人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2005(026)007
【摘要】目的明确由于标准品不同及样品的处理不同而带来的差异,建立一种重复性好、可行性强的凝血因子Ⅷ效价测定的适宜方法.方法采用部分凝血活酶时间(APTT)法测定人凝血因子Ⅷ效价,同时对该方法的精密度、准确度进行分析.结果凝血因子Ⅷ为预稀释液效价检测回收率为1.0102,高于白蛋白CA BUFFER(回收率=1.0605);冷冻人干凝血因子Ⅷ为标准品明显低于标准血浆(t=8.536,P＜0.000 5).结论对于凝血因子效价检测,标准品及样品处理的统一规定是必要的.
【总页数】2页(P474-475)
【作者】胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【作者单位】232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R5
【相关文献】
1.人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
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4.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
5.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
人凝血因子Ⅷ效价测定一步法1 试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
重组人凝血因子Ⅷ细菌内毒素检测方法研究
重组人凝血因子Ⅷ细菌内毒素检测方法研究范林;刘晓民;黄洁;徐武;刘鑫【摘要】为建立重组人凝血因子Ⅷ细菌内毒素检查方法,按《中国药典》2015年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查方法及指导原则开展试验。
结果表明,鲎试剂动态浊度法在适当的稀释倍数下,重组人凝血因子Ⅷ细菌内毒素检测方法准确可靠,可以用于对重组人凝血因子Ⅷ原液、半成品、成品的检定,且不受人员、仪器和日期的影响。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2017(000)001【总页数】3页(P19-20)【关键词】细菌内毒素;重组人凝血因子Ⅷ;鲎试剂【作者】范林;刘晓民;黄洁;徐武;刘鑫【作者单位】四川大学生命科学学院;成都蓉生药业有限责任公司;四川大学生命科学学院;成都蓉生药业有限责任公司;四川大学生命科学学院;成都蓉生药业有限责任公司;四川大学生命科学学院;成都蓉生药业有限责任公司;四川大学生命科学学院;成都蓉生药业有限责任公司【正文语种】中文【中图分类】R927据报道，我国的甲型血友病患者约10万人，其中1万人接受过凝血因子Ⅷ治疗[1]。
目前，市场上有国内厂家从血浆中提取生产的凝血因子Ⅷ和进口的重组凝血因子Ⅷ。
受原料血浆的限制，血浆来源的凝血因子Ⅷ产量十分有限，进口重组凝血因子Ⅷ价格昂贵，一般血友病患者无法承受。
因此，迫切需要国内重组人凝血因子Ⅷ自主生产的完成。
在重组人凝血因子Ⅷ的生产过程中，对其质量控制方法的建立也迫在眉睫。
其中，建立细菌内毒素检测方法对控制产品的热原很重要。
因此，必须建立一个快速检测细菌内毒素的方法。
1.1 仪器与试剂移液器、动态试管仪、无热原取样瓶、反应管、无热原玻璃试管、无热原吸头和螺旋震荡器。
细菌内毒素工作标准品（CSE，效价60EU/支，批号150601-201479，中国食品药品检定研究院），鲎试剂（TAL，灵敏度0.015～10EU/mL，批号1306212，湛江安度斯生物有限公司），细菌内毒素检查用水（批号1403210，湛江安度斯生物有限公司）。
医疗机构医院医学实验室凝血因子活性测定技术要求
医疗机构医院医学实验室凝血因子活性测定技术要求1 范围本标准规定了凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）活性测定的技术要求，包括了一期法、二期法和发色底物法。
由于方法学不一致，本标准不涉及纤维蛋白原检测和凝血因子XIII的检测。
本标准适用于开展凝血因子活性检测的医学实验室，用于规范相应的检测过程和质量控制。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
