细菌内毒素检测标准操作
细菌内毒素检测标准操作
细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。
范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素限量检测。
责任人：质量检测人员材料：一、电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能达到180℃。
二、恒温水浴箱或适宜的恒温器（37℃±1℃）。
三、水银温度计，精度在1℃以下，量程不小于50℃。
四、旋涡混合器。
五、可调式移液器六、0.25EU/ml鲎试剂。
七、细菌内毒素工作品。
八、凝胶法细菌内毒素检查用水。
九、实验用具无热原吸头（1000μl、200μl）、带铝盖的凝集管（10mm×75mm）、试管架、计时器、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、镊子、砂轮。
所用玻璃器皿使用前须经250℃干烤至少1小时或180℃干烤至少4小时。
操作方法一、取样1、细胞发放前3天，取细胞培养液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放（可存放多长时间）。
2、细胞发放当天，取细胞生理盐水混悬液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放。
（可存放多长时间）。
3、取样应以无菌操作技术取样，所用器材在使用前应无热原或已去除热原。
二、鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的是考察鲎试剂的灵敏度是否正确、考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。
在使用一批新的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
（一）实验操作1、细菌内毒素工作品溶液的制备取细菌内毒素工作品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，开启过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照工作品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后用倍倍稀释方式进行稀释，即0.5ml各浓度工作品溶液+0.5ml检查用水（以下稀释方式同此法），制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
细菌内毒素检查SOP(动态浊度法)
细菌内毒素检查SOP（动态浊度法）1．目的为规范细菌内毒素含量测定的操作，特制定本SOP。
2．范围本SOP适用于细菌内毒素含量测定的操作。
3．定义3.1.动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
3.2.细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.3.细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.4.细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015 EU/ml（用于凝胶法）或0.005 EU/ml （用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量负责人/质量受权人负责本规程的批准。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6．材料6.1.仪器设备细菌内毒素测定仪、漩涡混合器、干烤箱6.2.试剂及溶液6.2.1.鲎试剂6.2.2.细菌内毒素工作标准品：国家标准品或经过国家标准品标定的工作标准品。
6.2.3.细菌内毒素检查用水：内毒素含量应小于0.005EU/ml。
6.3.使用的器具移液器、无热原稀释管和反应管、无热原枪头。
7．流程图无8．程序8.1.原理细菌内毒素能激活鲎试剂(TAL)中的酶系统，使凝固酶原变成凝固酶，进而凝固酶再激活其中的凝固蛋白原变成凝固蛋白，呈现凝胶反应，动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，计算内毒素浓度与反应时间关系的双对数标准曲线，利用标准曲线对供试品的内毒素含量进行定量测定。
8.2.试验前准备8.2.1.采样管用硅胶塞塞口，经180℃干烤2小时，除内毒素备用。
中华人民共和国国家标准细菌内毒素检测方法
医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法中华人民共和国国家标准 GB/T14233.2—93 1993-03-16发布一、定义及适用范围:本法系列用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中内毒素限量是否符合规定的一种方法。
用以代替家兔法对供试品进行热原初试。
本法仅适用于一次性使用输液器、输血器。
其他产品可参照使用。
二、主要设备:超净工作台、电热干燥箱、恒温水浴。
三、试剂 1、细菌内毒素国家标准品：用于仲裁鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。
2、细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。
3、鲎试剂：灵敏度为0.25EU/ml，规格为0.5ml。
4、无热原水：内毒素含量小于0.05EU/ml。
