螺旋 6．结合蛋白 7．盐析作用 8．亚基 9．分子病 10．透析二、思考题1.不同蛋白质的含量颇为相近，平均含量为％。
2.20种基本氨基酸可以分为哪几类？其分类依据是什么？其中，酸性氨基酸和碱性氨基酸各包含哪几种氨基酸？3.蛋白质的一、二、三、四级结构的各自定义及其特点。
4.蛋白质的二级结构有哪些？维持二级结构的化学键是？5.维持蛋白质一级结构的化学键是键，而维持蛋白质高级结构的化学键有哪些？6.如果组成蛋白质的2条多肽链之间存在共价键（如二硫键），就没有四级结构。
7.试说明蛋白质结构与功能的关系。
8.维持蛋白质亲水胶体稳定的两个因素是？9.引起蛋白质变性的理化因素有哪些？蛋白质变性后，其理化性质．．．．和生物学活性．．．．．会发生怎样的改变？10.沉淀蛋白质的方法有哪些？其中法在常温下沉淀出的蛋白质不变性。
11.试举二例说明蛋白质变性在医学、食品工业等实践中的应用。
12.蛋白质和核酸对紫外光均有吸收。
蛋白质的最大吸收波长是 nm；核酸的最大吸收波长是 nm。
13.蛋白质的生理功能有哪些？试从含量及生理功能说明蛋白质在生命过程中的重要性。
14.氨基酸的等电点和中性点(pH 7.0)有何区别?15.如将氨基酸混合液(甘氨酸、精氨酸、谷氨酸)点在滤纸上，在pH6.8的缓冲液中进行电泳，试推测它们从正极至负极的顺序。
第三章酶学学习要求一、掌握酶的概念与作用特点(催化效率高、专一性强、不稳定性及可调控性等)．酶蛋白、辅助因子(辅酶或辅基)、参与辅酶或辅基组成的B族维生素及其功能、全酶；必需基团与活性中心；酶原激活及同工酶概念。
蛋白质思考题答案
《蛋白质》思考题二、判断题1、蛋白质主要是由C、H、O和N四种元素组成。
√2、蛋白质元素组成的特点是含氮量比较接近，平均为6．25%。
3、氨基酸有D型和L型两种构型，故组成蛋白质的氨基酸也有D型和L型。
4、丙氨酸和苯丙氨酸各自都有一个氨基和一个羧基，所以它们的等电点是相同的。
5、组成蛋白质的所有氨基酸都含有手性碳原子。
６、维持蛋白质二级结构的主要次级键是二硫键。
７、组成蛋白质的氨基酸只有20种。
8、所有α-氨基酸都与茚三酮发生反应呈蓝紫色。
9、蛋白质的四级结构是指各亚基间以共价键相连聚合而成,有一定空间结构的聚合体。
10、蛋白质的分子结构决定它的生物学活性。
√11、蛋白质都具有四级结构。
12、蛋白质的等电点可以有很多个，而等离子点只有一个。
√13、蛋白质分子净电荷为零时的溶液pH值是该蛋白质的等电点。
√14、人体体液中很多蛋白质的等电点在pH=5、0左右，所以这些蛋白质在体液中主要以负离子形式存在。
√15、分子量相同的蛋白质在电场中泳动的速度也相同。
16、蛋白质溶液稳定的主要因素是蛋白质分子表面可以形成水化膜，并在偏离等电点时带有相同电荷。
√17、用透析方法可以分离提纯蛋白质，其原理是蛋白质分子可以透过半透膜。
18、蛋白质都能发生双缩脲反应. √19、蛋白质变性后会沉淀，沉淀的蛋白质也一定已变性。
20、食物蛋白经加热变性后，一级结构被破坏，肽键断裂，故而更易被人体所吸收。
三、填空题1、组成蛋白质的编码氨基酸主要有 20 种，它们除甘氨酸外都是 L 型α-氨基酸。
其中酸性氨基酸有 Glu 和 Asp ，碱性氨基酸有 Lys 、 Arg 和His 。
2、测得某生物样品含蛋白质12、5g该样品中含氮 2 g。
3、组成蛋白质的氨基酸中含有巯基的氨基酸是 Cys 。
4、肽键是蛋白质一级结构的主键，维持蛋白质空间结构的副键有离子键、氢键、范德华力、疏水键、二硫键。
5、蛋白质二级结构主要有α- 螺旋和β- 折叠两种形状，维持其稳定结构的副键是氢键。
蛋白质化学习题
