5、了解生物素 - 亲和素系统的特点
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第三节 亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记 一、亲和素及其活性：活性基团 -- 色氨酸 二、链霉亲和素及其活性：活性基团—色氨酸 三、亲和素、链霉亲和素的标记：最常用的是酶、FITC、和胶体金 （一）亲和素的标记（链霉亲和素的标记） 1．HRP- 亲和素结合物的制备： 改良过碘酸钠法： 戊二醛法： 2．亲和素 - 生物素化 HRP 复合物的制备： 3．亲和素 - 生物素化碱性磷酸酶复合物的制备：
1、试述 ABC 法的原理； 2、试述 BAB－ELISA 夹心法测抗原的原理及过程； 3、简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。
复习思考题， 作业题
情况反映及 分析
1、授课内容熟练。 2、授课时结合典型病例，提高学生的兴趣，加深印象。 3、课堂手法演示很重要，多媒体教学以其新颖、直观、内容丰富及灵活的特点深受学 生欢迎，教学效果良好。
5
安徽理工大学医学院
School of Medicine
《临床免疫学与免疫学检验》教案首页
第 次课 课程名称 教师
授课时间 临床免疫学与 免疫学检验
张荣波
教案完成时间
年级
专业技术 职务
专业、层次
授课方式 （大、小）
大班 学时 2 学时
授课题目（章、节）
第十一章 生物素－亲和素放大系统
基本教材或主要参考书 王兰兰 主编《临床免疫学与免疫学检验》（第三版，人民卫生出版社）
教学重点、难点： 重点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3、生物素 - 亲和素系统的应用 难点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理
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教研室审阅意见：
________________（教学组长签名）
________________（教研室主任签名） 2006 年 月 日
教学目的和要求： 1、掌握生物素的理化性质与标记； 2 、掌握生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3 、掌握生物素 - 亲和素系统的应用； 4 、熟悉亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记；
5、了解生物素 - 亲和素系统的特点
大体内容与时间安排，教学方法：课堂讲授 辅以启发式提问，配以多媒体投影 1、概述和特点（0.4 学时）； 2、生物素及其活化（0.6 学时）; 3、生物素-亲和素系统应用（1 学时）。
基本内容
（教案续页） 辅助手段和时间 分配
Fra Baidu bibliotek
2
第十一章 生物素－亲和素系统的特点 一、概述： 生物素： 生物素分子有两个环状结构，其中 I 环为咪唑酮环，是与亲和素 结合的主要部位； II 环为噻吩环， C2 上有一戊酸侧链，其末端羧基是结 合抗体和其他生物大分子的唯一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多 种活性基团的衍生物——活化生物素。 亲和素： 亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵蛋白中提取的一种由 4 个相 同亚基组成的碱性糖蛋白，每个亲和素能结合 4 个分子的生物素，二者的 亲和力极强，比抗原抗体间的亲和力至少高一万倍。
第四节 生物素 - 亲和素系统的应用 一、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理 基本类型有两种： 一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和 标记生物素，称为 BAB 法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶 复合物技术（ABC）。 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的 BA 法，或称标记亲和素 - 生物素法（LAB）。
第一节 生物素 - 亲和素系统的特点 可极大提高检测方法的灵敏度 特异性强 稳定性高 适用范围广 实验成本低
第二节 生物素的理化性质与标记 生物素及其活化 一、标记蛋白质氨基的活化生物素 （一）标记蛋白质醛基的活化生物素 （二）标记蛋白质巯基的活化生物素 （三）标记蛋白质核酸的活化生物素 二、生物素标记蛋白质 （一）生物素化蛋白质衍生物的特性 （二）标记方法 1．标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是 BNHS ；对于偏酸性的 抗原，标记时多采用 BHZ 2．标记酶：以生物素标记 HRP 为例 （三）标记注意事项
(或链霉亲和素)；也可采用游离亲和素(或链霉亲和素)搭桥, 两端分别连接 生物素化抗体和荧光素标记的生物素(BAB 法)或荧光标记的抗亲和素(或链 霉亲和素)抗体的夹心法。 四、生物素 - 亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS 主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联, 用于对终反应的放大(BA 法 ): 先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原 (标准 抗原和待测抗原)同时反应, 在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物； 再加入 125I 标记的亲和素(或链霉亲和素)与复合物中的生 物素结合, 最终 使反应信号放大, 进一步提高 IRMA 的灵敏度。 五、生物素 - 亲和素系统在分子生物学中的应用