四、试验前准备1、器具除热原:与试验液接触的所有器具均应除热原。
玻璃器具置电热干燥箱内250℃干烤至少60min；塑料器具置30%双氧水中浸泡4h，再用无热原水冲洗后于60℃烘干备用。
2、鲎试剂灵敏度测定（1）试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度，应符合规定。
（2）灵敏度测定：根据标示的灵敏度范围，将细菌内毒素工作标准品用无热原水以1→2等比稀释，选择能出现阳性和阴性结果的4个连续稀释液。
取同一批号鲎试剂若干支，分别按标示量加入无热原水溶解为鲎试剂溶解液。
取10mm×75mm试管若干支，分别加入0.1ml鲎试剂溶解液，加入内毒素稀释液0.1ml，每一稀释液平行操作4管，轻轻振动试管混匀内容物，封闭管口，置37±1℃恒温水浴中保温60±2min观察结果。
最高浓度的4管应均为阳性，最低浓度的4管应为阴性。
五、试验方法1、供试品数量 :同一批号至少3个单位供试品。
2、浸提介质:无热原水。
3、供试液制备:在无菌条件下，每套输液器内腔注入10ml，输血器内腔注入15ml浸提介质，反复荡洗5次后两端密封，置37±1℃恒温箱中保温2h，取出后将供试液汇集至一无热原具塞玻璃容器内。
细菌内毒素工作标准品检验操作规程
细菌内毒素工作标准品检验操作规程部门质量控制部题目细菌内毒素工作标准品检验操作规程起草审阅批准共2页编号 HY/02-ZK-203 执行日期页码第1页细菌内毒素工作标准品检验操作规程一、范围:本标准规定了细菌内毒素工作标准品的测定方法和操作要求;适用于本公司细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素质控品的质检测定。
二、引用标准:2010年版《中国药典》附录“细菌内毒素检查法”三、要求:1、操作环境:温度不得高于26?，湿度不得高于75%;2、标准品:细菌内毒素国家标准品。
五、操作步骤:3(效价测定以国家标准品为基准，随机取本品2支，使用同一批鲎试剂参考品测定，2支反应终点的均值应与国家标准品的效价相平行或一致。
3.1 凝胶法3.1.1 根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ)，将细菌内毒素国家标准品用检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成4个浓度的标准内毒素溶液，即2λ、λ、0.5λ和0.25λ备用,每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
3.1.2 设待复核的细菌内毒素工作标准品效价为P，用1ml检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成6个浓度的内毒素溶液，即(P/4λ)倍、(P/2λ)倍、(P/λ)倍、(2P/λ)倍、(4P/λ)倍和(8P/λ)倍备用,每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
3.1.3 细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品稀释须同时进行。
3.1.4 按《细菌内毒素检查法》项下操作，每一个内毒素浓度平行做4管。
如细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品的最大浓度4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，按下式计算细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的几何平均值(E)和细菌内毒素工作标准品反应终点浓度对应的稀释倍数的几何平均值(D)。
-1其中E=1g(?X/4)式中 X为细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的对数值(1g);-1D=1g(?X/4) 1式中 X为细菌内毒素工作标准品反应终点浓度对应的稀释倍数的对数值(1g)。
内毒素检测标准及方法
内毒素检测标准及方法
内毒素检测的标准及方法主要包括以下几个方面：
检测标准：
1.细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显
色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
2.细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）
相当。
检测方法：
内毒素检测主要使用鲎试验法，这是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，具有简单、快速、灵敏、准确的特点，被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
鲎试剂按实验方法可分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法。
其中凝胶法操作简单、经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
请注意，进行内毒素检测时应严格遵守相关标准和操作规范，确保结果的准确性和可靠性。
内毒素检测标准和正常值
内毒素检测标准和正常值内毒素检测是一种用于评估人体或动物体内内毒素水平的方法，常用于感染性疾病的诊断和治疗过程中。
内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，当细菌感染进入人体后，会释放内毒素，导致炎症和组织损伤。
因此，内毒素检测对于控制感染的发展和制定适当的治疗方案至关重要。
