色谱柱基础知识的总结
色谱柱基础知识的总结
色谱柱基础知识简介一、色谱柱工作原理当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出二、色谱柱的分类2.1 色谱柱主要分为填充柱和毛细管柱注：此外，还有一些综合了填充柱和毛细管柱特点的特殊色谱柱，例如Alltech 公司采用专利技术生产的集束管毛细管柱。
2.2 填充柱与毛细管柱的比较表1 填充柱与毛细管柱的比较色谱柱内径/mm 长度/m柱材料柱容量载气流速填充柱2-50.5-3玻璃或金属材质mg20-30mL/min毛细管柱0.10-0.810-100熔融石英或不锈钢、聚酰亚胺涂层ng1-10mL/min注：毛细管柱外层为聚酰亚胺，可修补柱子缺陷（即增强柔韧性）并且增加强度。
三、填充柱3.1 填充柱的构成3.1.1 填充柱的柱管填充柱可以使用任何类型的柱管，只要它对样品是清洁,、惰性的, 以及能够承受GC 的柱箱温度，像：不锈钢管、玻璃管、铜管、聚四氟乙烯管、聚合物管等。
3.1.2固体载体（颗粒）和固定相近距离观察一个填充颗粒,会发现它是由一个固体载体（颗粒）和在它上面均匀涂渍的涂敷物（叫做固定相）所组成。
固体载体即液态固定相附着的载体，其细小、均匀、多孔，增加与样品接触的表面积。
常用的固体载体为硅土。
固体载体也有不同大小的颗粒度，颗粒度是指“目数大小”。
一般是根据柱径来选择固体载体的粒度，保持载体的直径为柱内径的1/20 为宜。
常用60-80目及80-100目。
表 2 直径大小与目号的关系四、毛细管柱4.1 毛细管柱的构成毛细管色谱柱由两个主要部分组成：管身和固定相。
4.1.1 管身毛细管柱的管身一般使用熔融二氧化硅或不锈钢作为基本材质。
熔融二氧化硅即高纯度合成石英（以下通称熔融石英），通常在其表面涂上一层聚酰亚胺做为保护层。
GC色谱柱基础知识介绍
上海试剂厂
异构烷烯烃、异构醇类 苯类
400
美国 Davison 10A
环烷类及 5A 分子筛可吸附者
美国 Linde 13X
俄国 Zeolit NaX
（二）高分子多孔小球 高分子多孔小球（GDX）是以苯乙烯等为单体与交联剂二乙烯苯交联共聚的小球。这种
聚合物在有些方面具有类似吸附剂的性能，而在另外一些方面又显示出固定液的性能[8]。因此，
在进行气相色谱分析时，色谱柱的选择是至关重要的。不仅要考虑被测组分的性质， 实验条件例如柱温、柱压的高低，还应注意和检测器的性能相匹配。有关内容我们将在以 后章节中加以详细讨论。
第二节 填充气相色谱柱
填充气相色谱柱通常简称填充柱，在实际分析工作中的应用非常普遍。据资料统计， 日常色谱分析工作大约有 80%是采用填充柱完成的。填充柱在分离效能和分析速度方面比 毛细管柱差，但填充柱的制备方法比较简单，定量分析的准确度较高，特别是在某些分析 领域（例如气体分析、痕量水分析）具有独特用途。从发展上看，虽然毛细管柱有逐步取 代填充柱的趋势（例如已有一些日常分析使用 PLOT 柱代替过去常用的气固色谱填充柱）， 但至少在目前一段时期内，填充柱在日常分析中仍是一种十分有价值的分析分离手段。
这一类吸附剂包括具有强极性的硅胶、中等极性的氧化铝、非极性的炭素及有特殊吸附作 用的分子筛。它们大多数能在高温下使用，吸附容量大，热稳定性好，是分析永久性气体及气 态烃类混合物理想的固定相。但使用时应该注意: ⑴吸附剂的吸附性能与其制备、活化条件有 密切关系。不同来源的同种产品或者同一来源而非同批的产品，其吸附性能可能存在较大的差 异；⑵一般具有催化活性，不宜在高温和存在活性组分的情况下使用； ⑶吸附等温线通常是 非线性的，进样量较大时易出现色谱峰形不对称。
色谱柱基本知识
色谱柱色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。
目录1简介2构造3填料4分类1. 4.1 安装2. 4.2 流动相3. 4.3 样品制备4. 4.4 保存操作5发展方向6性能评价7注意事项8新进展柱效；对于同系物分析，只要500即可；对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构（尽可能减少填充床以外的死体积）及装填技术。
即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。
这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。
在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
2构造色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。
柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2 时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。
为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。
也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。
