志贺氏菌属诊断血清说明书
志贺氏菌
四、志贺氏菌检验标准操作程序11 范围本标准规定了食品中志贺氏菌（Shigella）的检验方法。
本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃2.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
2.3 厌氧培养装置：41.5 ℃ 1 ℃。
2.4 电子天平：感量0.1 g。
2.5 显微镜：10×～100×。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶：容量100 mL、200 mL、2 000 mL。
2.9 无菌培养皿：直径90 mm。
2.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.11 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂3.1 GN增菌液：见第A.1章。
3.2 志贺氏菌增菌肉汤：见第A.2章。
3.3 麦康凯（MAC）琼脂：见第A.3章。
3.4 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见第A.4章。
3.5 志贺氏菌显色培养基3.6 三糖铁（TSI）琼脂：见第A.5章。
3.7 营养琼脂：见第A.6章。
、3.8 葡萄糖半固体管：见第A.7章。
3.9 葡萄糖铵培养基：见第A.8章。
3.10 尿素琼脂：见第A.9章。
3.11 β-半乳糖苷培养基：见第A.10章。
3.12 氰化钾（KCN）培养基：见第A.11章。
3.13 氨基酸脱羧酶试验培养基：见第A.12章。
3.14 糖发酵管：见第A.13章。
1顾启芳，郭云昌。
3.15 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和V-P试验用）：见第A.14章。
3.16 西蒙氏柠檬酸盐琼脂：见第A.15章。
3.17 醋酸盐培养基：见第A.16章。
3.18 粘液酸培养基：见第A.17章。
3.19 蛋白胨水、靛基质试剂：见第A.18章。
3.20志贺氏菌属诊断血清。
4 检验程序志贺氏菌检验程序见图1。
志贺氏菌检测流程
志贺氏菌属检验的标准操作程序【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采集】由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。
【检验程序】采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。
【操作步骤】1. 分离培养采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。
36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。
2. 生化学试验凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。
其结果全部阴性者，作血清学试验。
3. 血清学试验挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏多价血清多价血清血清 2型血清 1型血清∣ + ∣ +∣ +∣ +∣—∣↓↓↓↓∣福氏菌宋内氏菌志贺氏2型志贺氏1型↓ 1-6型某型+鲍氏 7-11型某组+：组内分型血清———→鲍氏某型血清： 12-15型全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验16-18型福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。
福氏菌抗原成分如下。
第四节_志贺氏菌
http://www.bioberedskab.dk /agens/shigella/shigel6.jpg
8
4．抗原构造与分型
抗原构造: 有 O抗原和K 抗原
志贺氏菌扫描电镜照片
/ diseases/shigella.php
(1) O抗原： *菌体表面主要的脂多糖蛋白复合物，耐热，稳定。 分类（分群、血清型和亚型）的依据 *血清型分型用血清凝集试验 （2）K 抗原 菌体表面抗原，不耐热，100℃1 h即被破坏。 K 抗原与分型无关； 此抗原可阻止0抗原和O抗体的凝集。加热破坏K抗原后，0抗 原和O抗体仍可凝集。
16
含乳糖（-）、胆盐、染料指示剂
含乳糖、伊红＋美蓝
4．6 初步生化实验用培养基
4．6 三糖铁琼脂(TSl)：按GB／T4789.28--2003中4.26、 4.27规定。 硫化氢实验和糖分解实验。乳糖和蔗糖10，葡萄糖1，斜面菌多，穿刺菌少，分解糖慢。
二 选 一
4．7
4．8
葡萄糖半固体管：按GB／T4789．28--2003中4．31规定。 鞭毛动力测定实验用。 半固体管：按GB／T4789．28—2003中4．30规定。 鞭毛动力测定实验用。
三糖铁琼脂(TSI)成分： 蛋白胨 20.0g 牛肉膏 3.0g 乳 糖 10.0g 蔗 糖 10.0g 葡萄糖 1.0g 硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g 酚 红 0.025g或5g/L溶液5mL 氯化钠 5.0g 硫代硫酸钠 0.5g 琼 脂 12.0g 蒸馏水 1000.0mL
24
原理分析：
审判长 审判员 代理审判员 二00三年六月五日 书记员 书记员
3
第二节
志贺氏菌检验
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志贺氏菌检验
1 宋内氏典型菌落
XLD
志显
2 福氏典型菌落
XLD
志显
3 鲍氏典型菌落
XLD
志显
4 痢疾典型菌落
XLD
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
志显
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
