新型疫苗研究进展
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Ad已有49个血清型。 1956年，Ad4被鉴定为美军急性呼吸道疾病的病原
体 60年代开发Ad4和Ad7减毒口服活疫苗 美国（主要是军人）已有1亿人次口服了Ad4、Ad5
以及Ad7活疫苗胶囊， 无曾发生不良反应报告，疫苗有效率高达99.7% 人类肿瘤细胞中，尚未发现腺病毒基因的整合 腺病毒容易增殖、使用方便、稳定性良好，具有广泛
RNA病毒（RNA virus） 是核酸为RNA的病毒总称 艾滋病病毒、烟草花叶病毒、SARS病毒、西班牙流
感病毒和甲型H1N1流感病毒等都是RNA病毒。 RNA病毒缺乏复制校正机制，变异快， 疫苗开发难度大。 用于开发RNA复制子疫苗的RNA病毒包括：甲病毒、
黄病毒、小RNA病毒、副粘病毒和杯状病毒等。
目前，用作载体的病毒主要有痘病毒和腺病毒
痘病毒特点
基因组容量大及非必需区基因多 有利于进行基因工程操作 易于构建和分离重组病毒 可以插入多个外源基因 对插入的外源基因有较高的表达水平。
痘病毒优点
无致癌性、稳定性好、宿主范围广 基因组容量大、非必需基因多 能诱发机体产生很强的体液免疫和细胞免疫 分子生物学、基因工程、生物活性物质生产、
(4) 特别适合于大规模的免疫接种等
重组活菌疫苗载体分类：细菌、病毒
减毒的微生物，包括Shigella flexneri、 Bacillus anthracis、、Salmonella Typhimurium、Salmonella Typhi、Y. pseudotuberculosis、Listeria monocytogenes。
大量双链RNA可诱导被感染细胞凋亡，宿主 细胞的凋亡有利于免疫系统识别外源抗原。
RNA病毒的基因组结构加以改造，构建成 RNA载体，制备成疫苗，可激发比传统 DNA疫苗更高效的免疫应答。
基因重组疫苗及多价疫苗研究的有效工具。
百度文库例
将编码外壳蛋白的基因（比如乙型肝炎病毒 的表面抗原）插入牛痘病毒的基因组则可在 牛痘病毒启动子下表达。注射到血液中后， 重组病毒的复制不仅导致新的牛痘病毒颗粒 产生，还会产生大量的表面抗原，从而对天 花和乙型肝炎病毒产生免疫力。
腺病毒（adenovirus, Ad）
在小鼠和人体实验中，人们通过基因枪免疫途径研 究编码流感病毒的不同蛋白HA、NA、M1、NP 和NS1质粒，
结果证明H1-DNA和N1-DNA可以诱导高水平的 特异性抗体
在流感病毒攻击实验中起到很好的保护作用 重组腺病毒载体疫苗对NP-DNA疫苗有协同作用
NP-DNA+重组腺病毒载体疫苗
鉴于DNA疫苗的缺陷。。。。。。
RNA疫苗不会与宿主染色体DNA直接结合， 可降低基因的插入突变和整合的概率， 既能克服DNA疫苗可能引起细胞转化的潜在危险，
也能解决DNA通过核膜的困难，限制其高效表达 的缺陷。 RNA替代DNA作基因疫苗。 具有抗原表达效率高、安全性能良好以及应用 范围广等优点
苗的研究进展
重组载体疫苗
用减毒活病毒或减毒活细菌作为载体， 将编码特定病原体免疫原性蛋白的基因插入载
体，作为疫苗输入机体 诱导特定免疫应答。
重组活载体疫苗的优点 (1) 成本低廉、易于大量生产 (2) 比其它制剂，如亚单位疫苗具有更长的储 存期及更强的稳定性 (3) 免疫途径简单、易于接种
的免疫适应性，既可以在呼吸道增殖，也可以在消化 道增殖，因此具备作为活病毒口服疫苗载体的条件。
DNA疫苗、RNA复制子疫苗
开发核酸疫苗是一种新型疫苗免疫策略
DNA疫苗
把一个或几个抗原蛋白的编码基因克隆到真核 表达载体上，将此重组质粒转入机体内，使编 码基因借助宿主的转录和翻译机制获得表达， 进而通过抗原提呈细胞将抗原提呈给免疫细胞， 从而激活机体的细胞和体液免疫应答。
白可源源不断地在黏膜处产生，有效引起机体的免疫应答 和免疫耐受，
重组病毒活载体