还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同：①常规分析柱（常量柱），内径2~5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm），柱长10~30cm；②窄径柱（narrow bore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn），内径1~2mm，柱长10~20cm；③毛细管柱（又称微柱microcolumn），内径0.2~0.5mm；④半制备柱，内径>5mm；⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm；⑥生产制备柱内径可达几十厘米。
色谱柱相关知识总结
第二章气相色谱柱第一节气相色谱柱的类型气相色谱法（gas chromatography, 简称GC）亦称气体色谱法，气相层析法。
其核心即为色谱柱。
气相色谱柱有多种类型。
从不同的角度出发，可按色谱柱的材料、形状、柱内径的大小和长度、固定液的化学性能等进行分类。
色谱柱使用的材料通常有玻璃、石英玻璃、不锈钢和聚四氟乙烯等，根据所使用的材质分别称之为玻璃柱、石英玻璃柱、不锈钢柱和聚四氟乙烯管柱等。
在毛细管色谱中目前普遍使用的是玻璃和石英玻璃柱，后者应用范围最广。
对于填充柱色谱, 大多数情况下使用不锈钢柱，其形状有U型的和螺旋型的，使用U 型柱时柱效较高。
按照色谱柱内径的大小和长度，又可分为填充柱和毛细管柱。
前者的内径在2~4mm，长度为1~10m左右；后者内径在0.2~0.5mm，长度一般在25~100m。
在满足分离度的情况下，为提高分离速度，现在也有人使用高柱效、薄液膜的10m短柱。
根据固定液的化学性能，色谱柱可分为非极性、极性与手性色谱分离柱等。
固定液的种类繁多，极性各不相同。
色谱柱对混合样品的分离能力，往往取决于固定液的极性。
常用的固定液有烃类、聚硅氧烷类、醇类、醚类、酯类以及腈和腈醚类等。
新近发展的手性色谱柱使用的是手性固定液，主要有手性氨基酸衍生物、手性金属配合物、冠醚、杯芳烃和环糊精衍生物等。
其中以环糊精及其衍生物为色谱固定液的手性色谱柱，用于分离各种对映体十分有效，是近年来发展极为迅速且应用前景相当广阔的一种手性色谱柱。
在进行气相色谱分析时，色谱柱的选择是至关重要的。
不仅要考虑被测组分的性质，实验条件例如柱温、柱压的高低，还应注意和检测器的性能相匹配。
有关内容我们将在以后章节中加以详细讨论。
第二节填充气相色谱柱填充气相色谱柱通常简称填充柱，在实际分析工作中的应用非常普遍。
据资料统计，日常色谱分析工作大约有80%是采用填充柱完成的。
填充柱在分离效能和分析速度方面比毛细管柱差，但填充柱的制备方法比较简单，定量分析的准确度较高，特别是在某些分析领域（例如气体分析、痕量水分析）具有独特用途。
色谱柱基础知识的总结
色谱柱基础知识的总结1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。
反冲后是正者用，还是反着用。
具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。
反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交柱。
答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。
譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。
因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。
具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。
用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。
特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
色谱柱知识讲解
1、反相色谱的流动相不再需要烃类、氯仿这些 更危险的有机溶剂，使用起来更加简单和安全。 2、而极性强的化合物由于分子间作用力更强， 往往沸点不低，不适合用气相分析，更适合用反 相液相色谱分析
1、反相色谱的流动相有更多的参数选择：PH、缓冲盐种类、浓 度等，能更好地调整分离效果，而正相色谱可调整的流动相参数 非常有限
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
主要内容
正相 色谱 反相 离子对 色谱
色谱ห้องสมุดไป่ตู้
色谱
亲水作 用色谱
凝胶 色谱
正相色谱
固定相极性大于流动相极性 流动相是弱极性：如正己烷、石油醚等 固定相是有极性：布满硅羟基的硅胶
极性大的化合物 极性小的化合物
固定相（极性大） 流动相（极性小）
出峰慢 出峰快
反相色谱
流动相极性大于固定相极性 流动相是强极性：如甲醇、水
离子对色谱
又叫离子交换色谱
适用：化合物极性特别强， 一言不合就电离
原理：可增强离子和固定相 的相互作用，使不同的化合 物得到分离
凝胶色谱
又叫体积排阻色谱
不管是正相、反相还是离子交换色谱，化合物出峰的情况都是和极性相 关的，而凝胶色谱的出峰却只和化合物的大小有关，所以也叫体积排阻 色谱。
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
液相色谱柱原理及使用与维护
2
在平衡前根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
亲水性色谱柱 （HILIC）
氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应及相似相溶
基于NP原理
氨基酸分析柱
相似相溶
基于RP原理
常用液相色谱柱使用方法与维护保养
2、常用液相色谱柱使用方法与维护保养 (1)认识色谱柱规范化使用与保养的必要性：延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本，逐步提高分析人员色谱柱使用与维护水平，确保试验数据的准确性、可靠性和重现性，提升个人在色谱领域的竞争力。 (2)熟悉几个概念： 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。 运载溶剂（Shipping Solvent）：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。 保存条件（Storage Conditions）：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存温度。 保存溶剂（Storage Solvent）：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与 比例的溶液。
适用于在ODS上无保留或分离时间太长的组分的分离，以及样品中同时含有亲水与疏水性化合物而在ODS上色谱优化困难的场合，也可用于氨基酸分析。
化学分析中的柱色谱法基础知识
化学分析中的柱色谱法基础知识柱色谱法是化学分析的基础技术之一，其广泛应用于分离、分析、净化、提纯等领域。
柱色谱法最早应用于有机化学中，主要用于分离各种有机物。
但随着仪器技术的不断升级，柱色谱法已经可以应用于各种领域，包括无机分析、生化分析、环境分析、食品分析等。
柱色谱法的基本原理柱色谱法主要利用物质分子在不同站点处所受的吸附作用差异，来完成分离、分析等任务。
通俗地说，柱色谱法就像是在不同人群中找到不同特征的一样，将不同的物质分开。
整个柱色谱法的过程主要包括三个步骤：样品进样、分离、检测。
其具体过程如下：1、样品进样：将待分离样品注入到柱子中，并通过色谱柱使样品分离。
2、分离：根据不同物质所受吸附作用的差异，在色谱柱中完成不同物质的分离。
3、检测：通过检测器，对分离出来的物质进行鉴定和定量。
柱色谱法的色谱柱柱色谱法的柱子是柱色谱法的核心部件，柱子的质量和种类对整个柱色谱法都至关重要。
目前常用的柱子有液相色谱柱（Liquid Chromatography Column）和气相色谱柱（Gas Chromatography Column）。
在柱子中，分离物质被分子筛分离，根据色谱柱的不同材料、填充物和分子筛分子的大小，可以分为多种柱子，如反相柱、离子柱、手性柱等等。
不同的柱子适用于不同的分离对象和条件，选用合适的柱子能够明显提高柱色谱法的分析效果。
柱色谱法的应用柱色谱法技术的应用领域十分广泛，可用于制药、食品、环境和生物等行业中的质量控制和检验检疫。
以下是柱色谱法的常见应用领域：1、制药工业中，利用反相柱对药物混合物进行消杂，提纯或分离开来。
2、食品工业中，用于检测食品中的添加剂、色素、香料等成分，以及检测食品中的农药残留。
3、环境监测领域，用于污染物检测和土壤分析等。
4、生物科学领域中，利用手性柱分离和分析手性化合物、蛋白质等。
总之，柱色谱法是化学分析领域中最为重要的技术之一，它能够通过选择合适的柱子，分离出不同的化合物和成分，进而实现分析和定量等任务。
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧一、引言高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
色谱柱是HPLC系统的核心组成部分，其性能直接影响分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍HPLC色谱柱的基本原理、分类、使用及维护等方面的专业知识。
二、色谱柱的基本原理色谱法是一种基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡进行分离的物理化学方法。
HPLC色谱柱的核心是固定相，它是由硅胶、氧化铝、活性炭等颗粒状物质组成。
当样品溶液通过色谱柱时，不同物质根据其与固定相的相互作用力大小，依次从固定相中解吸下来，从而实现各成分的分离。
三、色谱柱的分类1.正相色谱柱：适合分离极性化合物，如糖类、醇类等。
2.反相色谱柱：适合分离非极性化合物，如脂肪酸、烃类等。
3.离子交换色谱柱：适合分离带电离子或极性化合物，如氨基酸、核酸等。
4.体积排阻色谱柱：适合分离大分子物质，如蛋白质、多糖等。
四、色谱柱的选择与使用1.根据分析物的性质选择合适的色谱柱。
2.确保色谱柱不受污染，使用前需进行清洗和活化。
3.避免过度使用压力，以延长色谱柱的使用寿命。
4.定期更换色谱柱，以保证分析结果的稳定性。
五、色谱柱的维护与保养1.使用后及时清洗色谱柱，防止残留物对柱子的污染。
2.色谱柱应储存于干燥、避光的环境中，避免受潮或暴晒。
3.对于长期不用的色谱柱，应定期检查其性能并进行活化处理。
4.避免将色谱柱置于高温或低温环境中，以防止硅胶固定相产生裂纹或变形。
5.定期更换流动相，以保证流动相的质量和稳定性。
同时，流动相的pH值应控制在固定相所能承受的范围内。
6.在使用过程中，应时刻关注色谱柱的压力变化。
