磁珠法核酸分离技术概况
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磁珠法核酸分离技术概况
传统的核酸分离技术包含沉淀,离心等过程,这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低,接触有毒试剂,很难实现自动化操作;而采用磁性微球做载体进行核酸分离技术就能很好地克服这些缺点,实现样品的快速、高效制备,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。
一、磁珠法提取核酸简介
磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞,从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后,再在磁场作用下,使磁性颗粒与液体分开,回收颗粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。
磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂,操作简单,符合核酸自动化提取要求,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。
二、技术路线简易流程
样品裂解—磁珠与待分离DNA特异性结合—磁珠-DNA混合物的洗涤—磁珠与待分离DNA的洗脱分离(即结合-洗涤-洗脱三步)。
细胞裂解后,向裂解液中加入磁珠,当溶液的PH值小于6.5时,磁珠选择性的与优化的DNA结合,此时将吸附有DNA的磁珠置于磁场中,通过缓冲液去除没有被吸附的杂质(蛋白等),然后将磁珠置于PH值8.5的缓冲液中,纯化的DNA即可进入缓冲液中。
三、优点
配合微纳米磁珠核酸提纯试剂,优化样品回收和提纯效果,直接用于后续实验。
1、自动化操作保证了实验结果稳定,避免人工操作引起的差异及错误。
2、自动化操作系统,严格控制孔孔之间污染,避免操作人员的污染和被污染。
四、临床应用
乙肝、丙肝、艾滋病、流行性病毒、感染性疾病等。
下图是国外kingfisher磁珠法核酸提取技术原理图,供参考。