一种是复制缺陷性载体病毒，只有通过特定转 化细胞的互补作用或通过辅助病毒叠加感染才 能产生传染性后代，无排毒的隐患，又可表达 目的抗原
另一种是具有复制能力的病毒，如疱疹病毒、 腺病毒和痘病毒等，它们可作为外源基因的载 体而保持自身传染性
无毒的细菌，如Lactobacillus。
问题：引起免疫抑制，建立潜伏感染、毒力恢
复和外源基因表达不稳定免疫原性差
关键
解决细菌载体的安全性、免疫原 性和外源抗原基因在无抗生素选择压力 下能否随宿主稳定遗传等问题
乳酸菌在表达外源基因的特点：
某些菌种带有大量染色体外因子，易建立新表达载体系统 易培养，遗传操作方法成熟、简便、效率高，重复性好 乳酸菌为食品级细菌，可有效提高基因工程产品的安全性 具有活性很高且可调控的启动子系统，可表达毒素基因 可在细胞内、细胞表面、展示表达或分泌到细胞外 乳酸菌表达的外源蛋白不需经过纯化就可以直接服用 某些菌株，如乳杆菌对机体有极强的黏附作用，其表达蛋
小鼠
诱导出显著的体液免疫和细胞免疫应答
并可以帮助小鼠抵抗来自异型流感病毒——高致病 性亚型流感病毒的攻击。
全球性流感大流行的威胁和传统疫苗的局
限性使得DNA疫苗被认为是一种能够替代传统 疫苗的免疫策略，
DNA疫苗主要不足
(1) 核酸疫苗长期在体内表达，可引起机体过量免 疫或产生免疫耐受现象，最终导致机体免疫抑制 (2) 外源基因进入机体后，可与宿主的基因发生整 合，导致宿主细胞肿瘤基因活化、抑癌基因灭活或 去向不明 (3) 持续的抗原表达所激起的强烈CTL应答可能会 对机体其它细胞产生毒性杀伤作用
新型疫苗研究进展（二）
疫苗是用于预防和治疗传染病或某些慢性疾病 的生物制品，实际生活中应用最广泛的是传统灭活 疫苗、减毒活疫苗和基因工程，但部分存在着免疫 效果不确实、非特异性反应强、保护期短等缺点， 这就使得新型疫苗的出现成为必然……
新型疫苗研究进展
重组载体疫苗 DNA疫苗、RNA复制子疫苗研究进展 树突状细胞疫苗、T细胞疫苗 （肿瘤疫苗、治疗性疫苗的研究进展） 真菌疫苗的研究进展 动脉粥样硬化疫苗、糖尿病疫苗、避孕疫
体 60年代开发Ad4和Ad7减毒口服活疫苗 美国（主要是军人）已有1亿人次口服了Ad4、Ad5
以及Ad7活疫苗胶囊， 无曾发生不良反应报告，疫苗有效率高达99.7% 人类肿瘤细胞中，尚未发现腺病毒基因的整合 腺病毒容易增殖、使用方便、稳定性良好，具有广泛
RNA病毒（RNA virus） 是核酸为RNA的病毒总称 艾滋病病毒、烟草花叶病毒、SARS病毒、西班牙流
感病毒和甲型H1N1流感病毒等都是RNA病毒。 RNA病毒缺乏复制校正机制，变异快， 疫苗开发难度大。 用于开发RNA复制子疫苗的RNA病毒包括：甲病毒、
黄病毒、小RNA病毒、副粘病毒和杯状病毒等。
目前，用作载体的病毒主要有痘病毒和腺病毒
痘病毒特点
基因组容量大及非必需区基因多 有利于进行基因工程操作 易于构建和分离重组病毒 可以插入多个外源基因 对插入的外源基因有较高的表达水平。
痘病毒优点
无致癌性、稳定性好、宿主范围广 基因组容量大、非必需基因多 能诱发机体产生很强的体液免疫和细胞免疫 分子生物学、基因工程、生物活性物质生产、
(4) 特别适合于大规模的免疫接种等
重组活菌疫苗载体分类：细菌、病毒
减毒的微生物，包括Shigella flexneri、 Bacillus anthracis、、Salmonella Typhimurium、Salmonella Typhi、Y. pseudotuberculosis、Listeria monocytogenes。
大量双链RNA可诱导被感染细胞凋亡，宿主 细胞的凋亡有利于免疫系统识别外源抗原。
RNA病毒的基因组结构加以改造，构建成 RNA载体，制备成疫苗，可激发比传统 DNA疫苗更高效的免疫应答。
基因重组疫苗及多价疫苗研究的有效工具。
百度文库例
