5、了解生物素 - 亲和素系统的特点
生物素亲和素系统的特点
生物素亲和素系统的特点生物素亲和素系统是一种重要的蛋白质相互作用系统，其特点是高度特异性、高亲和力和可逆性。
它在生物学研究和生物工程中有着广泛的应用。
生物素亲和素系统是由生物素和生物素结合蛋白（biotin-binding protein）相互作用而形成的。
生物素是一种小分子有机物，是一种维生素B7，也称为维生素H。
生物素结合蛋白是一种特异性结合生物素的蛋白质，它存在于许多生物中，包括细菌、真菌、植物和动物。
生物素亲和素系统的特点主要有以下几个方面。
1. 高度特异性：生物素亲和素系统的结合是高度特异的，即只有生物素与生物素结合蛋白之间的相互作用才能发生。
这种特异性是由于生物素与生物素结合蛋白之间的非共价相互作用，如氢键、疏水相互作用和离子相互作用等。
这种特异性使得生物素亲和素系统在生物学研究和生物工程中能够准确地识别和分离目标蛋白。
2. 高亲和力：生物素与生物素结合蛋白之间的结合具有很高的亲和力。
生物素与生物素结合蛋白之间的结合常数（Kd）通常在纳摩尔或皮摩尔级别，表明它们之间的结合是非常紧密的。
这种高亲和力使得生物素亲和素系统能够在生物样品中高效地捕获目标蛋白，并且能够通过洗脱等步骤将非特异性结合的蛋白去除，从而实现对目标蛋白的高纯度分离。
3. 可逆性：生物素与生物素结合蛋白之间的结合是可逆的。
这意味着在适当的条件下，生物素与生物素结合蛋白之间的结合可以被打破，从而使得目标蛋白得以释放。
这种可逆性使得生物素亲和素系统能够在目标蛋白的纯化和分析过程中进行多次结合和释放，提高了操作的灵活性和效率。
生物素亲和素系统的应用非常广泛，主要包括以下几个方面。
1. 蛋白质纯化：生物素亲和素系统可以通过生物素与目标蛋白的特异结合来实现对目标蛋白的高效纯化。
在蛋白质纯化过程中，通常将生物素结合到目标蛋白上，然后使用生物素亲和素树脂等介质将目标蛋白捕获，最后通过洗脱步骤将纯的目标蛋白分离出来。
2. 蛋白质相互作用研究：生物素亲和素系统可以用于研究蛋白质之间的相互作用。
简述生物素亲和素系统的特点
简述生物素亲和素系统的特点嘿，今天咱来聊聊这个生物素亲和素系统！你可别小看它，这玩意儿那可是相当有特点嘞！
要说这生物素亲和素系统，就像是一对超级合拍的好搭档。
首先呢，它们之间的亲和力强得很呐！硬要形容的话，就像是两块强力磁铁，“啪”一下子就吸到一块儿了，那叫一个紧密！这就意味着它们一旦牵手，那轻易可就不会松开哟，别提多牢固啦。
然后呢，这系统还特别敏感！就像是那种对周围动静特别在意的小机灵鬼儿。
只要稍微有点风吹草动，它就能迅速做出反应。
这种敏感度简直逆天了，别的系统可能还在那儿迷迷糊糊呢，它就能第一时间察觉到情况。
嘿，你知道吗？它还特别神通广大。
想象一下，它就如同一个万能连接器，可以把各种不同的东西都给串起来。
不管是蛋白质啦，还是别的啥玩意儿，它都能给完美地连接起来，厉害吧？这能力，简直就是生物界的“月老”，专门负责牵红线的！
而且哦，这个系统还超级稳定呢！就跟那泰山似的，任凭风吹雨打，它就是稳稳当当的。
不管周围环境怎么变，它都能坚定不移地发挥自己的作用。
咱再说说它的效率，那真是杠杠的！一旦运作起来，那速度就跟火箭似的，“嗖嗖”就把事情给搞定了。
别的系统可能还在慢悠悠地晃悠呢，它早就跑完一圈回来休息啦。
说起来，要是咱们生活中也有这种像生物素亲和素系统一样厉害的东西该多好啊！啥东西都能快速、牢固、敏感地结合在一起，那得省多少事儿啊！总之，这个生物素亲和素系统可真是不简单呐，小小的身体里蕴含着大大的能量和特点。
真是让咱不得不佩服大自然的神奇和智慧嘞！希望科学家们能好好利用它的这些特点，给咱的生活带来更多的惊喜和便利哟！是不是挺有趣的呀？嘿嘿。
9章生物素亲和素
生物素活化
标记蛋白质醛基的活化生物素
标记蛋白质巯基的活化生物素
活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物
标记蛋白质氨基的活化生物素
标记核酸的活化生物素
三、生物素标记蛋白质
1. 标记方式 生物素化蛋白质衍生物有二类： 一种是生物素化的大分子生物活性物 质（如生物素化抗原、抗体） 另一种是标记材料（如酶）结合生物 素后制成的标记物（如生物素 化酶）。
亲和素与链霉亲和素不同点
特点 等电点 分子量(KD) 是否有糖基 非特异吸附
AV 10.5 67 有 多
SAV 6 .0 65 无 少
三、SA和SAV的标记物 几乎所有用于标记的物质均可以同AV和 SAV结合， 125I、胶体金、荧光素、化学发光物 等 小分子物质 酶、抗原、抗体等大分子物质
BAS技术基本类型
1.BAB法（biotin--avidin bind，BAB ）， 也称为桥联亲和素－标记生物素法 （BRAB） 2.标记亲和素-生物素法（BA） （labeledavidin-biotin，LAB）
BAS技术基本类型
BAB法
（biotin--avidin bind，BAB）
及既可偶联生物大分子，又可连接荧光
素、酶等标记材料的特性，使该系统在
标记免疫分析技术领域中的应用具有很
强的稳定性和适用性。
第二节
生物素的理化性质及其标记物
一、生物素的特性 生物素（biotin，B）又称维生素H，辅酶R 分子量-----244.31 广泛分布于动、植物组织中，常从含 量较高的卵黄和肝组织中提取。生物素分 子有两个环状结构
主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十一章 生物素-亲和素放大技术
第十一章生物素-亲和素放大技术第一节生物素的理化性质与标记生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。