若发现异常压力或突然变化，应及时检查柱子是否堵塞或受损。
若确有问题，应立即停止使用并进行修复或更换。
7.在使用过程中，还应注意观察色谱峰的形状和大小。
若发现异常峰或分离效果变差，应考虑更换流动相或清洗柱子。
若问题仍未解决，应考虑更换色谱柱。
色谱柱基础知识简介
小，通常0.5~5ml/min
小，通常需要分流进样 口
填充柱(铜&不锈钢材料)
填充柱(玻璃材料)
毛细管柱
填充柱固定相的分类
• 固体固定相：炭质材料、氧化铝、硅胶、 分子筛、高分子多孔小球 • 液体固定相-固定液：
固定液的要求：操作温度下呈液态、粘度低、化学稳定性 好、不与组分发生反应、对样品有足够的分离能力和高的 柱效。 选择固定液的原则：相似性原则、样品与固定液的特殊的作 用力、混合固定液 选择固定液的支持物-担体
色谱柱基础知识简介
2005.07
色谱柱的分类
• 通常使用填充柱和毛细管柱两类 • 两类色谱柱的区别
项目 填充柱 毛细管柱柱源自料柱长 柱内径铜、不锈钢、硅酸硼玻 常用熔凝硅玻璃 璃
0.5~10米 2~4mm 10~150米 0.25mm、0.38mm、 0.50mm
柱流速
样品容量
大，通常10~50ml/min
开管柱开管柱（毛细管柱）的分类
• 壁涂渍开管柱：固定液直接涂在毛细管壁 上 • 固体涂渍开管柱：先在毛细管内涂一层很 细（小于2微米）多孔颗粒，形成多孔层， 再在多孔层上涂渍固定液。 • 多孔层开管柱：毛细管中涂渍细颗粒的吸 附剂或任何固定相（如分子筛）。不再涂 固定液。
色谱柱的老化
• 目的：除去溶剂、水分、以及色谱柱制备过程中其他挥发 性杂质；促进固定液均匀牢固的分布在担体上。 • 老化方法（略） • 老化温度的选择应注意：足够高以除去不挥发物质；足够 低以延长柱寿命和减少柱流失；温度越低老化时间应越长； 不超过色谱柱的最高使用温度 • 填充柱比毛细管柱应更经常、更严格的老化 • 填充柱老化时间应长些，可过夜；毛细管柱老化只能是轻 度的，时间应短些，防止固定液流失。 • 老化好的色谱柱若不立即投入使用，应将其从柱箱中取出， 两端盖上帽子，防止空气、水分或其他杂质的进入。
色谱柱基础知识的总结
色谱柱基础知识的总结色谱柱是色谱分析中的重要工具，它是用来分离混合物中不同化合物的设备。
色谱柱的选择和使用对于色谱分析结果的准确性和灵敏度起着至关重要的作用。
下面将对色谱柱的基础知识进行总结。
色谱柱的种类主要包括气相色谱柱（GC柱）和液相色谱柱（LC柱）。
GC柱使得样品在高温下蒸发成为气态，然后通过柱子的分离效应进行分离。
LC柱是将可溶于液相的样品通过柱子的分离效应进行分离。
色谱柱的工作原理是样品分离的基础。
色谱柱的分离效应由固定填充物和流动相的选择决定。
固定填充物是色谱柱中的重要组成部分，分为填充型和包袋型。
填充型色谱柱常用的填充物有硅胶、氧化铝、氮化硅等。
填充型色谱柱适用于对极性物质的分离。
包袋型色谱柱通常是指薄层涂布型的液相色谱柱，常见的包袋型色谱柱有C18、C8、C4等。
包袋型色谱柱适用于对非极性以及中等极性物质的分离。
流动相的选择也是色谱柱分离效应的关键因素。
在GC柱中，通常使用气体作为流动相，常用的有氢气、氦气等。
在LC柱中，流动相一般是有机溶剂和缓冲液的混合物，常见的有甲醇、乙腈等。
流动相的选择要根据要分离的物质的属性，如极性、溶解度等进行合理选择，以提高分离效果。
色谱柱的选择要根据需要分离的物质的性质进行。
对于GC柱的选择，常见的指标有极性、温度范围、长度和内径等。
相对于液相色谱柱，GC柱的选择范围较窄，通常根据物质的极性选择合适的GC柱。
液相色谱柱的选择相对较为复杂，常见的指标有固定相类型、粒径、孔径、长度和内径等。
固定相的选择要根据样品的性质进行，如极性的物质选择极性固定相，非极性物质选择非极性固定相。
粒径和孔径的选择会影响柱子的分离效果和分析时间。
总之，色谱柱是色谱分析中的重要工具，其选择和使用对于色谱分析结果至关重要。
合理选择柱子的类型和填充物，以及优化流动相的组成和条件，能够提高色谱分离效果和分析灵敏度。
同时，良好的色谱柱的使用与保养也是保证色谱分析质量的重要环节。
只有不断深入了解和熟悉色谱柱的基础知识，才能更好地进行色谱分析工作。
色谱柱常用知识
色谱柱使用常识1.色谱柱的安装⑴、用过滤和脱气的流动相（不含缓冲盐）彻底冲洗色谱仪的泵和管路，务必使系统中不含气泡。
⑵、根据色谱柱上所标示的流动相流向，将色谱柱入口与泵端管路相连，柱出口不连。
⑶、将泵的流速设为0.1mL/min或更低，流速缓慢地上升到正常流速（t>5min）。
⑷、当溶剂从色谱柱出口端自由流出时，将流速设为0，把柱出口与检测器端的管路相连。
⑸、用10－30倍柱体积的流动相、正常流速平衡色谱柱。
⑹、氨基柱、氰基柱既可在正相环境下使用，也可在反相环境下工作。
当需要从反相变为正相或正相变为反相时，需要用20－30倍柱体积的THF作为过渡溶剂冲洗系统，否则易使泵的单向阀堵塞，出现压力异常的现象。
2.色谱柱使用注意事项①、流动相：a、溶剂必须是HPLC级的，试剂则尽可能使用高纯度的；b、不与固定相发生化学反应，粘度小，且对样品有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内（可用范围）或2～5（最佳范围），k值太小，不利于分离；k值太大，可能使样品在流动相中沉淀；c、流动相使用之前必须过滤和脱气；d、确保溶剂间是相互混溶的；e、流动相必须与检测器相匹配，如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂。
