高效液相色谱法定性定量分析
【精品课件】高效液相色谱定性定量分析方法
定量分析基本要求
• 要有纯物质做标准 • 被定量组分峰要与其他组分达到基线分离 • 符合定性参数要求 • 选择合适定量方法
定量分析基本公式
• 在某些限定条件下，被测组分的浓度与检测器的 响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度 与峰面积不成线性，分别取对数后呈线性。）
两谱联用技术
1 如果标准物质缺乏或难以获得；或由于结构、理 化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至相同 的保留值，则保留值定性准确度存在疑问。
2 可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和 质谱对化合物进行定性，目前两用技术有： HPLC-紫外光谱，HPLC-红外光谱，HPLC-MS, HPLC-NMR等。
高效液相色谱定性定量分析方法
色谱分析的目的：
对未知组分进行定性分析 对已知组分进行定量分析
根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰 在检测器上的响应信号强度，对该谱峰进行初步定性 定量分析。
液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素
色谱峰的定性鉴别：
通过保留值（通常指保留时间）进行定性 需要制定保留时间误差范围
• 相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；
• 相关系数越接近1，说明线性关系越好；
• 绘制标准工作曲线时一般选取3-6个不同浓度 的标准样品，相关系数起码应在0.95以上。
如达不到要求，可பைடு நூலகம்存在以下原因：
1 所选浓度范围使检测器的响应值超出了该检测器
2
响应值的线性范围；
2 实验数据的精密度太差，过于分散。
3 无论何种原因，都应重新绘制标准工作曲线 。
高效液相色谱法
答：气相温度对于样品的气化程度影响很大,一般来说温度越高,气化越快,通过色谱柱时间也越短,气相单一物质分析一般用恒温,多种物质分析时,通过改变柱温能够很好的对样品进行分离,节省了分析时间,这时往往用梯度升温。
3、若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何者优越？为什么？
答：能，浓度对峰面积更优越。因为有些峰不完全对称，用它作标准曲线误差较大。
4、在样品干过滤时，为什么要弃去前过滤液？这样做会不会影响实验结果？为什么？
答： 干过滤主要是保持溶液浓度不变而采取的一种过滤方法，前液中可能有一些滤纸或滤膜上的杂质存在，为了保持溶液浓度不变，所以要将前液去掉。干过滤为分离掉溶液中的固体并且不改变溶液浓度而采取的一种方法。为保持溶液浓度不变。前段滤液要弃去，并且滤纸漏斗盛接的烧杯都要干的。这样做不会影响实验结果。
液相并不是都是室温,一般来说,温度对于反相色谱分析影响不大,所以用反相柱分析时,一般用室温,不配备柱温箱,但是很多正相色谱分析时对于温度要求比较严格,比如说配位体交换色谱法时,温度的影响还是很大的。
5、测饮料试液：可乐，茶叶，速溶咖啡。
6、10μL平头微量注射器。
四、实验内容
1、标准贮备液配制质量浓度分别为20、40、80、160μg·mL-1的标准系列溶液。（1mL，2mL，4mL，8mL稀释为50mL）
2、谱仪器条件：
泵的流速：1.0mL/min；检测波长：275nm；进样量：4μL；柱温：室温。
定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其它组分（如：单宁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。
hplc检测方法
hplc检测方法HPLC检测方法高效液相色谱(HPLC)是一种广泛应用于化学、制药、食品、环境等领域的分析技术。
HPLC检测方法能够对样品中的化合物进行定量和定性分析，具有灵敏度高、分离效果好、选择性强等优点。
下面将介绍HPLC检测方法的原理、步骤、注意事项等方面的内容。
一、原理HPLC检测方法的原理是利用不同化合物的物理化学性质，如分子量、极性、亲水性、亲油性等，在高压力下通过固定在柱子中的固定相进行分离。
样品成分通过柱子后，会在检测器中产生信号，根据不同成分的信号大小进行定量分析。
二、步骤HPLC检测方法的步骤主要包括：样品制备、柱子选择、流动相配置、样品进样、分离、检测等。
1. 样品制备：样品制备是HPLC检测方法的第一步。
样品制备的目的是将复杂的样品进行简化，使其易于分离和检测。
常用的样品制备方法包括提取、纯化、水解、酸解等。
2. 柱子选择：柱子是HPLC检测方法中最重要的部分之一。
柱子的选择应根据不同样品的性质和分离要求进行选择。
常见的柱子类型有反相柱、离子交换柱、凝胶柱等。
3. 流动相配置：流动相是HPLC检测方法中的另一个重要组成部分。
流动相的选择应根据不同样品的性质和柱子类型进行选择。
常用的流动相包括水、有机溶剂、缓冲液等。
4. 样品进样：样品进样是HPLC检测方法中的关键步骤之一。
样品进入柱子前必须经过进样器。
进样器的选择应根据不同样品的性质和进样量进行选择。
5. 分离：分离是HPLC检测方法中最核心的部分之一。
分离的目的是将样品中的成分分离出来。
分离过程中，样品成分会根据不同的化学性质在柱子中进行分离。
6. 检测：检测是HPLC检测方法中的最后一步。
检测器会对柱子中流过的各个成分进行检测，根据不同成分的信号大小进行定量分析。
三、注意事项在进行HPLC检测方法时，需要注意以下几点：1. 样品应尽可能纯净，避免杂质的干扰。
2. 流动相的选择应准确，避免对柱子产生损害。
