黑骨藤中总黄酮含量的测定
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(1. 四川师范大学 生命科学学院 , 四川 成都 610066; 2. 四川师范大学 植物资源应用与开发研究所 , 四川 成都 610066)
摘要 :对采自不同产地、不同年份黑骨藤的总黄酮含量进行了测定. 以芦丁为对照品 ,检测波长 510 nm,绘制 标准曲线 ,采用紫外分光光度法测定总黄酮的相对百分含量. 芦丁对照品在 2. 065～103. 250 mg·L - 1范围内有良 好的线性关系 ( r = 0. 999 90) ,平均回收率为 98. 03% , RSD 值为 1. 40%. 采用分光光度法测定黑骨藤的总黄酮含量 操作简便、结果可靠 ,为评价黑骨藤的质量提供了依据.
32. 02 2. 578 1. 459 4. 001 97. 53 98. 03 1. 40
31. 97 2. 576 1. 459 4. 029 99. 59
3. 6 样品制备条件的选择 3. 6. 1 提取方法的选择 用甲醇作溶剂 ,常规回
流法 (粒度 30 目 , 80 ℃水浴 ,料液比 1 ∶8,提取 3 次 ,每次 2 h) ,测得相对百分含量为 5. 59% ( RSD 值为 2. 00% , n = 3) ;超声波提取 (粒度 30目 , 80 ℃ 水浴 ,料液比 1∶8,提取 3次 ,每次 30 m in) ,测得相 对百分含量为 6. 76% (RSD 值为 2. 15% , n = 3). 结 果表明 ,超声提取法测得含量更高 ,故选择用超声 提取方式 ,实验数据见表 3.
1 仪器 、试剂与材料
日本岛津 UV - 1700型紫外可见扫描分光光度 计 , KQ - 300DE 型数控超声波清洗器 ,德国 SAR2 TOR IUS B P211D 型电子天平. 芦丁对照品由中国药 品生物制品检定所提供. 其他试剂均为分析纯. 黑 骨藤样品由本课题组于 2005～2007年在贵州省贵
水
2 0. 501 17. 034 3. 40
3 0. 501 17. 886 3. 57
1 φ(乙醇 ) =50% 2
0. 501 36. 172 7. 22 0. 502 36. 696 7. 31
关键词 :黑骨藤 ; 总黄酮 ; 紫外分光光度法 中图分类号 : R917; S816. 17 文献标志码 : A 文章编号 : 1001 - 8395 (2010) 01 - 0089 - 04
do i: 10. 3969 / j. issn. 1001 - 8395. 2010. 01. 019
2. 6 样品溶液的制备及含量测定 精确称取一定 量过 30目筛的样品 ,按 2. 4项下同法操作 ,根据回 归方程得出样品的黄酮含量.
3 结果
3. 1 标准曲线 根据光谱扫描结果 ,确定波长为 510 nm. 得到的回归方程为 : y = 0. 011 72x - 0. 004 65,相关 系数 r = 0. 999 90. 表明在 2. 065 ～103. 250 mg· L - 1之间芦丁标准品呈良好的线性关系. 3. 2 精密度 精密度结果见表 1, RSD 值均低于 5% ,该方法精密度较好 ,符合含量分析要求.
2010年 1月 第 33卷 第 1期
四川师范大学学报 (自然科学版 ) Journal of Sichuan Normal University (Natural Science)
Jan. , 2010 Vol. 33, No. 1
黑骨藤中总黄酮含量的测定
景小楠 1 , 钟 菡 1 , 张 宏 1, 23 , 于树华 1, 2
目前对于黑骨藤的研究主要涉及化学成分及抗 风湿、抗炎等药理作用的研究. 已知的化学成分有熊 果酸等三萜类化合物 [4 - 7] ,杠柳苷元 、杠柳苷等强心 苷类化合物 [8 - 10 ] ,未见对其总黄酮化合物的相关研 究报道. 近年来 ,黄酮类化合物因具有抑菌、止咳抗 炎、抗心率失常、降血脂 、抗氧化、雌性激素样作用、 抗肿瘤、消除机体内自由基抗衰老 、增强机体免疫 力 [6 - 7 ]等多项药理活性且毒性低而备受关注. 本课 题组在前期研究中发现黑骨藤中含有黄酮类化合 物 ,在此研究基础上本文就对采自于不同地域 、不同 时间的黑骨藤植物中的总黄酮含量进行分析比较 , 为黑骨藤药用资源的综合利用提供科学依据.