（四）初 步 生 化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖 半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。
白色不透明圆形边缘不整齐直mm3mm菌落周围琼脂颜色变为紫红色宋内氏典型菌落xldxldxld熟肉制品中宋内的分离效果rf志显xld蔬菜制品中宋内分离效果xld鲍氏在生肉中的分离效果xld选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种tsi葡萄糖半固体营养琼脂斜面36培养20h24培养物中出现以下情况可以弃去a
（二）、培养特性
1 、 需 氧 或 兼 氧 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， PH7.2~7.4
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察， 则继续培养至48 h再进行观察。
菌落特征
• MAC琼脂 ：无色至浅粉红色， 半透明、光滑、 湿润、圆形、 边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂 ：粉红色至无色，半 透明、光滑、 湿润、圆形、边缘整齐或不齐， 直径1 ～2 mm
志贺氏菌检验操作规范
上海味泽生物科技有限公司志贺氏菌检验1 范围本标准规定了食品中志贺氏菌的检验方法。
本标准适合用于各类食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。
2 术语和定义2.1志贺氏菌志贺氏菌shigella是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dyseatery bacteria。
致病性较强，感染10-200个即可发病，人类是唯一的患者和带菌者。
3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。
3.2冰箱：2℃～5℃。
3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。
3.4天平：感量0.1g。
3.5震荡器。
3.6无菌吸管:1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。
3.7无菌锥形瓶：250ml 500ml。
3.8无菌培养皿：直径90mm。
4 培养基和试剂4.1 GN增菌液4.2 HE琼脂4.3 SS琼脂4.4麦康凯琼脂4.4伊红美蓝琼脂（EMB）4.5三糖铁琼脂（TSI）4.6葡萄糖半固体管5 操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样25g(ml),加入装有225mlGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃±1℃培养6h～8h。
培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
5.2分离和初步生化试验5.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36℃±1℃培养18h～24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
5.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃±1℃培养18h～24h，分别观察结果。
5.3判定下述培养物可以弃去：a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b)在18h～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d）产气的培养物；e）有动力的培养物；f）产生硫化氢的培养物。
志贺氏菌检测
志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。
培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。
二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。
下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。
先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。
如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。
福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。
假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。
四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。
志贺氏菌的检验
HE平板原理及反应
发酵乳糖的肠杆菌
不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
（一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和 鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以 及水杨苷和七叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
（二）生化分群试验