内毒素检测通常使用血液或体液样品进行，下面将介绍一些常用的内毒素检测标准和正常值的参考内容：1. 内毒素检测方法：内毒素检测的常见方法包括兔子血症试验（Rabbit Pyrogen Test, RPT）、内毒素结合试验（Limulus Amebocyte Lysate Test, LAL）等。
其中，LAL是目前最常用的内毒素检测方法之一，它是利用海蛇（Limulus Polyphemus）的体液中特定蛋白质对内毒素的敏感性来进行检测的。
2. 内毒素检测标准：根据不同的应用需求，内毒素检测有不同的标准。
以下是两种常用的内毒素检测标准：- 美国FDA（Food and Drug Administration）标准：根据美国FDA的规定，在一些特定的医疗器械和药品制造过程中，内毒素的浓度需低于0.5 EU/mL（Endotoxin Units,EU/mL）。
- 欧洲药典（European Pharmacopoeia）标准：欧洲药典对于内毒素的浓度限制更为严格，要求内毒素浓度低于0.06 EU/mL。
3. 内毒素正常值参考范围：内毒素的正常值参考范围取决于采用的测量方法和样品类型。
以下是一些常见的内毒素正常值参考范围：- 兔子血症试验（RPT）：根据兔子血症试验方法进行的内毒素检测，正常值为阴性，即不产生发热反应。
- 内毒素结合试验（LAL）：根据LAL方法进行的内毒素检测，正常值通常为低于指定的内毒素浓度阈值，如<0.05 EU/mL。
需要注意的是，不同的内毒素检测方法可能会有不同的正常值参考范围，具体参考值应根据使用的检测方法和相关标准进行解释和参考。
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C·L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
细菌内毒素检测标准
细菌内毒素检测标准一、范围：本试验为《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定的“凝胶法”，系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝胶反应的机理，经判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
二、依据：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法。
第二部分：生物学试验方法。
《中华人民共和国药典》2010年版二部三、器具及试剂：1.器材：（1）锥形瓶（2）三角烧瓶（3）无热原剪刀、镊子（4）恒温培养箱（5）超净工作台（6）恒温水浴箱（7）电热干燥箱（8）旋涡混合器（9）移液器2.试剂：（1）细菌内毒素国家标准品（2）细菌内毒素工作标准品（3）鲎试剂（4）细菌内毒素检查用水四、实验前准备：1.器具处理：试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。
玻璃器皿置电热干燥箱内1800C干烤至少2h，或2500C干烤至少30min。
塑料器皿置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒检查用水充分冲洗后置600C烘干备用。
2.鲎试剂灵敏度复核实验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度试验。
试验步骤按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定进行。
3.供试品干扰实验：（1）对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。
当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰实验。
（2）每种产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰实验。
供试液制备按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”规定进行。
（3）如供试品对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰：a)使用更灵敏的鲎试剂对供试品进行更大倍数稀释;b)采用无热原氨基甲烷缓冲液稀释供试液;c)采用无热原氢氧化钠或盐酸溶液调节供试液pH值在6.0-8.0范围;d)采用阳离子缓冲（MgSO4或MgCl2）稀释供试液以调节离子浓度。
细菌内毒素工作标准品标定
细菌内毒素工作标准品标定细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，它可以引起人体免疫系统的异常反应，导致严重的感染和疾病。
因此，对细菌内毒素进行标定是非常重要的，它可以帮助我们更好地了解细菌内毒素的性质和浓度，为研究和临床诊断提供重要的参考依据。
一、标定原理。
细菌内毒素的标定是通过比较待测样品与已知浓度的内毒素标准品的反应，来确定待测样品中内毒素的浓度。
常用的标定方法包括内毒素结合试验、生物活性测定法和免疫学检测法等。
其中，内毒素结合试验是通过将内毒素与其受体结合来测定内毒素的浓度，生物活性测定法则是通过观察内毒素对生物体的毒性作用来确定其浓度，免疫学检测法则是利用抗体与内毒素特异性结合来检测内毒素的浓度。
二、标定步骤。
1. 准备工作，准备好内毒素标准品、待测样品、试剂和实验仪器。
2. 内毒素结合试验，将不同浓度的内毒素标准品和待测样品分别与其受体结合，观察其结合效果。
3. 生物活性测定法，将不同浓度的内毒素标准品和待测样品分别加入到生物体中，观察其对生物体的毒性作用。
4. 免疫学检测法，利用抗体与内毒素特异性结合的原理，对不同浓度的内毒素标准品和待测样品进行免疫学检测。