生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。
生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。
一、活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。
生物素活化后，可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物素N-羟基丁二酰亚胺醣（BLAHS）。
BLAHS分子酯键中的—C-=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键。
从而使蛋白质标记上生物素。
（二）标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。
BHZ是水合肼与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。
（三）标记蛋白质巯基的活化生物素3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。
（四）标记核酸的活化生物素活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。
二、生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：1.生物素化的大分子活性物质，如抗原、抗体。
2.标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
（二）标记方法1.标记抗体、抗原选用第二抗体进行生物素标记，制备的标志物具有通用性。
2.标记酶生物素标记辣根过氧化物酶第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。
生物素亲和素
分子式：C10H16O3N2S 分子量：244.31 等电点：PH=3.5 溶解特性：难溶于水，易 溶于二甲基甲酰胺(DMF) 两个环状结构： I环（咪唑酮环）为与亲 和素结合的主要部位； II环（噻吩环）为结合抗 体和其它生物大分子的部 位，C2上戊酸侧链的未端 羧基是结合生物大分子的 唯一结构
分子量：68 000
比活性：A≥12u/mgP
亲和常数：1015/mol
生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接后， 再与无水肼反应而成。 除醛基外， BCHZ还可标记氨基
标记特点：BHZ与蛋白质中的 醛基结合而标记
马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB)：
能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素
活化生物素可克服以上缺点，既减少空间位阻 效应，又可扩大其结合的对象。
生物素侧链的末
端羧基经化学修
饰后制成带各种 活性基团的衍生
物－活化生物素
(生物素化衍生 物)
标记蛋白质氨基的活化生物素
N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS） 长臂活化生物素（BCNHS）
活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物
注意事项：
选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基 团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性；
控制生物素：蛋白质比例 生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1，IgG应用浓度 0.5~5μg/ml；生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab； 使用交联臂减少空间阻力
概念：是动物微生物中提取的一种含10%碳水化物的碱性糖 蛋白，可由蛋清中提取。 主要包括：卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素 等。后两种因其特异性亲合力低，研究不多，前两种目前已 深入研究并得到广泛应用。 结构：4个相同亚基组成的四聚体糖蛋白，富含色氨酸，它 是与生物素结合的基团。
临床医学检验临床免疫：免疫组织化学技术考试题库真题
临床医学检验临床免疫：免疫组织化学技术考试题库真题1、单选免疫组织化学技术中，对固定剂的要求不包括（）A.能快速固定抗原B.能防止抗原物质扩散C.固定后的抗原能被抗体识别D.具有氧化活性E.固定后不影（江南博哥）响抗原抗体反应正确答案：D2、单项选择题生物素－亲和素系统的特点不包括（）A.灵敏度高B.特异性好C.适用广泛D.稳定性高E.无需活化正确答案：E3、单选免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）A.对细胞超微结构完好保存B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位C.保持其抗原性不受损失D.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合E.以上叙述都正确正确答案：E4、单选斑点ELISA与常规ELISA比较不同之处在于（）A.二者实验原理不同B.二者所用固相载体不同C.二者所用酶不同D.二者所用酶标抗体不同E.