WS/T 359-2011 血浆凝固实验血液标本的采集及处理指南WS/T 406-2012 临床血液学检验常规项目分析质量要求WS/T 407-2012 医疗机构内定量检验结果可比性验证指南3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1凝血酶原时间prothrombin time, PT血浆与凝血活酶试剂（例如，组织因子）和氯化钙反应后发生凝固所需要的时间。
[WS/T 359-2011，定义2.1]3.2活化部分凝血活酶时间activated partial thromboplastin time, APTT血浆与适量的氯化钙（CaCl2）、部分凝血活酶试剂盒接触因子激活剂（如白陶土）反应后发生凝固所需要的时间。
[WS/T 359-2011，定义2.2]3.3定标曲线calibration curve校准曲线参考曲线定量反映凝血因子活性与纤维蛋白形成所需时间之间的相互关系的曲线。
3.4参考血浆reference plasma校准血浆定标血浆已知凝血因子活性的枸橼酸钠抗凝的正常混合血浆。
该血浆可以自备，亦可从制造商处购买，用于制备参考曲线。
3.5乏因子血浆factor-deficient plasma缺乏待测凝血因子的血浆。
3.6质控血浆control plasma源于人或动物血，或者人工制成的新鲜、冰冻或冻干的血浆，用于质量控制。
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定摘要】目的讨论血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定。
方法对样本进行临床检验。
结论参考范围(一期法)FⅧ：C 54.29%～168.51%，FⅨ：C 50.09%～222.05%，FⅪ：C 81%～118%， FⅫ：C 61 %～148%。
因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性检测与Ⅱ：C、V：C、Ⅶ：C、X： C等一样，都是以相当正常人的百分活性来表示的，故工作参考值很重要，志愿者以100例为好，且年龄段分布要有代表性，制成的混合血浆在一30℃下也只能保持3个月。
每次检测都必须制作标准曲线。
【关键词】血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定参考范围(一期法)FⅧ：C54.29%～168.51%，FⅨ：C50.09%～222.05%，FⅪ：C81%～118%，FⅫ：C61 %～148%。
结果评价1.生理情况血浆凝血因子Ⅷ曾称为抗血友病因子(antihemophilic factor，AHF)或抗血友病球蛋白(antihemophilic globulin，AHG)，正常人血浆浓度很不稳定，一般为0.1mg/L，分子质量为3330000，肝脏可能是主要的合成场所，其基因定位于X性染色体(Xq28)，长度为186kb。
凝血因子Ⅸ也称为凝血活酶成分(plasma thromboplastin com-ponent，或叫christmas因子，分子质量为56000，正常血浆浓度为3～4mg/L，为肝脏合成的维生素K依赖性凝血因子，其基因定位于X染色体(Xq27.1)，长度为34kb。
凝血因子Ⅺ，又称血浆凝血活酶前质(plasma thromboplastin antecedent，PTA)，是一种较为稳定的凝血蛋白，血浆正常浓度为4～6mg/L，分子质量为160 000，由肝脏合成，基因定位于4号染色体(4q35)，长度为23kb。
因子Ⅻ，也称Hageman因子，正常血浆浓度为29mg/L，分子质量为80 000，主要由肝脏合成，基因定位于第5号染色体(5q33-ter)，长度为11.9kb。
凝血因子活性测定
凝血因子活性测定凝血因子活性测定介绍：凝血因子活性测定是对人体内的各种凝血因子进行活性测定，凝血因子在血液凝固过程中，起着非常重要的作用，测定各个凝血因子的活性，有助于判断血友病的类型，血友病的轻重程度以及某些病理情况下的凝血状况。
凝血因子活性测定正常值：因子Ⅱ：C 、因子Ⅴ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅸ：C、因子Ⅹ：C、因子Ⅺ：C、因子Ⅻ：C均为 0.80～1.20因子Ⅷ：C为 0.60～1.60凝血因子活性测定临床意义：异常结果：降低：1. Ⅷ：C降低见于血友病A，血管性血友病，弥散性血管内凝血等;2.因子Ⅸ：C降低见于血友病C，肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药等;3.因子Ⅺ：C降低可见于先天性因子Ⅺ缺乏，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血等;4.因子Ⅻ：C降低可见于先天性因子Ⅻ缺乏，弥散性血管内凝血，肝脏疾病等;5.因子Ⅱ：C ，因子Ⅴ：C ，因子Ⅶ：C ，因子Ⅹ：C降低，见于先天性凝血因子缺乏或获得性凝血因子降低，如肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药及血液中存在抗凝物质等。
