全血胆碱酯酶活性的测定

合集下载

6,胆碱酯酶活性测定

实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。

2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。

3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。

（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。

2．恒温水箱(37±0.5℃)。

3．离心机。

4．分光光度计，10mm比色皿。

5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。

（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。

2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。

取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。

3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。

4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。

5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。

出现黄色即弃用。

6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。

7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。

此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。

因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。

（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。

全血胆碱酯酶活性测定教案

二、仪器
• • • • • • 分光光度计； 10mL比色管；漏斗；恒温水浴箱，控温±0.5℃；采血针头；血色素吸管。
三、试剂
• 本标准所用试剂均为分析纯试剂 1、实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水 2、盐酸溶液(1＋2) 3、碱性羟胺溶液，临用前将139g/L盐酸羟胺溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合 4、磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)，准确称取磷酸氢二钠 (Na2HPO4· 12H2O)8.36g和磷酸二氢钾(KH2PO4)1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内 5、三氯化铁溶液，称取10g三氯化铁(FeCl3· 6H2O)，加 0.84mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。贮存于棕色瓶中 6、氯化乙酰胆碱标准液：贮备液70μmol/mL乙酰胆碱；临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液， 7μmol/mL乙酰胆碱
全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法
----羟胺三氯化铁法 WS/T66-1996
一、原理
• 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。 • 未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应，生成乙酰羟胺，然后，与三氯化铁在酸性溶液中反应，形成红色羟肟酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保存一周。
五、分析步骤
管号乙酰胆碱标准应用液(ml) 磷酸盐缓冲液乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml

胆碱酯酶检查的流程和注意事项

胆碱酯酶检查的流程和注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!胆碱酯酶检查是一项重要的生物化学检测，主要用于评估肝脏功能和诊断某些疾病。

全血胆碱酯酶活性的测定讲课讲稿

试剂和材料
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)
三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液
分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃
采血针头
血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A样品管+0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
C：以试剂空白为参比的在波长520nm处标准管的吸光度值。
②计算酶活性的相对值
Y= =197
Y—酶活性的相对值，%；
Xs—被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
Xc—正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃·30min)
吸光度0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得：Xs= =3.149μmol
Xs：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
A：以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；
B：以试剂空白为参比的在波长520nm Nhomakorabea对照管的吸光度值；
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19±0.398μmol；因3.149μmol在3.19±0.398μmol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。

胆碱酯酶活性测定方法

胆碱酯酶活性测定方法
胆碱酯酶（acetylcholinesterase, AChE）活性测定方法主要有以下几种常用的方法：
1. 利用酶促反应产生的色素变化测定：
(1) 比色法：将胆碱酯酶底物乙酰胆碱与碱性溴化镉等试剂反应，生成黄色产物，利用比色计或分光光度计测定产物的吸光度，间接测定胆碱酯酶活性。

(2) 荧光法：将胆碱酯酶底物与荧光染料反应，使底物和产物之间发生荧光变化，利用荧光光谱仪测定荧光强度，间接测定胆碱酯酶活性。

2. 利用电化学方法测定：常用的是反应器中使用碳电极或银电极，利用底物和产物之间的电位差变化测定胆碱酯酶活性。

3. 利用放射性同位素标记测定：将底物或产物标记上放射性同位素，通过测定放射性同位素的放射性强度，间接测定胆碱酯酶活性。

4. 利用质谱法测定：将底物和产物分离并通过质谱仪测定其质荷比，间接测定胆碱酯酶活性。

需要注意的是，不同的测定方法适用于不同的实验目的和样本类型，具体的选择应根据实验需求和设备条件来确定。

全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法

全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法Blood—Determinatoin of cholinesterase activity—Spectrophotometricmethod—Hydroxylamine-ferric chloride method1 主题内容与适用范围本标准规定了血中胆碱酯酶活性的分光光度测定方法——羟胺三氯化铁法。