以上都不对正确答案：B5、单选免疫组化技术中非特异性染色的特点不包括（）A.细胞和细胞间质均匀染色B.染色无特定部位C.染色具有结构性D.某一片均匀着色E.无分布规律正确答案：C6、单选用直接免疫荧光法检测T细胞上CD4抗原，荧光素应标记在（）A.CD4抗原上B.CD4单克隆抗体上C.固相载体上D.抗人Ig抗体上E.某种动物红细胞上正确答案：B7、单选石蜡包埋材料用酶处理的目的（）A.防止出现假阳性B.增大抗原的保存量C.裸露抗原的决定簇D.分解蛋白质E.消化石蜡表面正确答案：C8、单选免疫组化技术中固定标本的目的不包括（）A.使细胞内蛋白质固定B.终止细胞内酶反应C.防止细胞自溶D.去除干扰抗原抗体反应的类脂E.促进组织细胞中抗原的释放正确答案：E9、单选下列关于酶免疫组织化学技术的叙述中错误的是（）A.敏感性比免疫荧光标记技术高B.可用普通光学显微镜观察结果C.不能用电子显微镜观察结果D.便于对组织细胞微结构作分析E.染色标本可长期保存正确答案：C10、单选石蜡切片的优点不包括（）A.切片薄有连续性B.可长期保存C.防止抗原损失D.用于回顾性研究E.观察组织细胞结构的理想方法正确答案：C11、单选下列关于组织取材说法错误的是（）A.取材部位必须是主要病变区B.活检钳的刃口必须锋利，以免组织受挤压C.可选病灶区与正常组织交界区以外的区域D.必要时取远距病灶区的正常组织做对照E.组织标本可取活组织检查标本正确答案：C12、单选用免疫荧光技术直接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记（）A.抗原B.相应抗体C.抗免疫球蛋白杭体D.抗原－抗体复合物E.抗C抗体正确答案：B13、单选荧光抗体保存3～4年，应选择（）A.小量分装、4℃B.瓶分装、4℃C.瓶分装、－10℃D.小量分装、－20℃E.瓶分装、－20℃正确答案：D14、单选下列不符合荧光免疫技术直接法的描述是（）A.荧光抗体直接加于标本上B.常用于抗核抗体的检测C.每检查一种抗原需制备特异的荧光抗体D.灵敏度偏低E.特异性高，非特异荧光染色因素少正确答案：B参考解析：荧光免疫技术直接法检查抗原时，是用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。
免疫组织化学技术题库3-1-8
免疫组织化学技术题库3-1-8问题：[单选]生物素－亲和素系统的特点不包括（）A.灵敏度高B.特异性好C.适用广泛D.稳定性高E.无需活化问题：[单选]免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）A.对细胞超微结构完好保存B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位C.保持其抗原性不受损失D.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合E.以上叙述都正确问题：[单选]石蜡包埋材料用酶处理的目的（）A.防止出现假阳性B.增大抗原的保存量C.裸露抗原的决定簇D.分解蛋白质E.消化石蜡表面(安徽11选5 https://)问题：[单选]为了保证免疫荧光细胞化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次实验时进行对照试验。
下列选项中不必要的是（）A.自身对照B.吸收试验C.阴性对照D.阳性对照E.补体对照为保证免疫荧光组织化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，在实验中通常针对第一抗体设立对照，包括阳性对照、阴性对照、替代对照、自身对照和吸收试验等。
【考点】：免疫组织化学设立的对照试验问题：[单选]关于免疫组织化学技术的应用，下列说法错误的是（）A.对于细胞抗原性物质能准确、敏感地进行检测和定位B.在细胞学中主要用于菌种鉴定和抗原结构的研究C.检测人体大多数寄生虫，且具有特异性高和敏感性好等优点D.确定肿瘤的组织学发生，进行肿瘤的转移性和特异性的鉴别E.应用免疫荧光抗体直接法可以检出自身免疫疾病患者血中的自身抗体免疫组织化学技术的应用为：①对于细胞抗原性物质能准确、敏感地进行检测和定位。
②在细胞学中主要用于菌种鉴定和抗原结构的研究。
③检测人体大多数寄生虫，且具有特异性高和敏感性好等优点。
④确定肿瘤的组织学发生，进行肿瘤的转移性和特异性的鉴别，辅助识别肿瘤的良、恶性，癌前病变和癌。
⑤应用免疫荧光抗体间接法可以检出自身免疫疾病患者血中的自身抗体。
问题：[单选]CT成像原理利用的是（）A.多方位成像特性B.横断面图像显示特性C.X线的吸收衰减特性D.数据采集系统（DAS）特性E.X线透过被照体之后的直进性问题：[单选]免疫组织化学染色，为最大限度保存抗原的免疫活性，不宜使用的固定剂是（）A.醛类固定剂B.非醛类双功能试剂C.丙酮D.醇类固定剂E.含重金属的固定剂蛋白类抗原，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需去除病毒的蛋白质外壳，可使用胰蛋白酶；多糖类抗原用10%福尔马林（甲醛溶液）固定或加热固定；如有黏液物质存在，应用透明酸酶等处理去除；类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂（乙醚、丙酮等）处理去除类脂。
生物素-亲和素系统elisa法
生物素-亲和素系统ELISA法是一种基于生物素和亲和素之间高度特异性和高亲和力的免疫检测方法。
这种方法利用生物素和亲和素之间的结合反应，将抗原或抗体与生物素结合，再通过亲和素与生物素之间的结合反应，将抗原或抗体固定在固相载体上。
在ELISA中，生物素-亲和素系统可以用于提高检测的灵敏度和特异性。
