黑骨藤中总黄酮含量的测定
苗药黑骨藤研究进展
•综述・苗药黑骨藤研究进展!杨波，张建锋"国药集团同济堂(贵州)制药有限公司，贵州贵阳550009［摘要］苗药黑骨藤是民间广泛用于治疗风湿、类风湿等风湿类疾病的民族药，本文对其提取工艺、化学成分、质量控制、药理作用、临床应用等方面进行综述，以为黑骨藤进一步研究与开发利用提供参考。
［关键词］黑骨藤；提取工艺；化学成分；质量控制；药理作用；临床应用［中图分类号］R282.71［文献标识码］A［文章编号］-673-890(20-9)088-2205doi：10.13313/j.issn.16730890.20190424005Research Progrest of Miao Medicine Periplock forrestiiYANGBo，ZHANGJian-feng"Toogjitang Of Sinopharm,Group Guizhoo Pharmaceutical Co-&Ltd.&Guiyang550009&China+AbstracU］Periploca farrestii&a Miao nationalim herbal is widely used in folk medicine to treat rheumatism&rheuma-oid and oAheeeheumaicdiseases，Ahepapeeweeeeeviewed on aspecsofAheeieacion peoce s，chemicaacomposiion，quaai-ycon eoa，phaemacoaogicaae f ecsand cainicaaappaicaions，ipeovidesbasisfoeAhefueheeeeseaech and deveaopmenAand rational utilization of P.forrestii-+Keywords］Periploca farrestii Schlta；extraction technology；chemical composition；quality control；pharmacologicale f ects；cainicaaappaications黑骨藤是贵州苗族地区常用药物之一，其味苦、辛，性温，有小毒；具有祛风除湿、活血消痈之功效，常用于治疗跌打损伤、风湿痛、骨折等*黑骨藤为萝摩科植物西南杠柳Peripoca farrestii Schltr-的根或全株*该种主要分布于贵州、云南、西藏等,在其他民族也有药用，《广西药用植物名录》（铁散沙、牛尾蕨、铁骨头、山筋线）、《贵州草药》（黑骨头、柳叶过山龙）、《昆明民间常用草药》（山杨柳、、、柳）、《 云中药》（飞仙藤、达风藤）、《云南中草药》（/J、黑牛、青香藤、奶浆藤、青色丹、青风藤）等中均有药用记载+1］。
中草药中黄酮类化合物含量的测定方法研究进展
中草药中黄酮类化合物含量的测定方法研究进展
杨慧;杨天润;马子雲
【期刊名称】《医学研究与教育》
【年(卷),期】2022(39)3
【摘要】黄酮类化合物是一种广泛存在于植物中的天然有机化合物,在许多中草药中含量较为丰富。
作为多种中药的主要有效成分之一,黄酮类化合物因其广泛的生理或药理活性在疾病治疗中发挥重要作用,广泛应用于临床。
中草药中有效成分含量的测定是药品质量控制的重要环节之一,现对中草药中黄酮类化合物含量的不同测定方法作一综述。
【总页数】5页(P9-13)
【作者】杨慧;杨天润;马子雲
【作者单位】河北大学基础医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.普洱茶中黄酮类化合物含量的测定方法
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黔不同产地苗药黑骨藤的质量分析
： Ａ 一 ．
０ １ ０ ２０ ３ ０ ∞ ５ ｏ
试液， 测得槲皮素 一３—０一 —Ｌ一吡喃 阿拉伯糖 苷平 均
质量分数 ， 其结果见表 ４ 。
表 ４ 重 复 性试 验 结 果 ｌ ６） ｎ＝ ・
－ ｒｉ ， ｎ ａ
图 ２ 黑骨 藤 样 品 及 对 照 品
甲醇。
３ ２ ３ 提取时 间的选择 ： 定选用 回流提取法 ，甲醇为 ．． 确 提取溶媒 后 ， 分别又对 回流 １ １５ ２ ２ ５ ３ｈ ， ． ， ， ． ， 进行 了比
较 试 验 ， 果 表 明 回流 提 取 ２ｈ即能 较 完 全 提 取 出 黑 骨 藤 结
测定结果 。 其结果见表 ６ 。
只有 ０ ２ ９ ｍ ￣ ～， ． １５ ｇ ｇ 最高 为贵 州贵 阳市郊香 纸沟产 含量
为 ０ ２ １ｍ ｐ ～， 同产 地 黑 骨 藤 药 材 中槲 皮 素 一３一Ｏ ．４ ０ ｇ￣ 不 ｇ
实验结果表 明： 所采 的 ５批黑 骨藤 药材 中槲 皮 素 一３
—
一
一
Ｌ一吡喃阿拉伯糖苷 的含量有 明显差异 ； 般黑骨藤 一
黑骨藤为萝 蘼科杠柳 属植 物黑 龙骨 Ｐｒ ｌ ａｆｒ ｓ ｉ ｅｉ ｏ ｒ ｔ ｐ ｃ ｏ ｅｉ Ｓｈｔ 的干燥根或全株 。主 产于西南 的贵州等 地 ， 属植 ｃ ｌ． ｒ 该 物全世界共 １ ， 国产 ４种 ， ２种 我 均为药用植物 ， 主要 分布
阳中医学 院药 学 院孙 庆文 老 师鉴 定 为 正 品， 阴干 。甲醇 （ 析纯 ，５ ） 甲醇 （ 分 ９％ ， 色谱 纯 ， 批号 １ １６ ） 水 （ 哈哈 １６ ３ ， 娃 纯净水 ， 批号 １ １０ ） ２７ ０ 。
加热回流提取 ２ ， ｈ 放冷 ， 用甲醇补足减失质量 ， 匀 ， 摇 滤过 ， 取续滤液过 ０ ４ ｐ 的微孔滤膜 ， ．５， ｍ 即得 。 ２ ４ 方法学考察 ． ２ ４ １ 线性关系 考察 ： ． ． 精密 称取 经减压 干燥 至恒 重 的槲 皮素 一 ３一Ｏ—Ｏ—Ｌ一吡喃 阿拉伯 糖苷 对 照品 １ ２ ｍ ｔ ．７ ｇ置 １ｍ ０ Ｌ量瓶 中 ， 甲醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 匀 ， 成 每 加 摇 制 １ Ｌ含槲皮素 …３ Ｏ Ｏ—Ｌ一吡喃阿 拉伯糖 苷 ０ １７ ｇ ｍ ｔ ．２ｍ 的对照品液。精密吸取该 对照 品溶液 ２ ４ ６ ８ １ ，２￣ ， ， ， ， ，０ １１ Ｌ
黄酮含量测定实验报告
黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。
2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。
黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。
黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。
3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。
- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。
3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。
2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。
3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。
4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。
5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。
3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。
2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。
3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。
3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。
2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。
3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。
4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。
4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。
5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。
通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。
本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。
黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。
因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。
藤茶中总黄酮的含量测定
藤茶中总黄酮的含量测定
袁桥玉;刘新桥
【期刊名称】《内蒙古中医药》
【年(卷),期】2014(033)030
【摘要】目的:对藤茶样品中总黄酮进行含量测定.方法:采用分光光度法,以芦丁为对照品,并利用NaNO3-Al(NO3)3-NaOH显色方法,对藤茶样品中总黄酮的含量进行测定.结果:总黄酮在8.24-49.44ug/mL(r=0.9995)范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.98％,RSD=2.07％,不同产地藤茶中总黄酮含量存在一定差异,以湖南藤茶中总黄酮含量最高.结论:该方法快速、简便、准确,可作为该药材的质量评价标准的参考方法.