5. 数据分析，根据实验结果，利用标定曲线或其他相关方法，计算出待测样品中内毒素的浓度。
三、注意事项。
1. 实验操作要严格按照标定方法进行，避免操作失误导致实验结果不准确。
2. 内毒素标准品的保存和使用要符合相关规定，避免污染和变质。
3. 实验过程中要注意安全，避免接触内毒素对人体造成伤害。
4. 实验结果要进行重复实验和数据统计分析，确保结果的准确性和可靠性。
四、应用领域。
细菌内毒素的标定在医学、生物制药、食品安全等领域具有重要的应用价值。
在临床诊断中，可以通过标定细菌内毒素来判断感染程度和预后情况；在生物制药领域，可以通过标定内毒素来评估生物制品的质量和安全性；在食品安全领域，可以通过标定内毒素来监测食品中的细菌污染情况。
综上所述，细菌内毒素的标定是一项重要的工作，它对于保障人体健康和生产安全具有重要意义。
细菌内毒素检查操作规程
*******制药有限责任公司目的：建立一个规范的细菌内毒素检查操作规程。
范围：本规程适用于细菌内毒素检查。
职责：生物检测人员对本规程实施负责。
内容：1 准备工作1.1 设备用具的洗涤及除热原1.1.1 设备与用具刻度吸管(1、2、5、10ml)、10mm³75mm试管、试管架、不锈钢盒(或铝饭盒)、不锈钢筒(或铝筒)、洗耳球、电热干燥箱、恒温水浴箱、定时钟、电冰箱、旋涡混合器。
1.1.2 洗涤及除热原所用的玻璃器皿，先用自来水冲洗，再浸泡在洗液中过夜，取出后用自来水冲洗至pH中性，再用注射用水冲洗三次。
将刻度吸管放入金属筒内，试管、小瓶等放入金属盒内，于250℃干烤至少60分钟，也可采用其其它确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
1.2 试剂与标准品1.2.1 内毒素检查用水(即无热原水)，为内毒素含量不超过0.015Eu/mL的灭菌注射用水。
1.2.2 75%酒精棉。
1.2.3 细菌内毒素工作标准品，系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
由中国药品生物制品检定所标定和供应。
1.2.4 供试品溶液的制备：某些供试品需进行复溶，稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH值在6.0—8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家的推荐的适宜的缓冲液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
内毒素限值的确定：药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M式中：L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg²h)表示，注射剂K=5EU/(kg²h)，放射性药品注射剂K=2.5EU/( kg²h)，鞘内用注射剂K=0.2EU/( kg²h)；M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg²h)、mg/( kg²h)或U( kg²h)表示，人均体重按60Kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一种由细菌产生的毒素，它们可以导致各种疾病和感染。
为了检测细菌内毒素的存在，有几种常用的方法。
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫吸附试验是一种常用的检测细菌内毒素的方法。
它基于抗体与特定细菌内毒素结合的原理。
首先，在试验板上固定特异性的抗体，然后加入样本溶液。
如果样本中含有目标细菌内毒素，它们将与固定的抗体结合。
接下来，通过冲洗去除未结合的物质，并加入与抗体结合的酶标记二抗。
最后，染色物质被加入，形成颜色反应，测量其光密度即可检测细菌内毒素的存在。
2. 质谱分析质谱分析是一种高分辨率的检测细菌内毒素的方法。
它使用质谱仪来分析样品中的化学成分。
首先，样品通过质谱中的电离源产生离子。
然后，质谱仪以不同的方式对离子进行分离和检测，以确定其质量和相对丰度。
通过与已知细菌内毒素的质谱图进行比对，可以确定样品中是否存在目标内毒素。
3. 生物感应器生物感应器是一种基于生物反应的检测细菌内毒素的方法。
它使用已知对细菌内毒素具有特异性反应的生物分子，如细胞、抗体或酶等。
当目标内毒素存在时，它们与生物分子结合，触发特定的生物反应。
通过测量或监测这些反应的信号变化，可以确定细菌内毒素的存在。
4. 培养试验培养试验是一种传统的检测细菌内毒素的方法。
它通过将样品接种到特定培养基上，培育细菌并观察是否产生内毒素。
一般来说，细菌内毒素的产生需要一定的时间，而且对培养条件和培养基的选择也有一定的要求。
因此，这种方法可能需要更长的时间和更复杂的实验条件。
上述方法各有优缺点，选择适合的方法需要根据具体情况和需求进行。
综合考虑灵敏度、准确性、快速性和成本等因素，可以选择最适合的方法来检测细菌内毒素的存在。
(推荐)细菌内毒素检验操作程序
目的：规范细菌内毒素检验操作程序。
范围：适用于细菌内毒素检查操作。
责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。
内容1准备工作1.1实验设备及用具1.1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250℃烘烤1小时。
1.1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。