本法最低检测浓度为2.4μmol/L。

本标准适用于正常人和接触有机磷农药人员血中胆碱酯酶活性的测定。

2 原理血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。

未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应，生成乙酰羟胺，然后，与三氯化铁在酸性溶液中反应，形成红色羟肟酸铁络合物。

颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。

在波长520 nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。

3 仪器3.1分光光度计，10mm比色杯。

3.2比色管，10 mL。

3.3普通漏斗，40mm。

3.4恒温水浴箱，控温士0.5℃。

3.5采血针头。

3.6血色素吸管，有20μL刻度。

4试剂本标准所用试剂均为分析纯试剂。

4.1 实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水。

4.2 盐酸，=1.19 g/mL。

4.3 盐酸溶液(1+2)。

4.4 碱性羟胺溶液，临用前将139 g/L盐酸羟胺溶液和140 g/L氢氧化钠溶液等体积混合。

4.5 磷酸盐缓冲液(pH=7.20)，准确称取磷酸氢二钠()8.36g和磷酸二氢钾()1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内。

4.6 三氯化铁溶液，称取10 g三氯化铁()，加0.84 mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。

贮存于棕色瓶中。

4.7 氯化乙酰胆碱标准液，精确称取乙酰胆碱1.2716g，用磷酸盐缓冲液(4.5)溶解，并稀释到100 mL，此溶液1mL相当于70μmol乙酰胆碱，为贮备液。

临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液(4.5)稀释10倍，此溶液1 mL相当于7μmol乙酰胆碱，为应用液。

全血胆碱酯酶活性测定

实验五全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱脂酶活性分光光度测定方法WS/T67—1996[原理]胆碱脂酶水解硫代乙酰胆碱（ASCH，acetyl-thilcholine）,生成硫代乙酰胆碱和乙酸。

硫代胆碱与硫基现色几剂，5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸[DTNB，dithio-bis-(nitribenzoic acid)]反应，形成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸（TNB）。

在412nm长下比色定量。

[仪器]分光光度计，5mm比色杯；恒温水浴；离心机；血红蛋白吸管，20ul；刻度吸管，5.0ml, 2.0 ml；试管10ml；容量瓶，10ml。

[试剂]1．1/15mol/L磷酸盐缓冲液（PH 7.4）；生理盐水：氯化钠0.85/100ml；硫代乙酰胆碱（ASCh）溶液：称取ASCh 72.3mg，溶于生理盐水中并稀释成10ml。

置冰箱中保存。

临用时，以生理盐水稀释10倍；5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸（DTNB）溶液：称取DTMB19.8mg，滴加硫酸缓冲液并搅拌至完全溶解，溶液透明（约2ml）。

再用生理盐水稀释至10ml ，置冰箱中保存。

临用时，用生理盐水稀释10倍；出现黄色即弃取；毒扁豆碱溶液（抑制剂）：取毒扁豆碱约1mg，溶于1ml生理盐水中。

临用时配制。

严防污染其他试剂和器材。

2．巯基标准溶液：准确称取还原型谷胱甘肽3.07mg，用水（经煮沸并冷却的水）溶解并移入10ml容量瓶中，稀释至刻度。

此溶液1ml相当于1μmol谷胱甘肽。

因谷胱甘肽易氧化，故溶液应临用时配制。

[采样、运输和保存]取10ul末梢血滴入置有肝素钠或3ml磷酸缓冲液的小试管中，混匀，加塞。

置冰瓶中运送，于4℃冰箱内保存，尽快分析。

[分析步骤]1．标准曲线的绘制：取5支试管，按实习10—6配制标准。

以水为参比测定吸光度。

从各标准管的吸光度减去0管，以酶活性为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2．样品测定实习表10—6 标准管的配制管号0 1 2 3 4巯基标准溶液，ml 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4水，ml 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1缓冲溶液，ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 DTNB溶液，ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5胆碱酯酶活性，μmol/ml 0.0 20 40 60 801．将样品从冰箱中取出，使恢复到室温，混匀待用。