蛋⽩质化学习题第⼀章蛋⽩质化学习题作业题部分：⼀．选择题：1.下列哪种蛋⽩质结构成分对280nm波长处光吸收的作⽤最⼤？（）⑴Trp的吲哚环⑵Tyr的苯酚环⑶Phe的苯环⑷肽键⑸Cys的硫原⼦2.下列哪种氨基酸可解离侧链的pK值最接近于⽣理pH？（4 ）⑴Cys ⑵Glu ⑶Gln ⑷His ⑸Lys3.茚三酮是以下列哪种⽅式与氨基酸反应的？（5 ）⑴脱氢作⽤⑵氨基还原作⽤⑶特定肽键的断裂⑷侧链的裂解⑸氧化脱羧脱氨的作⽤4.下列哪种氨基酸只有当其前体参⼊多肽后才能被合成？（3 ）胶原蛋⽩⑴Phe ⑵Lys ⑶Hyp ⑷Glu ⑸Ser5.⽤下列哪些实验可检测氨基酸混合物中的酪氨酸？（）⑴坂⼝反应⑵福林试剂反应⑶⼄醛酸反应⑷⽶伦反应6.⽤下列⽅法中测定蛋⽩质含量，哪⼀种需要完整的多肽？（1 ）⑴双缩脲反应⑵凯⽒定氮法⑶紫外吸收⑷茚三酮反应7.关于Phe-Leu-Ala-Val-Phe-Leu-Lys的叙述哪些是正确的？（3.5）⑴是具有7个肽键的分⼦⑵是⼀个六肽⑶对脂类表⾯有亲和⼒⑷可被胰蛋⽩酶⽔解⑸是⼀个碱性多肽，等电点⼤于pH 88.下列哪些蛋⽩质是结合蛋⽩？（）⑴粘蛋⽩⑵细胞⾊素C ⑶⾎红蛋⽩⑷清蛋⽩⑸组蛋⽩9.下列关于α-螺旋的叙述中，哪些是正确的？（除3 ）⑴它是靠分⼦内氢键来达到稳定的⑵它是通过最⼤限度减弱不利的R基相互作⽤来达到稳定的⑶它是借疏⽔交互作⽤来达到稳定的⑷它是存在于某些蛋⽩质中的⼆级结构的⼀种类型⑸Pro和Gly可中断α-螺旋10.下列关于蛋⽩质结构的叙述哪些是正确的？（除4）⑴⼆硫键对稳定蛋⽩质的构象起重要作⽤⑵带电荷的氨基酸侧链在⽔中趋向排列在分⼦的外侧⑶蛋⽩质的⼀级结构决定其⾼级结构⑷氨基酸的疏⽔侧链很少埋在蛋⽩质分⼦的内部11.有⼀糖蛋⽩，经测定其蛋⽩氮含量为0.5mol ，那么其粗蛋⽩含量为多少？（1 ）⑴43.75g ⑵45.64g ⑶1.12g ⑷⽆法计算12.下列关于⾎红蛋⽩的叙述哪些是正确的？（4.5）⑴四个⾎红素都能找到互不依赖的结合氧⑵结合氧的百分数对氧分压作图时图象呈双曲线⑶O2较CO更易与⾎红蛋⽩结合⑷O2和⾎红蛋⽩的结合并不导致⾎红素铁化合价的改变⑸酸中毒、提⾼CO2的⽔平都会导致Hb与氧亲和⼒的下降，从⽽降低DPG⽔平可提⾼Hb的氧亲和⼒13.⽣理状态下，⾎红蛋⽩与氧可逆结合的铁离⼦处于什么状态？（1 ）⑴还原性的⼆价状态⑵氧化性的三价状态⑶与氧结合时是三价，去氧后成⼆价⑷与氧结合时是⼆价，去氧后成三价14.⾎红蛋⽩的氧合曲线呈（3 ）⑴双曲线⑵抛物线⑶S型曲线⑷直线⑸钟罩形15.SDS凝胶电泳测定蛋⽩质的分⼦量是根据各种蛋⽩质（2 ）⑴在⼀定pH条件下所带电荷的不同⑵分⼦⼤⼩不同⑶分⼦极性不同⑷溶解度不同16.下列有关肌红蛋⽩的叙述，哪些是正确的？（除4）⑴肌红蛋⽩是由⼀条多肽链和⼀个⾎红素连接⽽成的紧密球状结构⑵多肽链含有⾼⽐例的α-螺旋构象⑶⾎红素位于⼆个组氨酸残基之间⑷⼤部分⾮极性基团位于球状结构的外部⼆．填空题：1.组成蛋⽩质分⼦的碱性氨基酸有、、和。
生化题(含答案)
•一、解释题• 1.肽键 2. 蛋白质的变性• 3.蛋白质的沉淀 4.亚基• 5. 等电点（pI） 6.透析•7. 结构域8.模体• 1.碱基互补规律 2.核小体• 3.DNA变性 4.DNA复性• 5.核酸杂交 6.Tm值•7.增色效应8.退火• 1.全酶 2.同工酶• 3.酶原 4.酶原激活• 5.不可逆性抑制 6.可逆性抑制•7.竞争性抑制8.反竞争性抑制•9.非竞争性抑制10.必需基团•11.酶的活性中心12.辅助因子1.维生素A原1.必需脂肪酸2.载脂蛋白3.脂肪动员4.酮体5. β-氧化6.激素敏感性脂肪酶8. LCAT9. HMG-CoA 10. ACAT 11. LDL、VLDL 、HDL、CM1．