【总页数】2页(P126-127)
【作者】袁桥玉;刘新桥
【作者单位】武汉职业技术学院生物工程学院 430074;中南民族大学药学院430074
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.藤茶中总黄酮的三波长紫外光谱法测定 [J], 周大寨;朱玉昌;王进
2.闽产藤茶总黄酮提取物中三种主成分的含量测定 [J], 易开;林珠灿;柳庆龙;徐伟;郭素华
3.鄂西藤茶中总黄酮的提取及含量测定 [J], 成凤桂;欧知义
4.瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量测定 [J], 何桂霞;何群
5.双波长分光光度法检测藤茶中的总黄酮 [J], 刘建兰;郑红岩;于华忠;高梦;刘同方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苗药黑骨藤多指标的含量测定及聚类分析
苗药黑骨藤多指标的含量测定及聚类分析目的：建立同时测定苗药黑骨藤中绿原酸和杠柳毒苷含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法。
色谱柱为Xtimate C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温为25 ℃，进样量为10 μL。
采用SPSS 23.0统计软件根据药材样品中绿原酸和杠柳毒苷的含量进行聚类分析。
结果：绿原酸、杠柳毒苷检测进样量线性范围分别为0.040 6～1.8 μg（r=0.999 4）、0.016 8～2.3 μg（r=0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于5.0%；定量限分别为0.918 0、0.084 3 μg/mL，检测限分别为0.102 0、0.025 3 μg/mL；加样回收率分别为102.66%～104.00%（RSD=0.53%，n=6）、96.44%～100.79%（RSD=1.73%，n=6）；耐用性试验的RSD均小于3.0%。
18份药材样品可聚为三大类，即S2、S4、S10、S12、S14～S18聚为一类，S1、S3、S5～S7、S9、S11、S13聚为一类，S8为一类。
结论：该方法可用于黑骨藤药材的质量控制和品质评价；不同产地黑骨藤药材中绿原酸和杠柳毒苷的含量有较大差异，各成分含量与产地有一定关联。
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for content determination of chlorogenic acid and periplocin in Miao medicine Periploca forrestii. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Xtimate C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （gradient elution）at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 220 nm，and column temperature was maintained at 25 ℃. The sample size was 10 μL. Cluster analysis was conducted according to the content of chlorogenic acid and periplocin in samples by SPSS 23.0 software. RESULTS：The linear range of chlorogenic acid and periplocin were 0.040 6-1.8 μg（r=0.999 4）and 0.016 8-2.3 μg （r=0.999 9），respectively. RSDs of precision，stability and repeatability tests were all lower than 5.0%. The quantitation limits were 0.918 0，0.084 3 μg/mL，and detection limits were 0.102 0，0.025 3 μg/mL，respectively. RSD of durability were lower than 3.0%. The recoveries were 102.66%-104.00%（RSD=0.53%，n=6），96.44%-100.79%（RSD=1.73%，n=6），respectively. RSD of durability were lower than 3.0%. The result indicated that 18 batches of samples were divided into 3 categories by cluster analysis. S2，S4，S10，S12 and S14-S18 were divided into one category；S1，S3，S5-S7，S9，S11 and S13 were divided into another category；S8 was regarded as one category. CONCLUSIONS：The method can be applied for quality control and evaluation of P. forrestii. The contents of chlorogenic acid and periplocin in P. forrestii from different producing areas are different greatly. There is a certain correlation between the content of each component and the producing area.KEYWORDS Periploca forrestii；Chtorogenic acid；Periplocin；Content determination；Cluster黑骨藤为萝藦科（Asclepiadaceae）杠柳属（Periploca）植物黑龙骨（Periplocaforrestii Schltr.）的干燥根或全株，又名飞仙藤、黑骨头、柳叶过山龙、滇杠柳等，苗语称嘎八又赊、锐松怪、蛙蟒塞，其味苦，辛、温，有小毒，具有祛风除湿、通经活络之功效，多用于治疗风湿关节痛、跌打损伤、乳腺炎、闭经等病症。
黑骨藤的化学成分和药效研究进展
凯里学院学报 Journal of Kaili Univen. 2021
黑骨藤的化学成分和药效研究进展
孙文娟 1，龙春芳 2，龙 毅 1*
（1. 贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2. 凯里学院，贵州 凯里 556011）
·56·
2.3 治疗皮肤系统疾病的作用 通过使用二硝基氯苯所诱发的小鼠迟发性超敏反应，发现了黑骨藤的醇沉部位的小鼠灌胃
给药对于抑制二硝基氯苯诱发的超敏反应具有明显的抑制作用 . 研究数据表明，黑骨藤醇沉部位 的剂量在 50 mg/kg 的时候抑制二硝基氯苯诱发的超敏反应作用非常明显，且剂量在 50 mg/kg 和 100 mg/kg 的黑骨藤醇沉部位还能明显地抑制增强脾细胞增殖反应 . 由此可知，黑骨藤醇沉部位 具有一定的免疫抑制活性，并且可考虑将其应用于过敏性疾病治疗当中［21］.