接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到： 5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质 试验。 见P167：根据不同生化反应结果，可分为A群（痢 疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍 氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分 离→→生化学试验→→结果报告
第一次 样品处理和增菌培养
预先准备并灭菌的器材 规格名称 • 1、18×180mm试管
数量
6支
• • • •
2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶 酌情 7 、不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 酌情
（三）生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏 菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3 、不产生 H2S ，不分解尿素， V-P 试验阴性， 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性，靛基质不定。 5、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、 鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。
志贺氏菌属(参照模板)
志贺氏菌属志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌。
临床上能引起痢疾症状的病原生物很多，有志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。
人类对痢疾杆菌有很高的易感性。
在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。
一、生物学性状志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3µm ,宽0.5-0.7µm 。
不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。
DNA的G+C 为49-53克分子%（Tm法）。
需氧或兼性厌氧。
营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。
37℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2nm，宋内氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。
在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。
本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。
大多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。
靛基质产生不定，甲基红阳性，VP试验阴性，不分解尿素，不产生HS。
根据生化反应可进行初步分类。
2志贺氏菌属的细菌对甘露醇分解能力不同，可分为二大组。
A、不分解甘露醇组：主要为志贺氏菌。
又根据能否产生靛基质，进一步分靛基质阳性（1、3、4、5、6、9、10型）和靛基质阴性（2、7、8型）的志贺氏痢疾菌。
B、分解甘露醇组：包括福氏、鲍氏、宋内氏菌。
再按乳糖分解情况，分为迟缓分解乳糖的宋内氏和不分解乳糖的福氏和鲍氏菌。
后者进一步再根据靛基质产生与否，分靛基质阳性（福氏菌1、2、3、4、5型和鲍氏菌5、7、9、11、13、15型）和靛基质阴性（福氏菌6型和鲍氏菌1、2、3、4、6、8、10、12、14）二类（见表一）表一志贺氏菌属生化反应的分类葡萄糖（+）甘露醇（-）甘露醇（+）志贺氏菌志贺氏菌乳糖（-）乳糖（+）（1、3、4、（2、7、8型）5、6、9、10型）靛基质（-）靛基质（+）靛基质（-）福氏菌6型福氏菌（1、2、宋内氏菌鲍氏菌（1、2、 3、4、5型），3、4、6、8 鲍氏菌（5、7、9、10、12、14型） 11、13、15型）抗原构造与分型：志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O）及表面抗原（K）组成。
GB志贺氏菌检验
• XLD琼脂：粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边 缘整齐或不齐
6
GB 志贺氏菌检验
志贺氏菌（Shigella）检验
• 志贺氏菌属（Shigella） 的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病 原菌。 • 直杆菌，形态似其他肠杆菌科的种。革兰氏阴性。不运动。兼性厌氧， 具有呼吸和发酵两种类型的代谢。
2
《GB 4789.5—2012食品微生物学检验 志贺氏菌检 验》
XLD培养基
CM0469B CM0115B CM0115T 无
MacConkey Agar No.3 3号麦康凯琼脂
Triple sugar Iraon Agar 三糖铁琼脂
CM0277B CM0003B
初步生化实验
营养琼脂斜面
Nutrient Agar
营养琼脂
BO0196M BO0196T BO0196V
赖氨酸脱羧酶肉汤 片剂(Taylor 改良配 CM0308S 方) 胰蛋白胨水 蛋白胨水 BactiDrop™ Kovacs吲哚 CM0087B CM0009B R21522
RapID™ ONE 肠杆 R8311006 菌鉴定系统
5
结果观察
• 麦康凯琼脂：无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形 、边缘整齐或不齐
半固体琼脂斜面
4
GB 4789.5—2012食品微生物学检验 志贺氏菌检验 解决方案-D的中文名称 OXOID货号 Simmons柠檬酸琼 CM0155B 脂 尿素琼脂基础 CM0053B