3. 进样量应适当，过多或过少都会影响检测结果。
高效液相色谱法3
2.内标法 内标法分为 工作曲线法 内标一点法 内标二点法 内标对比法 校正因子法 在HPLC中最常用内标对比法。 选择内标物的三个条件(纯、样品中不含有、保留时 间接近)，在HPLC中的要求与GC完全一致。一般可选择 一个化学结构与待测物质相似、物理性质相近的纯物质作 为内标物，加到待测样品溶液中，经过样品前处理后进样。 使用内标法可抵消因仪器稳定性差、进样量不够准确等原 因带来的实验误差。
(一) 多环芳烃的分析 一 多环芳烃的分析(图21－18) 多环芳烃的分析，可用反相或吸附色谱法分析。反 相色谱法用ODS柱，用乙腈−水或甲醇−水为流动相。但用 甲醇−水时，保留时间较长，因此多采用梯度洗脱。多环 芳烃也可用硅胶(YWG等)柱，以不含水的正己烷为流动相， 也能获得较好的分离效果，但需注意溶解样品的溶剂应与 流动相的性质相近。许多多环芳烃是致癌物质，其含量监 测在食品分析与环境保护监测中都有实用意义。
(1)内标对比法： 这种方法不需知校正因子又具有内标法的定量准确 度与进样量无关的特点，方法简便实用。在药物分析中分 析结果(含量)常用标示量％表示:
( Ai / As )样品 (ms )样品 W 标示量% = × × ×100% ( Ai / As )对照 (ms )对照 m
(21.13)
式中(ms)样品与(ms)对照分别是内标物在试样溶液及对照溶液 中的量，W为平均片重(或丸重等)，m是取样量，其它符 号的含义同GC章。若试样溶液与对照溶液中加人内标物 的量相等，所称取的样品重与平均片重相同，则上式的后 二项均等于1。
A的标示量％=(178024／202694)÷(154856／171222)×100％=97.l％ P的标示量％=(820968／202694) ÷(692272／171222)×100％=100.l％ C的标示量％=(407792／202694) ÷(372221／171222)×100％=92.5％
液相定量方法
液相定量方法液相定量分析是指在液体状态下进行的化学分析方法，用以确定溶液中特定组分的浓度或含量。
这种方法在化学分析、临床诊断、环境监测、药物分析等领域都有广泛应用。
以下是一些常见的液相定量方法：1. 紫外-可见光谱法（UV-Vis Spectroscopy）：利用物质在紫外和可见光区域对光的吸收特性来进行定量分析。
每种物质都有特定的吸收光谱，通过测量溶液的吸光度，可以依据朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law）计算出溶液中组分的浓度。
2. 红外光谱法（IR Spectroscopy）：通过分析物质在红外光区域的光谱来识别和定量分子中的特定基团。
红外光谱可以提供有关分子结构和化学环境的信息。
3. 原子吸收光谱法（Atomic Absorption Spectroscopy, AAS）：利用原子在特定波长处对光的吸收来定量分析元素。
当样品中的元素原子化后，它们会吸收特定波长的光，吸收的强度与原子的浓度成正比。
4. 原子荧光光谱法（Atomic Fluorescence Spectroscopy, AFS）：类似于AAS，但是检测的是被原子化的物质在特定波长处发射的光。
AFS通常具有更高的灵敏度。
5. 质谱法（Mass Spectrometry, MS）：通过分析物质的质谱图来确定其分子质量和结构。
质谱法可以用于定性和定量分析，但在液相分析中，通常用于检测和鉴定分析物。
6. 高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）：HPLC是一种常用的液相分离和定量技术。
它通过色谱柱分离混合物中的组分，然后使用检测器（如紫外检测器、二极管阵列检测器、电化学检测器等）来监测分离后的组分的浓度。
7. 液相色谱-质谱联用（LC-MS）：将液相色谱的分离能力与质谱的检测灵敏性和特异性结合起来，用于复杂样品中微量组分的定性和定量分析。
8. 电化学方法（Electrochemical Methods）：如伏安法、电位滴定法等，通过测量电化学反应的电流或电位变化来定量分析溶液中的物质。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
二。实验原理： 高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法 和气相色谱的基础上发展起来的，（经典液相色谱法使用粗粒 多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力 流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入 口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气相色谱原理类似， 流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配 合程序升温可分析高沸点的有机化合物。）弥补了经典液相色 谱法和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小 口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱 柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内 获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物， 更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化 合物。