特应性皮炎作为一种人体免疫调节作用异常的瘙痒疾病而存在 . 针对该病症，鲍春梅等［22］通 过研究黑骨藤皂苷对特应性皮炎小鼠的治疗作用，发现黑骨藤皂苷可以治疗特应性皮炎 . 目前虽 然黑骨藤皂苷治疗特应性皮炎的免疫调节机理还没完全清楚，但为深入研究治疗特应性皮炎提 供了一定的理论依据 . 2.4 治疗肿瘤的作用
各项研究中分离的化合物主要集中在极性较大部位，尤以水提部位为多，这些化合物又通常 具有细胞增殖抑制、抗氧化和抗肿瘤的活性 . 由此可以推测黑骨藤水溶性提取部位是抗类风湿性 关节炎的主要活性部位，这或许是民间和临床治疗风湿性关节炎和类风湿关节炎等疾病时通常 会采用水煎煮的方式进行服用的原因 .
收稿日期：2020 - 12 - 07 基金项目：国家自然科学基金资助项目（81660710） 作者简介：孙文娟（1987 - ），女，山东招远人，贵州中医药大学硕士研究生，研究方向为天然药物化学及活性成分 . *通讯作者：龙毅，E - mail：longyi621@.
黑骨藤药材中铅·镉·砷·汞·铜的含量及其质量标准评价
黑骨藤药材中铅镉砷汞铜的含量及其质量标准评价陈华国;曹桂红;赵超;周欣【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)008【摘要】[目的]对不同产地的黑骨藤药材中铅、镉、砷、汞、铜的含量进行测定,为高品质黑骨藤药材的筛选、药材质量标准建立及中药材生产质量管理规范(GAP)种植提供科学依据.[方法]样品经湿法消解后,用原子荧光光度法和原子吸收分光光度法进行检测;采用聚类分析等数量统计软件对测定结果进行分析处理.[结果]黑骨藤药材中主要是铅和镉重金属元素超标,超标率为铅47.62%、镉71.43%、汞14.28%、铜14.28%.[结论]不同产地的黑骨藤药材中砷、汞和铜含量较低,铅和镉含量严重超标.【总页数】3页(P4071-4072,4083)【作者】陈华国;曹桂红;赵超;周欣【作者单位】贵州师范大学天然药物质量控制研究中心,贵州贵阳,550001;贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州贵阳,550001;贵州师范大学天然药物质量控制研究中心,贵州贵阳,550001;贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州贵阳,550001;贵州师范大学天然药物质量控制研究中心,贵州贵阳,550001;贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州贵阳,550001;贵州师范大学天然药物质量控制研究中心,贵州贵阳,550001;贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州贵阳,550001【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.贵州省不同产地水黄花药材中的铅、镉、铜、砷、汞含量分析 [J], 熊珂;孙绪;付思红;马雪;刘亭;刘春花;王爱民;王永林;2.电感耦合等离子体质谱法测定中药材中铜、砷、镉、铅、汞的含量 [J], 黄智安;沈蕊;石志慧3.贵州省不同产地水黄花药材中的铅、镉、铜、砷、汞含量分析 [J], 熊珂;孙绪;付思红;马雪;刘亭;刘春花;王爱民;王永林4.原子吸收光谱法测定丹参药材中铅、镉、铜、砷、汞的含量 [J], 庞秀清;郑林;刘童;王爱民;王永林5.丹参药材中铅、镉、砷、汞、铜的含量测定 [J], 孟萌;陈涛;李进;马志平;贾薇;贾美娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黔不同产地苗药黑骨藤的质量分析
黔不同产地苗药黑骨藤的质量分析
王文春;李江;杨阳
【期刊名称】《中国民族医药杂志》
【年(卷),期】2012(018)008
【摘要】苗药黑骨藤采自贵阳香子沟、贵阳乌当、凯里、安顺,并详细记录其生境；采用高效液相色谱法,以槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷为对照品,Hypersil C18
色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇:水(33∶67)为流动相,流速为1mL·min-1,检测波长为370nm,柱温25℃,进行测定.黑骨藤中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的
含量贵阳香子沟所采集的要高于其他地区采集的；其生长环境比较阴湿.不同产地
黑骨藤药材中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的含量有明显差异,初步说明黑骨藤中槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷的含量受产地,湿度,光照等的影响.
【总页数】3页(P60-62)
【作者】王文春;李江;杨阳
【作者单位】贵阳中医学院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院,贵州贵阳550002;
贵阳中医学院,贵州贵阳550002
【正文语种】中文
【中图分类】R291.6
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黑骨藤中总黄酮含量的测定
黑骨藤中总黄酮含量的测定景小楠;钟菡;张宏;于树华【摘要】对采自不同产地,不同年份黑骨藤的总黄酮含量进行了测定.以芦丁为对照品,检测波长510 nm,绘制标准曲线,采用紫外分光光度法测定总黄酮的相对百分含量.芦丁对照品在2.065～103.250 mg·L~(-1)范围内有良好的线性关系(r=0.999 90),平均回收率为98.03%,RSD值为1.40%.采用分光光度法测定黑骨藤的总黄酮含量操作简便,结果可靠,为评价黑骨藤的质量提供了依据.【期刊名称】《四川师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(033)001【总页数】4页(P89-92)【关键词】黑骨藤;总黄酮;紫外分光光度法【作者】景小楠;钟菡;张宏;于树华【作者单位】四川师范大学,生命科学学院,四川,成都,610066;四川师范大学,生命科学学院,四川,成都,610066;四川师范大学,生命科学学院,四川,成都,610066;四川师范大学,植物资源应用与开发研究所,四川,成都,610066;四川师范大学,生命科学学院,四川,成都,610066;四川师范大学,植物资源应用与开发研究所,四川,成都,610066【正文语种】中文【中图分类】R917;S816.17黑骨藤(Periploca forrestii Schltr)属于萝摩科(Asclepiadaceae)杠柳亚科(Subfam.Periplocoideaek. Schum)植物,是被贵州省药材标准收载的一种苗药,具有祛风除湿、活血通络、消痹止痛的功能,可舒筋活络、祛风除湿;主治风湿性关节炎、跌打损伤、胃痛、消化不良、闭经、痢疾等[1-3].