三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶活性王小鹏

三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶原理：在血液胆碱酯酶作用下，乙酰胆碱发生水解；剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应生成乙酰羟胺，后者在酸性条件下，与三氯化铁反应生成红棕色羟肟酸铁配合物，呈色强度与剩余乙酰胆碱的量成正比，在５２０ｎｍ波长处比色，间接测定血中胆碱酯酶活性。

此法最低检测浓度２.４μmol/L（20μl血样），测定范围2.4~1000.0μmol/L。

步骤：1、标准的配制：取6支比色管，分别加入0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，7μmol/ml的氯化乙酰胆碱标准溶液，加标准缓冲液（PBS）至1.0ml，各加1.0ml水，配制成乙酰胆碱含量为：0.0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0μmol标准溶液系列。

向各管中加入4.0ml 碱性羟胺，振摇2min。

加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。

加2.0ml三氯化铁溶液，振摇。

溶液与520nm处，以第一管为参比，测定吸光度值。

以乙酰胆碱含量（μmol）对相应的吸光度值绘制标准曲线。

2、样品的处理：取4支比色管，分别为1（A,B）和2（A,B），向各管加入0.98mlPBS，20μl血样。

置于37℃水浴中预热5min。

向1和2的A管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液。

自加入乙酰胆碱开始计时，在37℃左右（正负0.5℃）准确反应30min，每间隔10min振摇1次，同时，向1和2的B管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液，充分振摇。

取出比色管，各管立即加入4.0ml碱性羟胺溶液，充分振摇2min。

然后，A和B管各加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。

加2.0ml三氯化铁溶液，振摇后样品离心。

滤液与520nm处，以标准第一管为参比，测定吸光度。

分别用各管吸光度值计算其中乙酰胆碱剩余量，从而得出1,2号管胆碱酯酶活性。

实验数据及结果：标准曲线吸光度值如下表表1标准曲线吸光度值0 1.4 2.8 4.2 5.6 7.0胆碱酯酶溶液体积吸光度值0.004 0.139 0.260 0.395 0.475 0.600可得标准曲线为：y=0.081x+0.028 拟合方程为R2=0.994样品吸光度如下表表2样品吸光度1号2号A管0.576 0.555B管0.643 0.6561A中含有乙酰胆碱的量是6.7654 1B中含有7.5926 消耗乙酰胆碱为0.8272μmol2A中含有乙酰胆碱的量为6.5061 2B中含有7.7531 消耗乙酰胆碱量为1.247μmol由此数据可知2号管中乙酰胆碱消耗量大，估1号内乙酰胆碱酶活性被抑制为注射有有机磷农药的小鼠血样。

全血胆碱脂酶测定

注意事项
采血前先准备好试管，加入磷缓；采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置；准确控制水浴温度和放置时间；加三氯化铁显色后，在20min内比色；参比管的溶液留用到最后。
实验报告要求
[实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果] [分析与讨论]
三氯化铁比色法
[原理]
乙酰胆碱
胆碱酯酶
胆碱 +
乙酸
碱性羟胺
乙酰羟胺
FeCl3Leabharlann HCl羟肟酸铁(棕红色络合物)
[器材] 刺针一次性自控式微量吸管（20μl）分光光度计恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ）
[试剂] 磷酸盐缓冲液（PH=7.20）碱性羟胺溶液 1∶2盐酸溶液三氯化铁溶液氯化乙酰胆碱标准应用液（1ml含7μmol）
实验目的
加深对有机磷农药中毒机制的认识掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法
意义
有机磷农药中毒的重要诊断指标中毒者治疗后的效果观察指标接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标
方法
Asch-DTNB比色法（GBZ52）羟胺三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法纸片法 Biocheck法（便携式分析仪）
健康人胆碱酯酶活性绝对值（0.02ml . 37 ℃ . 30min）男：4.43 μmol 女：3.99 μmol
河南健康人胆碱酯酶活性绝对值（0.02ml . 37 ℃ . 30min）全血：3.83±0.55μmol 血浆：0.76±0.18 μmol 红细胞: 3.07±0.45μmol
浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值男：3.22 ±0.336 μmol 女：3.19 ±0.398 μmol