西蒙氏柠檬酸盐琼 Simmons Citrate Agar 脂 尿素琼脂 Urea Agar
40%尿素溶液
SR0020K
生化鉴定
Lysine Decarboxylase 氨基酸脱羧酶试验 Broth Tablets 培养基 （Taylor modification） 蛋白胨水 靛基质试剂 生化鉴定试剂盒 Tryptone Water Peptone water BactiDrop™ Kovacs Indol RapID™ ONE system
志贺氏菌检验
志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。
志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。
食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。
志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。
一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。
二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。
这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。
但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。
第二，SPA协同凝集法。
这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。
三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。
志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。
以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。
志贺氏菌检测Word版
志贺氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：36℃±1℃；1.2 冰箱：2℃～5℃；1.3 膜过滤系统；1.4 厌氧培养装置：41.5℃±1℃；1.5 电子天平：感量0.1g；1.6 显微镜：10×～100×；1.7 均质器；1.8 振荡器；1.9 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；1.10 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml；1.11 无菌培养皿：直径90mm；1.12 pH计或pH比色管或精密pH试纸；1.13 全自动微生物生化鉴定系统。
2 培养基和试剂3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1。
3.2 麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2。
3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3。
3.4 三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4。
3.5 营养琼脂斜面：见附录中5。
3.6 半固体琼脂：见附录中6。
3.7 葡萄糖铵培养基：见附录中7。
3.8 尿素琼脂：见附录中8。
3.9 β-半乳糖苷酶培养基：见附录中9。
3.10 氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录中10。
3.11 糖发酵管：见附录中11。
3.12 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录中12。
3.13 粘液酸盐培养基：见附录中13。
3.14 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中14。
3.15 志贺氏菌属诊断血清。
3.16 生化鉴定试剂盒。
4 操作步骤4.1 增菌以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。
4.2 分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。
志贺氏菌属
（2）慢性细菌性痢疾：急性菌痢治疗不彻底，或机体抵抗力低、营养不良或伴有其他慢性病时，易转为慢 性。病程多在二个月以上，迁延不愈或时愈时发。
（3）外毒素：志贺氏菌A群Ⅰ型及部分2型菌株还可产生外毒素，称志贺氏毒素。为蛋白质，不耐热，75～ 80℃1小时被破坏。该毒素具有三种生物活性：①神经毒性，将毒素注射家兔或小鼠，作用于中枢神经系统，引 起四肢麻痹、死亡；②细胞毒性，对人肝细胞、猴肾细胞和HeLa细胞均有毒性；③肠毒性，具有类似大肠杆菌、 霍乱弧菌肠毒素的活性，可以解释疾病早期出现的水样腹泻。
接种肠道杆菌选择性培养基，37℃孵育18～24小时，挑取无色半透明的可疑菌落，作生化反应和血清学凝 集试验，确定菌群和菌型。如遇非典型菌株，须作系统生化反应以确定菌属；必要时，用适量菌液接种于豚鼠结 膜上，观察24小时，如有炎症，则为有毒菌株。
快速诊断法
（1）荧光菌球法：适于检查急性菌痢的粪便标本。将标本接种于含有荧光素标记的志贺氏菌免疫血清液体 培养基中，37℃培养4～8小时。如标本中有相应型别的痢疾杆菌，繁殖后与荧光素抗体凝集成小菌球，在低倍或 高倍荧光显微镜下易于检出。方法简便、快速，有一定的特异性。
所致疾病
细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。传染源主要为病人和带菌者，通过污染了痢疾杆菌 的食物、饮水等经口感染。人类对志贺氏菌易感，10～200个细菌可使10～50%志愿者致病。一般说来，志贺氏菌 所致菌痢的病情较重；宋内氏菌引起的症状较轻；福氏菌介于二者之间，但排菌时间长，易转为慢性。