目前对于黑骨藤的研究主要涉及化学成分及抗风湿、抗炎等药理作用的研究.已知的化学成分有熊果酸等三萜类化合物[4-7],杠柳苷元、杠柳苷等强心苷类化合物[8-10],未见对其总黄酮化合物的相关研究报道.近年来,黄酮类化合物因具有抑菌、止咳抗炎、抗心率失常、降血脂、抗氧化、雌性激素样作用、抗肿瘤、消除机体内自由基抗衰老、增强机体免疫力[6-7]等多项药理活性且毒性低而备受关注.本课题组在前期研究中发现黑骨藤中含有黄酮类化合物,在此研究基础上本文就对采自于不同地域、不同时间的黑骨藤植物中的总黄酮含量进行分析比较,为黑骨藤药用资源的综合利用提供科学依据.日本岛津UV-1700型紫外可见扫描分光光度计,KQ-300DE型数控超声波清洗器,德国SAR2 TOR I US BP211D型电子天平.芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供.其他试剂均为分析纯.黑骨藤样品由本课题组于2005～2007年在贵州省贵阳市、四川省凉山州西昌市和都江堰市青城山采集,经四川成都中医药大学生药教研室鉴定为萝摩科(Asclepiadaceae)杠柳属(Periploca Linn)黑骨藤(Periploca forrestil Schltr).2.1 标准曲线的制作精密称取芦丁标准品0.020 65 g,用质量分数为50%乙醇配制成206.5 mg ·L-1的储备液.精密移取上述储备液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL容量瓶中,分别加入0.3 mL质量分数为5%亚硝酸钠溶液,摇匀,放置6 min后加入0.3 mL质量分数为10%硝酸铝溶液,摇匀,放置6 min后加入4 mL质量分数为4%的NaOH溶液,用质量分数为50%的乙醇定容至刻度,摇匀,静置20 min[11].在200～600 nm波长范围进行吸收光谱扫描.,以不加标准品同法制备空白对照.在510 nm处测定吸光度,以芦丁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标进行拟合,得出回归方程.2.2 精密度的测定精密吸取一定量标准品溶液,按2.1项下同法操作,测定低、中、高3个质量浓度分别为2.474、37.110、86.600 mg·L-1的吸光度值,分别测定日内精密度和日间精密度.2.3 稳定性的测定精密吸取一定量标准品溶液,按2.1项下同法操作,在室温下放置15、30、45、60、90、150 min,测定吸光度,计算稳定性.2.4 重现性的测定精密称取一定量的西昌黑骨藤(采自2007年)的茎,粉碎过30目筛,按1∶20的固液比用质量分数为50%乙醇浸泡超声提取.提取条件:时间30 min,温度70℃,超声频率40 kHz.提取液过滤、浓缩、定容得样品溶液.取一定量溶液充分摇匀后用定量滤纸过滤,移取滤液,按2.1项下同法操作,定容,在510 nm测定吸光度值,根据回归方程得出样品的黄酮含量.2.5 加标回收率精密称取一定量的西昌黑骨藤(采自2007年)的茎,再精确加入适量的芦丁对照品溶液(浓度为486.19 mg·L-1)3 mL,按2.4项下同法操作,测定含量,计算加标回收率.2.6 样品溶液的制备及含量测定精确称取一定量过30目筛的样品,按2.4项下同法操作,根据回归方程得出样品的黄酮含量.3.1 标准曲线根据光谱扫描结果,确定波长为510 nm.得到的回归方程为:y=0.011 72x-0.004 65,相关系数r=0.999 90.表明在2.065～103.250 mg· L-1之间芦丁标准品呈良好的线性关系.3.2 精密度精密度结果见表1,RSD值均低于5%,该方法精密度较好,符合含量分析要求.3.3 稳定性在15、30、45、60、90、150 min的吸光值为0.443、0.443、0.435、0.421、0.415、0.413,RSD值为3.20%,较小.从吸光值数据来看,前30 min吸光值更为稳定,说明在前30 min样品有更好的稳定性.3.4 重现性样品含量分别为7.44%、7.72%、7.45%、7.50%、7.31%、7.28%,其RSD值为2.11%,较小,符合含量分析要求.3.5 加标回收率加标回收率在96.98%～99.59%,结果见表2.3.6 样品制备条件的选择3.6.1 提取方法的选择用甲醇作溶剂,常规回流法(粒度30目,80℃水浴,料液比1∶8,提取3次,每次2 h),测得相对百分含量为5.59%(RSD值为2.00%,n=3);超声波提取(粒度30目,80℃水浴,料液比1∶8,提取3次,每次30 min),测得相对百分含量为6.76%(RSD值为2.15%,n=3).结果表明,超声提取法测得含量更高,故选择用超声提取方式,实验数据见表3.3.6.2 提取溶剂的选择考察水,质量分数分别为50%、75%和95%的乙醇、甲醇、乙酸乙酯6种溶剂对提取率的影响(30目黑骨藤药材,料液比1∶20,温度50℃,时间30 min,超声提取两次),结果表明黄酮含量在质量分数为50%乙醇中最高,平均值为7.37% (RSD值为2.47%,n=3),实验数据见表4.3.6.3 提取温度的选择考察在30～70℃不同温度下对提取率的影响(30目黑骨藤药材,质量分数为50%乙醇提取,料液比1∶20,时间30 min,超声提取两次),结果表明温度曲线的总体趋势是:温度越高,总黄酮提取率越高.但由于温度太高,溶剂易挥发,所以没有进行更高温度的考察,选择70℃为提取温度,见图1所示.3.6.4 提取时间的选择考察提取时间在5～45 min之间对提取率的影响(30目黑骨藤药材,质量分数为50%乙醇提取,料液比1∶20,温度70℃,超声提取两次),结果表明总黄酮提取率在30 min达到最大值,故选择30 min为最佳提取时间,结果见图2.3.7 样品含量测定结果3.7.1 黑骨藤不同部位的总黄酮含量比较分别精确称取一定量采自2006年西昌黑骨藤的根、茎、叶,按步骤2.4进行测定,结果见表5.结果显示茎的含量最高,而民间用药部位一般都用其茎.3.7.2 黑骨藤茎不同年份以及不同产地总黄酮含量比较对2005～2007年采自不同产地的黑骨藤植物的茎进行总黄酮含量测定,按步骤2.4进行测定,结果见表6.含量测定结果表明,青城山的含量最高,分别与贵阳和西昌的差异呈极显著水平,而贵阳与西昌之间差异不显著.不同产地样品的总黄酮含量随着放置时间的增长都呈逐渐降低的趋势.黑骨藤主要分布于我国的东北、华北、西北、西南等地区[9],在四川的资源十分丰富.本文对贵州贵阳、四川西昌、四川成都青城山3地不同年份的样品分别进行了黄酮含量的测定.从结果来看,对于不同部位黄酮含量在黑骨藤的茎中含量较高,对于不同产地四川青城山的含量最高,而且随着贮存年份的增加,黄酮含量在逐渐降低.四川青城山与贵阳和西昌的黄酮含量的差异分别呈极显著水平.同时证明本法良好的稳定性、重现性,具有高精密度、高回收率,可用于本药材的质量控制.本课题组也对黑骨藤的小鼠抗炎作用进行了相关的研究,相关研究结果另文发表.