1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管1.2内毒素标准品与实验试剂1.2.1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。
1.2.2细菌内毒素检查用水（内毒素含量＜0.015Eu/mL灭菌注射用水）。
1.2.3细菌内毒素国家标准品和工作标准品。
1.2.4 75%乙醇、铬酸洗液。
1.3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌内毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。
1.4恒温水浴箱内水浴温度调节到37±1℃。
2鲎试剂灵敏度复核2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（如：λ=0.25 EU/ml），细菌内毒素工作标准品加入1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟。
2.2将工作标准品制备成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度（0.5 EU/ml、0.25 EU/ml、0.125 EU/ml、0.06 EU/ml）的内毒素标准溶液，备用。
例：工作标准品为160 EU/ml 时30秒。
2.3取18支0.25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入0.1mlBET 水，然后分别加入0.1ml2.2中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入0.1mlBET 水作阴性对照。
2.4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟。
放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。
再次检查温度是否在所要求的范围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。
氯化钠(供注射用)细菌内毒素检查标准操作规程
氯化钠（供注射用）细菌内毒素检查标准操作规程1.供试品溶液的制备：取本品1g，加12ml细菌内毒素检查用水，振摇使其充分溶解，作为供试品溶液。
2.标准对照溶液的制备：将细菌内毒素工作标准品用1.0ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），用细菌内毒素检查用水制成2λ浓度的溶液即为标准对照溶液。
每稀释一步均应在旋涡混合仪上混匀30秒。
3.供试品阳性对照液配制：取上述供试品溶液1ml，再加1ml浓度为4λ的标准对照溶液，混匀，即得供试品阳性对照液。
4.取鲎试剂8支(规格0.1ml,灵敏度0.25EU)，其中2支分别注入0.2ml细菌内毒素检查用水，作为阴性对照；其余6支分别注入0.1ml细菌内毒素检查用水,取2支分别加入供试品溶液0.1ml,作为供试品组；取2支分别加入供试品阳性对照液0.1ml,作为供试品阳性对照组；其余2支分别加入浓度为2λ的标准对照溶液0.1ml,作为阳性对照组。
5.保温：封闭管口，将溶液轻轻混匀后，垂直放入37℃±1℃的恒温水浴锅中，保温60±2分钟，然后取出观察结果。
6.确认结果判定：将安瓿从恒温水浴锅中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。
保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
若阴性对照管均为阴性，供试品阳性对照管均为阳性，阳性对照管均为阳性，试验有效；供试品管均为阴性，判供试品符合规定；供试品管均为阳性，判供试品不符合规定；供试品管中1管为阴性，1管为阳性，需进行复试。
7.标准：每1g含细菌内毒素不得超过5EU。
415 细菌内毒素检查标准操作规程g
范围：注射用水、大输液、化学药品、生化药品、放射性药品、生物制品等以及药品生产过程的内毒素监控。
职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.操作前准备1.1检验人员操作前要穿戴好工作服、工作帽、戴上口罩，手要用75%的酒精消毒。
操作时要力求准确。
1.2设备与用具——试验所用器皿，需经处理，除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小时（或180℃干烤至少2小时）。
1.3试剂与标准品1.3.1无热原水：内毒素含量不超过0.06Eu/ml的注射用水。
1.3.275%酒精棉1.3.3鲎试剂为冻干品，规格有0.1ml/支和0.5ml/支二种。
1.3.4细菌内毒素工作标准品，由中国药品生物制品检定所指定的鲎试剂厂标定及供应。
1.3.5供试品溶液可按药典正文规定进行。
2.操作步骤：2.1取试管5支，各加入0.1ml鲎试剂溶液，其中2支分别加入0.1ml供试品溶液作为供试品管。
2.2另一支加入2倍灵敏度内毒素标准品溶液0.1ml作为阳性对照管。
2.3第四支加入2倍灵敏度内毒素标准品溶液0.1ml，再加入供试品溶液0.1ml 作为样品阳性对照管。
2.4最后一支加入0. 灵敏度1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
2.5将上述5支管轻轻混匀后封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴中保温60min ±2min，小心取出，观察结果。
3.结果判断3.1阳性：缓慢倒转试管180℃，管内物质是坚实凝胶者，记录为（+）3.2阴性：缓慢倒转试管180℃，管内物质流动或呈凝胶状但不能保持完整者，记录为（－）3.3阳性对照管2管均为阳性（+）及阴性对照管为阴性供试品（－），则试验有效。