首先，亲和素与生物素之间的结合反应非常稳定，可以减少非特异性结合，提高检测的特异性。
其次，每个亲和素可以结合4个生物素，使得反应信号放大，提高检测的灵敏度。
生物素-亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，包括用于固相化抗体或抗原的制备、用于ELISA终反应的放大等。
在固相化抗体或抗原的制备中，先将亲和素（或链霉亲和素）包被于固相载体，抗体或抗原也先与生物素结合，然后通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。
在ELISA终反应的放大中，用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，然后连接亲和素-酶结合物（BA-ELISA）、或亲和素及酶标生物京（BAB-ELISA）或ABC试剂（ABC-ELISA），从而使反应信号放大，提高检测灵敏度。
总之，生物素-亲和素系统ELISA法是一种灵敏度高、特异性好的免疫检测方法，可以用于各种抗原或抗体的检测。
2023年检验类之临床医学检验技术(师)高分题库附精品答案
2023年检验类之临床医学检验技术（师）高分题库附精品答案单选题（共50题）1、ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是A.酶标记的抗体B.酶标记的抗原C.未标记的已知抗原D.未标记的已知抗体E.未标记的抗抗体【答案】 C2、病人严重腹泻常可引起（）A.血中COB.血NaC.代谢性碱中毒D.低血钾E.血液pH↑【答案】 D3、不属于粪便病理成分的是A.RBCB.WBC.黏液D.阿米巴原虫E.虫卵【答案】 C4、脑出血时CSF的特点是A.出现血凝块B.二管均呈红色，一管无色C.离心后，上清液呈黄色D.离心后，上清液无色E.迅速形成薄膜【答案】 C5、骨髓纤维化A.外周血见泪滴细胞B.外周血中有较多的嗜酸、嗜碱性粒细胞C.外周血有大量的靶形红细胞D.外周血有大量的球形红细胞E.外周血有大量的原始细胞【答案】 A6、下列关于NK细胞的叙述正确的是A.NK细胞形态具有异质性，所有的LCL细胞均为NK细胞B.具有非特异杀伤作用，但无MHC限制性C.对所有肿瘤细胞均有作用D.NK细胞发源于骨髓干细胞，其发育、成熟依赖胸腺微环境E.NK细胞不具有细胞介导的细胞毒作用【答案】 B7、不属于宫颈鳞状上皮癌低分化鳞癌形态特征的是A.癌细胞多成群出现B.核畸形明显C.细胞体积大，胞质丰富，多数有角化D.胞核呈不规则形E.核质比明显增大【答案】 C8、急诊测定生化项目时应用的抗凝剂是（）。
A.草酸盐B.肝素C.枸橼酸钠D.氟化钠E.EDTA【答案】 B9、甘油三脂与冠心病关系的叙述，错误的是（）。
A.富含甘油三酯的脂蛋白在动脉粥样硬化中起重要作用B.高甘油三酯血症常伴HDL-C水平升高C.血浆甘油三酯升高是冠心病发生的一个独立危险因素D.甘油三酯以VLDL循环于血中，VLDL如转变为小而密LDL，则致动脉粥样硬化能力增加E.甘油三酯增高反映了CM和/或VLDL水平增高【答案】 B10、对放线菌叙述正确的是A.革兰阴性菌B.抗酸性为阴性C.触酶试验阳性D.可产生吲哚E.分解脲素【答案】 B11、质粒的本质是A.染色体DNAB.胞质颗粒C.染色体外DNAD.胞质中核糖体E.中介体【答案】 C12、在感染的病灶组织压片镜检时见到呈菊花状的菌丝是A.放线菌B.麻风菌C.真菌D.链霉菌E.链丝菌【答案】 A13、尿酮体中乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮分别约占A.2%、78%、20%B.20%、78%、2%C.78%、2%、20%D.2%、20%、78%E.78%、20%、2%【答案】 B14、系统性红斑狼疮（SLE）的标志性抗体是（）。
生物素-亲和素
生物素-亲和素生物素－亲和素系统（Biotin-Avidin System，以下简称BAS）是半个世纪前发现的一种新型生物反应放大系统。
生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏，生物素－亲和素系统目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。
生物素（D-biotin）分子结构见图，分子量244.31Da．生物素分子有两个环状结构（如下左图），其中咪唑酮环是与亲和素结合的主要部位；噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素（如下右图）亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD。
4个相同的亚基使每个亲和素能最多可结合4个分子的生物素。
生物素与亲和素之间具有极强的亲和力，比抗原与抗体间的亲和力高得多。
并且，二者的结合稳定性好、专一性强。
生物素－亲和素系统有哪些优点：灵敏度生物素易与蛋白质、核酸类及其他生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且具有多价性。
此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。
因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性亲和素与生物素间的结合呈高度特异性。
因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。
而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响。