升高：见于血液高凝状态和血栓性疾病，如深部静脉血栓形成，肺栓塞，肾病综合征，妊娠高血压综合征，恶性肿瘤等。
因子Ⅷ也见于肝脏疾病。
需要检查的人群：患有血液病的人群。
凝血因子活性测定注意事项：不合宜人群：长期服用阿司匹林的人群。
检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食。
禁止服用阿司匹林，检查前禁止服用各种药物，以免造成影响。
检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。
凝血因子活性测定检查过程：取标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。
另取1×10 cm的塑料试管6支，各加入0.1 %纤维蛋白原溶液450 μl，置37℃水浴预热5 min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50 μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。
医学检验·检查项目：凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C)_课件模板
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ห้องสมุดไป่ตู้临床意义：
∶C或Ⅸ∶C小于2%，中型2%～5%，轻型 5%～25%，亚临床型25%～45%。因子Ⅷ∶C 降低还见于血管性血友病、DIC和抗因子 Ⅷ∶C抗体所致的获得性血发病甲;因子 Ⅸ∶C降低还见于肝脏疾病、维生素K缺乏 症、DIC和口服抗凝剂等。
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临床意义：
(1)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C水平增高：见 于高凝状态和血栓性疾病。尤其是静脉血 栓形成，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾 病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合 征、恶性肿瘤以及肝功能衰竭时因子 Ⅷ∶C水平增高。 (2)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C 水平降低：见于血友病甲或血友病乙，按 其降低程度分为：重型Ⅶ
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正常值： 因子Ⅷ∶C 78%～128%；因子Ⅸ∶C
68%～128%。
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相关检查： 维生素E、红细胞聚集性、血小板聚集试 验（PAgT）、血清黏度（SV）、乙醇凝胶 试验、活化部分凝血活酶时间（APTT）。
谢谢！
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相关症状： 拔牙后伤口经久不愈、弥漫性出血、血液 粘滞度增高、凝血因子功能的障碍、延髓 出血、面颊及上胸部充血。
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相关疾病：
丘疹紫癜性手套和短袜样综合征、妊娠合 并血栓性疾病、产科播散性血管内凝血、 肝硬化、小儿播散性血管内凝血、丘疹性 血管增生、皮肤骨髓纤维化。
人凝血因子Ⅷ效价凝固检测法的验证及应用
２ ４・
微生物学免疫学进展
２ ０ １ ３年第 ４ １卷第 ３期
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人 凝 血 因子 Ⅷ效 价凝 固检 测 法 的 验 证 及 应 用
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凝血检查操作方法
凝血检查操作方法
凝血检查是一种常用的临床检查方法，用于评估人体的凝血功能。
下面是凝血检查的一般操作步骤：
1. 采样：首先选择合适的采样部位，常见的有静脉采血和穿刺采血。