胆碱酯酶活

胆碱酯酶活性测定（干化学法）操作规程1.预期用途快速定性检测人血清、血浆中胆碱酯酶活性。

2.检验原理胆碱酯酶催化水解乙酰胆碱（Ach）生成乙酸和胆碱，乙酸能使指示剂溴百里香酚蓝（BTB）发生颜色变化，通过颜色的改变反映生成乙酸的量，乙酸量的多少即可表示酶活力的高低；反应结果可与胆碱酯酶活性测定比色表直接进行比色测定。

3.主要组成成份本产品系由乙酰胆碱(Ach)、溴百里香酚蓝等试剂固定在通过双面胶粘贴有中速滤纸的PVC板上，干燥后裁切成胆碱酯酶活性测定试纸。

4.样本要求4.1、在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。

4.2、检测时应使用新鲜标本。

4.3、常规抗凝剂不影响检测结果。

5.检验方法在进行测试前必须先完整阅读使用说明书。

5.1、取测定试纸一片，放在培养皿中，向反应纸片中央加上8～10μl待测新鲜血清或血浆，盖上培养皿盖保持密封（保持一定的湿度以防血清蒸发，同时防外界酸碱影响），放置37℃水浴箱中并开始记时。

5.2、11分30秒后取出，所呈现色泽与胆碱酯酶活力比色表(见图一)比较，即得胆碱酯酶活力单位。

5.3、如无水浴箱，根据测定时室温，查附表确定反应所需时间，在到达反应所需时间后立即比色。

5.4、正常值30-80单位，如低于30单位的标本，欲求得较精确的结果，可将时间延长一倍，再观察结果。

附表：20～40℃内反应终点时间表6.结果判定阳性：胆碱酯酶活力单位小于30。

阴性：胆碱酯酶活力单位大于等于30。

无效：向胆碱酯酶活性测定试纸加上待测新鲜血清或血浆后不出现墨绿色，表明标本受污染或试纸失效。

7.检验结果的解释7.1、阳性结果表明胆碱酯酶活力降低，可能是由于有机磷农药中毒或肝实质性损害（如急性肝炎、慢性肝炎活动期、肝硬化失代偿期及肝癌等）造成。

7.2、阴性结果表明胆碱酯酶活性正常。

7.3、检验结果无效时应考虑标本是否受污染，如排除标本受污染，应换用其它批号胆碱酯酶活性试纸重新检测。

胆碱酯酶活力判定标准

胆碱酯酶活力判定标准胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）是一种重要的酶类物质，在生物体中具有重要的生理功能。

它主要是在神经系统中发挥作用，通过降解神经递质乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）来调节神经信号的传递。