因此，在实际应用中可**限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白水解酶以及有机溶剂均不影响其结合。
因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。
生物素-亲和素免疫放大技术
第十一章生物素 -亲和素免疫放大技术一、生物素 - 亲和素系统的特点灵敏度高，特异性好，稳定性高，适用广泛。
二、生物素的理化性质与标记（一）生物素及其活化1.标记蛋白质氨基的活化生物素N- 羟基丁二酰亚胺酯（ BNHS）2. 标记蛋白质醛基的活化生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）3.标记蛋白质巯基的活化生物素3- （ N-马来酰亚胺 - 丙酰） - 生物胞素（ MPB）4.标记蛋白质核酸的活化生物素常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和 BHZ。
（二）生物素标记蛋白质生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
标记方法：（ 1）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是BNHS；对于偏酸性的抗原，标记时多采用 BHZ。
（ 2）标记酶：以生物素标记HRP为例。
标记注意事项：（ 1）应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件；（2）标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；（3）为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；（4）生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。
三、亲和素、链霉亲和素理化性质与标记1.亲和素及其活性：活性基团 - 色氨酸。
2.链霉亲和素及其活性：活性基团- 色氨酸。
3.亲和素、链霉亲和素的标记：最常用的是酶、FITC 和胶体金。
亲和素的标记（链霉亲和素的标记）（1） HRP-亲和素结合物的制备：改良过碘酸钠法，戊二醛法；（2）亲和素 - 生物素化HRP复合物的制备；（3）亲和素 - 生物素化碱性磷酸酶复合物的制备。
四、生物素 - 亲和素系统的应用1.生物素 - 亲和素系统基本类型及原理：基本类型有两种，一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶复合物技术（ ABC）。
19章---生物素-亲合素系统及其在免疫检测技术中的应用
(2)生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP）：作为 TTP的结构类似物，可采用缺口移位法通过DNaseⅠ 和DNA聚合酶Ⅰ的作用而掺入到双链DNA中。 (3) BNHS和BHZ：与核酸胞嘧啶分子中的N-4位
氨基结合，形成生物素标记的核酸探针，但对碱基
配对有影响。（不常用）
生物素标记蛋白质特点
活化生物素通过侧链与蛋白分子连接；
化酶的步骤。
BSA在酶免疫测定中的应用 BSA在荧光免疫技术中的应用 BSA在放射免疫测定中的应用
BAS在化学发光免疫分析中的应用
BAS在胶体金免疫技术中的应用
BSA在分子生物学中的应用
BAS在其它方面的应用：分子和细胞的分离与纯 化、肿瘤诊断与治疗、增强杂交细胞融合率等
小
结
生物素为B族水溶性维生素，Ⅰ环咪唑酮环是与AV/SA结 合部位，Ⅱ环噻吩环戊酸侧链末端羧基可结合生 物大分子 。经化学修饰后带活性基团成为活化生物素。 AV或SA是生物素天然特异性结合物，均为大分子蛋白， 由四个相同亚基构成，可结合4个生物素分子。 生物素与AV/SA结合具有亲合力高、特异性强、敏感性 高、稳定性好等特点，使BAS适应性广、实用性强。 生物素和AV/SA均可与各种标记分子结合如Ab、酶。 1个AV/SA 可与4个生物素化物结合及一个生物大分子可 与多个生物素分子结合，使BAS具有多级放大效应，可极大 地提高分析测定的灵敏度。
1.生物素-链霉亲合素-生物素化抗体(或Ag)包被法 纳米 微球
生物素化牛血清 白蛋白(BSA)
通过B-BAS将抗体间 接包被在固相载体上
生物素化抗体
亲合素
生物素化-BSA 致敏微球
2.链霉亲合素-生物素化抗体（或抗原）包被法
纳米 微球
生物素亲和素系统的特点
生物素亲和素系统的特点生物素亲和素系统（Biotin-Avidin System）是一种广泛应用于生物学和生物化学研究中的特殊化学结合系统。
它的特点是高度特异性、强大的亲和力和稳定性，被广泛用于生物分析、生物传感和生物分离等领域。
生物素亲和素系统的特点主要可以从以下几个方面进行解释和描述。
1. 特异性：生物素亲和素系统的特异性是指生物素与亲和素的结合具有高度特异性。
生物素是一种维生素B家族成员，具有特定的化学结构，可以与亲和素（如avidin、streptavidin等）非常稳定地结合在一起。
这种结合是非常特异的，只有生物素与亲和素之间的结合才能发生，其他分子无法与亲和素结合。
2. 强大的亲和力：生物素与亲和素之间的结合具有非常强大的亲和力。
生物素和亲和素之间的结合是通过非共价键的相互作用实现的，包括静电相互作用、疏水相互作用和范德华力等。
这些相互作用使得生物素与亲和素之间的结合非常牢固和稳定，可以在不同的条件下保持结合不变性。
3. 稳定性：生物素与亲和素之间的结合非常稳定，可以在很宽的条件下保持结合不变性。