抵抗力
抵抗力
志贺氏菌的检验
2023-10-28contents •志贺氏菌概述•志贺氏菌的检验方法•志贺氏菌检验的实验室要求•志贺氏菌检验的临床意义•志贺氏菌检验的未来发展趋势目录01志贺氏菌概述志贺氏菌是一种革兰阴性细菌，属于肠杆菌科志贺氏菌属。
它是一种人类肠道内的正常菌群，但在特定条件下，如肠道疾病或免疫力下降时，它可以成为机会性致病菌，引起细菌性痢疾等肠道感染。
志贺氏菌的定义志贺氏菌主要通过粪-口途径传播，即通过摄入被志贺氏菌污染的食物、水或与感染者直接接触而传播。
此外，食物、水、生活用品等被志贺氏菌污染后，也可以通过间接接触传播给其他人。
志贺氏菌的传播途径志贺氏菌感染可引起细菌性痢疾，这是一种常见的肠道传染病，临床表现为发热、腹痛、腹泻、里急后重等症状。
严重病例可出现脱水、休克、死亡等严重后果。
因此，对志贺氏菌的检验和防控具有重要意义。
志贺氏菌的危害02志贺氏菌的检验方法通过选择性培养基，如SS、EMB等，将志贺氏菌从粪便、食物等样品中分离出来。
分离培养鉴定药敏试验通过生化试验、血清学鉴定等手段，对分离得到的菌株进行鉴定，确认为志贺氏菌。
对分离得到的志贺氏菌进行药敏试验，测定其对抗菌药物的敏感性，为治疗提供参考。
03细菌培养法0201免疫学检测法酶联免疫吸附试验（ELISA）通过特异性抗体捕捉志贺氏菌抗原，然后进行酶联免疫反应，检测粪便、食品等样品中的志贺氏菌。
免疫荧光抗体技术利用特异性抗体标记志贺氏菌，通过荧光显微镜观察，检测样品中的志贺氏菌。
设计特异性的引物，对志贺氏菌的DNA进行扩增，通过凝胶电泳等手段检测是否含有志贺氏菌DNA。
聚合酶链式反应（PCR）对扩增得到的DNA序列进行测序，与已知的志贺氏菌基因序列进行比对，确认是否为志贺氏菌。
基因测序分子生物学检测法03志贺氏菌检验的实验室要求实验室应具备有效的通风系统，减少空气中细菌数量。
实验室应配备高级别的个人防护装备，如实验服、手套、口罩等。
实验室内应保持清洁干燥，避免过度拥挤，减少交叉感染的风险。
鸡源福氏志贺氏菌的分离鉴定及药敏试验
鸡源福氏志贺氏菌的分离鉴定及药敏试验张丹鹤;蒋媛媛;许兰菊;杨永珍;邓久虎;苗银萍【摘要】为了对新郑某养鸡场鸡群严重腹泻进行病原确切诊断并提供防治依据,采集病料进行了细菌分离鉴定和药敏试验.经细菌分离培养、抹片染色镜检、生化试验,初步鉴定出5株鸡源志贺氏茵.用分离菌株攻毒后的发病比例为2/5～4/5,死亡比例为1/5～3/5.由此表明5个分离茵株均具有一定的毒力.血清学试验鉴定结果表明,5个分离菌株均为鸡源福氏志贺氏菌.药敏试验结果显示,5个分离茵株对阿莫西林等12种药物具有多重耐药性,其中4个茵株对阿米卡星和氨苄/舒巴坦较敏感.%A fowl-run severe chicken diarrhea happened in Xinzheng, in order to give exact pathogen diagnosis and provide basis for prevention and treatment, disease materials were collected to do bacterial isolation and identification, drug sensitive tests were also done in this study. After bacterial isolation and cultivation, morphologic observation and biochemical tests, 5strains of shigella isolated from chicken were initially identified. After challenge, the morbidity and mortality in chickens were2/5 ～ 4/5, 1/5 ～3/5. Challenge experiment results showed that five strains have certain virulence.Serologic test results showed that five strains are S. flexneri isolated from chicken. Drug sensitive test results showed that five strains have multiple drug resistance to 12 kinds of drugs, such as AMX. Four isolations are more sensitive to AN and AM/SU.【期刊名称】《河南农业大学学报》【年(卷),期】2011(045)001【总页数】5页(P97-101)【关键词】鸡;福氏志贺氏菌;分离鉴定;药敏试验【作者】张丹鹤;蒋媛媛;许兰菊;杨永珍;邓久虎;苗银萍【作者单位】河南农业大学,河南,郑州,450002;河南农业大学,河南,郑州,450002;河南农业大学,河南,郑州,450002;河南农业大学,河南,郑州,450002;河南农业大学,河南,郑州,450002;河南农业大学,河南,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】S852.61志贺氏菌(Shigella)是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，俗称痢疾杆菌.根据O抗原的不同，志贺氏菌属可分为痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(S.flexneri)、鲍氏志贺氏菌(S.boydii)和宋内氏志贺氏菌(S.sonnei)4 个群［1］.近年国内外报道，志贺氏菌除感染人外，还能感染猴、犊牛、奶牛、仔猪、幼犬、鸡、鸭、小鼠、豚鼠、袋鼠等多种动物，严重危害人和动物的健康［2～12］.2004 年许兰菊等［2］首次从自然发病鸡体内分离到鸡源志贺氏菌，根据研究鸡源志贺氏菌在生物学及血清学特性等方面与人志贺氏菌相同.