表 2 加标回收率实验结果 Table 2 The results of spotting recovery 样品重 黄酮含 加标 测得 回收 平均 量 /mg 量 /mg 量 /mg 量 /mg 率 / % 值 / % RSD / %
32. 06 2. 581 1. 459 3. 996 96. 98
6 0. 027 0. 431 1. 006 0. 028 0. 431 0. 997
平均值
0. 027 0. 438 0. 975 0. 028 0. 443 0. 100
RSD / %
4. 30 1. 07 4. 12 5. 00 2. 27 1. 86
3. 3 稳定性 在 15、30、45、60、90、150 m in的吸光值 为 0. 443、0. 443、0. 435、0. 421、0. 415、0. 413, RSD 值为 3. 20% ,较小. 从吸光值数据来看 ,前 30 m in吸光值更 为稳定 ,说明在前 30 m in样品有更好的稳定性. 3. 4 重现性 样品含量分别为 7. 44%、7. 72%、 7. 45%、7. 50%、7. 31%、7. 28% , 其 RSD 值 为 2. 11% ,较小 ,符合含量分析要求. 3. 5 加 标 回 收 率 加 标 回 收 率 在 96. 98% ～ 99. 59% ,结果见表 2.
表 4 提取溶剂对总黄酮溶出量的影响 Table 4 The effect of solven t on tota l flavone con ten t
溶剂
编号
药材 重 /g
提取 提取 量 /mg 率 / %
平均 值 /%
RSD / %
1 0. 500 16. 550 3. 31 3. 43 3. 85
5. 50 5. 57
5. 59 2. 00
3
0. 499
28. 543
5. 72
1 超声 2
0. 501 0. 502
33. 367 33. 634
6. 66 6. 70
6. 76 2. 15
3
0. 501
34. 719
6. 93
3. 6. 2 提取溶剂的选择 考察水 ,质量分数分别为
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
精密度 日内 日间
c / (mg·L - 1 )
2. 474 37. 110 86. 600
2. 474 37. 110 86. 600
表 1 精密度测定结果 ( n = 6) Table 1 The results of prec ision( n = 6)
吸光度
1
2
3
4
5
0. 029 0. 443 0. 988 0. 029 0. 443 0. 979
黑骨藤 ( Periploca forrestii S ch ltr) 属于萝摩 科 (A sclepiadaceae)杠柳亚科 ( S ubfam. Periplocoideaek. S chum )植物 ,是被贵州省药材标准收载的一种苗 药 ,具有祛风除湿 、活血通络 、消痹止痛的功能 ,可 舒筋活络 、祛风除湿 ; 主治风湿性关节炎 、跌打损 伤 、胃痛 、消化不良 、闭经 、痢疾等 [ 1 - 3 ].
表 3 提取方式对比实验结果 Table 3 The com par ison of d ifferen t extracting m ethods
方式 编号 药材重 / g
黄酮含 量 /mg
黄酮提取 平均 率 / % 值 / % RSD / %
1 回流 2
0. 501 0. 500
27. 555 27. 850
90
四川师范大学学报 (自然科学版 )
33卷
60、90、150 m in,测定吸光度 ,计算稳定性. 2. 4 重现性的测定 精密称取一定量的西昌黑骨 藤 (采自 2007 年 )的茎 ,粉碎过 30 目筛 ,按 1 ∶20 的固液比用质量分数为 50%乙醇浸泡超声提取. 提 取条件 :时间 30 m in,温度 70 ℃,超声频率 40 kHz. 提取液过滤 、浓缩 、定容得样品溶液. 取一定量溶液 充分摇匀后用定量滤纸过滤 ,移取滤液 ,按 2. 1 项 下同法操作 ,定容 ,在 510 nm 测定吸光度值 ,根据 回归方程得出样品的黄酮含量. 2. 5 加标回收率 精密称取一定量的西昌黑骨藤 (采自 2007年 )的茎 ,再精确加入适量的芦丁对照 品溶液 (浓度为 486. 19 m g·L - 1 ) 3 mL ,按 2. 4 项 下同法操作 ,测定含量 ,计算加标回收率.