糖的无氧氧化2.糖的有氧氧化3．三羧酸循环4．糖异生5．丙酮酸羧化支路6．磷酸戊糖途径7．乳酸循环8. 血糖9.糖原累积症10.蚕豆病1.生物氧化2．呼吸链3．氧化磷酸化4．P／O比值• 1.氮总平衡 2.氮正平衡• 3.氮负平衡 4.蛋白质的营养价值• 5.必需氨基酸 6.非必需氨基酸•7.食物蛋白质的互补作用8.蛋白质的腐败作用9.氧化脱氨基作用10．氨基转移作用•11.联合脱氨基作用12.一碳单位•13.氮平衡14.鸟氨酸循环•15.生酮氨基酸16.生糖氨基酸•1、PRPP 2. 从头合成途径3. 补救合成途径4. 痛风症•1、别构调节•2、化学修饰调节•3、快速调节•4、缓慢调节•5、别构酶•6、肝脏在物质代谢中的作用•7、物质代谢调节的主要方式 1.胆汁酸 2.初级胆汁酸• 3.次级胆汁酸 4.胆汁酸的肠肝循环• 5.胆色素 6.结合胆红素•7.未结合胆红素8.胆素原肠肝循环•9.生物转化作用10.激素的灭活•11.黄疸12.隐性黄疸•1.半保留复制2.冈崎片段3.转录4. 逆转录5. 生物学的“中心法则”6.模板链7.编码链8.前导链9.后随链1.密码子2.起始密码子3.终止密码子4. 反密码子5. SD序列•二、填空题1.人体蛋白质的基本组成单位为，共有种。
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1.蛋白质组学概念？蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，从蛋白质整体水平上来认识生命活动规律的科学。
2.蛋白质分离纯化的基本原则？（1）获得尽可能多的样品蛋白（2）不同的制备方法配合使用（3）制备的方法与后续研究相结合3.细胞破碎的方法有哪些？（1）温和裂解方法：冻融，渗透，去污剂，酶消化法，匀浆法（2）强烈裂解方法：超声波，玻璃珠，研磨法4.蛋白质裂解液使用还原剂、去污剂及变性剂的作用分别是什么，熟悉经常用到的试剂？（1）去污剂：有助于溶解膜蛋白质，并有助于膜蛋白质与脂类的分离。
常用的有离子型去污剂（SDS），非离子型去污剂（TritonX-100），两性离子去污剂(CHAPS)。
（2）变性剂：通过改变溶液中的氢键结构使蛋白质充分伸展，将其疏水中心完全暴露，降低接近疏水残基的能量域。
常用的有尿素和硫脲。
（3）还原剂：用于还原二硫键或防止蛋白质氧化，增加蛋白质的溶解性。
常用的有具游离巯基的β－巯基乙醇（β－ME），二硫苏糖醇（DTT）和不带电荷的三丁基膦（TBP）。
5.蛋白质裂解液中加入两性电解质的作用是什么？（1）起载体作用（2）捕获样品中的少量盐分，从而保证蛋白质的溶解性6.影响样品制备的干扰物质有哪些？（1）盐（NaCl）（2）离子去污剂（SDS）（3）核酸、脂类及多聚糖（4）酚类复合物（5）不溶物质7.实验时去除植物材料中酚类物质的方法是什么？（1）还原状态：通过氢键与蛋白结合；处理方法：添加PVPP，形成多酚物（2）氧化状态（醌）：发生共价结合；处理方法：添加还原剂 (DTT, 抗坏血酸, 亚硫酸盐)8.凝胶的分子筛效应？凝胶分离不同分子量大小的分子的特性称为分子筛效应。