在 BAS-HEI 系统中, 预先将作为配体的生物素与酶偶联,形成的生物素－ 酶复合物具有完整的酶活性；亲和素作为特异的酶结合体(类似于抗体), 可 与生物素－酶复合物结合。当生物素－酶复合物与亲和素结合后, 酶因活性 中心受空间位阻作用而失活。
三、生物素 - 亲和素系统在荧光免疫技术中的应用 BAS 用于荧光抗体技术, 通常采用 BA 法, 即用荧光素直接标记亲和素
主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测,用 BAS 制备的亲和吸 附 剂 进 行 基 因 的 分 离 纯 化 以 及 将 免 疫 测 定 技 术 与 PCR 结 合 建 立 免 疫 -PCR(immum-PCR)用于抗原的检测等三方面。
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小结
（教案末页）
肿瘤是组织细胞非正常增生的结果，肿瘤抗原是表达于肿瘤细胞（肿瘤特异性） 或肿瘤细胞表达、正常组织细胞也表达（肿瘤相关）的抗原。病毒相关肿瘤所表达 的病毒蛋白可被看作是肿瘤抗原的一种，故免疫系统对病毒相关肿瘤在发生早期即 发挥监视作用，早期原发性肿瘤一般处于免疫耐受（忽视）状态。晚期肿瘤阶段， 肿瘤细胞或者抗原进入淋巴组织之后，机体方能产生针对肿瘤抗原的特异性免疫应 答，包括抗体、CTL 和 Th 细胞等。天然免疫系统在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要 作用，被活化的巨噬细胞和 NK 细胞分泌的细胞因子能够抑制肿瘤细胞的增殖，引起 其死亡。还能通过抗体介导 ADCC 或者活化补体发挥作用。 肿瘤细胞通过多种机 制逃避免疫监视，包括表面抗原的调变,MHC 分子的下调和干扰免疫应答等。肿瘤 免疫治疗的关键是激活和诱导机体的抗肿瘤免疫应答。一方面要寻找更多的肿瘤特 异抗原，同时增加肿瘤细胞的免疫原性。通过体外活化淋巴细胞再回输的方法有一 定的疗效，利用肿瘤特异性抗体制备的各种免疫毒素也有较好的应用前景。
0.4 学时 0.6 学时 1 学时
3
此外，依据待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗 体，又分为直接法 BAS 和间接法 BAS 。 （一）BAB 法：也称桥连亲和素 - 标记生物素法（ BRAB ） 直接法： 间接法： （二）ABC 法 直接法 : 间接法： （三）LAB 法 直接法： 间接法： 二、生物素 - 亲和素系统在酶免疫测定中的应用 （一）生物素 - 亲和素系统在 ELISA 中的应用 BA-ELISA BAB-ELISA ABC-ELISA （二）生物素 - 亲和素系统在均相酶免疫测定中的应用
1、试述 ABC 法的原理； 2、试述 BAB－ELISA 夹心法测抗原的原理及过程； 3、简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。
复习思考题， 作业题
情况反映及 分析
1、授课内容熟练。 2、授课时结合典型病例，提高学生的兴趣，加深印象。 3、课堂手法演示很重要，多媒体教学以其新颖、直观、内容丰富及灵活的特点深受学 生欢迎，教学效果良好。
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安徽理工大学医学院
School of Medicine
《临床免疫学与免疫学检验》教案首页
第 次课 课程名称 教师
授课时间 临床免疫学与 免疫学检验
张荣波
教案完成时间
年级
专业技术 职务
专业、层次
授课方式 （大、小）
大班 学时 2 学时
授课题目（章、节）
第十一章 生物素－亲和素放大系统
基本教材或主要参考书 王兰兰 主编《临床免疫学与免疫学检验》（第三版，人民卫生出版社）
教学重点、难点： 重点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3、生物素 - 亲和素系统的应用 难点： 1、生物素的理化性质与标记； 2、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理
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教研室审阅意见：
________________（教学组长签名）
________________（教研室主任签名） 2006 年 月 日
教学目的和要求： 1、掌握生物素的理化性质与标记； 2 、掌握生物素 - 亲和素系统基本类型及原理； 3 、掌握生物素 - 亲和素系统的应用； 4 、熟悉亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记；
5、了解生物素 - 亲和素系统的特点
大体内容与时间安排，教学方法：课堂讲授 辅以启发式提问，配以多媒体投影 1、概述和特点（0.4 学时）； 2、生物素及其活化（0.6 学时）; 3、生物素-亲和素系统应用（1 学时）。
基本内容
（教案续页） 辅助手段和时间 分配
Fra Baidu bibliotek