第 1期
景小楠等 : 黑骨藤中总黄酮含量的测定
91
50%、75%和 95%的乙醇、甲醇、乙酸乙酯 6种溶剂对 提取率的影响 (30目黑骨藤药材 ,料液比 1∶20,温度 50 ℃,时间 30 m in,超声提取两次 ) ,结果表明黄酮含 量在质量分数为 50%乙醇中最高 ,平均值为 7. 37% (RSD 值为 2. 47% , n = 3) ,实验数据见表 4.
阳市 、四川省凉山州西昌市和都江堰市青城山采 集 ,经四川成都中医药大学生药教研室鉴定为萝摩 科 (A sclepiadaceae) 杠柳属 ( Periploca L inn ) 黑骨 藤 ( Periploca forrestil S ch ltr).
2 实验方法
2. 1 标 准 曲 线 的 制 作 精 密 称 取 芦 丁 标 准 品 0. 020 65 g,用质量分数为 50%乙醇配制成 206. 5 mg ·L - 1的储备液. 精密移取上述储备液 0. 1、0. 5、1. 0、 2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL 于 10 mL 容量瓶中 ,分别加入 0. 3 mL质量分数为 5%亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,放置 6 m in后加入 0. 3 mL 质量分数为 10%硝酸铝溶液 ,摇 匀 ,放置 6 m in后加入 4 mL质量分数为 4%的 NaOH 溶液 ,用质量分数为 50%的乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 静置 20 m in[11 ]. 在 200～600 nm 波长范围进行吸收 光谱扫描. ,以不加标准品同法制备空白对照. 在 510 nm处测定吸光度 ,以芦丁浓度为横坐标 ,吸光度为 纵坐标进行拟合 ,得出回归方程. 2. 2 精密度的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,测定低 、中 、高 3 个质量 浓度分别为 2. 474 、37. 110、86. 600 m g·L - 1的吸 光度值 ,分别测定日内精密度和日间精密度. 2. 3 稳定性的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,在室温下放置 15、30、45、
0. 027 0. 443 0. 906 0. 026 0. 441 0. 998
0. 028 0. 435 0. 979 0. 029 0. 461 0. 986
0. 026 0. 436 0. 955 0. 026 0. 443 1. 007
0. 026 0. 437 1. 017 0. 027 0. 437 1. 032
收稿日期 : 2008 - 10 - 16 基金项目 :国家自然科学基金 (30870257)资助项目 3 联系作者简介 :Leabharlann Baidu 宏 (1965—) ,女 ,教授 ,主要从事天然产物化学的研究
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
摘要 :对采自不同产地、不同年份黑骨藤的总黄酮含量进行了测定. 以芦丁为对照品 ,检测波长 510 nm,绘制 标准曲线 ,采用紫外分光光度法测定总黄酮的相对百分含量. 芦丁对照品在 2. 065～103. 250 mg·L - 1范围内有良 好的线性关系 ( r = 0. 999 90) ,平均回收率为 98. 03% , RSD 值为 1. 40%. 采用分光光度法测定黑骨藤的总黄酮含量 操作简便、结果可靠 ,为评价黑骨藤的质量提供了依据.
32. 02 2. 578 1. 459 4. 001 97. 53 98. 03 1. 40
31. 97 2. 576 1. 459 4. 029 99. 59
3. 6 样品制备条件的选择 3. 6. 1 提取方法的选择 用甲醇作溶剂 ,常规回
流法 (粒度 30 目 , 80 ℃水浴 ,料液比 1 ∶8,提取 3 次 ,每次 2 h) ,测得相对百分含量为 5. 59% ( RSD 值为 2. 00% , n = 3) ;超声波提取 (粒度 30目 , 80 ℃ 水浴 ,料液比 1∶8,提取 3次 ,每次 30 m in) ,测得相 对百分含量为 6. 76% (RSD 值为 2. 15% , n = 3). 结 果表明 ,超声提取法测得含量更高 ,故选择用超声 提取方式 ,实验数据见表 3.
1 仪器 、试剂与材料
日本岛津 UV - 1700型紫外可见扫描分光光度 计 , KQ - 300DE 型数控超声波清洗器 ,德国 SAR2 TOR IUS B P211D 型电子天平. 芦丁对照品由中国药 品生物制品检定所提供. 其他试剂均为分析纯. 黑 骨藤样品由本课题组于 2005～2007年在贵州省贵
水
2 0. 501 17. 034 3. 40
3 0. 501 17. 886 3. 57
1 φ(乙醇 ) =50% 2
0. 501 36. 172 7. 22 0. 502 36. 696 7. 31
关键词 :黑骨藤 ; 总黄酮 ; 紫外分光光度法 中图分类号 : R917; S816. 17 文献标志码 : A 文章编号 : 1001 - 8395 (2010) 01 - 0089 - 04
do i: 10. 3969 / j. issn. 1001 - 8395. 2010. 01. 019
2. 6 样品溶液的制备及含量测定 精确称取一定 量过 30目筛的样品 ,按 2. 4项下同法操作 ,根据回 归方程得出样品的黄酮含量.