结果表明药效与黄酮含量在一定的范围内呈量效关系,黄酮含量越高,抗炎作用越明显.以上研究可以为这种中药材资源的综合应用提供一定的理论依据.【相关文献】[1]Toki wa T,Harada K,Matsumura T.Orientalmedicinal herb,Periploca sepium,extract inhibits growth and I L-6 production of human synovial fibroblast-like cells[J].Biol Pharm Bull,2004,27(10):1691-1693.[2]陈庆,靳凤云,陈华国,等.苗族黑骨藤有效部位的筛选研究[J].中国民族民间医药志,2005,74:163-165.[3]王和鸣,葛继荣,陈治英.黑骨藤追风活络胶囊治疗痹病的临床研究[J].中国中医骨伤科杂志,1999,7(2):12-14.[4]KjerJ,W rayV,Edrada-EbelR,et al.XanaltericAcids Iand IIand Related Phenolic Compounds from an EndophyticA lternar2 iasp.Isolated from theMangrove PlantSonneratia alba[J].J Nat Prod,2009,72(11):2049-2052.[5]LiWei,Fu Hong-wei,Bai Hong,et al.Triterpenoid saponins fromRubusellipticusvar.obcordatus[J].J Nat Prod,2009, 72(10):1755-1760.[6]Lemma-Gray P,Valusova E,Carroll C A.Subunit analysis of bovine heart complex I byreversed-phase high-perfor mance liquid chromatography,electrospray ionization-tandem mass spectrometry,and matrix-assisted laser desorption/ionizationtime-of-flightmass spectrometry[J].AnalBiochem,2008,382(2):116-121.[7]Bajad S,ShulaevV.Highly-parallelmetabolomics approaches usingLC-MS2 for pharmaceutical and environmental analysis[J]. 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苗药黑骨藤中含总黄酮及总皂苷量测定
苗药黑骨藤中含总黄酮及总皂苷量测定郭江涛;刘杰;黎正旭;徐红应【摘要】建立苗药黑骨藤中含总黄酮及总皂苷量测定的方法.结果表明,芦丁标准对照品在2.230~44.600 mg/L范围内线性关系良好,回归方程为Y=11.087X-0.0125(r=0.9992);齐墩果酸在8.080~40.400 mg/L范围内线性关系良好,回归方程Y=49.13X-0.0138(r=0.9998).该方法快速简便,结果可靠,可用于黑骨藤中含总黄酮及总皂苷的量测定,为黑骨藤的质量标准研究提供依据.%To establish a method for determination of total flavonoids and total saponin content of Periploca Forrestii Schltr.Results indicated the range linear has good relationship between 2.230~44.600 mg/L, the regression equation wasY=11.087X-0.0125 ( r=0.9992);when oleanolic acid in 8.080 ~40.400 mg/L linear regression equation , Y =49.13X -0.0138 (r=0.9998).This method was simple, reliable and can be used for the determi-nation of total flavonoids and saponin content in Periploca forrestii Schltr, provided the basis for the quality standard of Periploca Forrestii Schltr.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(034)003【总页数】4页(P277-280)【关键词】黑骨藤;紫外可见分光光度法;总黄酮;总皂苷【作者】郭江涛;刘杰;黎正旭;徐红应【作者单位】贵阳中医学院药学院,贵阳550025;贵阳中医学院药学院,贵阳550025;贵阳中医学院药学院,贵阳550025;贵阳中医学院药学院,贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】R284通迅作者：刘杰(1985-)，女，博士，讲师，研究方向：中药创新药物研究.E-mail:****************黑骨藤是贵州十大苗药之一，为萝藦科(Asclepiadaceae)杠柳属(Periploca)植物黑龙骨(PeriplocaforrestiiSchltr.)的干燥根或全株[1].黑骨藤全株入药，具有通经、活血、解毒、祛风的功效，主治风湿关节痛[2-3]、跌打损伤、伤口愈合[4]、月经不调等症，但具有一定的肝毒性[5].是广泛应用于治疗闭合性软组织损伤、风湿与类风湿等疾病的民族药[6].主要分布于贵州、青海、广西、西藏等地.黑骨藤收载于2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》[7]，该标准中主要记载了黑骨藤的来源、性状、显微鉴别以及理化鉴别，缺乏黑骨藤质量控制的有效方法.目前国内外对黑骨藤质量控制方面研究也较少.黑骨藤中主要含有强心苷类、C21甾类、多糖类、黄酮类和三萜皂苷类等成分[8-12].黑骨藤抗炎作用[13]与其黄酮类[14]、皂苷类[15]及糖类成分[16]有密切联系，本试验以芦丁及齐墩果酸为对照品，运用紫外可见分光光度法，对黑骨藤中含总黄酮及总皂苷进行了测定，为其质量标准以及进一步开发利用提供了理论依据.1 仪器与试药UV-5900型分光光度计(上海元析仪器有限公司)，ME-204E型分析天平(梅特勒托利多仪器有限公司)，SK8200H型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，SHE-Ⅲ型循环水真空泵(上海荣亚生化仪器厂)，98-1-B型单子调温电热套(天津市泰斯有限公司)，GZX-9240MBE数显恒温水浴锅(上海双捷实验设备有限公司)，DZF-6050型真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司).芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号10080-200707)，齐墩果酸对照品(中国食品药品检定研究所，批号110709-201206)，黑骨藤药材经由贵阳中医学院孙庆文教授鉴定为萝藦科杠柳属植物黑骨藤.所用试剂为分析纯，水为超纯水.2 实验方法与结果2.1 黑骨藤总黄酮及总皂苷的测定2.1.1 对照品溶液的制备芦丁对照溶液：精密称取芦丁对照品0.002 23 g，用甲醇溶解配制为质量浓度为0.223 mg/mL的溶液.齐墩果酸对照溶液：精密称取齐墩果酸对照品0.010 10 g，用甲醇溶解配制为质量浓度为0.202 mg/mL的溶液.2.1.2 测定方法及波长选择芦丁测定方法及波长选择：精密移取上述芦丁储备液于10 mL容量瓶中，分别加入0.3 mL质量分数为5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6 min后加入0.3 mL质量分数为10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6 min后加入4 mL质量分数为4%的氢氧化钠溶液，用甲醇定容至刻度，摇匀，静置20 min.在200～600 nm波长进行吸收光谱扫描，选取最大吸收波长为510 nm，芦丁对照品扫描图谱见图1.图1 芦丁波长扫描图齐墩果酸测定方法及波长选择：精密移取上述齐墩果酸储备液于5 mL容量瓶中，水浴挥干溶剂，分别加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 mL高氯酸溶液，75 ℃水浴中加热20 min，取出后立即用冰水冷却10 min，再加入4 mL冰醋酸定容，摇匀.以甲醇同法制备空白参比.在400～800 nm波长进行扫描，选取最大吸收波长为550 nm.齐墩果酸对照品扫描图谱见图2.图2 齐墩果酸波长扫描图2.1.3 供试品溶液的制备按L9(34)设计的实验.将10 g药材按要求进行提取，浓缩后用甲醇定容至20 mL，取0.1 mL定容到10 mL.2.1.4 芦丁标准曲线的制作精密移取上述储备液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于10 mL容量瓶中，按2.3.1依法操作.以甲醇同法制备空白对照，以芦丁质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标.由实验结果得出回归方程为Y=11.087X-0.012 5(r=0.999 2)，线性范围为2.230～44.600 mg/L.2.1.5 齐墩果酸标准曲线的制作精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于5 mL容量瓶中，按2.3.2依法操作.以甲醇同法制备空白对照.以齐墩果酸质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，由实验结果得出回归方程Y=49.13X-0.013 8(r=0.999 8)，线性范围为8.080～40.400 mg/L.2.1.6 精密度试验精密吸取1.0 mL芦丁对照品溶液，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，制成0.022 3 mg/mL对照品溶液，按“2.1.4”项方法操作，于510 nm处测定吸光度测定6次，计算对照品的RSD值为1.37%.精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.6 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，制成0.024 24 mg/mL对照品溶液，按“2.1.5”项方法操作，于550 nm处测定吸光度测定6次，计算对照品的RSD值为1.54%.2.1.7 稳定性试验取精密度项下(芦丁)的第3号样品按“2.1.4”项方法操作，于0、6、12、24、48 h测定吸光度，结果RSD为1.05%，对照品溶液在48 h内基本稳定.取精密度项下(齐墩果酸)的第3号样品按“2.1.5”项方法操作，于0、6、12、24、48 h测定吸光度，结果RSD为1.72%，对照品溶液在48 h内基本稳定.2.1.8 重复性实验平行吸取6份1.0 mL芦丁对照品溶液，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，制成0.022 3 mg/mL对照品溶液，制备供试品溶液，按“2.1.4”项方法操作，测定计算RSD为1.49%，表明重现性良好.平行吸取6份0.6 mL齐墩果酸对照品溶液，置5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，制成0.024 24 mg/mL对照品溶液，制备供试品溶液，按“2.1.5”项方法操作，测定计算RSD为1.68%，表明重现性良好.2.1.9 加样回收率试验精密称取已知量的同一批样品9份，按照高、中、低剂量加入芦丁对照品，按照“2.1.4”项方法操作并测定，结果平均回收率为99.70%，RSD为1.01%.精密称取已知量的同一批样品9份，按照高、中、低剂量加入齐墩果酸对照品，按照“2.1.5”项方法操作并测定，结果平均回收率为99.28%，RSD为2.03%. 2.2 正交设计2.2.1 样品含量测定采用L9(34)正交实验法设计实验，以含总黄酮和总酚酸量为考察指标，以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数作为考察因素，各因素取3个水平进行考察，各因素水平见表1.表1 正交试验的因素与水平水平乙醇体积分数/%(A)料液比(B)提取时间/min(C)提取次数(D)1601∶630 12701∶860 23801∶109032.2.2 结果分析采用紫外可见分光光度法对样品中的总黄酮及总酚酸进行测定(结果见表2).验证直观分析结果，对正交试验结果进行了方差分析，见表 3.表2 正交考察表序号因素ABCD总黄酮百分含量/%总皂苷百分含量/%综合评分/%1601∶63016.284.8011.082601∶86025.295.9411.233601∶109035.055.46 10.514701∶66038.197.2015.395701∶89014.064.498.556701∶103025.725.7 111.437801∶69024.835.6810.518801∶83035.856.2312.089801∶106013.72 4.648.36k110.94012.32711.5309.330k211.79010.62011.66011.057k310.3171 0.1009.85712.660R1.4732.2271.8033.330表3 方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性溶剂溶度3.28220.3854.460料液比8.14120.9544.460提取时间6.06920.7114.460提取次数16.64121.9504.460误差34.138注： F0.05(2, 2) =19.00; F0.01(2, 2) =99通过直观分析和方差分析，影响因素的主次顺序为:提取次数>料液比>提取时间>溶剂溶度.