静脉采血时，使用无菌技术消毒采血部位，插入一根无菌注射针，将血液抽取到无菌采血管中。
穿刺采血一般用于小儿或特殊情况，也需使用无菌技术进行操作。
2. 反应管准备：将采集的血液倒入干燥、清洁、无菌的试管中，约占容量的2/3。
3. 凝血触发：加入辅助凝血试剂，一般是凝血酶活化剂（如凝血酶或活化红细胞素C）和钙离子。
这些试剂的作用是激活血液中的凝血因子，引起凝血级联反应。
4. 适当颠倒：轻轻颠倒试管，使血液均匀与试剂混合。
5. 凝血时间观察：注视试管中的血液变化，观察血液开始凝结的时间，即凝血时间，通常以秒数表示。
凝血时间的延长可能与凝血因子的缺乏或功能异常有关。
6. 记录结果：凝血时间的测定结果通常以正常范围进行评估。
根据不同的实验室和标准，正常凝血时间可能有所不同。
需要注意的是，在进行凝血检查前应遵循一定的术前准备和操作规范，以确保结果的准确性。
严格的无菌技术和正确的试剂使用方法对于凝血检查来说非常重要。
同时，在操作过程中需要注意安全，避免对自己或他人的伤害。
冻干人凝血因子Ⅷ使用说明
冻干人凝血因子Ⅷ【用法用量】用法：将装有冻干人凝血因子Ⅷ和灭菌注射用水的制剂瓶加温至25-37℃。
开启铝塑组合盖，露出橡皮塞。
用消毒剂如酒精消毒橡皮塞的暴露部分。
瓶塞上勿残留消毒剂。
取下配制用针一端的塑料套。
将配制用针短的一端插入稀释液瓶的瓶塞中央。
去掉配制用针另一端长针的塑料外套。
倒转稀释液瓶和配制用针并将配制用针的长针一端插入因子Ⅷ制剂瓶的瓶塞中央。
待稀释液完全流入因子Ⅷ制剂瓶内。
取下稀释液瓶，排气后拔去配制用针。
轻轻转动瓶子使产品完全溶解。
不得剧烈摇动以免产生泡沫及引起蛋白变性。
用注射器进行静脉注射用法如下：将过滤针头装在注射器上，通过过滤针将人凝血因子Ⅷ溶液吸入注射器。
偶尔溶液中会有微量细小蛋白颗粒，可被滤去而不影响制剂的效价。
拔去过滤针，代之以输注装置。
配制好的制剂需立即输用，并在一小时内用完。
给药速度宜慢，不要超过10ml/分。
如果病人的用药量超过一瓶，可用同一套输注装置经一次静脉穿刺给药。
配制好的溶液不可再冷藏。
使用完毕后丢弃一切输液用装置。
如静脉滴注，用于输注的输液器必须带有滤网装置以去除溶解液中可能存在的微量细小颗粒。
滴注速度一般以每分钟60滴为宜。
用量：给药剂量必须参照体重、是否存在抑制物，出血的严重程度等因素。
下列公式可用于计算剂量：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×患者体重(kg)×需提升的因子Ⅷ活性水平（正常的%）例：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×50(kg)×30(%)-750IU一般推荐剂量如下：1．轻度至中度出血：单一剂量10-15IU/kg体重，将因子Ⅷ水平提高到正常入水平的20-30%。
2．较严重出血或小手术：需将因子Ⅷ水平提高到正常人水平的30～50%，通常首次剂量15-25IU/kg体重。
如需要，每隔8-12小时给予维持剂量l0-15IU/kg体重。
3．大出血：危急生命的出血如口腔、泌尿系统及中枢神经系统出血或重要器官如颈、喉、腹膜后，骼腰肌附近的出血：首次剂量40IU/kg体重，然后每隔8-12小时给予维持剂量20-25IU/kg体重。
人凝血因子Ⅷ的应用
ห้องสมุดไป่ตู้ 生产工艺
? 采用低温乙醇法或冷冻法制得冷沉淀，经抽 提、吸附、精制。
? 1.分批 2.添加稳定剂 3.除菌过滤及分装 4.半 成品鉴定 5.冻干 6.规格 7.成品鉴定
质量检测
? 用人凝血因子 VIII缺乏血浆为基质血浆，采用一期 法测定供试品人凝血因子 VIII效价。
? 溶解时间： 25-37℃ 30分钟内溶解 ? 水分：含量 ≤3% ? PH：20 ℃ 6.8~7.6 ? 钠离子测定：含量 ≤ 160mmol/L ? 枸椽酸离子测定：含量 ≤ 25mmol/L ? 效价测定：不低于标示量的 80% ? 比活性：每 mg蛋白质所含人凝血因子 8的效价应大
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人凝血因子Ⅷ的作用及制备
凝血因子 Ⅷ简介
凝血因子Ⅷ的性状是乳白 色疏松体，复溶后溶液应 为无色澄清液体，可带轻 微乳光。参与血液凝固过 程的各种蛋白质组分，又 叫抗血友病球蛋白。正常 人血浆中的Ⅷ因子是一种 分子量高达 100万～200万 的糖蛋白，含低分子量及 高分子量两种成分。
生理作用：
? 它的生理作用是，在血管出血时被激活，和 血小板粘连在一起并且补塞血管上的漏口， 这个过程被称为凝血。它们部分由肝生成， 可以为香豆素所抑制。有2332个氨基酸残基， 在人体内的半衰期8～12小时，作为凝血过程 中的辅助因子参与凝血。