3.4供试品2管均为阳性结果（+），应判为不符合规定。
如供试品2管均为阴性结果（－）则符合本法规定。
3.5供试品2管中如有一管为（+），一管为（－）时，按“2.操作步骤”另取4支试管复试，4管中如有一管（+），即认为该批样品不符合本法规定。
细菌内毒素检查操作规程
细菌内毒素检查操作规程细菌内毒素检查操作规程一、实验目的细菌内毒素检查是为了检测样本中是否存在细菌产生的内毒素，可以作为细菌感染的诊断依据和治疗效果评估的指标。
二、实验材料和设备1. 细菌培养基和培养物2. 内毒素检测试剂盒3. 显微镜和载玻片4. 离心机5. 温箱和恒温水浴6. 试管、培养皿、移液器等常规实验用品三、实验步骤1. 培养细菌：将待检测的细菌接种到适当的培养基上，放入温箱中以适当的温度和时间进行培养，使细菌生长至对应的生长期。
2. 收集细菌：将培养好的细菌转移到离心管中，使用离心机将细菌离心沉淀。
3. 细菌裂解：将细菌沉淀加入合适的裂解缓冲液中，使用适当的方法将细菌完全裂解。
4. 澄清液分离：使用离心机将细菌裂解液离心，将上清液转移到新的试管中。
5. 内毒素检测：按照内毒素检测试剂盒说明书的要求，将所得上清液加入试剂盒中，进行内毒素的检测。
6. 结果解读：根据试剂盒的指示，观察试剂盒中的颜色变化或读取光密度等指标，判断样品中是否存在细菌内毒素。
7. 结果验证：使用正负对照样品验证结果的准确性和可靠性。
四、实验注意事项1. 实验过程需要遵守无菌操作的要求，避免细菌污染。
2. 实验中使用的试剂和培养基要在有效期内，并按照要求保存。
3. 实验过程中应注意个人防护，避免接触到有害物质。
4. 操作前要充分了解试剂盒的使用方法和读取结果的标准。
5. 结果解读时要考虑到阳性和阴性对照的结果，以免误判。
6. 使用的设备要事先进行验证和校准，以保证实验结果的准确性和可靠性。
五、实验结果记录和分析1. 记录实验所使用的试剂批号和有效期。
2. 记录实验过程中的注意事项和操作细节。
3. 记录实验结果，包括阳性和阴性对照的结果。
4. 对实验结果进行分析和解释，判断样品中是否存在细菌内毒素。
六、实验结果的报告和存档1. 编写实验报告，包括实验目的、材料和方法、结果分析、结论等内容。
2. 报告中要附带实验记录、数据分析和结果验证等材料。
细菌内毒素检查仪使用操作规程
一．目的：建立细菌内毒素检查仪标准操作规程。
二．适用范围：化验室操作人员。
三．责任者：化验室操作人员负责本规程的实施，化验室负责人负责监督。
四．内容：1.操作步骤1.1向水浴槽内注入蒸馏水(最好除气)至水位线下沿。
1.2接通电源，打开电源开关，电源指示灯亮，同时仪器面板上数字显示水浴槽内温度值。
1.3按下控温键，相应加热指示灯亮，表示开始加热，水温应逐渐升高。
1.4水浴温度达到37℃时，加热指示灯灭，仪器自动恒温。
1.5时间预置为1小时即显示01:00，可按时间设定的△、▽键调节。
1.6试验准备，试验方法及结果判断按“细菌内毒素检查法”的要求进行。
1.7当试管(安瓿瓶)放到水浴槽时，立即开始试验。
按下测试键，仪器便自动按预置1小时开始计时，待到59分钟时，即发出提示信号报警，提请操作人员做观察试验结果的准备。
1.8 60分钟到时，操作人员双手食指放于试管架两端板的圆凹处，向上后方提升试管架，缓缓倒转180°后观察并记录试验结果。
1.9为了方便观察记录，本机在试管架上做了标记，编了序号，操作人员可根据需要安排试管位置。
1.10 本机设有8个自身凝集插孔，供24小时观察自身凝集试验用。
通常需要4孔，另外4孔可做为标准温度计插孔，以便校核数显温度值。
1.11试验结束，关闭电源。
1.12填写仪器使用登记。
2.注意事项及维护保养2.1仪器使用前，需检查电源线，加热器线，温度传感器线是否接通，水浴槽内是否注水。
开启电源开关，指示灯应亮，否则应检查保险管是否熔断或电源是否接通。
2.2按下加热键，数显温度值应增长，加热指示灯亮(低于37℃时)，否则检查加热器线是否接通，或发光二极管是否损坏。
2.3试管夹卡不住试管，更换损坏的试管夹，或试管外径不符合要求(小于Φ10mm)则更换试管。
2.4水浴温度超标，应检查温控电路。
工作区域温度不均匀，调整匀热板的位置。
2.5计时不准时，应检查计时电路。
到位不报警，检查报警电路或蜂鸣器是否损坏。
纯化水细菌内毒素标准
纯化水细菌内毒素标准纯化水是制药行业中的重要组成部分，其质量和安全性对药品的生产和品质有着至关重要的影响。
细菌内毒素是纯化水中的一种重要污染物，它是一种脂多糖，由革兰氏阴性菌细胞壁组成，具有热稳定性、水溶性、酶不降解性等特点。
因此，对纯化水进行细菌内毒素检测和控制是保证药品质量和安全性的重要措施。
以下是纯化水细菌内毒素标准的主要内容。
一、标准范围本标准规定了纯化水中的细菌内毒素限量值和检测方法。
适用于制药行业中的纯化水制备和使用过程中对细菌内毒素的检测和控制。
二、标准要求1.细菌内毒素限量值：根据制药行业的不同药品品种和生产工艺要求，纯化水中的细菌内毒素限量值应符合相关规定。
一般来说，细菌内毒素含量应小于0.25EU/ml。
2.检测方法：采用鲎试剂法进行细菌内毒素检测。
该方法是一种基于鲎血细胞的生物检定法，通过检测细菌内毒素对鲎血细胞的凝集作用，从而确定样品中的细菌内毒素含量。
三、标准操作流程1.采样：在纯化水制备和使用过程中，分别采集各个关键控制点的水样，如原水、砂滤水、碳滤水、反渗透水等。
每个水样应采集500ml以上，用灭菌容器保存，并在2小时内送至实验室进行检测。
2.试剂准备：准备好鲎试剂、细菌内毒素标准品、稀释液、无热原空白平板等实验用品。
3.实验操作：将鲎试剂与待测水样按照规定的比例进行稀释，然后在恒温条件下进行孵育。
在孵育过程中观察鲎试剂的凝集反应情况，并记录各个稀释度的细菌内毒素含量。