4．进样阀从装载转向进样位，同时按进样按扭，工作站 开始记录并出图11。 5．苯甲酸的色谱峰出完后，按照4-5步骤连续操作四次， 获得从最低浓度到最高浓度的标准试液的五张色谱图，分 别为11，12，13，14，15（15为流动相进样，设浓度为0 mg/ml）。 6．按照4-5步骤取25微升的未知样品，进样，出谱图W1。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，它基于样品在液相中的分配
行为以及在固定相上的吸附和解吸行为。
它能够对样品中的物质进行分离、定量和定性分析。
高效液相色谱的原理如下：
1. 选择性分离：高效液相色谱中，样品混合物被注入装有固定相（柱填充物）的色谱柱中。
不同物质在柱填充物上的吸附和解吸速度不同，因此可以通过调整流动相的组成、温度和流速等参数来实现对样品中物质的选择性分离。
2. 吸附-解吸过程：在高效液相色谱中，样品溶解于流动相中，与固定相表面发生相互作用。
这个过程涉及吸附和解吸，吸附过程发生在固定相表面，解吸过程发生在固定相表面和流动相中物质的分配行为。
通过控制流动相的性质和柱填充物的特性，可以实现对不同物质的选择性吸附和解吸。
3. 柱填充物：高效液相色谱柱的填充物通常是多孔性固体颗粒，如硅胶或石英。
填充物的选择与样品的性质和分离的目的有关。
柱填充物的粒径、孔径和表面性质将影响色谱分离的效果。
4. 检测器：高效液相色谱的结果通过检测器进行检测和记录。
常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等，根据待分析物的性质和浓度选择适当的检测器。
总之，高效液相色谱是利用样品在液相中的分配和在固定相上的吸附解吸过程进行分离和定量分析的方法。
通过调整柱填充物、流动相和检测器等参数，可以实现对样品中不同物质的选择性分离和定量测定。
高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除
高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除高效液相色谱定量分析过程中一旦出现误差将影响结果的准确性，其误差来源主要为样品前的处理、标准品的配置，有效减小误差，可以提高分析结果的准确度，在操作过程中操作者尽量将操作误差减小到最低，有效消除误差的来源非常重要。
该文主要分析了高效液相色谱中定量分析中的误差来源以及消除方法，以期为提高实验的准确性提供帮助。
标签：高效液相色谱；定量分析；误差[Abstract] High performance liquid chromatography （HPLC）once appear in the process of quantitative analysis of the error will affect the accuracy of the results，the main error source as sample processing，in front of the standard configuration，effectively reduce the error，can enhance the accuracy of analysis results，the operator in the process of operation as far as possible to minimize the operating error，effectively eliminate the source of error is very important. This article mainly analyzes the quantitative analysis of error sources in high performance liquid chromatography （HPLC）and eliminate method，in order to offer help to improve the accuracy of the experiment.[Key words] High performance liquid chromatography （HPLC）；Quantitative analysis；Error高效液相色谱是色谱法的一个重要分支[1]，以液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相采用高压输液系统泵入装有固定相的色谱柱[2]，该方法已被广泛应用到医学、化学、农学、工业、法检等重要学科领域中。
高效液相色谱法定性定量分析
高效液相色谱法测定萘乙酸的含量一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
二、实验原理将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。
如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。
三、仪器和试剂1、Agilent 1100高效液相色谱仪。
2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。
3、流动相：H2O和CH3OH4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。
5、未知物萘乙酸6、平头微量注射器。
四、实验步骤1、开机(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；(2) 打开打印机和计算机的电源；(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；(4) 打开工作站。