鸡源志贺氏菌可引起鸡的腹泻痢疾、血便，重者引起死亡.剖检可见明显的肠道病变，耐过鸡消瘦和生长发育迟缓.鸡志贺氏菌病是鸡的一种新发传染病，常被误诊为鸡白痢或鸡球虫病等，给该病防治造成很大困难，结果导致了严重的经济损失［2，13］.2009-03 新郑某鸡场的8月龄蛋鸡鸡群发生严重腹泻，本研究针对腹泻病鸡采集典型病料进行病原菌分离鉴定，结果分离到鸡源福氏志贺氏菌，并对其病原特性进行了研究，为该病的确切诊断和有效防治提供科学依据.1 材料与方法1.1 鸡群发病情况及病料来源2009-03-16新郑某养鸡户前来就诊，该鸡场本批共饲养蛋鸡3 000只，8月龄时鸡群发病.鸡群发病后大部分鸡的采食量和产蛋量下降，并具有严重腹泻拉稀症状，部分鸡只发生死亡.剖检病变可见十二指肠出血性炎症.无菌操作采集病死鸡的十二指肠及其肠内容物，备检.1.2 试验动物及分组1日龄罗曼商品代蛋公雏40只，购自郑州牧业工程高等专科学校孵化场.按正常标准饲养管理，隔离观察3 d后鸡只均正常.随机抽取5只雏鸡采血分离血清，经检测鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌和志贺氏菌抗体均为阴性.将剩余的35只雏鸡随机分为7个小组，每组5只;分别为空白对照组、质量分数1%葡萄糖肉汤对照组和5个攻毒组.1.3 培养基与染色液营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、SS琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、西蒙氏枸橼酸盐琼脂培养基;6种细菌微量生化反应管有葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、尿素.以上培养基和微量生化管均由杭州天和微生物试剂有限公司生产，均在有效期内按说明书使用.质量分数1%葡萄糖肉汤用营养肉汤培养基按1%比例加入葡萄糖配制成.革兰氏染色液1套，由河南农业大学牧医工程学院畜禽疫病细菌分子生物学与免疫学实验室配制保存.1.4 志贺氏菌属诊断血清和鸡源志贺氏菌多价凝集抗原志贺氏菌属4种多价诊断血清，福氏多价诊断血清，痢疾1型诊断血清，痢疾2型诊断血清，宋内Ⅰ相诊断血清(史密氏)，鲍氏多价(1-5型)诊断血清，均由宁波天润生物药业有限公司生产，且在有效期内.鸡源志贺氏菌多价凝集抗原由河南农业大学牧医工程学院畜禽疫病细菌分子生物学与免疫学实验室研制保存.1.5 药敏纸片药敏纸片共12种，分别为阿莫西林(AMX，10 μg·片-1)、氨苄/舒巴坦(AM/SU，10/10 μg·片-1)、头孢曲松(CRO，30 μg·片-1)、头孢唑啉(CZ，30 μg·片-1)、罗红霉素(ROX，15 μg·片-1)、庆大霉素(GM，10 μg·片-1)、阿米卡星(AN，30μg·片-1)、米诺环素(MNO，30 μg·片-1)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(STX，23.75/1.25 μg·片-1)、环丙沙星(CIP，5 μg·片-1)、诺氟沙星(NOR，10 μg·片-1)、氧氟沙星(OFL，5 μg·片-1)，均由北京天坛药物生物技术开发公司生产，且在有效期内.1.6 细菌分离培养及抹片染色镜检首先将采集病料分别接种于质量分数1%葡萄糖肉汤，置37℃18～24 h增菌培养.然后将增菌培养物分别划线接种于SS琼脂平板及麦康凯琼脂平板，置37℃培养24 h，观察菌落培养性状.对上述细菌分离培养呈现的典型菌落进行细菌抹片、革兰氏染色和显微镜油镜观察.1.7 细菌生化试验挑取SS琼脂平板及麦康凯琼脂平板上的典型菌落接种于质量分数1%的葡萄糖肉汤进行纯化培养18 h，然后将纯化培养菌液分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、尿素细菌微量生化反应管，用穿刺法接种三糖铁琼脂斜面和西蒙氏枸橼酸盐琼脂斜面，37℃培养，连续观察7 d，每24 h观察并记录1次结果.MR试验、V-P试验、吲哚试验和明胶液化试验均按照文献［14］进行.1.8 细菌动物攻毒试验将鸡源志贺氏菌分离菌株分别接种于质量分数1%葡萄糖肉汤，37℃培养24 h，然后进行菌落计数，每毫升约含菌22.08×108个.采用腹腔注射的方法对3日龄雏鸡进行攻毒，攻毒组注射不同菌株的肉汤培养物0.2 mL·只-1，肉汤对照组腹腔注射灭菌质量分数1%葡萄糖肉汤0.2 mL·只-1，空白对照组不做任何处理.攻毒组和对照组分别进行隔离饲养，每2 h观察并记录雏鸡的表现，对病死鸡及时进行剖检，7 d后对攻毒的存活鸡全部剖检，观察记录剖检病变，采集病料，进行细菌回收试验.1.9 细菌血清学鉴定1.9.1 抗原制备将初步判定的鸡源志贺氏菌分离株接种营养琼脂平板，37℃培养24 h后，将细菌用少量体积分数0.5%的石炭酸生理盐水(pH值为7.2)洗下，制成菌悬液，然后经121～126℃高压灭活2 h破坏细菌的K抗原.用麦氏比浊管进行比浊，调整抗原的最终浓度为40×108个·mL-1，按6%的比例加入碱性美兰染液混匀，置4℃冰箱保存备用.1.9.2 平板凝集试验取制备好的细菌抗原50 uL于白瓷板孔中，再加入等量的志贺氏菌属诊断血清，轻摇混匀后，同时设标准阳性、阴性对照以及抗原对照，3～5 min后观察结果.结果判定方法参照文献［14］.1.10 细菌药敏试验采用纸片扩散法，检测5个鸡源志贺氏菌分离株对阿莫西林等12种药物的敏感性.试验方法参照文献［16］进行，结果判定标准按产品说明书.2 结果与分析2.1 细菌分离培养结果将增菌液在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上划线接种，37℃培养24 h后，均可见圆形、微凸、边缘整齐、无色、半透明、直径1～2 mm的小菌落，未见到其它形态的菌落.2.2 细菌形态及染色特性对分离的菌落进行细菌抹片、革兰氏染色和镜检.结果均为革兰氏阴性短小杆菌. 2.3 细菌生化试验结果结果见表1.其中1号、2号和5号菌株分离自十二指肠，3号和4号菌株分离自十二指肠肠内容物.