4.数据处理：根据实验结果，计算出待测水样中的细菌内毒素含量。
如果细菌内毒素含量超过限量值，则说明该水样不符合标准要求。
5.质量保证：在进行细菌内毒素检测时，应确保实验室的清洁和消毒工作，避免样品受到污染。
此外，应使用有证的标准品进行标定和校准，确保实验结果的准确性和可靠性。
6.结果报告：将检测结果及时报告给相关部门和人员，以便对纯化水制备和使用过程进行监控和控制。
如果发现细菌内毒素含量超标，应立即采取措施进行纠正和改进。
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细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。
范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素限量检测。
责任人：质量检测人员材料：一、电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能达到180℃。
二、恒温水浴箱或适宜的恒温器（37℃±1℃）。
三、水银温度计，精度在1℃以下，量程不小于50℃。
四、旋涡混合器。
五、可调式移液器六、0.25EU/ml鲎试剂。
七、细菌内毒素工作品。
八、凝胶法细菌内毒素检查用水。
九、实验用具无热原吸头（1000μl、200μl）、带铝盖的凝集管（10mm×75mm）、试管架、计时器、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、镊子、砂轮。
所用玻璃器皿使用前须经250℃干烤至少1小时或180℃干烤至少4小时。
操作方法一、取样1、细胞发放前3天，取细胞培养液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放（可存放多长时间）。
2、细胞发放当天，取细胞生理盐水混悬液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放。
（可存放多长时间）。
3、取样应以无菌操作技术取样，所用器材在使用前应无热原或已去除热原。
二、鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的是考察鲎试剂的灵敏度是否正确、考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。
在使用一批新的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
（一）实验操作1、细菌内毒素工作品溶液的制备取细菌内毒素工作品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，开启过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照工作品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后用倍倍稀释方式进行稀释，即0.5ml各浓度工作品溶液+0.5ml检查用水（以下稀释方式同此法），制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
2、待复核鲎试剂的准备取0.1ml/支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
若待复核鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，取若干支按其标示量加入检查用水复溶，充分溶解后将鲎试剂溶液混合在一起，然后每0.1 ml分装到10mm×75mm凝集管中，要求至少分装18管备用。
3、加样将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。
4支（管）4列每列每支分别加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。
4、加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟。
5、观察并记录结果。
将试管架从水浴或适宜恒温器中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（＋）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
（二）实验结果计算如最大浓度为2.0λ的4管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λC）。
λC=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值（1g）。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
（三）结果判断当λC在0.5λ-2λ（包括0.5λ和2λ）时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌内毒素检查，并以λ（标示灵敏度）为该批鲎试剂的灵敏度。
三、干扰实验（一）实验目的干扰试验的目的是确定供试品内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。
并且验证当供试品的配方和工艺有变化、鲎试剂来源改变或供试品阳性对照结果呈阴性时供试品是否存在干扰作用。
（二）实验操作1、制备内毒素标准对照溶液取1支细菌内毒素工作品，用细菌内毒素检查用水先稀释至2EU/ml，再稀释成4个浓度的标准溶液即2.0λ、λ、0.5λ、0.25λ。