于0.25IU
安全试验
? 小白鼠实验：用体重18~20g小白鼠5只，每 只腹腔注射检品1.5IU，半小时内动物不应有 明显的异常反应，继续观察7天，动物均健康， 每只体重增加者判为合格。如不符合上述要 求，再用10只小白鼠复试一次，观察结果
不良反应
1)过敏:可能出现过敏反应,发热,风疹症状; 2)肝:可发生肝病 3)消化系统:呕吐,恶心或胃痛 4)神经系统:可能发生不适或头痛
血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨
血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨来源：本站原创作者：杨海平（北京市红十字血液中心，北京100088）发布时间：2009-12-4新鲜冰冻血浆（FFP）是目前临床常用的一种血液成分，在治疗和预防出血性疾病及大剂量输血所致的凝血功能障碍方面起非常重要的作用。
在FFP中，Ⅷ因子是非常不稳定又重要的一种凝血因子［1］。
在目前采供血机构对血液质控检测中，常用Ⅷ因子效价（IU/ml）作为FFP的质量控制指标［2］。
随着检测技术的自动化，全自动血凝仪也开始进入采供血机构。
全自动血凝仪一般的输出结果是FFP中Ⅷ因子的百分活性，此活性单位适用于临床诊断，正常人血浆中Ⅷ因子参考值为（103±25 7）%［3］。
采供血机构对FFP中Ⅷ因子效价的测量一般是通过测定已知国际单位的国家标准品来进行换算。
笔者探讨了一个新的换算方法，可用于FFP质量控制指标中Ⅷ因子百分活性与国际单位的换算。
1 材料与方法1．1仪器及试剂ACL7000全自动血凝仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套进口试剂，包括：Ⅷ因子缺乏血浆，APTT试剂（含硅土），因子稀释液，校准血浆，正常质控物，CaCl2溶液。
1．2样品稀释方案用含量为7 3 IU/ml的Ⅷ因子浓制剂国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010607）进行稀释（表1）。
表1 稀释方案（μl）1．3测定方法严格按照仪器操作说明和试剂要求进行。
仪器配套正常质控物的靶值范围82%—122%，测定值：94%，以此作室内质控，监测仪器的工作状态。
用全自动血凝仪分别测定稀释后国家标准品Ⅷ因子的凝固时间和百分活性，对每种样品测2次，取平均值。
2 结果2．1测定结果不同稀释比例下国家标准品Ⅷ因子的凝固时间（用TC表示）和百分活性（用V表示）的测定值见表2。
从表2可以看出，不同的稀释比例，获得的N/V值不完全相同，这说明N/V值与稀释比例之间不是严格线性关系。
另外采用Ⅷ因子国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010606，含量为3 8 IU/ml）试验，都得到相同的结论。
冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程
冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。
主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。
本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。
1 制造1.1制造要求1.1.1 对血浆的要求1.1.1.1所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求，血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。
在采集时应减少皮肤损伤，保持血流通畅，并与抗凝剂充分混合，用塑料袋采集。
新鲜分离液体血浆或新鲜冰冻血浆及冻结冷沉淀，均可用于生产。
1.1.1.2分离后的血浆应保持无菌，并应及时冰冻保存。
自采血到冻结一般在8小时内完成。
液体血浆应在4±2℃贮放，贮放时间应不超过小时，最长不得超过12小时。
冰冻血浆（-30℃以下）保存期不超过6个月。
1.1.2 对制造工作室、设备及原材料的要求，与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。
1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法或冻融法制得冷沉淀，经抽提、吸附、精制，亦可采用经卫生部批准的其他工艺制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。