痕量的杂质会极大地降低色谱柱的性能，当需要更换流动相时，确保溶剂（缓冲液）之间是相互混溶的。
若使用的溶剂与色谱柱中的溶剂不能混溶，则需使用过渡溶剂，否则会对色谱柱产生永久性的伤害。
盐或缓冲液从流动相中析出也会对色谱柱产生永久性的伤害。
每次进样前应该检查样品在流动相中的溶解性，如果可能尽量使用流动相溶解样品。
②、固定相：a、流动相的pH值应保持在2.0－8.0之间（除非有特殊说明）；b、如果有必要可使用预饱和柱和保护柱；c、使用氨基柱时，流动相和样品中尽量避免含醛类和酮类物质。
当前的反相色谱柱填料可分为以下三种：⒈硅胶柱：柱效高，机械强度大，但对pH敏感，低pH值(<2.0)会使键合相水解（除去键合的功能集团）；高pH值（>8.0），硅胶溶解。
色谱柱常识
因此，对于不同的被分析物要按实际情况选择封端或不封端的填料。
硅胶的化学性质—碳覆盖率
碳覆盖率（键合度）：与基体物质相连的键合相的量。
填料的选择性决定于键合的密度，尤其是在分离碳水化合物时，不同键合密度表现出不同的选择性。
碳覆盖率对色谱分离的影响：
* 双体键合：增加色谱柱稳定性，增加色谱柱的载样量
硅胶的化学性质—封端
封端：键合步骤之后，用小分子硅烷将裸露的硅羟基键合，以便获得更大的覆盖率。
封端多用于反相色谱键合中。
封端可消除或减少可能发生的二级反应。
没有封端的反相色谱填料通常比封端的有复杂多样的选择性。
碱性物质在不封端的填料上，容易产生拖尾。
色谱柱填料形状与粒径
基质：硅胶、二氧化铝、聚合物填料等
形状：球形和无定形
* 无定形：易制备、价格低；但涡流扩散大，渗透性差， 比较难填装出稳定的柱床，一般用来做制备柱。
* 球形：涡流扩散小，渗透性好，可填装出稳定的柱床。
* 高碳覆盖率：提高分辩率，分析时间长
* 低碳覆盖率：缩短运行时间
色谱柱分类
反相色谱柱：C18、C8、C3等
正相色谱柱：硅胶柱、氨基柱、氰基柱等
离子交换柱：有强阴、强阳、弱阴、来自阳之分 体积排阻柱：凝胶渗透色谱柱与凝胶过滤色谱柱
疏水作用柱
手性柱
宽径柱（3-21.2mm）-载样量高
柱的内径决定了流速：
流速F2=F1*(ID2/ID1)2
硅胶纯度
硅胶的硅醇基与离子型化合物之间可能进行二级反应
硅胶中的痕量金属会增加硅醇的酸性和峰的不对称性，有利于二级反应的发生，容易引起峰的拖尾。硅胶越纯，金属含量越低时，可以降低表面游离硅胶基的酸性，消除或减少可能发生的二级反应。
色谱柱知识
液相色谱柱知识1. 色谱柱的构成色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。
柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。
色谱填料：经过制备处理后，用于填充色谱柱的物质颗粒，通常是5-10粒径的球形颗粒。
色谱柱管：内部抛光的不锈钢管。
典型的液相色谱分析柱尺寸是内径4.6mm，长250mm。
色谱柱：也称固定相，是将色谱填料填充到色谱柱管中所构成的。
2. 色谱柱的填充干法填充：在硬台面上铺上软垫，将空柱管上端打开垂直放在软垫上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直台面墩10-20次。
湿法填充：又称淤浆填充法，使用专门的填充装置。
3. 填料的结构色谱填料是由基质和功能层两部分构成。
基质：又常称作载体或担体，通常制备成数微米至数十微米粒径的球形颗粒，它具有一定的刚性，能承受一定的压力，对分离不起明显的作用，只是作为功能基团的载体。
常用来作基质的有硅胶和有机高分子聚合物微球。
（常用球形全多孔硅胶为化学键合相载体）功能层：是通过化学或物理的方法固定在基质表面的、对样品分子的保留起实质作用的有机分子或功能团。
如图8-10是硅胶基质的冠醚大分子固定相的结构示意图，功能层冠醚分子吸附或键合在硅胶基质的表面。
液相色谱仪（Liquid Chromatograph）由高压输液泵、检测器、进样器及液相色谱柱等四部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。
7／16英寸外螺纹与1／4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。
3／16英寸的内螺纹与1／16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。
高效液相色谱柱基础知识
色谱柱的种类
➢ 高分子聚合物 • 常用的是以高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙
烯酸酯为基质的球形填料。 • 压力限度比无机填料低； • 在整个pH范围内稳定，可以用NaOH或强碱来清洗
分离有机酸、碱、盐这些离子型化合物。 ➢ 样品容量随烷基链长增加而增大，且长链烷基可
使溶质的保留值增大，并常常可改善分离的选择 性；短链烷基键合相具有较高的覆盖度，分离极 性化合物时可得到对称性较好的色谱峰。苯基键 合相与短链烷基键合相的性质相似。
反相键合相色谱
流动相为极性的水或缓冲液，常加入甲醇、 乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶 的有机溶剂以调节保留时间。
ZORBAX Extend-C18，pH9~12, ➢ 基质的颗粒度 颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)，分离度越好，柱压