9.双向电泳第一向进行胶条水化时的两种方式是什么？各有什么特点？（1）主动水化：低电压可以让高分子量的蛋白更好地进入胶条（2）被动水化：蛋白自然地进入胶条；用于高盐浓度的蛋白样品；水化后, 在电极处使用滤纸片除盐，如果在水化前使用滤纸片会导致蛋白被吸附在滤纸片上10.双向凝胶电泳的基本原理？2D-SDS-PAGE是两种分离方法的结合（1）根据等电点用IEF分离蛋白质（2）在聚丙烯酰胺凝胶上电泳进一步分离聚焦的蛋白质根据等电点的不同，第二向电泳根据分子质量的不同分离蛋白质11.双向凝胶电泳的基本流程？(1)等电聚焦：标记胶条→样品上样及水化→置于聚焦盘内→设定IEF电泳程序→加矿物油覆盖胶面(2)胶条平衡：先在含有SDS、还原剂DTT但不含碘乙酰胺的平衡液中平衡，再在含碘乙酰胺的平衡液中平衡(3)SDS-PAGE：制胶→样品制备→加缓冲液→连接电源→电泳(4)染色：染色液及脱色液的配制→染色→脱色12.双向电泳中第一向到第二向进行平衡过程的机理？平衡buffer 1：还原(将S–S键转化为SH)，DTT平衡buffer 2：烷基化物 (使每个SH均烷基化以防止S–S键的重新形成),碘乙酰胺13.蛋白凝胶染色的方法有哪些？各有哪些优缺点？（1）考马斯亮蓝法优点：选择性地对蛋白质进行染色，大大地降低了化学噪音，提高了灵敏度（2）胶体考染法优点：考马斯亮蓝定量地与蛋白质结合，可以准确定量蛋白质；缺点：蛋白质谷氨酸羧基侧链不可逆的酯基化（酸催化下），使得肽谱数据失真（3）银染法优点：大大提高了灵敏度；扩展了动态线性范围兼容质谱（去除戊二醛后）；快速，方便缺点：银离子可与半胱氨酸残基结合；银染试剂戊二醛和甲醛都会对蛋白质的α-和ε-氨基烷基化，妨碍后续分析（4）SYPRO染料优点：快速，灵敏，终点式染色易操作；动态线性范围广，染色覆盖范围广；不干扰后续分析。
14.正相和反相液相色谱的区别？（1）正相色谱法：采用极性固定相；流动相为相对非极性的疏水性溶剂，常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
（2）反相色谱法：一般用非极性固定相；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
15.分子离子、质荷比定义？（1）分子离子：气态分子失去一个电子所得的离子叫做分子离子。
（2）质荷比（m/z)：质谱检测的分子离子的质量与其所带电荷的比值。
16.生物质谱的基本原理是什么？分析样品在特定的条件下转变为高速运动的离子，这些离子根据质量/电荷比的不同在静电场和磁场的作用下得到分离，用特定的检测器可以记录不同质荷比的各种离子的相对强度并形成质谱图。
17.生物质谱仪由几个主要部分组成？基本部分：（1）离子源（2）质量分析器（3）检测器，检测由质量分析器分离的离子其他部分：（1）复杂计算机（2）真空泵系统18.比较MALDI和ESI的异同点？MALDI离子源工作原理：(1)以脉冲方式使样品离子化，从固相标本中产生的离子，并在飞行管中测定分子量(2)将分析物分散在基质分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶体，用激光照射晶体，由于基质分子经辐射所吸收的能量导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，导致基质和分析物膨胀并进入气相(3)样品被包裹在基质中，大部分激光能量被基质的发色基团首先吸收，从而保护了样品分子的完整性MALDI优点：能够耐受高盐；具有较高的质测上限；能分析混合物；敏感度为fmol；可发展为蛋白及核酸测序手段缺点：质量分辨率＜500*；质量测定精确度为± 0.1% ～±0.01%；不能与液相色谱联用ESI离子源工作原理：原理：样品通过液流流动（通常从HPLC）进入离子源，穿过有持续高压的不锈钢锥体或进样针，随着液流利开进样针样品分散为细雾状微滴。
微滴含有肽离子以及HPLC流动相组分（水、乙腈、醋酸等）。
离子源进一步从溶液组分中分离肽离子，将离子转移到质量分析器。