1.2.2 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤器和不同机柜冻干的制品分为亚批。
1.2.3 稳定剂及防腐剂制品内允许加稳定剂，制品应不含防腐剂。
1.2.4除菌过滤及分装本品应用微孔薄膜过滤，可直接分装无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及规格确定。
1.2.5 半成品检定每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验。
1.2.6 冻干除菌过滤分装的制品经外观检查后立即冻结，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。
2。
5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。
1.3 规格每瓶含人凝血因子Ⅷ的效价可有50、100、200、300、400IU五种，制品的效价应标示在瓶签及包装上。
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法1 材料1.1试剂1.1.10.05mol/L CaCl2溶液称7.35gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.20.025mol/L CaCl2溶液称3.675gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.3 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17gNaCl，溶于约100ml蒸馏水中，加37.2ml0.1mol/l HCl，加蒸馏水至200ml，pH为7.3～7.4。
1.1.4 枸橼酸盐-氯化钠溶液1份3.8%枸橼酸三钠溶液加5份0.85%NaCl溶液混匀。
1.1.5Al(OH)3胶a称（NH4）2SO45.5g，溶于150ml63℃蒸馏水中。
B称氨明矾19.175g，溶于250ml58℃的蒸馏水中。
C最取12.5ml氨水（比重0.88），加12.5ml蒸馏水。
三种溶液配毕后，立即将c液迅速倒入a液中搅匀，然后在搅拌下将此混合液迅速倒入b液，用力搅拌10分钟（保持温度不低于58℃），离心（2500r/min，15分钟），弃上清，沉淀洗涤5次。
第一次：用75ml蒸馏水加0.055ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第二次：用75ml蒸馏水加0.11ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第三、四、五次分别用75ml蒸馏水洗。
将沉淀物悬浮于总体积为175ml蒸馏水中，混匀，分装，4℃保存。
1.1.6 正常人血清分别收集20份以上正常人血于干燥灭菌的玻璃瓶中，待血凝固后，放于37℃保温5～6小时，置4℃冰箱过液，分离血清，混匀，定量分装（0.5ml/安瓿），冷冻干燥，-20℃保存。
缓冲液作1∶10稀释，4℃冰箱过夜（使血清活化），试验当日再用咪唑缓冲液作最适浓度稀释（一般为1∶20），置冰浴备用。
1.1.7 牛Ⅴ因子收集公牛血于干燥灭菌的玻璃容器中，室温放置4小时，离心（2500r/min，30分钟），分离血清，取血清加10%（g/ml）BaSO4在室温下搅拌吸附40分钟，离心（2500r/min，40分钟），弃沉淀，定量（1ml/瓶）分装，冷冻干燥，-20℃保存。
人凝血因子Ⅷ浓制剂国际标准品第六次协作标定
刘大英 （ 中国药品生物 制品捡 定所 ， 京 １０ ５ ） 北 ００ ０
要 】 目的 建立 第六次人凝血因子Ⅷ浓制剂 国际标 准品， 用于全世界 各 国建立本 国人凝血因子 Ⅶ浓制
共采 用 ３种方法 ， 即一期 法、 二期法 和基质显 色沽。结果 标准品批号 为 ９／１， ７６６ 效价 ８ ．
法标定 中有 ２ 个 实验 室使 用 Ｃ ｒ ｏｅｉ ２ ｈｏ ｇｎ ｍ ｘ试剂 盒 ； ２ 个 实验 室使用 Ｄｄ 试 剂盒 ； 实验 室使用 Ｉｍ ｎ ａｅ ２个 ｍ ｕ０ 试剂 盒。 以上 ３ 标定 方法所使 用 的凝集仪 也都是 种 产地不 同 、 型号不 同， 体现 了多样化 。
据， ４个样本 Ｓ Ｐ Ｘ、 、 、 Ｙ测 定 顺 序在 每 一 次测 定 中均