3 结果
3. 1 标准曲线 根据光谱扫描结果 ,确定波长为 510 nm. 得到的回归方程为 : y = 0. 011 72x - 0. 004 65,相关 系数 r = 0. 999 90. 表明在 2. 065 ～103. 250 mg· L - 1之间芦丁标准品呈良好的线性关系. 3. 2 精密度 精密度结果见表 1, RSD 值均低于 5% ,该方法精密度较好 ,符合含量分析要求.
2010年 1月 第 33卷 第 1期
四川师范大学学报 (自然科学版 ) Journal of Sichuan Normal University (Natural Science)
Jan. , 2010 Vol. 33, No. 1
黑骨藤中总黄酮含量的测定
景小楠 1 , 钟 菡 1 , 张 宏 1, 23 , 于树华 1, 2
目前对于黑骨藤的研究主要涉及化学成分及抗 风湿、抗炎等药理作用的研究. 已知的化学成分有熊 果酸等三萜类化合物 [4 - 7] ,杠柳苷元 、杠柳苷等强心 苷类化合物 [8 - 10 ] ,未见对其总黄酮化合物的相关研 究报道. 近年来 ,黄酮类化合物因具有抑菌、止咳抗 炎、抗心率失常、降血脂 、抗氧化、雌性激素样作用、 抗肿瘤、消除机体内自由基抗衰老 、增强机体免疫 力 [6 - 7 ]等多项药理活性且毒性低而备受关注. 本课 题组在前期研究中发现黑骨藤中含有黄酮类化合 物 ,在此研究基础上本文就对采自于不同地域 、不同 时间的黑骨藤植物中的总黄酮含量进行分析比较 , 为黑骨藤药用资源的综合利用提供科学依据.
表 2 加标回收率实验结果 Table 2 The results of spotting recovery 样品重 黄酮含 加标 测得 回收 平均 量 /mg 量 /mg 量 /mg 量 /mg 率 / % 值 / % RSD / %
32. 06 2. 581 1. 459 3. 996 96. 98
6 0. 027 0. 431 1. 006 0. 028 0. 431 0. 997
平均值
0. 027 0. 438 0. 975 0. 028 0. 443 0. 100
RSD / %
4. 30 1. 07 4. 12 5. 00 2. 27 1. 86
3. 3 稳定性 在 15、30、45、60、90、150 m in的吸光值 为 0. 443、0. 443、0. 435、0. 421、0. 415、0. 413, RSD 值为 3. 20% ,较小. 从吸光值数据来看 ,前 30 m in吸光值更 为稳定 ,说明在前 30 m in样品有更好的稳定性. 3. 4 重现性 样品含量分别为 7. 44%、7. 72%、 7. 45%、7. 50%、7. 31%、7. 28% , 其 RSD 值 为 2. 11% ,较小 ,符合含量分析要求. 3. 5 加 标 回 收 率 加 标 回 收 率 在 96. 98% ～ 99. 59% ,结果见表 2.
表 4 提取溶剂对总黄酮溶出量的影响 Table 4 The effect of solven t on tota l flavone con ten t
溶剂
编号
药材 重 /g
提取 提取 量 /mg 率 / %
平均 值 /%
RSD / %
1 0. 500 16. 550 3. 31 3. 43 3. 85
5. 50 5. 57
5. 59 2. 00
3
0. 499
28. 543
5. 72
1 超声 2
0. 501 0. 502
33. 367 33. 634
6. 66 6. 70
6. 76 2. 15
3
0. 501
34. 719
6. 93
3. 6. 2 提取溶剂的选择 考察水 ,质量分数分别为
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
精密度 日内 日间
c / (mg·L - 1 )
2. 474 37. 110 86. 600
2. 474 37. 110 86. 600
表 1 精密度测定结果 ( n = 6) Table 1 The results of prec ision( n = 6)
吸光度
1
2
3
4
5
0. 029 0. 443 0. 988 0. 029 0. 443 0. 979
黑骨藤 ( Periploca forrestii S ch ltr) 属于萝摩 科 (A sclepiadaceae)杠柳亚科 ( S ubfam. Periplocoideaek. S chum )植物 ,是被贵州省药材标准收载的一种苗 药 ,具有祛风除湿 、活血通络 、消痹止痛的功能 ,可 舒筋活络 、祛风除湿 ; 主治风湿性关节炎 、跌打损 伤 、胃痛 、消化不良 、闭经 、痢疾等 [ 1 - 3 ].
