甲型血友病分析

基因的过度表达，从而达到治疗疾病的目的。 2.基因治疗的遗传病条件：
1).已知疾病的分子缺陷确定所涉及的基因或疾病的生化基础。 2).确保基因操作可以准确纠正表型异常。 3).明确了解目的基因及其表达产物。 4).治疗基因( therapy gene )或正常基因得到克隆。 5). 能安全高效的导人基因并有效调节其表达。 6).基因治疗的安全性得到ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物试验和临床前研究的证实。 7).与其他治疗方法相比，基因治疗具有更有利的风险-效益比。
1.通过该产前基因诊断结果 是否可以判断该孕妇 所孕胎儿患有甲型血友病？能否判定胎儿性别？
可以判断患有甲型血友病：PCR与RFLP结合 起来扩增FVIII基因内含Bcll和Xbal多态性位点的两 个DNA片段；酶切后可根据酶切图谱分析这两个多 态性位点的存在与否作为正常与血友病基因的遗传 标志，通过家系连锁分析进行产前及基因携带者的 基因诊断。
引起血液凝固障碍，导致出血倾向。 2)分类：
①重型，血浆凝血因子Ⅷ活性小于正常的 1% ; ②中度，血浆凝血因子Ⅸ活性约为正常的 1 ~ 5% ; ③轻型，血浆凝血因子Ⅷ活性高于正常的5% 。
四2.基因治疗概念以及适用遗传病的条件
1基因治疗(gene therapy ) 运用重组DNA技术，将基因材料导人靶细胞，以替代或补偿缺陷基因的功能，或抑制
母亲： XAXa
X 父亲：XAY
XAXA XAY
XAXa XaY
男孩和女孩患该病的概率分别为：1/2和0.
三，临床上还有哪些疾病可以采取类似的方法进行 产前诊断？
1.羊膜穿刺方法介绍； 2.对羊膜穿刺可以进行产前诊断的疾病； 3.产前诊断的其他取材方法介绍；
三1.羊膜穿刺介绍
羊膜穿刺（amniocentesis）羊水取样
可直接检测胎儿血液系统指标 适用于较大孕周。 4）缺点： 操作难度更大
流产率相对羊水穿刺略高( 1% ~2%)，并发症更多。
三3.其他产前诊断的取材方法
胎儿活体组织检查（目前基本弃用）
1）分类：胎儿镜下活体组织检查 （16 ~ 20 周) 超声引导下活体组织检查。(16~22周)
2）适用范围： 先天性代谢障碍和遗传病 大疱松懈症 某些肝酶代谢障碍疾病 杜氏假肥大性肌营养不良症( DMD)
5）羊膜腔感染的诊断 诊断有无羊膜腔感染。
三3.其他产前诊断的取材方法
绒毛吸取术
1）原理：孕妇阴道或腹壁从绒毛膜的绒毛中吸取获得胎儿的滋养层细胞。 2）时间：妊娠11~ 13周 3）方法：在超声引导下，取样器经腹部或宫颈进入子宫取材进行各项检测。 4）优点：1.孕早期可做诊断
2.能采取更简单，安全的方法终止妊娠 5）缺点：1.取样术后至孕28周前的流产率为2%~ 3%。
四3.甲型血友病可以用基因治疗的原因；
原因:
1）血友病基因水平上的发病机制已较为清楚 2) 对于患者来说，1%一5%凝血因子就能维持正常凝血 3)凝血因子在血浆中的水平没有很严格的调控，在正常人群中的范 围跨度大 4) 靶器官的可选择范围较宽。 5)凝血因子的相关基因已经克隆分离。 6)构造动物模型时可选用体型较大的动物与人体环境较为相近。
病案介绍：
• 分别抽取该孕妇及其丈夫以及患病长子（先证者） 外周血，提取DNA。同时抽取该孕妇羊水20ml， 按常规方法提取DNA。通过PCR体外扩增DNA和 限制性片段长度多态性（RFLP）连锁分析技术进 行基因诊断，通过特异性核酸内切酶Bcl对扩增 DNA进行酶切后。
产前诊断：
•又称宫内诊断或出生前诊断，是对胚胎或胎 儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形 做出准确的诊断。
1.通过该产前基因诊断结果 是否可以判断该孕妇 所孕胎儿患有甲型血友病？能否判定胎儿性别？
能判定胎儿性别：对高危胎儿可在妊娠12-16 周进行羊水穿刺，获得胎儿DNA基因型和遗传表型 后。应用ZFY/ZFX的同源序列的引物进行双重PCR， 可准确诊断胎儿的性别。
• ZFY/ZFX指
应用PCR技术扩增人ZFX和ZFY基因特异性DNA顺 序,在男性DNA中检测到ZFX基因特异和ZFY基因特异的 两种扩增产物,在女性DNA中仅检测到ZFX基因特异的一 种扩增产物。
2.增加胎儿肢体畸形的风险。 6）相关疾病：小儿先天性高氨血症
三3.其他产前诊断的取材方法