2、编辑方法(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；(b）检测器对话框：设定波长337 nm。
(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。
(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。
仪器分析实验的课后习题答案及讨论
高效液相色谱1．高效液相色谱法的特点特点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量准确度高，应用围广。
适用于分析高沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效别离分析方法。
2.高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点：(1)进样方式的不同：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气化或裂解；(2)流动相不同，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力；(3)由于液体的粘度较气体大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级；(4)由于流动相的化学成分可进展广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率〔柱效能〕；(5)高效液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相；(6)高效液相色谱是在液相中进展，对被测组分的检测，通常采用灵敏的湿法光度检测器，例如，紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等。
3.高效液相色谱的定性和定量分析的方法定性：〔1〕利用纯物质定性的方法利用保存值定性：通过比照试样中具有与纯物质一样保存值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。
不适用于不同仪器上获得的数据之间的比照。
利用参加法定性：将纯物质参加到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。
〔2〕利用文献保存值定性相对保存值r21：相对保存值r21仅与柱温和固定液性质有关。
在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保存数据，可以用来进展定性鉴定。
定量：有归一法、标法、外标法在定量分析中，采用测量峰面积的归一化法、标法或外标法等，但高效液相色谱在别离复杂组分式样时，有些组分常不能出峰，因此归一化法定量受到限制，而标法定量则被广泛使用。
4．高效液相色谱实验时，选择流动相时应注意的几个问题〔1〕尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
高效液相色谱法定性定量测定油梨果实中的可溶性糖成分
高效液相色谱法定性定量测定油梨果实中的可溶性糖成分葛宇;曹剑秋;司雄元;胡福初;李章;臧小平;马蔚红【摘要】Avocado fruits (Persea americana Mill.) were collected from 3 accessions of avocado germplasm and their soluble sugar components and contents were determined. The results showed that the contents of total soluble sugar in the pulps of the avocado fruits of the 3 avocado accessions ranged from (13.19 ± 0.32) to (25.94 ± 0.98) mg/g FW. The soluble sugar components were composed of mannoheptulose,perseitol, fructose and glucose, and dominated by mannoheptulose. There were significant differences in the contents of total soluble sugar, mannoheptulose, perseitol, fructose and glucose among the avocado fruits of 3 avocado accessions. The total soluble sugar contents in the seeds of the 3 avocado accessions were at the range of between (20.47 ± 0.52) and (29.41 ± 0.60)mg/g FW. The soluble sugar component also included perseitol, mannoheptulose, fructose and glucose, dominated by perseitol. There were great differences between the contents of total soluble sugar, mannoheptulose, perseitol, fructose and glucose of the seeds of 3 avacado germplasms. The average contents of total soluble sugar and other soluble sugar components in the fruit pulp and seeds of 3 avocado accessions was in the order of perseitol >fructose >mannoheptulose>glucose>total soluble sugar.