抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验，又称Coombs’的重要依据。【参考值】正常人直接与间接试验均为阴性，Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。

【临床意义】

直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全抗体。直接Coombs’试验较间接试验对AIHA更有诊断价值。用特异性单价抗血清可将AIHA 分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％；

阳性结果

本试验阳性结果主要见于下列几种情况：

1.自身免疫性贫血，（IgG）型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。

2.

型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供应补体）则结果为阳性。

37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。

4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。

5.红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变为阳性。

6.SLE

铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。

【要求】

用肝素或EDTA抗凝血做直接Coombs’试验，血清做间接Coombs’试验。

抗人球蛋白试验

项目意义: 抗人球蛋白试验(anti human globulin test) 又

称Coombs试验。

[临床意义]

1．正常人抗人球蛋白试验直接、间接试验均呈阴

性。

2．温抗体型自身免疫性溶血性贫血、新生儿同种

免疫溶血病常呈直接试验阳性反应。

3．自身免疫性溶血性贫血大多属于温抗体型(主

要为IgG)。但也有小部分属于冷抗体型(主要为IgM)。

故必要时应于4℃条件下进行试验以检出其冷抗体，否

则会导致假阴性反应。

4．由于病人不完全抗体的性质不同,含量不一，以

及所用抗血清效价的影响，本试验的检出阳性率也不

致,故除用多价的抗人球蛋白血清进行试验外,必要时

需加用单价抗血清,以提出检出阳性率。

5. 间接抗人球蛋白试验主要检测病人血清中是否

有不完全抗体,常用于Rh或ABO型新生儿同种免疫溶

血病的母体血清中不完全抗体的检测验。因其敏感性

差，很少用于AI-HA的诊断。

6. 本试验阳性还可见于系统性红斑狼疮、类风湿

性关节炎、淋巴瘤、恶性肿瘤、甲基多巴及青霉素型

药物诱发性免疫性溶血性贫血等。

7. 本试验较易发生假性阴性反应。如：①试剂不

适宜；②自身抗体的解离常数高；③红细胞上所吸咐

的抗体浓度过低；④发病早期即已大量应用肾上腺皮

质激素。

1．原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，则与红细胞上粘附的IgG相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋白试验（ＤＡＴ）。患者血清中存在游离的自身抗体，则可用Rno(D)阳性的Ｏ型红细胞加以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS作用而发生凝集反应，此即为间接抗人球蛋白试验（ＩＡＴ）。

2．试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产）。

3．操作：

3．1 在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12个小格。

3．2 将各种抗人球和C3分别作倍比稀释（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格内，做好标记。

3．3 每孔加入洗涤后5％被检RBC悬液10ul。

3．4 混匀放密闭保湿盒内，37度保温30分钟；（每隔10秒混匀一次）于镜下作效价和分值测定。

4. 结果：

（＋－）：2分反应液中有3－5个小凝块（4个RBC以上紧密聚集）。

（＋）：4分反应液中有6－10个小凝块游离RBC约3／4。

（＋＋）：6分反应液中有11－30个中等大小凝块游离RBC约1／2。

（＋＋＋）：8分反应液中有充满凝块游离RBC约1／4。

（＋＋＋＋）：10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。

5. 正常参考值：阴性。

６. 注意事项：

６．１患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血清量的４０００倍以上。

６．２每次试验应作阴阳对照。

６．３对研究温抗体型AIHA而言，应选择单抗特异类（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不仅诊断所需，且可将温型抗体ＡＩＨＡ进一步分型。

６．４血液用ＥＤＴＡ抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补体结合，致出现假阳性。

２．临床意义：

７．１温抗体型导致的AIHA,DA T,强阳性，IA T多为阴性，但亦可阳性。

７．２药物诱发的ＩHA，根据类型不同：多巴类ＤＡＴ与ＩＡＴ均为阳性；青霉素类ＤＡＴ阳性，ＩＡＴ阴性；奎宁类因其抗体多为IgM型，ＤＡＴ多为阴性；如改用抗人全血球蛋白则ＤＡＴ可为阳性。

７．３冷凝集素综合征：用抗人全血清的抗人球与３７度洗涤过的患者红细胞用试验，ＤＡＴ亦可阳性，如用单抗IgG或IgM的特异抗血清用试验，ＤＡＴ则为阴性。３７度作ＩＡＴ结果阴性，温度下降则ＩＡＴ阳性。

７．４ＰＮＨ：患者在溶血发作时，ＤＡＴ强阳性，发作后转阴性；ＩＡＴ常为阴性。

７．５新生儿同种免溶贫：本病是孕妇的血型抗体通过胎盘进入胎作的血液，对胎儿红细胞的抗原起破坏作用而致的溶血病。故母亲与胎儿的Rh血型、ＡＢＯ型或其它血型不合时均可发生。因Rh抗体引起溶血的病例，全抗或单抗IgG或IgM呈阳性，且持续数周，经换血与输后阴性转。因ＡＢＯ血型不合引起溶血的病例，ＤＡＴ多为阴性或弱阳性。