高效液相色谱法定性定量分析

高效液相色谱法测定萘乙酸的含量

一、实验目的

1、学习高效液相色谱仪的操作。

2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。

3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。

二、实验原理

将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。

三、仪器和试剂

1、Agilent 1100高效液相色谱仪。

2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。

3、流动相：H2O和CH3OH

4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、

5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。

5、未知物萘乙酸

6、平头微量注射器。

四、实验步骤

1、开机

(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；

(2) 打开打印机和计算机的电源；

(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；

(4) 打开工作站。

2、编辑方法

(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：

(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；

(b）检测器对话框：设定波长337 nm。

(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。

(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。

(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。

3、进样

(1）用样品洗注射器；

(2）先进标准样品，绘制标准曲线；

(3）再进未知物萘乙酸，测定含量。

4、分析结束，打印结果报告。

5、关闭检测器。

6、如果使用缓冲溶液，则先用90%水清洗色谱系统30分钟以上，再用甲醇清洗30分钟以上。

7、退出工作站，关闭“CAG Boot Up Server”。

8、依次关闭主机，稳压电源，计算机和打印机。

五、结果处理

1、确定未知样萘乙酸的出峰时间。

2、绘制标准曲线。

3、求未知物萘乙酸的浓度。

六、思考题

1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？

2、高效液相色谱柱一般可在室温进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？