%分析油梨果实可溶性糖成分及含量,为以后深入分析、利用其成分提供一定理论基础.对所采集的3份油梨,应用高效液相色谱仪测定其可溶性糖组分及含量.结果显示,3份油梨果肉中的可溶性总糖含量为(13.19±0.32)~(25.94±0.98)(mg/g FW),其可溶性糖由甘露庚酮糖、甘露庚糖醇、果糖及葡萄糖等4个成分组成,以甘露庚酮糖为主;可溶性总糖、甘露庚酮糖、甘露庚糖醇、果糖及葡萄糖含量在3份油梨果肉中差异均显著.3份油梨种子中的可溶性总糖含量为(20.47±0.52)~(29.41±0.60)(mg/g FW),其可溶性糖同样由甘露庚酮糖、甘露庚糖醇、果糖及葡萄糖等4个成分组成,以甘露庚糖醇为主;可溶性总糖、甘露庚酮糖、甘露庚糖醇、果糖及葡萄糖含量在3份油梨种子中差异均显著.3份油梨果肉和种子之间可溶性总糖和各可溶性糖成分平均含量差距大小依次为:甘露庚糖醇>果糖>甘露庚酮糖>葡萄糖>可溶性总糖.【期刊名称】《热带农业科学》【年(卷),期】2017(037)007【总页数】6页(P89-94)【关键词】油梨;果肉和种子;可溶性糖成分;高效液相色谱【作者】葛宇;曹剑秋;司雄元;胡福初;李章;臧小平;马蔚红【作者单位】中国热带农业科学院海口实验站海南海口 570102;海南大学园艺园林学院海南海口 570228;安徽农业大学生物技术中心安徽合肥 230036;海南省农业科学院热带果树研究所/海南省热带果树生物学重点实验室海南海口 571100;海南大学园艺园林学院海南海口 570228;中国热带农业科学院海口实验站海南海口570102;中国热带农业科学院海口实验站海南海口 570102【正文语种】中文【中图分类】S667.9油梨(Persea americana Mill.)为樟科(Lauraceae)鳄梨属(Persea)植物，中文又名鳄梨、牛油果。
制药工程中常用药物检验方法的使用方法
制药工程中常用药物检验方法的使用方法制药工程是一门综合性较强的学科，涉及到药物的研发、生产和质量控制等方面。
在制药工程中，药物的检验是非常重要的环节，它可以确保药物的质量和安全性。
本文将介绍制药工程中常用的药物检验方法及其使用方法。
1. 红外光谱法红外光谱法是一种常见的药物质量检验方法。
它利用药物分子的红外吸收特性来进行定性和定量分析。
使用红外光谱法时，首先需要准备样品，将样品放置于红外光谱仪中进行测试。
然后，通过观察红外光谱图，分析样品中不同化学键的吸收峰，从而确定样品的成分和质量。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的药物分析方法，适用于检测药物中各种成分的含量。
使用高效液相色谱法时，首先需要准备样品和色谱柱。
将样品注入色谱柱中，再通过改变流动相的组成和流速，使样品中的各种成分分离。
最后，通过检测样品在色谱柱中的峰值面积或浓度，来计算各种成分的含量。
3. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种常用的定量分析方法，适用于检测药物中某些有特定吸收特性的成分。
使用紫外可见光谱法时，首先需要准备样品溶液，并利用紫外光谱仪测定样品吸光度。
然后，通过比较样品的吸光度与标准曲线或已知浓度的参比溶液的吸光度之间的关系，来计算样品中特定成分的含量。
4. 气相色谱法气相色谱法是一种常用的药物分析方法，适用于检测药物中挥发性成分的含量。
使用气相色谱法时，首先需要准备样品和气相色谱仪。
将样品插入气相色谱仪中，通过升温使样品中的挥发性成分蒸发，并通过色谱柱分离。
最后，通过检测样品在色谱柱中的峰值面积或浓度，来计算挥发性成分的含量。
5. 核磁共振波谱法核磁共振波谱法是一种常用的定性和定量分析方法，适用于研究药物的结构和组成。
使用核磁共振波谱法时，首先需要准备样品，并放置于核磁共振仪中进行测试。
通过观察样品的核磁共振谱图，可以分析样品中不同核的化学位移和相互作用，从而确定样品的结构和成分。
总结制药工程中常用的药物检验方法有红外光谱法、高效液相色谱法、紫外可见光谱法、气相色谱法和核磁共振波谱法。
18章高效液相色谱法
六、反相离子对色谱法
把离子对试剂加入到含水流动相中，被分析组分离 子在流动相中与离子对试剂的反离子（或是称对离子） 生成不带电荷的中性离子对，从而增加溶质与非极性固 定相的作用，使分配系数增加，改善分离效果， 适用于分离可离子化或离子型的化合物。 1、离子对模型
试样离子在流动相中与离子对试剂离解出的反离子 生成不荷电的中性离子对，然后在非极性固定相上产生 保留。
第四节 高效液相色谱分析方法
一、定性和定量分析方法
1、定性方法分为色谱鉴定法和非色谱鉴定法。 2、定量方法常用外标法和内标法进行。 3、主成分自身对照法：
不加校正因子主成分自身对照法： 加校正因子主成分自身对照法： 二、高效液相色谱分离方法的选择 分离模式选择主要依据试样的性质和各种模式的分离 机制。试样的性质包括相对分子量、化学结构、极性和溶 解度等。
（1）化学稳定性好,使用过程中不流失,柱寿命长;
（2）均一性和重现性好;
（3）柱效高,分离选择性好;
（4）适于梯度洗脱;
（5）载样量大. 3、使用注意事项： （1）使用硅胶基质的键合相pH应维持在2-8;硅-碳杂化 硅胶等为基质的键合相pH范围宽（2-12）；
（2）不同厂家，不同批号的同类键合相也可表现不同 的色谱特性。
