微生物培养实验方法_

四、实验操作
(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定 容至1000mL
操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培 养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉 塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以 不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角 锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸， 再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为 100kPa、温度为121℃，灭菌15～ 30min。将培养皿用旧报纸包裹，放 入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭 菌2h。
倒平板技术
1.将灭过菌Biblioteka Baidu 培养皿放在火 焰旁的桌面上， 右手拿装有培 养基的锥形瓶， 左手拨出棉塞。
1.临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后置 于4℃冰箱保存。 2.长期保存： 甘油冷冻管藏法
（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中
保温1～2 d后无菌落生长，说明培
养基的制备是成功的，否则需要重
新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、 形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌 菌落的特点，则说明接种操作是符合要 求的；如果培养基上出现了其他菌落， 则说明接种过程中，无菌操作还未达到 要求，需要分析原因，再次练习。
一旦划破，会造成划线不均匀， 难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落，菌落会沿着划破 处生长，会形成一个条状的菌落。
注意：
1、 移液管需要经过灭菌。操作 时，试管口和移液管离火焰1~2cm
处.
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
斜面制备
培养基配制
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9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒 精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本） 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接 种.
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培 养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
平板划线的操作方法
一旦划破，会造成划线不均匀， 难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落，菌落会沿着划破 处生长，会形成一个条状的菌落。
微生物实验室培养的基本操作
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 器具的灭菌 培养基的配制 培养基的灭菌 倒平板 微生物接种 恒温箱中培养 菌种的保存
培养基配制原理
• 微生物的生长繁殖时需要各种营养物质，一般 包括水、无机盐、碳源和氮源，有的还需要少量 特殊营养物质（生长因子）根据微生物的种类和 实验目的不同，选择不同的原料配制不同培养基。 本课题使用牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种应用 最广泛和最普遍的细菌基础培养基，也称普通培 养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl，其中牛肉 膏为细菌提供碳源和能源，磷酸盐；蛋白胨主要 提供氮源；而NaCl提供无机盐。在配制固体培养 基时还要加入琼脂作凝固剂。在培养细菌时要用 稀酸或稀碱将pH调至中性或微碱性，以利于细菌 的生长繁殖。
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倒平板技术
2.右手拿锥形 1 2
瓶，使瓶口迅
速通过火焰。
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3.用左手的拇指 和食指将培养皿 打开一条稍大于 瓶口的缝隙，右 手将锥形瓶中的 培养基(约10~ 20mL)倒入培养 皿，左手立即盖 上培养皿的皿盖。
倒平板技术
4.等待平板冷 却凝固，大约 需5~10min。 然后，将平板 倒过来放置， 使皿盖在下， 皿底在上。
分装 灭菌 摆放斜面
接种的注意点
：（1）用接种环取菌种之前、每次划线之前 和划线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要 在酒精灯附近冷却后再操作；（2）划线时 不要划破培养基，如果采用分段划线法操 作从第二次操作应总在上一次划线末端开 始，首尾区不能相连；（3）操作必须始终 在酒精灯火焰旁进行。
菌种的保存