最佳提取条件为A2B1C2D3，即用6倍量70%乙醇回流提取3次，每次60 min.2.3 验证实验取3批样品，按照由上述实验确定的最优提取实验方案，使用紫外分光光度法测量所得3次提取物中总黄酮含量的平均值为8.071%、7.941%、7.933%，总酚酸含量的平均值为7.241%、7.200%、7.103%，表明所选最优工艺提取效果良好.3 结语L9(34)正交实验法具有科学性、准确性，本实验通过比较乙醇体积分数、料液比、提取时间和提取次数，以含总皂苷及总黄酮量为测量指标，用紫外分光光度法，优化提取工艺.黄酮类及皂苷类是黑骨藤的主要有效成分.实验结果表明，4个因素中对提取效率影响较大的因素是提取次数及料液比.在实验范围内，提取次数越多，乙醇用量越大，总黄酮及总皂苷的提取率越高.而乙醇体积分数和提取时间比较不明显，可能和乙醇挥发，提取剂质量浓度降低有关.本实验通过对黑骨藤中总黄酮及总皂苷两大类化学成分的研究，加强了对黑骨藤质量标准的控制和进一步的开发利用.参考文献：[1] 刘明, 刘刚, 刘育辰, 等. 黑骨藤镇痛抗炎作用活性部位筛选[J]. 药物评价研究, 2014, 37(4): 322.[2] BAO C, LIU Y, SUN X, et al. 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Magn Reson Chem, 2009, 47(8): 701-705.[9] 甘秀海, 周欣, 赵超, 等. 黑骨藤化学成分的研究[J]. 中草药, 2009 , 40(5): 708-710.[10] 徐冉, 张援虎, 赵延涛. 黑骨藤化学成分的研究[J]. 中国药学杂志, 2011 ,46(11): 823-825.[11] 赵珊, 张宝, 熊丹丹, 等. 苗药黑骨藤的化学成分研究[J]. 中草药, 2017, 8: 1513-1518.[12] 甘秀海, 周欣, 赵超, 等. 黑骨藤化学成分及药理作用研究进展[J]. 广东化工, 2012, 39(9): 20-21.[13] 廖作庄, 杨凤莲, 王俊利, 等. 黑骨藤药理作用研究进展[J]. 右江医学, 2014,42(3): 361-362.[14] LIANG Q, CHEN H, ZHOU X, et al. Optimized microwave-assistant extraction combined ultrasonic pretreatment of flavonoids from Periploca forrestii Schltr. and evaluation of its anti-allergic activity [J]. Electrophoresis, 2017, 38(8): 1113-1121.[15] LIU Y, LI M, HE Q, et al. Periploca forrestii saponin ameliorates murine CFA-induced arthritis by suppressing cytokine production [J]. Mediators Inflamm, 2016(1-2): 7941684.[16] FENG J, ZHANG R, ZHOU Y, et al. Immunosuppressive pregnane glycosides from Periploca sepium and Periploca forrestii [J]. Phytochemistry, 2008, 69(15): 2716-2723.。
贵州苗药黑骨藤总黄酮的抗炎镇痛作用
贵州苗药黑骨藤总黄酮的抗炎镇痛作用
冉启军;赵建峰
【期刊名称】《遵义医学院学报》
【年(卷),期】2012(35)4
【摘要】目的观察贵州苗药黑骨藤总黄酮的抗炎镇痛作用,为苗药推广应用提供科学参考依据.方法将受试动物随机分为高、中、低剂量组,采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀2种动物模型,检测黑骨藤总黄酮的抗炎作用；以及通过小鼠热板法镇痛试验及冰醋酸致小鼠扭体反应模型检测其镇痛效果.结果黑骨藤总黄酮可抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀与角叉菜胶所致的大鼠足趾肿胀(P＜0.01),明显减少冰醋酸所致小鼠扭体反应次数减少(P＜0.05),使热板镇痛试验中小鼠的痛阈明显提高(P＜0.05).结论黑骨藤总黄酮具有较好的抗炎消肿与镇痛作用,可作为黑骨藤药材的指标性成份.
【总页数】4页(P283-286)
【作者】冉启军;赵建峰
【作者单位】遵义医学院附属医院,贵州遵义 563099;遵义县人民医院检验科,贵州遵义 563000
【正文语种】中文
【中图分类】R971
【相关文献】
1.贵州苗药酢浆草水提物的抗炎镇痛作用 [J], 崔珺;杨雅欣;郑林;董莉;何彬;刘亭;李靖;穆琼
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2. 6 样品溶液的制备及含量测定 精确称取一定 量过 30目筛的样品 ,按 2. 4项下同法操作 ,根据回 归方程得出样品的黄酮含量.
3 结果
3. 1 标准曲线 根据光谱扫描结果 ,确定波长为 510 nm. 得到的回归方程为 : y = 0. 011 72x - 0. 004 65,相关 系数 r = 0. 999 90. 表明在 2. 065 ～103. 250 mg· L - 1之间芦丁标准品呈良好的线性关系. 3. 2 精密度 精密度结果见表 1, RSD 值均低于 5% ,该方法精密度较好 ,符合含量分析要求.
5. 50 5. 57
5. 59 2. 00
3
0. 499
28. 543
5. 72
1 超声 2
0. 501 0. 502
33. 367 33. 634
6. 66 6. 70
6. 76 2. 15
3
0. 501
34. 719
6. 93
3. 6. 2 提取溶剂的选择 考察水 ,质量分数分别为
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阳市 、四川省凉山州西昌市和都江堰市青城山采 集 ,经四川成都中医药大学生药教研室鉴定为萝摩 科 (A sclepiadaceae) 杠柳属 ( Periploca L inn ) 黑骨 藤 ( Periploca forrestil S ch ltr).