生物素与亲和素之间的结合可以在宽范围的pH值、温度和离子强度下保持稳定。
这使得生物素亲和素系统可以在不同的实验条件下应用，并保持稳定的结合性能。
4. 可逆性：生物素与亲和素之间的结合是可逆的。
这意味着在一定条件下，生物素与亲和素之间的结合可以解离，恢复到原来的状态。
这种可逆性使得生物素亲和素系统可以在需要的时候进行结合和解离，实现对目标分子的控制和调控。
生物素亲和素系统的特点使其在生物学和生物化学研究中得到了广泛的应用。
具体来说，生物素亲和素系统可以用于以下几个方面的研究和应用。
1. 生物分析：生物素亲和素系统可以用于检测和分析生物样品中的目标分子。
通过将生物素与目标分子结合，然后使用标记有荧光物质等检测方法进行检测，可以实现对目标分子的高灵敏度和高特异性的检测。
2. 生物传感：生物素亲和素系统可以用于构建生物传感器，实现对特定分子的检测和监测。
生物素-亲和素系统相关技术3
3、BAS在放射免疫技术中的应用
4、
BAS在分子生物学中的应用
免疫-PCR
免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来 的新方法，用PCR扩增代替ELISA的酶催化 底物显色。
PCR具有很强的放大能力，其可以定量 地检测DNA和RNA，具有非常高的敏感性和 特异性，因此，将与抗原结合的特异抗体通 过连接分子与DNA结合，再经PCR扩增，由 此定量检测抗原使敏感性高于ELISA和RIA。
PCR技术具有高度的灵敏性
PCR产物每轮循环增加一倍
30轮循环
扩增量达230个拷贝（109拷贝）
二、免疫PCR的发展
免疫PCR技术目前尚处于研究阶段，应用的
还不多；
实验表明免疫PCR的敏感性比ELISA高105倍，
且PCR产生的背景信号很弱，可以检测到几 百个分子的抗原，在理论上免疫PCR可以检 测到一个分子抗原，因此，免疫PCR特别适 用于检测一些含量特别少的抗原分子。
1.标记蛋白质氨基：N-羟基丁二酰亚胺酯
（BNHS）、长臂活化生物素（BCNHS）。
2.标记蛋白质醛基：酰肼（BHZ）和肼化生
物胞素（BCHZ）。
3.标记蛋白质巯基：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）
-生物胞素（MPB）。
4.标记核酸：光生物素、生物素脱氧核苷三
磷酸、BNHS和BHZ。
1.标记蛋白质氨基：N-羟基丁二酰亚胺酯
降低ALP的活性。
活化生物素可与不同的大分子物质结合，应
根据可标记基团的种类及特性，选择相应的
活化生物素；
抗体：BNHS
偏酸性抗原：BHZ
核酸：光生物素
一个蛋白质分子可联结多个生物素分子，即
生物素化大分子具有多价性，它是BAS多级 放大作用的物质基础。
生物素-亲和素放大技术
生物素-亲和素放大技术生物素与亲和素之间结合的亲和力高、特异性强，各自均可以与各型大小分子结合，以及两者在结合反应时具有的多级放大作用等优越性。
生物素的理化性质与标记亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记生物素-亲和素系统的特点生物素-亲和素系统的应用生物素的理化性质与标记生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31kD。
活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，使之容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
包括能标记蛋白质氨基、醛基、巯基和核酸的活化生物素。
常用于标记核酸分子的活化生物素有以下几种：1.光敏生物素它是一种化学合成的生物素衍生物，用于DNA或RNA的标记。
2.生物素脱氧核苷三磷酸先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素。
可采用缺口移位法掺入到双链DNA中。
3.BNHS和BHZ 二者均可以在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交联，使核酸分子生物素化。
生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
而且一个蛋白质分子可连接多个生物素分子，从而使其具有较高的比活性，在与亲和素的反应中成为多价。
生物素化大分子的多价性，是BAS多级放大作用的物质基础。
生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
（二）标记注意事项1.选择正确的活化生物素和反应条件；2.应有适当的比例，以免影响被标志物的活性；3.可在生物素与被标志物间加入交联臂样结构；4.不影响被标记物的免疫活性。
亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素（AV）和链霉亲和素（SA）是生物亲和素的天然特异性结合物。
而且，二者均为大分子蛋白，几乎所有用于标记的物质均可以与之结合。
生物素、亲和素标记技术
3 生物素酰肼(BHZ)：
制备：生物素 +水合肼 标记特点： BHZ与蛋白质中的醛基结合而标记
适用：标记偏酸性的蛋白质、酶、DNA
三、亲和素及其理化性质 1 概念 2 分子式 3 结构特点 4 溶解特性 5 等电点 6 其它特性
1 概念： 亲和素(avidin)：是动物微生物中提 取的一种含10%碳水化合物的碱性糖蛋白。 链霉亲和素：是从链球菌属的菌培养 液中提取的一种蛋白质 2 分子量： A: 6.7KD SA: 6~6.5KD
3 结构特点： 咪唑酮环/四氢噻吩环 结合亲和素 侧链末端羧基结合蛋白质