脐带穿刺术( cordocentesis ) 1）时间：妊娠18 ~ 30周进行，最适穿刺孕周为24~ 30周。
2）方法: 先行B型超声检查，穿刺在B超引导下进针至脐静脉后抽取适量 脐静脉血后进行各种检查。 3）优点: 较羊水所需时间更短，成功率更高;
• 限制性片段长度多态性（RFLP) 技术的原理是：检测 DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。
• PCR-RFLP 是将PCR 技术、RFLP 分析与电泳方 法联合应用，先将待测的靶DNA 片段进行复制扩 增，然后应用DNA 限制性内切酶对扩增产物进行 酶切，最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而 分型。
病例分析
——临床病例2
病案介绍： • 孕妇，38岁，孕2产1，孕15周+2天。曾于8年前
生育一男孩，于6岁时因齿龈、舌、口腔、鼻经常 出血，膝、踝、肘等部位常于轻微外伤后出现瘀 斑或出血不止现象而被确诊患有甲型血友病。家 族史调查显示，本人与其丈夫非近亲婚配，该孕 妇的一个哥哥曾患类似病症于2年前死亡，其他家 庭成员未出现类似症状。因担心再次生育甲型血 友病患儿，要求进行产前诊断。
是由凝血因子VIII即抗血友病球蛋白（AHG） 缺乏导致的，因此又称抗血友病球蛋白缺乏症或第 VIII因子缺乏症。
遗传方式：X连锁隐性遗传；由女性传递，男 性发病，发病率约为1/5000的男性活婴，女性患者 极为罕见。
2.1该孕妇每生育一次，其生育男孩和女孩患有甲 型血友病的概率分别是多少？
由下列分析可知：
血友病的种类：
• 1、甲型血友病：凝血因子VIII即抗血友病球蛋白 （AHG）缺乏，为XR。
• 2、乙型血友病：凝血因子IX即血浆凝血活酶 （PTC）缺乏，为XR。
• 3、丙型血友病：凝血因子XI缺乏，为AR。 • 4、血管性假血友病：vWF因子缺乏，为AD或AR。
• PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、 引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合 酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的 寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延 伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数 增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因 片段。
Thank you
采用ZFX/ZFY扩增系统进行性别鉴定的优点为:①检 测X、Y两条性染色体,无假阴性结果;②ZFY基因位于Y染 色体短臂,不受Y染色体长臂正常变异影响;③ZFY基因邻 接TDF基因,适于性反转受检者;④扩增产物可经电泳直接 区分。
2.甲型血友病是由于哪种蛋白质出现异常而导致的 疾病？其遗传方式是什么？
1）原理：羊水中有一定数量胎儿脱落细胞， 多数为成纤维细胞和上皮细胞。
2）时间：最佳时间是妊娠16~ 22*6周 3）方法: B超监视下进行，孕妇排空膀胱，
专用穿刺针经腹壁、子宫壁进人羊膜腔， 抽取淡黄色清亮的羊水约20ml,按需要立即送检。 4）优点:安全性最高 5）缺点：可能会出现阴道血、羊水溢出或子宫持续性收缩
3）优点：用于某些需要特定组织采样的疾病 4）缺点：流产发生率较高
并发症的发生率也较高
四，经产前诊断确诊患有甲型血友病的胎儿，如出 生后是否可以采用基因治疗？
1.甲型血友病机制及临床表现 2.基因治疗概念以及适用遗传病的条件 3.甲型血友病可以用基因治疗的原因
四1.甲型血友病机制及分类：
1)机制: 因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ缺乏均可使凝血过程的第一阶段中的凝血活酶生成减少，
三2.对羊膜穿刺可以进行产前诊断的疾病
1）胎儿先天性疾病的诊断 诊断胎儿染色体病、单基因病等。
2）胎儿代谢性疾病的诊断 测定羊水中相关酶的浓度进行宫内代谢性疾病诊断。
3）胎儿神经管缺陷 胎儿开放性神经管畸形(主要包括:无脑儿、脊柱裂)的诊断。
4）胎肺成熟度的检测 确定胎儿肺是否成熟，有助于对终止妊娠的时机进行选择。