本次协作标定 人凝 血 因子 Ⅷ浓制 剂 国际标准 品 有两 个候选待标 品 （ ｘ和 Ｙ表示 ）取 代第 五 次人 用 ， 源 的凝血因子 Ｙ浓制 剂 国际标 准 品。由于 重组人凝 噩 血 因子 Ⅷ浓制 剂在 全 世 界广 泛 使 用 ， 以本 次 人 凝 所 血 因子 Ⅷ浓 制剂 国际标 准 品采 用重组 人凝 血 园子 Ⅷ 浓 制剂为原 料 ， 以第 五次 人 源 的凝 血 因子 Ⅷ浓 制 剂 国际标准 品为标准 （ ） ｓ 。同 时 还 协作 标 定人 凝 血 因 子 Ⅷ 血浆 国际标准 品 ， 候选 待 标品用 Ｐ表 示 。
Ｙ、 ；、 、 、 第 ２种为 同 时测 定 ５ 样本 ｓＰ ｘ、 Ｐ ＳＸ ＰＹ； 个 、、 Ｙ、； ３ 为 同时测定 ６个样 本 Ｓ Ｐ Ｘ、 、 、 ； Ｓ第 种 、 、 Ｙ Ｐ Ｓ第 ４种为 同时测定 ８ 个样本 ｓＰ Ｘ、 、 ｘ、、。 、 、 Ｙ Ｙ、 ＰＳ
结 果
人凝血因子检验方法(一)
人凝血因子检验方法(一)人凝血因子检验1. 什么是人凝血因子检验人凝血因子检验是一种通过检测人体凝血因子的活性和浓度水平来评估凝血功能和判断凝血疾病的一种方法。
根据不同的目的和需求，可以选择多种不同的检测方法进行凝血因子的检验。
2. 检测方法以下是几种常见的人体凝血因子检验方法：2.1 凝血酶原时间 (PT)•PT是一种常见的凝血因子检测方法，主要用于评估凝血因子Ⅶ、Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ和纤维蛋白原活性。
2.2 部分凝血活酶时间 (APTT)•APTT是用来测量体内凝血因子的固有和共同通路的方法，常用于评估凝血因子Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅱ。
2.3 国际标准化比值 (INR)•INR是一种标准化的凝血时间结果，用于监测和控制在接受口服抗凝药物治疗的患者的凝血功能。
2.4 凝血酶原活性 (FII)•通过比较未知样品和正常血浆的凝血时间，来测量凝血因子Ⅱ的活性。
2.5 凝血因子浓度检测•通过测量各凝血因子的浓度来判断凝血功能是否正常。
3. 使用注意事项在进行人凝血因子检验时，需要注意以下事项：•由于不同的凝血因子具有不同的正常活性和浓度范围，因此在进行检测时需要将结果与参考范围进行比较来做出评估。
•检测结果可能受到多种因素的影响，如药物使用、疾病状态等，因此需要综合考虑来做出准确的判断。
•在进行凝血因子检验前，需要告知医生关于个人的药物使用和疾病史等信息，以便医生能够更好地解读检测结果。
结论人凝血因子检验是评估凝血功能和判断凝血疾病的重要方法。
通过使用不同的检测方法，可以准确地评估人体内各凝血因子的活性和浓度水平，从而辅助医生做出准确的诊断和治疗方案。
但需要注意，检测结果需要综合考虑其他因素，并与参考范围进行比较，才能得出准确的结论。
4. 其他凝血因子检测方法除了上述提到的常见凝血因子检测方法之外，还有一些其他的方法可以用于评估凝血功能：4.1 纤维蛋白原测定（FIB）•纤维蛋白原测定是一种常用的方法，通过测量纤维蛋白原的浓度来评估凝血功能。
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人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程
1目的
严格规范操作者的检测方法，使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验操作，特制定本操作规程。
2适用范围
本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子Ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子Ⅷ的供试品效价检测。
3制定依据
《中华人民共和国药典》（2015年版）三部，附录3521人凝血因子Ⅷ效价测定法（一期法）。
4职责
4.1检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。
4.2复核人对检验中的计算进行复核。
4.3确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。
5仪器及器具
5.1仪器
5.1.1凝血仪
5.1.2电子天平
5.1.3电子分析天平
5.1.4漩涡混匀器
5.2器具
5.2.1微量移液器
5.2.2吸头
5.2.3移液管
5.2.4洗耳球
5.2.5试管
5.2.6试管架
5.2.7砂轮
5.2.8凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）
6试剂及试液
6.1试剂
6.1.1人凝血因子VIII国家标准品
6.1.2人凝血因子VIII比较品
6.2试液
6.2.1人凝血因子Ⅷ缺乏血浆
