串联亲和纯化

串联亲和纯化/质谱

服务简介

TAP/MS是Co-IP/MS的“近亲”，两者在寻找诱饵蛋白的互作蛋白以及纯化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS经过2步亲和纯化，而Co-IP/MS只有1步亲和纯化，故而TAP/MS可以有效减少非特异蛋白的结合。

基本流程：构建含有目的基因的载体，使目的基因与2个不同的表位标签融合表达，如Flag、HA、His、CBP、SBP等等。辉骏生物采用Flag-HA双标签载体；载体转染细胞并表达融合蛋白“Flag-HA-诱饵蛋白”；细胞裂解提取总蛋白，经anti-flag树脂和anti-HA树脂的两步纯化和洗脱，更大限度了去除了假阳性蛋白。洗脱液进入质谱仪，分析鉴定与诱饵蛋白具有相互作用的蛋白。

技术优势

1、TAP/MS得到的互作蛋白是在细胞内与诱饵蛋白结合的，符合体内真实生理情况，得到的结果可信度高。

2、采用两步纯化，可以有效的减少非特异蛋白的结合，并避免因过度冲洗而产生的复合体解离。

技术路线

实验步骤：

1、构建融合Flag-HA的诱饵蛋白真核表达载体或者慢病毒载体

2、载体瞬时转染靶细胞或包装慢病毒感染靶细胞

3、TAP纯化互作蛋白

4、质谱鉴定互作蛋白