4 溶解特性： 难溶于水，易溶于二甲基甲酰胺(DMF)
5 等电点： PH=3.5 6 其它特性： 羧基需经活化修饰才能结合蛋白质 （羧基活化的生物素，称为活化生物素， 也叫生物素衍生物）
二 生物素衍生物的种类及特性： 1 生物素羟丁酰亚胺酯(BNHS)： DMF 制备：生物素 + N-羟基琥珀酰亚胺 二环己基碳二亚胺 标记特点： BNHS中的羧基与蛋白质中的赖氨酸氨基 结合达到标记的目的
3 结构特点： 每分子由四个亚基组成
4 溶解特性：溶于水，C=5mg/ml 5 等电点： A: PH=10.5 SA: PH= 6.0 6 比活性： A≥12u/mgP SA ≥14u/mgP
四、亲和素的活性及其测定 1 亲和素的活性：是表示亲和素结合生物 素的能力，即：ugB/mgA或ugB/mgSA。
2 活性测定： ⑴ 羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA)法： A(SA) + HABA（红色） B A-B （出现黄色时B的量）
⑵ 分光光度法：
五、生物素标记物及亲和素标记物的制备：
1 生物素标记物的制备： B +Ab/Ag/E 交联剂
亲和素与生物素结合的特点
亲和素与生物素结合的特点
1. 亲和素和生物素结合那可真是超紧密的呀！就像两块吸铁石紧紧吸在一起一样。
比如说在实验室里做检测时，利用它们的这种紧密结合，能精准地检测到我们想要的东西呢，多厉害！
2. 它们结合的特异性简直绝了！就如同钥匙和锁一样，只有特定的它们才能完美匹配。
想想看，要是没有这种特异性，很多生物实验岂不是会乱套啦！
3. 亲和素与生物素结合非常迅速呀，那速度快得惊人！就好像是火箭发射一样“嗖”地一下就完成了。
在一些即时反应的生物过程中，这简直太关键啦，不是吗？
4. 这种结合还特别稳定呢，好似坚固的堡垒一般。
一旦结合上了，很难被轻易破坏呀。
就如同盖好的房子，稳稳地立在那里，给人十足的安全感。
5. 亲和素和生物素结合还有着极高的亲和力哟，那真是亲密无间的感觉呀！好比最好的朋友，总是形影不离。
在生物反应中，这种高亲和力让一切都那么高效呢。
6. 它们的结合能力那是相当强大呀，仿佛是大力士一般。
想想在复杂的生物体内环境中，还能如此有力地结合，多让人惊叹啊！
7. 亲和素与生物素的结合真是神奇呢，好像有一种魔力在吸引着它们。
这不就是大自然的奇妙之处嘛，总是能创造出这么厉害的组合！
8. 哇塞，亲和素和生物素结合的这些特点真的太重要啦！没有它们这样的完美结合，好多生物领域的进展都要受影响呢，你们说是不是呀！
观点结论：亲和素和生物素的结合具有紧密、特异、迅速、稳定、高亲和力、强大结合能力等特点，这些特点使得它们在生物领域中发挥着极其重要的作用，不可或缺呀！。
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此外，依据待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗 体，又分为直接法 BAS 和间接法 BAS 。 （一）BAB 法：也称桥连亲和素 - 标记生物素法（ BRAB ） 直接法： 间接法： （二）ABC 法 直接法 : 间接法： （三）LAB 法 直接法： 间接法： 二、生物素 - 亲和素系统在酶免疫测定中的应用 （一）生物素 - 亲和素系统在 ELISA 中的应用 BA-ELISA BAB-ELISA ABC-ELISA （二）生物素 - 亲和素系统在均相酶免疫测定中的应用
第一节 生物素 - 亲和素系统的特点 可极大提高检测方法的灵敏度 特异性强 稳定性高 适用范围广 实验成本低
第二节 生物素的理化性质与标记 生物素及其活化 一、标记蛋白质氨基的活化生物素 （一）标记蛋白质醛基的活化生物素 （二）标记蛋白质巯基的活化生物素 （三）标记蛋白质核酸的活化生物素 二、生物素标记蛋白质 （一）生物素化蛋白质衍生物的特性 （二）标记方法 1．标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是 BNHS ；对于偏酸性的 抗原，标记时多采用 BHZ 2．标记酶：以生物素标记 HRP 为例 （三）标记注意事项
主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测,用 BAS 制备的亲和吸 附 剂 进 行 基 因 的 分 离 纯 化 以 及 将 免 疫 测 定 技 术 与 PCR 结 合 建 立 免 疫 -PCR(immum-PCR)用于抗原的检测等三方面。
4
小结
（教案末页）
肿瘤是组织细胞非正常增生的结果，肿瘤抗原是表达于肿瘤细胞（肿瘤特异性） 或肿瘤细胞表达、正常组织细胞也表达（肿瘤相关）的抗原。病毒相关肿瘤所表达 的病毒蛋白可被看作是肿瘤抗原的一种，故免疫系统对病毒相关肿瘤在发生早期即 发挥监视作用，早期原发性肿瘤一般处于免疫耐受（忽视）状态。晚期肿瘤阶段， 肿瘤细胞或者抗原进入淋巴组织之后，机体方能产生针对肿瘤抗原的特异性免疫应 答，包括抗体、CTL 和 Th 细胞等。天然免疫系统在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要 作用，被活化的巨噬细胞和 NK 细胞分泌的细胞因子能够抑制肿瘤细胞的增殖，引起 其死亡。还能通过抗体介导 ADCC 或者活化补体发挥作用。 肿瘤细胞通过多种机 制逃避免疫监视，包括表面抗原的调变,MHC 分子的下调和干扰免疫应答等。肿瘤 免疫治疗的关键是激活和诱导机体的抗肿瘤免疫应答。一方面要寻找更多的肿瘤特 异抗原，同时增加肿瘤细胞的免疫原性。通过体外活化淋巴细胞再回输的方法有一 定的疗效，利用肿瘤特异性抗体制备的各种免疫毒素也有较好的应用前景。