越高(渗透性差)，常用5μ。 ➢ 基质的颗粒分布 颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差) ➢ 基质的颗粒形状 球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀 无定型（不规则形状）：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀，
色谱柱 ； • 聚合物基质在流动相发生变化时会出现膨胀或收缩，
对于小分子化合物柱效低； • 主要用于大分子化合物，常制成凝胶柱或离子交换
柱。
化学键合相色谱柱
➢ 定义：将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶 表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相。
➢ 种类 非极性键合相（反相）：键合相表面基团为非极性
高效液相色谱柱基础知识
张润平
色谱柱的构造
✓ 色谱柱由柱管、填料压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、 于70 kg/cm2 时，也可采用 厚壁玻璃或石英管。为提高柱效，减小管壁效应，管内壁要求 有很高的光洁度，不锈钢柱内壁多经过抛光。
凝胶色谱柱知识点总结
凝胶色谱柱知识点总结凝胶色谱柱的分类凝胶色谱柱主要有两种类型，即大小分离色谱和亲和色谱。
1. 大小分离色谱大小分离色谱是根据生物大分子在凝胶中的大小差异进行分离的，通常用来分离蛋白质、核酸和多肽等大分子生物大分子。
根据凝胶的孔径大小，可以将大分子生物大分子从小分子生物大分子中分离出来。
2. 亲和色谱亲和色谱是利用生物大分子与特定配体之间的亲和作用来进行分离和纯化的方法。
通常在凝胶上固定一定的亲和剂，通过生物分子与亲和剂之间的特定相互作用来实现生物分子的选择性吸附和洗脱。
凝胶色谱柱的原理凝胶色谱柱的分离原理是利用凝胶材料固定在色谱柱中，通过色谱柱中的孔隙结构来实现生物大分子的分离。
凝胶色谱柱根据其孔隙大小可分为两种类型，包括凝胶过滤柱和凝胶渗透柱。
1. 凝胶过滤柱凝胶过滤柱利用凝胶中的孔隙大小来分离生物大分子。
当生物大分子通过色谱柱时，较大的生物大分子会被凝胶阻挡，而较小的生物大分子可以通过凝胶的孔隙，从而实现生物大分子的分离。
2. 凝胶渗透柱凝胶渗透柱通过凝胶中的孔隙大小来实现生物分子的分离。
通常，生物大分子会根据其大小在凝胶柱中进行渗透，从而实现生物大分子的分离和纯化。
凝胶色谱柱的应用凝胶色谱柱在生物分离和纯化中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质分离与纯化凝胶色谱柱可用于蛋白质的分离与纯化，对于分离蛋白质复合物、纯化功能蛋白等方面具有重要作用。
2. 核酸分离与纯化凝胶色谱柱可以用于核酸的分离与纯化，对于分离DNA、RNA等核酸样品具有重要作用。
3. 多肽分离与纯化凝胶色谱柱也可用于多肽的分离与纯化，对于分离多肽混合物、纯化特定多肽等方面具有重要作用。
4. 膜蛋白分离与纯化对于膜蛋白的分离与纯化，凝胶色谱柱也有着重要的应用价值。
凝胶色谱柱的优缺点凝胶色谱柱具有一些优点和缺点，以下分别进行介绍：1. 优点（1）分离效果好：凝胶色谱柱能够实现对生物大分子的高效分离与纯化，分离效果好；（2）操作简便：凝胶色谱柱的操作相对简单，不需要复杂的设备和技术，易于掌握；（3）适用范围广：凝胶色谱柱适用于多种生物大分子的分离与纯化，具有较广的应用范围。
色谱柱相关知识点总结
色谱柱相关知识点总结一、色谱柱的基本知识色谱柱是色谱分析中用于分离和提取混合物中成分的一种仪器，其主要原理是利用混合物成分在固定相上的溶解度差异，通过流动相的运动使不同成分逐渐分离。
色谱柱通常由柱壁、填料和柱端组成，其内部填充有各种不同材质的固定相，以提供不同的分离机制。
二、色谱柱的分类根据填料的不同，色谱柱可以分为以下几种主要类型：1. 气相色谱柱：主要用于气相色谱分析，填料通常为不活性的多孔硅胶或聚酯。
气相色谱柱广泛应用于各种化学物质的分析和检测。
2. 液相色谱柱：主要用于液相色谱分析，填料通常为全球性组织最具影响力的金属有机框架领域标准协会。
液相色谱柱可根据分离机制的不同分为反相、正相、离子交换、凝胶柱等类型。
3. 离子色谱柱：特殊用途色谱柱，主要用于分离离子物质，填料通常为离子交换树脂。
离子色谱柱常用于水质分析和环境监测中。
4. 通用型色谱柱：用于多种成分的分离和检测，填料通常为较为通用的硅胶或聚酯材料。
通用型色谱柱适用范围广，可以满足多种化学成分的分离需求。
三、色谱柱的特点1. 分离效果好：色谱柱内部填充有固定相，可以提供不同的分离机制，使得不同成分能够得到有效的分离，从而保证分析的准确性。
2. 适用范围广：不同类型的色谱柱可以满足各种化学物质的分离和检测需求，适用范围广泛。
3. 操作简便：色谱柱的操作相对简单，只需要合理选择填料和条件，就可以进行有效的分离和检测。
4. 耐用性强：优质的色谱柱通常具有较长的使用寿命，能够满足长期的分析需求。
四、色谱柱的选择选择合适的色谱柱对于分析结果的准确性至关重要，通常需要考虑以下几个因素：1. 样品性质：不同的样品性质需要选择不同类型的色谱柱，如极性样品使用反相色谱柱，非极性样品使用正相色谱柱。
2. 分离要求：不同的分离要求需要选择不同类型的色谱柱，如需要高效分离的样品可以选择长柱或小颗粒填料的色谱柱。