2 实验方法
2. 1 标 准 曲 线 的 制 作 精 密 称 取 芦 丁 标 准 品 0. 020 65 g,用质量分数为 50%乙醇配制成 206. 5 mg ·L - 1的储备液. 精密移取上述储备液 0. 1、0. 5、1. 0、 2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL 于 10 mL 容量瓶中 ,分别加入 0. 3 mL质量分数为 5%亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,放置 6 m in后加入 0. 3 mL 质量分数为 10%硝酸铝溶液 ,摇 匀 ,放置 6 m in后加入 4 mL质量分数为 4%的 NaOH 溶液 ,用质量分数为 50%的乙醇定容至刻度 ,摇匀 , 静置 20 m in[11 ]. 在 200～600 nm 波长范围进行吸收 光谱扫描. ,以不加标准品同法制备空白对照. 在 510 nm处测定吸光度 ,以芦丁浓度为横坐标 ,吸光度为 纵坐标进行拟合 ,得出回归方程. 2. 2 精密度的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,测定低 、中 、高 3 个质量 浓度分别为 2. 474 、37. 110、86. 600 m g·L - 1的吸 光度值 ,分别测定日内精密度和日间精密度. 2. 3 稳定性的测定 精密吸取一定量标准品溶 液 ,按 2. 1项下同法操作 ,在室温下放置 15、30、45、
0. 027 0. 443 0. 906 0. 026 0. 441 0. 998
0. 028 0. 435 0. 979 0. 029 0. 461 0. 986
0. 026 0. 436 0. 955 0. 026 0. 443 1. 007
0. 026 0. 437 1. 017 0. 027 0. 437 1. 032
表 4 提取溶剂对总黄酮溶出量的影响 Table 4 The effect of solven t on tota l flavone con ten t
溶剂
编号
药材 重 /g
提取 提取 量 /mg 率 / %
平均 值 /%
RSD / %
1 0. 500 16. 550 3. 31 3. 43 3. 85
表 3 提取方式对比实验结果 Table 3 The com par ison of d ifferen t extracting m ethods
方式 编号 药材重 / g
黄酮含 量 /mg
黄酮提取 平均 率 / % 值 / % RSD / %
1 回流 2
0. 501 0. 500
27. 555 27. 850
收稿日期 : 2008 - 10 - 16 基金项目 :国家自然科学基金 (30870257)资助项目 3 联系作者简介 :张 宏 (1965—) ,女 ,教授 ,主要从事天然产物化学的研究
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精密度 日内 日间
c / (mg·L - 1 )
2. 474 37. 110 86. 600
2. 474 37. 110 86. 600
表 1 精密度测定结果 ( n = 6) Table 1 The results of prec ision( n = 6)
吸光度
1
2
3
4
5
0. 029 0. 443 0. 988 0. 029 0. 443 0. 979
90
四川师范大学学报 (自然科学版 )
33卷
60、90、150 m in,测定吸光度 ,计算稳定性. 2. 4 重现性的测定 精密称取一定量的西昌黑骨 藤 (采自 2007 年 )的茎 ,粉碎过 30 目筛 ,按 1 ∶20 的固液比用质量分数为 50%乙醇浸泡超声提取. 提 取条件 :时间 30 m in,温度 70 ℃,超声频率 40 kHz. 提取液过滤 、浓缩 、定容得样品溶液. 取一定量溶液 充分摇匀后用定量滤纸过滤 ,移取滤液 ,按 2. 1 项 下同法操作 ,定容 ,在 510 nm 测定吸光度值 ,根据 回归方程得出样品的黄酮含量. 2. 5 加标回收率 精密称取一定量的西昌黑骨藤 (采自 2007年 )的茎 ,再精确加入适量的芦丁对照 品溶液 (浓度为 486. 19 m g·L - 1 ) 3 mL ,按 2. 4 项 下同法操作 ,测定含量 ,计算加标回收率.
6 0. 027 0. 431 1. 006 0. 028 0. 431 0. 997
平均值
0. 027 0. 438 0. 975 0. 028 0. 443 0. 100
RSD / %
4. 30 1. 07 4. 12 5. 00 2. 27 1. 86
3. 3 稳定性 在 15、30、45、60、90、150 m in的吸光值 为 0. 443、0. 443、0. 435、0. 421、0. 415、0. 413, RSD 值为 3. 20% ,较小. 从吸光值数据来看 ,前 30 m in吸光值更 为稳定 ,说明在前 30 m in样品有更好的稳定性. 3. 4 重现性 样品含量分别为 7. 44%、7. 72%、 7. 45%、7. 50%、7. 31%、7. 28% , 其 RSD 值 为 2. 11% ,较小 ,符合含量分析要求. 3. 5 加 标 回 收 率 加 标 回 收 率 在 96. 98% ～ 99. 59% ,结果见表 2.
第 1期
景小楠等 : 黑骨藤中总黄酮含量的测定
91
50%、75%和 95%的乙醇、甲醇、乙酸乙酯 6种溶剂对 提取率的影响 (30目黑骨藤药材 ,料液比 1∶20,温度 50 ℃,时间 30 m in,超声提取两次 ) ,结果表明黄酮含 量在质量分数为 50%乙醇中最高 ,平均值为 7. 37% (RSD 值为 2. 47% , n = 3) ,实验数据见表 4.
2010年 1月 第 33卷 第 1期
四川师范大学学报 (自然科学版 ) Journal of Sichuan Normal University (Natural Science)
Jan. , 2010 Vol. 33, No. 1
黑骨藤中总黄酮含量的测定
景小楠 1 , 钟 菡 1 , 张 宏 1, 23 , 于树华 1, 2
表 2 加标回收率实验结果 Table 2 The results of spotting recovery 样品重 黄酮含 加标 测得 回收 平均 量 /mg 量 /mg 量 /mg 量 /mg 率 / % 值 / % RSD / %
32. 06 2. 581 1. 459 3. 996 96. 98
目前对于黑骨藤的研究主要涉及化学成分及抗 风湿、抗炎等药理作用的研究. 已知的化学成分有熊 果酸等三萜类化合物 [4 - 7] ,杠柳苷元 、杠柳苷等强心 苷类化合物 [8 - 10 ] ,未见对其总黄酮化合物的相关研 究报道. 近年来 ,黄酮类化合物因具有抑菌、止咳抗 炎、抗心率失常、降血脂 、抗氧化、雌性激素样作用、 抗肿瘤、消除机体内自由基抗衰老 、增强机体免疫 力 [6 - 7 ]等多项药理活性且毒性低而备受关注. 本课 题组在前期研究中发现黑骨藤中含有黄酮类化合 物 ,在此研究基础上本文就对采自于不同地域 、不同 时间的黑骨藤植物中的总黄酮含量进行分析比较 , 为黑骨藤药用资源的综合利用提供科学依据.
水
2 0. 501 17. 034 3. 40
3 0. 501 17. 886 3. 57
1 φ(乙醇 ) =50% 2
0. 501 36. 172 7. 22 0. 502 36. 696 7. 31
黑骨藤 ( Periploca forrestii S ch ltr) 属于萝摩 科 (A sclepiadaceae)杠柳亚科 ( S ubfam. Periplocoideaek. S chum )植物 ,是被贵州省药材标准收载的一种苗 药 ,具有祛风除湿 、活血通络 、消痹止痛的功能 ,可 舒筋活络 、祛风除湿 ; 主治风湿性关节炎 、跌打损 伤 、胃痛 、消化不良 、闭经 、痢疾等 [ 1 - 3 ].
(1. 四川师范大学 生命科学学院 , 四川 成都 610066; 2. 四川师范大学 植物资源应用与开发研究所 , 四川 成都 610066)