ESI优点：能与HPLC、CZE联用；能形成多价离子，可更为准确地测定分子量；质量分辨率为2000以上*；可以直接从水相观察非共价复合物；敏感度为fmol ～pmol；质量测定精确度为±0.01%缺点：在分析混合物时，多价离子形成会使结果分析比较困难；仅在低盐（＜1mmol/L）条件下给出理想信号；样品组成过于复杂时可能不产生信号信号19.肽质量指纹图谱是如何鉴定蛋白质的？PMF原理：将由质谱获得的肽段实验质量数据与数据库中已知蛋白的肽段理论数据对比已达到鉴定蛋白的目的。
eg：蓖麻毒素（Ricin）MALDI-TOF质谱的测定，得到Ricin的分子量为62925Da↓根据Ricin的肽质量指纹图谱，共检出22条肽谱峰↓将这些肽片段的质量数据用MASCOT搜索引擎在SwissProt数据库中进行PMF检索21.什么是二级质谱图？二级质谱图：在一级质谱图中，选择其中的一个峰，对其进行CID过程，就得到一张二级质谱图。
CID：碰撞诱导解离,是通过撞击使得多肽的肽键断裂的过程。
22.目前鉴定蛋白质磷酸化的主要技术手段有哪些？（1）抗体法：主要采用磷酸化蛋白质抗体富集磷酸化蛋白；专一性强、效率高。
（2）离子交换色谱：离子交换色谱的固定相是一些带电荷的基团，这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。
可分为强阳离子交换色谱和强阴离子交换色谱。
23.金属螯合色谱（IMAC)的主要技术原理是什么？（1）利用金属离子与磷酸肽之间的特异性作用进行分离（2）金属离子种类不同，对象不同24.什么是定量蛋白质组学？常用的研究技术有哪些？（1）定量蛋白质组学或多重蛋白质组学：是将一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量（相对定量）和鉴定的一门学科。
（2）常用的研究技术：荧光差异凝胶电泳技术；稳定同位素代谢标记技术25.荧光双向差异凝胶电泳与经典的双向电泳技术的主要区别是什么？荧光双向差异凝胶电泳（1）实验仪器：荧光染料、扫描仪、DeCyder分析软件（2）灵敏度，实验时间：能检测到小于10%的蛋白表达；（3）实验流程：经典双向电泳（1）实验仪器：IEF电泳仪、SDS-PAGE电泳仪、CCD照相机或激光密度扫描仪、PDQuest分析软件（2）灵敏度，实验时间：（3）实验流程：26.稳定同位素标记的基本原理是什么？（1）SILAC:细胞培养中稳定同位素的氨基酸标记SILAC的基本原理是：分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。
不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。
（2）ICAT:同位素亲和标签ICAT的基本原理是：利用同位素亲和标签试剂预先选择性地标记含半胱氨酸的肽类，分离纯化后通过质谱进行鉴定，根据质谱图上不同ICAT试剂标记的一对肽段离子的强度比例，定量分析它的母本蛋白质在原来细胞中的相对丰度。
27.同位素亲和标签（ICAT）技术的原理是什么？ICAT试剂由哪几部分组成？作用分别是什么？ICAT试剂的组成和作用：（1）专一的化学反应基团：能与蛋白质的半胱氨酸残基的拟SH专一反应（2）中间的连接子：可以结合稳定的同位素（通常为8个氘原子为“重型”，含有8个氢原子为“轻型”）（3）亲和反应基团：一种生物素亲和标签，能与生物素结合选择分离ICAT标记的多肽28.简述酵母双杂交技术的原理？（1）利用酵母作为真核蛋白相互作用的模型（2）利用诱饵质粒筛选文库或者单个已知蛋白（3）通过报告基因的转录鉴定蛋白的相互作用（4）使用不同的培养基筛选阳性克隆。