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第十一章 生物素－亲和素系统的特点 一、概述： 生物素： 生物素分子有两个环状结构，其中 I 环为咪唑酮环，是与亲和素 结合的主要部位； II 环为噻吩环， C2 上有一戊酸侧链，其末端羧基是结 合抗体和其他生物大分子的唯一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多 种活性基团的衍生物——活化生物素。 亲和素： 亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵蛋白中提取的一种由 4 个相 同亚基组成的碱性糖蛋白，每个亲和素能结合 4 个分子的生物素，二者的 亲和力极强，比抗原抗体间的亲和力至少高一万倍。
第四节 生物素 - 亲和素系统的应用 一、生物素 - 亲和素系统基本类型及原理 基本类型有两种： 一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和 标记生物素，称为 BAB 法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶 复合物技术（ABC）。 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的 BA 法，或称标记亲和素 - 生物素法（LAB）。
第一节 生物素 - 亲和素系统的特点 可极大提高检测方法的灵敏度 特异性强 稳定性高 适用范围广 实验成本低
第二节 生物素的理化性质与标记 生物素及其活化 一、标记蛋白质氨基的活化生物素 （一）标记蛋白质醛基的活化生物素 （二）标记蛋白质巯基的活化生物素 （三）标记蛋白质核酸的活化生物素 二、生物素标记蛋白质 （一）生物素化蛋白质衍生物的特性 （二）标记方法 1．标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是 BNHS ；对于偏酸性的 抗原，标记时多采用 BHZ 2．标记酶：以生物素标记 HRP 为例 （三）标记注意事项
(或链霉亲和素)；也可采用游离亲和素(或链霉亲和素)搭桥, 两端分别连接 生物素化抗体和荧光素标记的生物素(BAB 法)或荧光标记的抗亲和素(或链 霉亲和素)抗体的夹心法。 四、生物素 - 亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS 主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联, 用于对终反应的放大(BA 法 ): 先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原 (标准 抗原和待测抗原)同时反应, 在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物； 再加入 125I 标记的亲和素(或链霉亲和素)与复合物中的生 物素结合, 最终 使反应信号放大, 进一步提高 IRMA 的灵敏度。 五、生物素 - 亲和素系统在分子生物学中的应用
在 BAS-HEI 系统中, 预先将作为配体的生物素与酶偶联,形成的生物素－ 酶复合物具有完整的酶活性；亲和素作为特异的酶结合体(类似于抗体), 可 与生物素－酶复合物结合。当生物素－酶复合物与亲和素结合后, 酶因活性 中心受空间位阻作用而失活。
三、生物素 - 亲和素系统在荧光免疫技术中的应用 BAS 用于荧光抗体技术, 通常采用 BA 法, 即用荧光素直接标记亲和素
主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测,用 BAS 制备的亲和吸 附 剂 进 行 基 因 的 分 离 纯 化 以 及 将 免 疫 测 定 技 术 与 PCR 结 合 建 立 免 疫 -PCR(immum-PCR)用于抗原的检测等三方面。
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小结
（教案末页）
肿瘤是组织细胞非正常增生的结果，肿瘤抗原是表达于肿瘤细胞（肿瘤特异性） 或肿瘤细胞表达、正常组织细胞也表达（肿瘤相关）的抗原。病毒相关肿瘤所表达 的病毒蛋白可被看作是肿瘤抗原的一种，故免疫系统对病毒相关肿瘤在发生早期即 发挥监视作用，早期原发性肿瘤一般处于免疫耐受（忽视）状态。晚期肿瘤阶段， 肿瘤细胞或者抗原进入淋巴组织之后，机体方能产生针对肿瘤抗原的特异性免疫应 答，包括抗体、CTL 和 Th 细胞等。天然免疫系统在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要 作用，被活化的巨噬细胞和 NK 细胞分泌的细胞因子能够抑制肿瘤细胞的增殖，引起 其死亡。还能通过抗体介导 ADCC 或者活化补体发挥作用。 肿瘤细胞通过多种机 制逃避免疫监视，包括表面抗原的调变,MHC 分子的下调和干扰免疫应答等。肿瘤 免疫治疗的关键是激活和诱导机体的抗肿瘤免疫应答。一方面要寻找更多的肿瘤特 异抗原，同时增加肿瘤细胞的免疫原性。通过体外活化淋巴细胞再回输的方法有一 定的疗效，利用肿瘤特异性抗体制备的各种免疫毒素也有较好的应用前景。
0.4 学时 0.6 学时 1 学时
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此外，依据待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗 体，又分为直接法 BAS 和间接法 BAS 。 （一）BAB 法：也称桥连亲和素 - 标记生物素法（ BRAB ） 直接法： 间接法： （二）ABC 法 直接法 : 间接法： （三）LAB 法 直接法： 间接法： 二、生物素 - 亲和素系统在酶免疫测定中的应用 （一）生物素 - 亲和素系统在 ELISA 中的应用 BA-ELISA BAB-ELISA ABC-ELISA （二）生物素 - 亲和素系统在均相酶免疫测定中的应用