将编码外壳蛋白的基因（比如乙型肝炎病毒 的表面抗原）插入牛痘病毒的基因组则可在 牛痘病毒启动子下表达。注射到血液中后， 重组病毒的复制不仅导致新的牛痘病毒颗粒 产生，还会产生大量的表面抗原，从而对天 花和乙型肝炎病毒产生免疫力。
腺病毒（adenovirus, Ad）
在小鼠和人体实验中，人们通过基因枪免疫途径研 究编码流感病毒的不同蛋白HA、NA、M1、NP 和NS1质粒，
结果证明H1-DNA和N1-DNA可以诱导高水平的 特异性抗体
在流感病毒攻击实验中起到很好的保护作用 重组腺病毒载体疫苗对NP-DNA疫苗有协同作用
NP-DNA+重组腺病毒载体疫苗
鉴于DNA疫苗的缺陷。。。。。。
RNA疫苗不会与宿主染色体DNA直接结合， 可降低基因的插入突变和整合的概率， 既能克服DNA疫苗可能引起细胞转化的潜在危险，
也能解决DNA通过核膜的困难，限制其高效表达 的缺陷。 RNA替代DNA作基因疫苗。 具有抗原表达效率高、安全性能良好以及应用 范围广等优点
苗的研究进展
重组载体疫苗
用减毒活病毒或减毒活细菌作为载体， 将编码特定病原体免疫原性蛋白的基因插入载
体，作为疫苗输入机体 诱导特定免疫应答。
重组活载体疫苗的优点 (1) 成本低廉、易于大量生产 (2) 比其它制剂，如亚单位疫苗具有更长的储 存期及更强的稳定性 (3) 免疫途径简单、易于接种
的免疫适应性，既可以在呼吸道增殖，也可以在消化 道增殖，因此具备作为活病毒口服疫苗载体的条件。
DNA疫苗、RNA复制子疫苗
开发核酸疫苗是一种新型疫苗免疫策略
DNA疫苗
把一个或几个抗原蛋白的编码基因克隆到真核 表达载体上，将此重组质粒转入机体内，使编 码基因借助宿主的转录和翻译机制获得表达， 进而通过抗原提呈细胞将抗原提呈给免疫细胞， 从而激活机体的细胞和体液免疫应答。
白可源源不断地在黏膜处产生，有效引起机体的免疫应答 和免疫耐受，
重组病毒活载体
一种是复制缺陷性载体病毒，只有通过特定转 化细胞的互补作用或通过辅助病毒叠加感染才 能产生传染性后代，无排毒的隐患，又可表达 目的抗原
另一种是具有复制能力的病毒，如疱疹病毒、 腺病毒和痘病毒等，它们可作为外源基因的载 体而保持自身传染性
无毒的细菌，如Lactobacillus。
问题：引起免疫抑制，建立潜伏感染、毒力恢
复和外源基因表达不稳定免疫原性差
关键
解决细菌载体的安全性、免疫原 性和外源抗原基因在无抗生素选择压力 下能否随宿主稳定遗传等问题
乳酸菌在表达外源基因的特点：
某些菌种带有大量染色体外因子，易建立新表达载体系统 易培养，遗传操作方法成熟、简便、效率高，重复性好 乳酸菌为食品级细菌，可有效提高基因工程产品的安全性 具有活性很高且可调控的启动子系统，可表达毒素基因 可在细胞内、细胞表面、展示表达或分泌到细胞外 乳酸菌表达的外源蛋白不需经过纯化就可以直接服用 某些菌株，如乳杆菌对机体有极强的黏附作用，其表达蛋
小鼠
诱导出显著的体液免疫和细胞免疫应答
并可以帮助小鼠抵抗来自异型流感病毒——高致病 性亚型流感病毒的攻击。
全球性流感大流行的威胁和传统疫苗的局
限性使得DNA疫苗被认为是一种能够替代传统 疫苗的免疫策略，
DNA疫苗主要不足
(1) 核酸疫苗长期在体内表达，可引起机体过量免 疫或产生免疫耐受现象，最终导致机体免疫抑制 (2) 外源基因进入机体后，可与宿主的基因发生整 合，导致宿主细胞肿瘤基因活化、抑癌基因灭活或 去向不明 (3) 持续的抗原表达所激起的强烈CTL应答可能会 对机体其它细胞产生毒性杀伤作用
新型疫苗研究进展（二）
疫苗是用于预防和治疗传染病或某些慢性疾病 的生物制品，实际生活中应用最广泛的是传统灭活 疫苗、减毒活疫苗和基因工程，但部分存在着免疫 效果不确实、非特异性反应强、保护期短等缺点， 这就使得新型疫苗的出现成为必然……
新型疫苗研究进展
重组载体疫苗 DNA疫苗、RNA复制子疫苗研究进展 树突状细胞疫苗、T细胞疫苗 （肿瘤疫苗、治疗性疫苗的研究进展） 真菌疫苗的研究进展 动脉粥样硬化疫苗、糖尿病疫苗、避孕疫