1、试述 ABC 法的原理； 2、试述 BAB－ELISA 夹心法测抗原的原理及过程； 3、简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。
复习思考题， 作业题
情况反映及 分析
1、授课内容熟练。 2、授课时结合典型病例，提高学生的兴趣，加深印象。 3、课堂手法演示很重要，多媒体教学以其新颖、直观、内容丰富及灵活的特点深受学 生欢迎，教学效果良好。
在 BAS-HEI 系统中, 预先将作为配体的生物素与酶偶联,形成的生物素－ 酶复合物具有完整的酶活性；亲和素作为特异的酶结合体(类似于抗体), 可 与生物素－酶复合物结合。当生物素－酶复合物与亲和素结合后, 酶因活性 中心受空间位阻作用而失活。
三、生物素 - 亲和素系统在荧光免疫技术中的应用 BAS 用于荧光抗体技术, 通常采用 BA 法, 即用荧光素直接标记亲和素
(或链霉亲和素)；也可采用游离亲和素(或链霉亲和素)搭桥, 两端分别连接 生物素化抗体和荧光素标记的生物素(BAB 法)或荧光标记的抗亲和素(或链 霉亲和素)抗体的夹心法。 四、生物素 - 亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS 主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联, 用于对终反应的放大(BA 法 ): 先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原 (标准 抗原和待测抗原)同时反应, 在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物； 再加入 125I 标记的亲和素(或链霉亲和素)与复合物中的生 物素结合, 最终 使反应信号放大, 进一步提高 IRMA 的灵敏度。 五、生物素 - 亲和素系统在分子生物学中的应用
教学重点、难点： 重点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3、生物素 - 亲和素系统的应用 难点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理
1
教研室审阅意见：
________________（教学组长签名）
________________（教研室主任签名） 2006 年 月 日
教学目的和要求： 1、掌握生物素的理化性质与标记； 2 、掌握生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3 、掌握生物素 - 亲和素系统的应用； 4 、熟悉亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记；
5、了解生物素 - 亲和素系统的特点
大体内容与时间安排，教学方法：课堂讲授 辅以启发式提问，配以多媒体投影 1、概述和特点（0.4 学时）； 2、生物素及其活化（0.6 学时）; 3、生物素-亲和素系统应用（1 学时）。
第三节 亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记 一、亲和素及其活性：活性基团 -- 色氨酸 二、链霉亲和素及其活性：活性基团—色氨酸 三、亲和素、链霉亲和素的标记：最常用的是酶、FITC、和胶体金 （一）亲和素的标记（链霉亲和素的标记） 1．HRP- 亲和素结合物的制备： 改良过碘酸钠法： 戊二醛法： 2．亲和素 - 生物素化 HRP 复合物的制备： 3．亲和素 - 生物素化碱性磷酸酶复合物的制备：
5
基本内容
（教案续页） 辅助手段和时间 分配
2
第十一章 生物素－亲和素系统的特点 一、概述： 生物素： 生物素分子有两个环状结构，其中 I 环为咪唑酮环，是与亲和素 结合的主要部位； II 环为噻吩环， C2 上有一戊酸侧链，其末端羧基是结 合抗体和其他生物大分子的唯一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多 种活性基团的衍生物——活化生物素。 亲和素： 亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵蛋白中提取的一种由 4 个相 同亚基组成的碱性糖蛋白，每个亲和素能结合 4 个分子的生物素，二者的 亲和力极强，比抗原抗体间的亲和力至少高一万倍。
安徽理工大学医学院
School of Medicine
《临床免疫学与免疫学检验》教案首页
第 次课 课程名称 教师
授课时间 临床免疫学与 免疫学检验张荣波 Nhomakorabea教案完成时间
年级
专业技术 职务
专业、层次
授课方式 （大、小）
大班 学时 2 学时
授课题目（章、节）
第十一章 生物素－亲和素放大系统
基本教材或主要参考书 王兰兰 主编《临床免疫学与免疫学检验》（第三版，人民卫生出版社）
第四节 生物素 - 亲和素系统的应用 一、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理 基本类型有两种： 一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和 标记生物素，称为 BAB 法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶 复合物技术（ABC）。 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的 BA 法，或称标记亲和素 - 生物素法（LAB）。