设计性实验,氨中毒对肝性脑病的影响

研究题目：氨中毒学说和假性神经递质学说对肝性脑病的作用

研究现状：肝性脑病是一个古老的话题，至今仍是终末期肝病患者的常见并发症及死亡原因之一。近年来，

针对肝性脑病的研究层出不穷，结论也莫衷一

是，仍有许多问题有待进一步探讨。目前，解释

肝性脑病发病机制的学说主要有氨中毒学说、假

性神经递质学说、氨基酸失衡学说及γ-氨基丁酸

学说等。有研究证明，应用左旋多巴可以明显改

善肝性脑病患者的状况。

实验目的

1.学习复制急性肝功能不全的动物模型，认识肝对降低

血氨的重要作用。

2.探讨血氨升高在肝性脑病发病机制中的作用。

3.观察血氨升高后对中枢神经系统的毒性作用及肝性

脑病的典型表现。

4.探讨氨中毒学说和假性神经递质学说。

实验原理：氨中毒学说：由于肝功能不全情况下，血氨的来源增多或去路减少，引起血氨升高，脑组织对氨

毒性极为敏感，因而出现脑功能障碍而导致昏

迷。正常血氨来自肠菌产氨（每日约4g）、肾泌

氨、肌肉组织产氨等，而解除氨毒性的机制主要

靠肝内的尿素合成。由于肝严重病变导致肝功能

不全，清除氨的能力大为降低，加之门腔静脉短

路，使由肠管回血液的氨不经肝解毒而直接进入

体循环，造成高氨血症与肝昏迷。饮食蛋白过多、

消化道出血、摄入铵盐、放腹水以及应用利尿剂

等均可引起血氨的升高或氨毒性增加，从而能诱

发肝昏迷。

假性神经递质学说：苯乙醇胺和羟苯乙醇胺、β-羟

酪胺与肝昏迷有密切关系。苯乙醇胶和径苯乙醇胺分

别为苯丙氨酸和酪氨酸的代谢产物。苯乙醇胺和羟苯

乙醇胺与儿茶酚胺的结构相似，也可被神经突触摄

取，贮存和释放，但不能产生正常的生理效应，造成

中枢神经系统功能紊乱以致昏迷。

研究对象：家兔，雌雄不拘，体重2.0KG-2.5KG

实验器材：兔手术器械1套、兔手术台、静脉输液装置、注射器（0.25ml、2ml、5ml、10ml）、系导管、三

通开关、丝线（1#、7#）、动脉夹、动脉插管一

套、分光光度计、离心机、水浴箱等；1%普鲁卡

因、2.5%复方氯化铵溶液、0.3mol/L氯化铵溶液、

生理盐水、血氨测试试剂盒、多巴胺-去甲肾上腺

素试剂盒、左旋多巴（5℅-10℅葡萄糖注射液）、

门冬氨酸鸟氨酸（0.9%的氯化钠注射液）

实验方法：随机选取一半数量的实验动物为第一组，另一半动物为第二组。

（1）固定将兔称重后，仰卧位固定于兔台上。

（2）颈部动脉插管剪去颈部正中被毛，1%普鲁

卡因局部皮下浸润麻醉。早甲状软骨下正中切口，分

离颈总动脉，并插管固定。放血2ml与洁净试管中，

待侧血氨浓度。

（3）上腹部手术○1剪去腹壁正中的毛，在上腹正

中用1%普鲁卡因局部麻醉。○2沿胃幽门找出十二指

肠，用眼科剪在肠壁作揖小切口，将导尿管插入肠腔

约5cm，作荷包缝合固定，将荷包缝合固定，将肠管

回纳腹腔，只留导尿管一端于腹外，以止血钳夹住腹

壁切口，关闭腹腔。腹部手术完毕后，待动物稳定

5-10min，观察、记录两组动物在正常状态下的各项指

标。

（4）模型复制向十二指肠插入注入复方氯化铵

溶液首次为10ml，后每个5min注射复方氯化铵溶液

5ml，仔细观察动物情况（呼吸加速、反应性增高、

肌肉痉挛等），直至全身星痉挛发作为止，停止注射，

从颈总动脉放血2ml用以检测血氨，记录所用的复方

氯化铵溶液总量，并计算每千克体重的用量。

全部实验动物动物推注氯化铵量达到实验组动

物出现痉挛（而该组动物未出现痉挛）时，从颈总动

脉放血2ml测血氨，并记录从推注氯化铵直至出现肝

性脑病痉挛发作的时间及氯化铵总量。

（5）血氨浓度和多巴胺去甲肾上腺素测定按照血

氨浓度测试试剂盒的说明进行操作。多巴胺-去甲肾上

腺素试剂盒全部测血中多巴胺和去甲肾上腺素浓度。

（6）第一组实验动物静脉滴注门冬氨酸鸟氨酸（0.9%

的氯化钠注射液），第二组实验动物静脉滴注左旋多巴

（5℅-10℅葡萄糖注射液）。两组每分钟不超过４０

滴，滴速相同，直至实验动物停止痉挛。记录两组实

验动物停止抽搐时间，测定此时两组动物血中多巴胺

和去甲肾上腺素浓度。

预期结果：第二组注射门冬氨酸鸟氨酸（0.9%的氯化钠注射液）的实验动物先停止痉挛。

参考文献：孙连坤《肝功能不全》

王建枝，金惠铭《病理生理学》第7版、第8版，

人民卫生出版社

刘玉兰《肝性脑病研究现状与展望》

《中国肝性脑病诊治共识意见(2013年，重庆)》