3. 操作条件：不同的操作条件需要选择不同类型的色谱柱，如高温条件下需要选择耐高温的色谱柱，高压条件下需要选择耐高压的色谱柱。
色谱柱相关知识
色谱柱相关知识1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
色谱柱相关知识
色谱柱相关知识1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
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色谱柱基础知识简介一、色谱柱工作原理当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。
二、色谱柱的分类2.1 色谱柱主要分为填充柱和毛细管柱注：此外，还有一些综合了填充柱和毛细管柱特点的特殊色谱柱，例如Alltech公司采用专利技术生产的集束管毛细管柱。
2.2 填充柱与毛细管柱的比较表1 填充柱与毛细管柱的比较色谱柱内径/mm 长度/m柱材料柱容量载气流速填充柱2-5 0.5-3 玻璃或金属材质mg 20-30mL/min毛细管柱0.10-0.810-100 熔融石英或不锈钢、聚酰亚胺涂层ng 1-10mL/min注：毛细管柱外层为聚酰亚胺，可修补柱子缺陷（即增强柔韧性）并且增加强度。
三、填充柱3.1填充柱的构成3.1.1 填充柱的柱管填充柱可以使用任何类型的柱管，只要它对样品是清洁,、惰性的, 以及能够承受GC的柱箱温度，像：不锈钢管、玻璃管、铜管、聚四氟乙烯管、聚合物管等。
3.1.2固体载体(颗粒)和固定相近距离观察一个填充颗粒,会发现它是由一个固体载体(颗粒)和在它上面均匀涂渍的涂敷物(叫做固定相)所组成。
固体载体即液态固定相附着的载体，其细小、均匀、多孔，增加与样品接触的表面积。
常用的固体载体为硅土。
固体载体也有不同大小的颗粒度，颗粒度是指“目数大小”。
一般是根据柱径来选择固体载体的粒度，保持载体的直径为柱内径的1/20为宜。
常用60-80目及80-100目。
表2 直径大小与目号的关系颗粒大小（目）平均的直径范围60/80目177至260μm80/100目149至177μm100/120目125至149μm120/1400目105至125μm四、毛细管柱4.1 毛细管柱的构成毛细管色谱柱由两个主要部分组成：管身和固定相。
4.1.1 管身毛细管柱的管身一般使用熔融二氧化硅或不锈钢作为基本材质。
熔融二氧化硅即高纯度合成石英（以下通称熔融石英)，通常在其表面涂上一层聚酰亚胺做为保护层。
当实验要求更高的使用温度时，我们可以来用不锈钢毛细柱来代替熔融石英毛细柱。
不锈钢毛细柱在使用温度(耐高温）及日常维护（不易折断等)的性能和指标上都优于熔融石英毛细柱。
但是不锈钢材质的惰性没有熔融石英好，它可以和许多的化合物相互作用，产生反应。
所以通常我们也会用化学方法对其进行处理，或者是在它的内壁再涂上薄薄的一层熔融石英，以增加不锈钢管的隋性：经过适当处理后，不锈钢毛细柱的惰性与熔融石英毛细柱的不相上下。
4.1.2 固定相固定相种类很多。
大部分的固定相是液体或胶状的高分子量，具有高热稳定性的聚合物，最常用的是聚硅氧烷（有时误称为硅氧烷）和聚乙二醇，另外还有一类是小的多孔粒子组成的聚合物或沸石(例如氧化铝、分子筛等)。
聚硅氧烷在其用途的多用性、性质的稳定性上都有优良的表现也是目前最为常用的固定相。
标准的聚硅氧烷是由许多单个的硅氧烷重复联接构成：每个硅原子与两个功能团相连，功能团的类型和数量决定了固定相总体类型和性质常见的四种功能基团为甲基、氰丙基、三氟丙基和苯基。
最基本的聚硅氧烷是由100%甲基取代的。
表3 常用固定液及相应色谱柱4.2 毛细管柱又分为三类：a空心毛细管柱WCOT - - 内表面涂有很薄的固定相，（Wall Coated Open Tube)；b填充毛细管柱SCOT –内表面涂有多孔的固体层或吸附剂（Support Coated Open Tube)；c多孔层毛细管柱PLOT –内表面先涂固态载体，然后再涂上固定相，（Porous Layer Open Tube).注：本实验室用的是空心毛细管柱WCOT，SCOT是根据其吸附性质的不同来分离溶质，PLOT（多孔层开管）柱用于易挥发性溶质（主要是气体）的分离，无需低温技术或柱温箱的低温冷却。
4.3 常用的毛细管色谱柱Agilent(J&W)（安捷伦科技公司）、Alltech（奥泰公司）、Restek （美国瑞斯泰克公司）、Varia(Chrompak)、Supelco是世界上五大色谱柱制造商。
菲罗门表4 本实验室现有色谱柱及将要配备的色谱柱五、毛细管色谱柱的选择选择毛细管柱，有四个要考虑的主要参数：固定相、内径、长度和液膜厚度。
5.1 固定相的选择选择毛细管柱时，最重要的是选择最佳固定相。
最可靠的方法是参考色谱柱制造商和供应商、GC 制造商以及出版的文献中所提供应用实例的汇编。
尽管可能无法参考确切的实例，但是通常可以得到足够信息来简化决策或减少潜在色谱柱数量。
固定相选择性和极性的概念在选择固定相时非常有用。
选择性决定于溶质和固定相分子的物理化学相互作用力，可以认为是固定相在区分两种溶质分子在其化学或物理性质方面的差异能力。
如果固定相和溶质间的相互作用力不同，则可分离。
固定液与组分分子间的作用力主要包括：静电力、诱导力、色散力和氢键力。
气相色谱试样中各组分通过色谱柱的保留时间与组分和固定液分子间作用力的大小有关，作用力小的组分先流出色谱柱，反之作用力大的组分后流出。