胆碱酯酶活力的检测是评估神经系统功能的一种重要方法。

胆碱酯酶活力的检测方法包括体外测定和体内测定两种。

在体外测定中，可以通过测定样品中酶催化降解底物乙酰胆碱所生成的产物酰胆碱酸（acetic acid）的释放量，来反映胆碱酯酶的活力。

常见的体外测定方法有刺激电极法、色谱法和酶联免疫吸附法等。

体内测定是通过测定动物体内胆碱酯酶活力来评估其功能状态。

常用的体内测定方法主要包括测定血浆或血清中酶活力、组织或细胞中酶活力、脑脊液中酶活力等。

胆碱酯酶活力的正常范围因检测方法、样本来源、性别、年龄等因素而有所差异。

一般来说，胆碱酯酶活力的正常参考范围是：1. 血浆或血清中酶活力：正常成年人的胆碱酯酶活力一般在0.4-1.2 U/mL之间。

2. 组织或细胞中酶活力：胆碱酯酶在不同组织和细胞中的活力差异较大，但一般都会显示较高的活力。

3. 脑脊液中酶活力：正常成年人的脑脊液中胆碱酯酶活力一般在低微的水平。

胆碱酯酶活力的异常变化可能与多种疾病和病理状态有关。

一些疾病和药物、毒物等因素可能引起胆碱酯酶活力的增加或降低。

例如，胆碱酯酶在神经系统中的活力降低可能与阿尔茨海默病等神经退行性疾病相关。

胆碱酯酶活力的增加可能与肝功能损害、某些药物中毒等有关。

此外，胆碱酯酶活力的检测在医学诊断中也具有一定的参考价值。

例如，胆碱酯酶活力的测定可用于鉴别肾上腺激素分泌过多的原因，可与尿儿茶酚胺、瘤胃癌相关的胆碱酯酶比较，以进行肿瘤的诊断。

此外，胆碱酯酶活力的异常变化还可能与某些遗传性疾病有关。

需要注意的是，在进行胆碱酯酶活力检测时，应遵循实验室的规范操作流程和标准方法，以确保测试结果的准确性和可靠性。

血液胆碱酯酶活性测定三种方法的比较

血液胆碱酯酶活性测定三种方法的比较黄金祥;汤晓勇;陈巍;王文玲【期刊名称】《劳动医学》【年(卷),期】2000(17)3【摘要】比较三种测定血液胆碱酯酶 (ChE)活性的方法。

[方法 ]用改良Ellman 法 (A法 )、携带式ChE测定仪法 (B法 )和纸片法 (C法 )同时测定 74名健康人和急性农药中毒患者 5 8人次血液ChE活性 ,统计和分析测定结果。

[结果 ]建立了三种方法血液ChE活性的正常参比值 ,急性氨基甲酸酯、有机磷及有机磷与其他农药混配中毒患者血液ChE活性均有不同程度下降 ,A法中红细胞AChE、全血和血浆ChE以及C法中全血ChE活性百分值与B法中红细胞AChE活性均呈密切的正相关关系 ,相关系数r分别为 0 92 8、0 939、0 6 83和0 90 6。

[结论 ]三种方法均可用于急性有机磷中毒患者ChE活性的测定 ,三种方法各有所长 ,各有所短。

【总页数】3页(P156-158)【关键词】胆碱酯酶;测定;杀虫剂;中毒;血液;测定【作者】黄金祥;汤晓勇;陈巍;王文玲【作者单位】中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所【正文语种】中文【中图分类】R139.3;R446.122【相关文献】1.测定苷甲对ERK激酶活性影响的三种方法比较 [J], 刘姬艳;于立坚;马润娣2.测定人红细胞G6PD活性的三种方法比较 [J], 聂崇兴;赵双星3.离子色谱法和传统分析法测定血液透析水中三种阴离子的方法比较 [J], 田海娇;武婷;申剑4.三种血液胆碱酯酶测定方法的比较 [J], 王玉萍;王绪玲;李慧;张巡淼;何凤生5.两种全血胆碱酯酶活性测定方法的相关性比较 [J], 万伟国;徐麦玲;陆爱玲;邹和建;陈宇明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