根据试验结果，初步判定5株分离菌均为鸡源志贺氏菌.表1 5个分离菌株的生化试验结果Table1 Biochemical test results of five isolations注:TSI(三糖铁培养基)上反应情况;A=产酸(黄色);“+”代表阳性;“-”代表阴性;“○”代表产气;代表缓慢发酵.Note:Reacts in TSI(Triple Sugar Iron Agar“A”means acidic;“K”means alkaligenous;“+”is positive;“-”is negative;“○”means aerogenous;“△+”means fermentable slowly.?2.4 细菌动物攻毒试验结果攻毒后，部分鸡出现腹泻拉稀、血便症状，重者死亡.剖检可见鸡的肠道出血性炎症、肝脏肿大等病变.经病原菌分离均可回收到攻毒菌.试验结果见表2，菌株编号同生化试验.表2 5株鸡源志贺氏菌攻毒试验结果Table2 Challenge experiment results of five strains of shigella isolated from chicken?2.5 细菌血清学鉴定结果对初步判定的5株鸡源志贺氏菌，用志贺氏菌属诊断血清进行平板凝集试验.经鉴定5个分离菌株均为鸡源福氏志贺氏菌.结果见表3.2.6 细菌药敏试验结果由表4可见，这5株鸡源福氏志贺氏菌对阿莫西林、头孢唑林、头孢曲松、庆大霉素、磺胺甲噁唑、环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星这8种药物都表现出耐药性.1号菌株对12种药物均耐药;2号菌株对阿米卡星敏感，对其它药物耐药;3号菌株对氨苄/舒巴坦、阿米卡星和米诺环素敏感，对罗红霉素的敏感性为中介;4号菌株对氨苄/舒巴坦和阿米卡星的敏感性为中介，对其它药物耐药;5号菌株对氨苄/舒巴坦敏感，对阿米卡星和米诺环素的敏感性为中介，对其它药物耐药.表3 5株鸡源志贺氏菌的血清学试验结果Table3 Serologic test results of fivestrains of shigella isolated from chicken?表4 5株鸡源志贺氏菌的药敏试验结果Table4 Drug sensitive test results of five strains of shigella isolated from chicken?3 小结与讨论本研究经细菌分离鉴定对新郑发生严重腹泻的病鸡群进行了病原诊断，分离出5株鸡源福氏志贺氏菌，且动物攻毒试验表明分离菌株具有明显的致病性.因此，该鸡群发生腹泻病是由鸡源福氏志贺氏菌所引起.药敏试验结果显示，5个分离菌株对阿莫西林等12种药物具有多重耐药性，其中4个菌株对阿米卡星和氨苄/舒巴坦较敏感.许兰菊等［15］利用研制的鸡源志贺氏菌平板凝集抗原及平板凝集试验，对中国河南、山东等不同地区鸡志贺氏菌病的发病率、流行地区、品种、日龄及其混合感染等进行了血清流行病学调查.结果表明:中国部分地区存在有鸡源志贺氏菌感染，其血清抗体阳性率较高，达28.13% ～33.17%，已远远超过鸡白痢鸡伤寒(1.4%).本研究从腹泻病鸡中分离出鸡源福氏志贺氏菌，进一步说明鸡志贺氏菌病在河南省部分地区呈流行趋势，且存在鸡源志贺氏菌种和型的差异.本试验分离的5株鸡源志贺氏菌，虽然其生化特性与医学有关文献报道的志贺氏菌属特性不是完全符合，但分离菌株经血清学鉴定均为鸡源福氏志贺氏菌.细菌菌属的生化特性标准是相对于大多数菌株，细菌菌属的各项生化特性指标在不同的菌株间存在有一定的(0% ～10%)差异［16］.菌株的生化特性可以作为细菌鉴定中判定属和种的参考依据，但不能作为判定细菌属和种的唯一标准.志贺氏菌各型之间的生化特性会有一定的差别，志贺氏菌亚群一般通过其生化特性的差异来区分，且常和血清学方法结合起来进行鉴定［17］.因此，本研究除细菌生化试验外，又进行了血清学特异性试验等.因此，本研究细菌鉴定结果是可靠的.由于本次试验所用血清的种类有限，未能将分离菌株鉴定到型及亚型，有待今后进一步研究.动物攻毒试验结果表明，分离的5个鸡源志贺氏菌菌株可使攻毒鸡发生腹泻和死亡.这进一步说明分离的鸡源志贺氏菌菌株对鸡具有一定的毒力和致病性.一旦鸡群发生志贺氏菌病得不到有效治疗，就会给养殖户带来很大的经济损失.因此，找出防治鸡志贺氏菌病的有效药物显得尤其重要.从药敏试验结果来看，5株鸡源福氏志贺氏菌对阿莫西林等8种药物都表现出耐药性.1号菌株对12种药物均产生了耐药性，其余菌株对氨苄/舒巴坦、阿米卡星和米诺环素的敏感性存在一定的差异.本次试验分离菌株具有多重耐药性，这可能与该地区养殖水平和用药习惯、兽药质量问题及饲料中长期添加某些抗菌类药物等因素有关［18］.因此，建议临床治疗要合理用药，选择敏感药物进行治疗，避免盲目性，尽量减少不必要的经济损失. 参考文献:［1］陆德源.医学微生物学［M］.第5版.北京:人民卫生出版社，2001:119-120. ［2］许兰菊，王川庆，胡攻政，等.鸡志贺氏菌在我国的发现及其病原特性研究［J］.中国预防兽医学报，2004，26(4):281-286.［3］韦毅，佟飞，刘自民.广西食蟹猴群中志贺氏菌的检出、分型以及对抗菌药物的敏感试验［J］.实验动物科学与管理，1999，16(4):6-9.［4］ MAURELLI A T，ROUTH PR，DILLMAN R C，et al.Shigella infection as observed in the experimentall inoculated pig［J］.Susscrofa Domestica Microb Pathog，1998，25(4):189-196.［5］ ALABOUDI A R，HAMMED D A，BASHER H A.Potential pathogenic bacteria from dead in shell chicken 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志贺菌血清学检测标准操作规程
志贺菌血清学检测标准操作规程
1．目的
规范志贺菌的血清学检测标准操作规程。
2．原理