（3）极性键合相：常用氨基、氰基键合相。是分别 将氨丙硅烷基和氰乙硅烷基键合在硅胶是制成。一般用 作正相色谱固定相。 氰基键合相。对双键或含双键的环状化合物有较好 的分离能力。 氨基键合相对糖类化合物的分离选择性好。在酸性 介质中它是一种弱阴离子交换剂，能分离核酸。不宜分 离带羰基的物质
2、键合相的特点
高效液相色谱法的检测器要求：灵敏度高、噪声 低、线性范围宽、重复性好和适用范围广。
1、紫外检测器简介： 灵敏度较高、噪声低、线性范围宽，对流速 和温度的波动不灵敏，还适用于制备色谱。 工作原理：是朗伯比尔定律，即组分的浓度与吸 光度成正比。 2、紫外检测器分类：
分析实验报告 高效液相色谱
华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼学号：20082401129专业：化学年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型：综合实验时间：2010/416一、[实验目的:]1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术二、[实验原理:]高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。
它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。
具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。
其基本原理：利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、[仪器和试剂:]1.主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测PhenomenexO柱]；10μL微量注射器2、试剂：甲醇、水苯和甲苯混合待测溶液苯标准溶液：2.0μL/mL甲苯标准溶液：2.0μL/mL苯、甲苯混合标准溶液：1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL、10.0μL/mL 四、[实验步骤]1、按操作规程开机。
2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件通过调节溶剂甲醇和水的混合比例，从而来优化色谱调剂。
调好最佳色谱条件，控制流速为1ml/min 。
柱温30℃，检测波长354nm 3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器分别进样10μL 苯和 甲 苯混合待测溶液，10μL 苯标准溶液（2.0μL/mL）和10μL 甲苯标准溶液（2.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。
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高效液相色谱法测定萘乙酸的含量
一、实验目的
1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
二、实验原理
将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。
如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。
三、仪器和试剂
1、Agilent 1100高效液相色谱仪。
2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。
3、流动相：H2O和CH3OH
4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、
5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。
5、未知物萘乙酸
6、平头微量注射器。
四、实验步骤
1、开机
(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；
(2) 打开打印机和计算机的电源；
(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；
(4) 打开工作站。
2、编辑方法
(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：
(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；
(b）检测器对话框：设定波长337 nm。
(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。
(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。
3、进样
(1）用样品洗注射器；
(2）先进标准样品，绘制标准曲线；
(3）再进未知物萘乙酸，测定含量。
4、分析结束，打印结果报告。
5、关闭检测器。
6、如果使用缓冲溶液，则先用90%水清洗色谱系统30分钟以上，再用甲醇清洗30分钟以上。
7、退出工作站，关闭“CAG Boot Up Server”。
8、依次关闭主机，稳压电源，计算机和打印机。
五、结果处理
1、确定未知样萘乙酸的出峰时间。
2、绘制标准曲线。
3、求未知物萘乙酸的浓度。
六、思考题
1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？
2、高效液相色谱柱一般可在室温进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？。