全血胆碱酯酶活性测定

六、计算
1、按式(1)计算酶活性的绝对值：被水解乙酰胆碱吸光度=B-A。 • 以被水解乙酰胆碱吸光度查标准曲线得被水解乙酰胆碱的量，此值为0.02ml血37℃30分钟反应条件下胆碱酯酶活性绝对值= Xs/0.02 • 式中：Xs——水解乙酰胆碱的浓度， µmol(0.02mL·37℃·30min)； • A—以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值； • B—以试剂空白为参比的在波长520nm处对照管的吸光度值。
• 加三氯化铁显色后，棕红色铁络合物易褪色，必须控制在20min内比色完毕。若大批样品分析时，可分批加入三氯化铁溶液，否则会有较大误差。 • 滤液一定要澄清，如果出现混浊，会使吸光度升高，而胆碱酯酶活性偏低。 • 氯化乙酰胆碱基质不太稳定，每次测定需做标准管。标准管读数在同一比色计上应保持恒定或仅有较小的变动。 • 计算胆碱酯酶活性百分数时，应以本地区正常人全血胆碱酯酶活性为基准。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc • 式中：Y—酶活性的相对值，%； • Xs—被测血样中酶活性的绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)； • Xc—正常人血中酶活性绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)。 Xc=1.60µmol(0.02mL·37℃·30min)
二、仪器
• • • • • • 分光光度计； 10mL比色管；漏斗；恒温水浴箱，控温±0.5℃；采血针头；血色素吸管。
三ห้องสมุดไป่ตู้试剂
• 本标准所用试剂均为分析纯试剂 1、实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水 2、盐酸溶液(1＋2) 3、碱性羟胺溶液，临用前将139g/L盐酸羟胺溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合 4、磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)，准确称取磷酸氢二钠 (Na2HPO4·12H2O)8.36g和磷酸二氢钾(KH2PO4)1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内 5、三氯化铁溶液，称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加 0.84mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。贮存于棕色瓶中 6、氯化乙酰胆碱标准液：贮备液70µmol/mL乙酰胆碱；临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液， 7µmol/mL乙酰胆碱

全血胆碱脂酶测定精讲

实验器材
一次性注射器(1ml) 12个，采血用；微量移液器（20μl）；分光光度计；玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸；恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ）移液管(0.2ml，1ml，5ml)；试管；漏斗；容量瓶
试剂
试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。 1．磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2 准确称取磷酸氢二钠(Na2HP04· 12H2O)16.72g和磷酸二氢钾 (KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml，置4℃冰箱中保存。 2．碱性羟胺溶液临用时将139 g/L的盐酸羟胺溶液与140 g/L的氢氧化钠溶液等体积混合。 3．盐酸溶液1+2 浓盐酸l份加水2份混合。
A管（样品管）
37℃水浴 30min（准确计时）碱性羟胺4ml,振3min 1∶2盐酸溶液2ml, 摇1min 10%三氯化铁溶液2ml
摇匀、过滤、比色
计算
1.被水解的乙酰胆碱吸光度=
对照管吸光度（B管）－样品管吸光度（A管）
2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱( μmol )
---即0.02ml血经37 ℃，30min反应条件下的
准确控制水浴温度和放置时间
加三氯化铁显色后，在20min内比色
参比管的溶液留用到最后
实验报告要求
[实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果]
[分析与讨论]
胆碱酯酶活性绝对值C
3.胆碱酯酶活性相对值（%）
样品胆碱酯酶活性绝对值 100 健康人碱酯酶活性绝对值
浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值
男：3.22 ±0.336 μmol
女：3.19 ±0.398 μmol
注意事项
采血前先准备好试管，加入磷缓采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置

全血胆碱酯酶活性的测定

全血胆碱酯酶活性的测定宇文皓月——羟胺三氯化铁法实验目的1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步调及酶测定的临床意义。

2. 了解罕见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。

3. 学会末梢血的收集。

实验原理血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。

未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。

颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。

在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。

试剂和资料蒸馏水盐酸溶液(1＋2)碱性羟胺溶液磷酸盐缓冲液(PH＝7.20) 三氯化铁溶液氯化乙酰胆碱尺度液分光光度计10mL比色管漏斗恒温水浴箱，控温±0.5℃采血针头血色素吸管采样、运输和保管用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。

实验步调A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min+1.0mL乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30minB 对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min+1.0mL水 37℃水浴 30minC 尺度管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min + 1.0mL乙酰胆碱应用液37℃水浴 30minD 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +1.0mL水37℃水浴 30min水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操纵：1.加入 4.0mL 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min；2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min；3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇；4.滤纸过滤，520nm比色。

实验结果表1-1 520nm波长下样品的吸光度样品编号 A B C D吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000结果计算①计算酶活性的绝对值带入得： Xs==3.149μmolXs：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL·37℃·30min)；试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；A：以B：以试剂空白为参比的在波长520nm处对照管的吸光度值；C：以试剂空白为参比的在波长520nm处尺度管的吸光度值。