6.2.2稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）
6.2.3激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂
6.2.4氯化钙溶液
7操作步骤
7.1供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备
7.1.1供试品及比较品溶液的制备
7.1.1.1供试品及比较品的预稀释
用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml
（冻干制品先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g，
加水溶解约为20倍。
具体稀释过程如下：
7.1.1.2供试品预稀释液的工作稀释（供试品溶液）
将上述含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液用
稀释液稀释6倍、8倍、10倍。
具体稀释过程如下：
先取500μl已预稀释成含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供
试品预稀释液，加500μl稀释液，稀释成含人凝血因子
Ⅷ约0.5IU/ml，混匀，再分别从中取200μl移到3支试
管中，分别加400μl，600μl和800μl稀释液。
供试品
稀释可根据本身效价高低及仪器环境等变化作适当适
当调整。
如下表稀释：
7.1.2标准品溶液的制备
7.1.2.1预稀释：将标准品按标示量加入水溶解，取100μl复溶
品，加人凝血因子Ⅷ缺乏血浆适量预稀释成约1IU/ml。
7.1.2.2工作稀释：将上述1IU/ml的标准品用稀释液稀释2倍、4
倍、8倍、16倍、32倍。
7.2检验操作
7.2.1凝血仪准备：
7.2.1.1先打开凝血仪电源，在反应盘上放入比色盘，预热使反
应仓温度达到37℃。
7.2.1.2分别将激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙
溶液加入凝血仪的相应区域。
7.2.2上机测试凝固时间
7.2.2.1将供试品杯加到供试品盘上，并按要求在相应的供试品
杯中加入
供试液（标准品、比较品和供试品稀释液）和相应试剂。
具体加入位置如下：
Dil杯加入稀释液；
18号杯加入人凝血因子Ⅷ缺乏血浆；
1~14号杯加入待测液；
7.2.2.2按仪器操作规程启动人凝血因子Ⅷ效价测定程序；
7.2.2.3测定结束后，记录返回的凝固时间
7.2.3测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均
值10%，否
则重测。
7.3结果处理
7.3.1标准曲线制作：
将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml），
分别取对数值；再将其各相应浓度所测得的凝固时间（秒，
s），也分别取对数值。
然后按统计学方法作直线回归方程（用
excel计算）：
logy = blogx+a
其中：x为人凝血因子Ⅷ效价，IU/ml；
y为测得相应凝固时间，秒（s）。
7.3.2供试品及比较品效价计算：
将3个不同浓度的供试品所得到凝固时间（秒）分别代入方
程式计算x值；然后将所得x值分别乘以相应的供试品稀释
倍数，即得到3个相应的效价（IU/ml）；计算这3个效价值
的平均值作为供试品中人凝血因子Ⅷ效价。
7.4注意事项
7.4.1标准曲线直线回归相关系数应不低于0.98。
7.4.2每个稀释度的标准品或供试品平行测定2管，2管之差不得超
过均值
10%，否则重测。
7.4.3直接接触标准品、供试品和血浆的器皿应为塑料制品或硅化
玻璃制品。
7.4.4应急预案
7.4.4.1仪器与电脑无法连接（仪器无法将实验数据传到电脑上
不易于对实验的考察及结果分析，试验过程中数据未能
在电脑上读取）。
检查线接口，重新连接仪器电脑。
7.4.4.2如遇到供试品还未上机检验停电，则待来电后，检验照
常进行。
如遇上机过程中断电在不影响检验结果的情况
下继续检验直到结束，否则重新检验。
7.4.4.3电源无法关闭，可能是电路短路，会导致机器死机。
7.4.4.4长期频繁的开关会导致仪器电源的松弛，仪器不容易关
闭，应减少开机次数，按仪器使用说明书定期维护。
7.4.4.5针头堵塞，操作仪器点击清洗，将针头冲干净。
8判定基准
检验结果的判定依据相应品种的质量标准进行
9生效日期
本规定自2015年12月01日起正式生效。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。