极性决定于固定相的结构，是由取代基团的极性及其相对量确定。
极性并不直接与选择性相关，但是会影响化合物保留以及分离。
极性确实对分离有影响，但仅是影响峰分离的众多固定相性质之一。
选择固定液时，一般是根据“相似相容”的选择来选择。
即固定相与被分离组分的性质（如极性、官能团、化学键等）越相似之间的作用力就越强，则固定相对其的流动阻力就越大，其保留时间也越长。
色谱柱就是通过这个原理将不同性质的混合物相互分开的．5.2 内径毛细管柱的内径可从0.10 - 0.80 mm。
色谱柱内径的大小将影响柱效、保留值、压力、载气流速和柱容量。
色谱柱内径的选择概述：a.如果需要较高的柱效，请使用0.18-0.25 mm内径的色谱柱。
0.18 mm 内径的色谱柱十分适用于泵容量较低的GC/MS系统。
直径较小的色谱柱容量最小，并需要最高的柱头压。
b. 如果需要较大的样品容量，请使用0.32 mm内径的色谱柱。
与0.25 mm 内径的色谱柱相比，此色谱柱通常对不分流进样或大体积(>2 μl)进样时较早流出的溶质有更佳的分离度。
c. 只有在仪器配备大口径直接进样器，且要求柱效较高时，才使用0.45 mm内径的色谱柱。
特别适用于高载气流速的情况，例如吹扫捕集、顶空进样器和阀进样应用。
d. 只有配备大口径直接进样器时，才使用0.53 mm 内径的色谱柱。
特别适用于高载气流速的条件，例如吹扫捕集、顶空进样器。
0.53 mm 内径的色谱柱在恒定的膜厚情况下具有最高的样品容量。
5.3 长度毛细管柱长度可从10-100m(可根据需要进行裁剪也可大于100 m），普通的一般为30 m。
柱长将会影响柱效率、保留（分析时间）和载气压力。
色谱柱柱长的选择概述：a.如果不知道最佳长度，请先使用25-30 米长的色谱柱，多数分析在此长度的柱子上完成。
b. 10-15 米长的色谱柱十分适用于分离含易分离溶质的样品或含溶质较少的样品。
内径较小的色谱柱通常长度较短，以便降低柱头压力。
c. 如果通过其它方法（直径较小的色谱柱、不同的固定相、改变柱温）不能达到满意的分离度时，应使用50-60 米长的色谱柱。
这种色谱柱适用于分离含多种溶质的复杂样品。
需要注意的是较长色谱柱的分析时间较长，费用较高。
5.4 液膜厚度液膜厚度影响柱子的保留特性、分离度和柱容量。
色谱柱膜厚的选择概述：a. 对于0.18-0.32 mm 内径的色谱柱，平均或标准膜厚为0.18-0.25 μm，可用于大多数分析。
b. 对于0.45-0.53 mm 内径的色谱柱，其平均或标准膜厚为0.8-1.5 μm，可用于大多数分析。
c. 厚膜色谱柱用于保留和分离挥发性溶质（如气体）。
厚液膜色谱柱惰性更强，容量更大。
厚液膜色谱柱具有较高流失性，使用温度上限也有所降低。
d. 薄膜色谱柱用于将高沸点、高分子量溶质（如类固醇、甘油三酸酯）的保留时间降至最小。
薄液膜色谱柱惰性更弱、容量更小、色谱柱流失更少。
六、毛细管柱的正确使用6.1 毛细管柱的安装a. 从色谱柱架上色谱柱的两端松开约0.5 m（1 圈到0.5 m）的柱管，以便安装入进样器和检测器。
避免小角度折弯柱管。
b. 将色谱柱安装到柱温箱中。
可以使用挂架。
c. 在色谱柱两端安装色谱柱螺母和石墨密封垫圈；将螺母和密封垫圈推到管线下方约15 cm 的位置。
d. 轻划（切割）色谱柱。
使用切割器从距色谱柱的两端约4-5 cm 处轻划色谱柱。
e. 柱切割断面要整洁。
在尽可能接近划痕处的位置用拇指和食指拿住色谱柱。
轻轻拉动并弯曲色谱柱。
色谱柱会很容易就断开。
如果色谱柱不容易断开，请勿用力将其断开。
在其他地方再次轻划（比先前的一端较远）并再次尝试干净利落地将其断开。
f. 使用放大镜检查切割处。
确保切割处与管线成直角，并且试管末端没有聚酰亚胺或“玻璃”碎片。
g. 在进样口处安装色谱柱。
检查GC 制造商的仪器手册以确定正在使用的进样口类型的正确的插入深度。
将色谱柱螺母和密封圈滑到合适的深度然后使用打字机修正液在色谱柱上的色谱柱螺母后面标记正确的插入深度。
使液体晾干。
将色谱柱插入进样器。
用手拧紧色谱柱螺母直到其将色谱柱固定，然后再拧紧1/4 至1/2 圈，以便在施加较轻的压力时不会将色谱柱从接头处拉出。
通过查看打字机修正液标记来验证是否已保持了正确的色谱柱插入深度。
h. 打开载气源并设定适当的流速。
将柱头压、分流和隔垫吹扫流速设定为相应的值。
有关标称柱头压，请参见表7。
如果使用分流/不分流进样口，请检查是否已“打开”吹扫（分流）阀。
i. 确认载气流已通过色谱柱。
把色谱柱的一端浸入盛有溶剂的瓶中，检查是否有气泡冒出。
j. 将色谱柱安装进检测器。
查看仪器制造商手册以确定正确的插入深度。
k. 检查是否存在渗漏。
这点十分重要。
在进行全面的泄漏检查之前不要将色谱柱加热。
l. 设定适当的进样器和检测器温度。
m.设定适当的尾吹气和检测器气流。
点火或“打开”检测器。
n. 在室温下将色谱柱吹扫最少10 分钟。
维护进样口或捕集阱之后，应再吹扫一段时间。
o. 注入非保留物质以检查进样器的安装是否正确。
例如：丁烷或甲烷(FID)、乙腈的顶空蒸气(NPD)、二氯甲烷的顶空蒸气(ECD)、空气(TCD)、氩气（质谱仪）。
如果出现对称非保留峰，则说明安装正确。
如果观察到拖尾峰，请重新将色谱柱装入进样口。
6.2 纯化载气毛细管柱的寿命与使用载气的纯度、水蒸气含量等有关。
在没有载气通过时, 柱的固定液热分解较迅速, 所以在柱箱升温前应该先通上载气，柱箱冷却后才能把载气关上。