用已知的志贺菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为志贺菌。
3．试剂
志贺菌诊断血清，生理盐水。
4．质控
福氏志贺ATCC12022阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。
5.操作步骤
5.1 首先用志贺菌属4种多价血清作玻片凝集，如凝集再进一步作血清定型（用福氏志贺菌1-6型、痢疾志贺菌1-2型、鲍氏志贺菌1-6型及宋氏志贺菌鉴定到种、型）。
一般先用福氏志贺菌血清凝集，因我国以B群最为多见，若出现生化反应符合志贺菌，而与4种多价血清不凝集的菌株，应考虑为K抗原存在，将菌液加热到100℃15-30分钟后再进行凝集。
5.2 与各型志贺菌血清不发生凝集，菌落特征与生化反应似痢疾志贺菌，可考虑非典型痢疾血清型，应送专业实验
室进行鉴定。
6.结果判断
阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。
阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。
自凝：试验一侧及对照一侧凝集。
7.注意事项
志贺菌菌体表面常有一层K抗原。
它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。
此时应将菌悬液于100℃中煮沸15-30分钟，以破坏K抗原，然后再做试验。
8.临床意义
主要用于志贺菌属的鉴定。
志贺氏菌分离培养SOP
志贺氏菌分离培养1.目的:检查从业人员肠道致病菌带菌状况,保证消费者身体健康。
2.检测依据:GB4789.5-94(P27-30) GB16002-19953.适用范围:健康人或患病者4.设备和材料:设备: 名称型号编号范围恒温培养箱36±1℃DHB7811596 20-60℃烤箱 HG-400 最高温度250℃高压锅 XQ-SG46-180A 额定工作压力0.14Mpa冰箱天平(0.1g) JPT-1 0.1g-100g材料:⑴三角瓶1000ml、500ml、250ml ⑵平皿90mm ⑶小试管⑷中试管⑸载玻片⑹酒精灯⑺接种针⑻试管架⑼棉棒13cm ⑽吸管10ml5.检测环境条件:室温6.内容:6.1标本的采集及处理:以男女分室,各取浸有增菌液湿润棉棒一支,将棉棒插入肛门3-5厘米,取出见黄色即可。
6.2检测程序:6.2.1实验原理:取粪便进行增菌及直接分离平板,增菌的目的是使志贺氏菌属以外的细菌受到抑制,而促进志贺氏菌属得到一定的增殖,提高检出率.分离接种鉴别培养基,挑取可疑菌落做初筛生化及血清学分型,最后做系统生化试验符合判定结果。
6.2.2试剂组成1) SS琼脂培养基 (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)2) 麦康凯琼脂培养基 (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)3) 革兰氏阴性杆菌液 (G-N增菌液) (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)4) 三糖铁琼脂培养基 (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)5) 双管糖琼脂培养基 (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)6) 半固体琼脂培养基 (粉剂成品,按包装说明方法配置和高压灭菌)7) 志贺氏菌诊断血清48种8) 晋微E-18微量生化板 (注:该板为18种生化反应)按说明书操作。
6.2.3操作步骤:6.2.3.1肛拭子直接接种麦康凯琼脂,培养36±1℃ 18-24小时同时种10mlGN增菌液,培养36±1℃6小时。
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志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序
1.目的
制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理
用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。
3.试剂及实验设备
3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志
贺氏菌属诊断血清
3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、
电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤
4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的
疑似菌落。
4.3菌群分析
将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。
如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。
4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦
氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬
液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。
若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。
5.质量控制
志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。
同一批号每月进行一次质控试验，新批号试剂进行质控试验。
6.质量记录
7.参考文献
[1]卢锦汉主编.医学生物制品学.北京.人民卫生出版社.1995
[2]中国生物制品规程（2000年版）.北京.化学工业出版社.2000
附表：志贺氏菌属国内常见菌型诊断抗原表。