最新外周血细胞形态学检验及技巧

外周血细胞形态学检

验及技巧

外周血细胞形态学检验及技巧

卫生部北京医院血液科郑天林

卫生部临床检验中心彭明婷谷小林陆红

五．血细胞形态学采样、制片染色与检查要求：

( 一 ) 采样、制片及染色，三道工序至关重要，是细胞形态学检查的成败关键。要得到合格的涂片标本，做好上述工序，应注意以下要求：

1. 采样、制片：

(1) 玻片要求：国内 1.0mm × 26mm × 76mm ± 0.5 ，美国 NCCLS 规定 1.0mm × 25mm × 75mm ±0.5 ，要严格清洁，接近中性 .

(2) 推片：选择优质推片，推片两端边缘整齐、平滑。也可选用有机玻璃，其大小、厚度与坡片相同，两端之边缘应加工光滑，以利推片用。

(3) 采外周血（样），擦去第一滴血，迅速采血，量适中，如绿豆粒大小，具有一定推片技术，推片倾斜 45 °±，推成血膜长度 25mm ～ 35mm ，宽度 18 ～ 20mm ，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少 10mm ，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇（摇）干，血膜具有头、体、尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、 WBC 或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。

(4) 如若采用静脉血推片，用 K 3 -EDTA 或肝素抗凝，推制血片应尽早进行（最迟在 1 ～ 2 小时内）。

（二）染色：是识别细胞形态的重要标记工序：

常规瑞氏 - 姬姆萨染色要点：

1 ．要得到满意、漂亮的血细胞染色标本，新鲜涂片迅速染色是很重要的。

2 ．染色液配制要合格；

3 ．涂片切勿用甲醛固定，否则不着色；

4 ．染色的好坏与染色液、缓冲液的质量及比例、加液间隔时间、保持玻片染色液面的张力等染色技巧均有重大关系。染液要覆盖涂膜面，再加缓冲液（ 1:2 ），其量要充足、混均，染色时间要 30 分钟以上。

5 ．细胞着色的观察：

(1) 当染液与缓冲液混合后，甲醛吸水液温升高，发生剧烈反应，直至液膜表面的“染色粒”呈均匀分布，随染色时间的推延，“染色粒”由“染色小粒”聚集成“染色大粒”，逐渐由外缘向内缘推进至染色面中心（此过程需要 20-30 分钟以上），则表明细胞着色已完成，

(2) 再用自来水缓流冲洗，使染色液沉渣及染色粒浮去，使其充分起分色作用，去除细胞染色中浮色，显示出胞核结构及细胞清晰形态，待干，镜检。

六．外周血细胞形态检查技巧：

外周血中三种血细胞数与形态学表现是：

● 反映骨髓造血状态及血液病和其他疾病的厨窗；

● 是检查与观察疾病的重要指标；

（一） WBC 形态学诊断技巧：

1 ． WBC 数值准确性估计：

（ 1 ）目前自动化计数仪时有出现结果的偏差，低倍镜观察血涂片可以粗略估计 WBC 数值及分布。低倍视野 WBC 数：正常约 3~5 个，增多 6 个以上，减低 3 个以下。

（ 2 ） WBC 如推至片尾，分布不均，估计将有一定难度。较大的细胞如单核、异淋及中性粒细胞及不成熟细胞多在片尾，体部则多为较小的淋巴细胞，使分类造成偏差，所以分类部位在适当调整。

2 ．白细胞计数值限度分级：

（ 1 ） WBC 正常范围： 4.0~10.0 × 10 9 /L;

（ 2 ） WBC 正常限度以下 :

● 轻度减少 (<4.0 ～ 3.0 × 10 9 /L),

● 中度减少 (<3.0 ～ 2.0 × 10 9 /L),

● 极度减少 (<2.0 × 10 9 /L);

（ 3 ） WBC 正常高限度以上 :

● 分轻度增多 (>10.0 ～ 20.0 × 10 9 /L),

● 中度增多 (>20.0 ～ 40.0 × 10 9 /L),

● 明显增多 (>40.0 ～ 80.0 × 10 9 /L)

● 极度增多 (>80.0 × 10 9 /L) 。

以此与所测知 WBC 计数值作粗略对比，推断 WBC 计数值的准确性。

（ 4 ）如在血片分类计数过程中发现较多有核红细胞时，

● 计出血片中有核红所占 % 率，即以校正原 WBC 计数值减去有核红所占比例，求出外周血中WBC 总数值，

● 另作 WBC 分类计 100 个过程中遇到多少有核红细胞，即有核红细胞个 /100 个 WBC ，

● 或作血片有核细胞分类计数（包括有核红细胞），计出有核红细胞所占 % 率。

3 ． WBC 分类正常范围及其病理性改变：

（ 1 ） WBC 分类正常范围：

● 新生儿出生后最初 24 小时白细胞数高，主要为中性粒细胞 , 至第 3 ～ 4 周，中性粒细胞与淋巴细胞比例倒转，直至 4 岁淋巴细胞比例仍多。表 1

● 白细胞分类正常范围由于民族、地区、年龄、性别及其生理性变化的影响，以及检查本身的技术差异，即使一人同次取材不同涂片、一张涂片多次分类计数结果也不可能完全一致，但不可差异太大。

● 分类中占大比例的中性粒细胞或淋巴细胞呈正态分布，占小比例的嗜酸 / 嗜碱性粒细胞及单核细胞则为 Poisson 分布。

（ 2 ）病理性形态学改变：

①中性粒细胞：

● 中性粒细胞分叶分化程度，被认为从干细胞至粒细胞生成是否正常及与粒细胞年龄相关；如核分叶不良， Pelger-huet 现象；核仅一叶或二叶，其百分率增加时谓之“左移”，反之，多数细胞四叶以上谓之右移，一般认为正常中性粒细胞胞核分叶情况：

4 叶者为 1

5 ～ 25% 3 叶者为 40 ～ 50%

2 叶者为 20 ～ 40% 1 叶者为 < 5%

血象中如有多个 5 叶以上者提示有巨幼细胞性贫血的可能。

右移现象

—多见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾患，并可以 5 叶与 4 叶所占比例计算，得出简单实用的分叶指数：

分叶指数 =5 叶 /4 叶 × 100% 正常核分叶指数： 0 ～ 17%

—还见于缺铁性贫血、类风湿性关节炎、遗传性高分叶症（显性遗传）及某些败血症（以左移多见）。

左移—见于感染、败血症、出血、小儿慢性中性粒细胞减少症等。

● 中性粒细胞毒性颗粒及空泡改变：中性粒细胞由于受到外来刺激（包括感染及应激反应）引起颗粒变性，粗大着色深染及浆内空泡等病理性改变。上述改变及白细胞数增多和出现幼稚及原始细胞则为类白血病反应。

● 慢性粒细胞白血病（ CML ）的中性成熟粒细胞一般胞浆颗粒较正常稀少，但无空泡及毒性颗粒，而慢性中性粒细胞白血病（ CNL ）的中性成熟粒细胞则与类白血病反应形态相似。

● 假性嗜酸性颗粒—在某些干细胞疾病如 MDS 、粒细胞缺乏症、肾性贫血某些患者中性粒细胞的颗粒增多，形态异常，类似嗜酸性样颗粒的出现。