2、制备含内毒素的供试品溶液用供试品溶液将1、中的2EU/ml细菌内毒素工作品溶液稀释成4个浓度即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液。
3、鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂36支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
4、加样将准备好的鲎试剂18支放在试管架上，排成5列，4列4支，1列2支。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素标准对照液，另一列2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照。
将另外18支鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支，1列2支。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素的含供试品溶液；另一列2支加入0.1ml供试品溶液作为样品阴性对照。
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，两同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟后，观察并记录结果。
（三）实验结果计算如两组最大浓度2.0λ均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴性，阴性对照4管均为阴性时，按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（ES）和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均（Et）。
ES=lg-1(∑XS/4)Et=lg-1(∑Xt/4)式中XS、Xt分别为用检查用水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。
（四）结果判断当ES在0.5λ-2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且Et在0.5 ES～2.0 ES（包括0.5 ES 和2.0 ES）时，则认为供试品不干扰试验，可用此方法对此供试品进行细菌内毒素检查。
当ES不在0.5λ-2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，则认为供试品干扰实验。
应使用适宜的方法排除干扰，如对供试品进行更大倍数稀释等。
四、供试品细菌内毒素检查凝胶限度试验在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
（一）操作方法1、供试品溶液的制备根据合格标准和鲎试剂灵敏度将供试品进行稀释（如CIK细胞合格标准为低于2 EU/ml，鲎试剂灵敏度为0.25 EU/ml，则8倍稀释）。
2、阳性对照溶液的制备用检查用水将内毒素标准品稀释制成2λ浓度的内毒素标准液。
3、供试品阳性对照溶液的制备用待检测的供试品溶液8倍稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度的内毒素溶液。
4、阴性对照液即细菌内毒素检查用水5、鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解、轻轻转动瓶壁，使内溶物充分溶解，避免产生气泡。
6、加样取8支（管）溶解好的鲎试剂，其中2支加入0.1ml供试品溶液8倍稀释液作为供试品管，2支加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管（PC），2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照管，（NC），2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管（PPC）。
7、将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟。
保温和取放试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
（二）结果判断当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验方为有效。
若供试品管2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供试品2管均为阳性，应认为不符合规定；如2管中1管为阳性，1管为阴性，按上述方法另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。
注意事项1 实验前，须用肥皂洗手，用75%酒精棉球消毒。
2 操作时37℃保温前应尽量保持无风状态，人员行动要轻缓，以防止空气体的内毒素进入供试液。
3 溶解鲎试剂及混匀供试品的鲎试剂时，不要剧烈振荡避免产生气泡。
4 由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果。
5 进行干扰实验时，标准对照系列和含内毒素的供试品溶液系列应同时进行。
6 在进行鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和供试品细菌内毒素检查时，各个实验中要求的对照应同时进行，并在实验有效的情况才能进行计算和判断。
7 实验操作应在清洁环境中进行，过程中应防止微生物的污染。
（具体到各实验室，应在实验室的那个部位进行操作）使用过的玻璃器皿如何处理？。