表 3 提取方式对比实验结果 Table 3 The com par ison of d ifferen t extracting m ethods
方式 编号 药材重 / g
黄酮含 量 /mg
黄酮提取 平均 率 / % 值 / % RSD / %
1 回流 2
0. 501 0. 500
27. 555 27. 850
90
四川师范大学学报 (自然科学版 )
33卷
60、90、150 m in,测定吸光度 ,计算稳定性. 2. 4 重现性的测定 精密称取一定量的西昌黑骨 藤 (采自 2007 年 )的茎 ,粉碎过 30 目筛 ,按 1 ∶20 的固液比用质量分数为 50%乙醇浸泡超声提取. 提 取条件 :时间 30 m in,温度 70 ℃,超声频率 40 kHz. 提取液过滤 、浓缩 、定容得样品溶液. 取一定量溶液 充分摇匀后用定量滤纸过滤 ,移取滤液 ,按 2. 1 项 下同法操作 ,定容 ,在 510 nm 测定吸光度值 ,根据 回归方程得出样品的黄酮含量. 2. 5 加标回收率 精密称取一定量的西昌黑骨藤 (采自 2007年 )的茎 ,再精确加入适量的芦丁对照 品溶液 (浓度为 486. 19 m g·L - 1 ) 3 mL ,按 2. 4 项 下同法操作 ,测定含量 ,计算加标回收率.
第 1期
景小楠等 : 黑骨藤中总黄酮含量的测定
91
50%、75%和 95%的乙醇、甲醇、乙酸乙酯 6种溶剂对 提取率的影响 (30目黑骨藤药材 ,料液比 1∶20,温度 50 ℃,时间 30 m in,超声提取两次 ) ,结果表明黄酮含 量在质量分数为 50%乙醇中最高 ,平均值为 7. 37% (RSD 值为 2. 47% , n = 3) ,实验数据见表 4.
阳市 、四川省凉山州西昌市和都江堰市青城山采 集 ,经四川成都中医药大学生药教研室鉴定为萝摩 科 (A sclepiadaceae) 杠柳属 ( Periploca L inn ) 黑骨 藤 ( Periploca forrestil S ch ltr).
2 实验方法
2. 1 标 准 曲 线 的 制 作 精 密 称 取 芦 丁 标 准 品 0. 020 65 g,用质量分数为 50%乙醇配制成 206. 5 mg ·L - 1的储备液. 精密移取上述储备液 0. 1、0. 5、1. 0、 2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL 于 10 mL 容量瓶中 ,分别加入 0. 3 mL质量分数为 5%亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,放置 6 m in后加入 0. 3 mL 质量分数为 10%硝酸铝溶液 ,摇 匀 ,放置 6 m in后加入 4 mL质量分数为 4%的 NaOH 溶液 ,用质量分数为 50%的乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 静置 20 m in[11 ]. 在 200～600 nm 波长范围进行吸收 光谱扫描. ,以不加标准品同法制备空白对照. 在 510 nm处测定吸光度 ,以芦丁浓度为横坐标 ,吸光度为 纵坐标进行拟合 ,得出回归方程. 2. 2 精密度的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,测定低 、中 、高 3 个质量 浓度分别为 2. 474 、37. 110、86. 600 m g·L - 1的吸 光度值 ,分别测定日内精密度和日间精密度. 2. 3 稳定性的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,在室温下放置 15、30、45、
0. 027 0. 443 0. 906 0. 026 0. 441 0. 998
0. 028 0. 435 0. 979 0. 029 0. 461 0. 986
0. 026 0. 436 0. 955 0. 026 0. 443 1. 007
0. 026 0. 437 1. 017 0. 027 0. 437 1. 032
收稿日期 : 2008 - 10 - 16 基金项目 :国家自然科学基金 (30870257)资助项目 3 联系作者简介 :Leabharlann Baidu 宏 (1965—) ,女 ,教授 ,主要从事天然产物化学的研究
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net