直接凝集试验(肥达反应)
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直接凝集试验
（direct agglutination test ） 肥达反应 （Widal test） test）
微量血凝反应板法
试验原理
将已知伤寒沙门菌的菌体“O”抗原和 鞭毛“H”抗原，以及引起副伤寒的甲、乙 型副伤寒沙门菌的“H”抗原作为诊断菌液 与受检人待测的已稀释的血清在微量血凝 反应板内反应，根据各反应孔内的凝集现 象出现与否，来测定受检者血清中有无相 应抗体以及抗体的效价，判断待测血清中 相应抗体水平的高低。
操作步骤
1、稀释血清(1:10稀释)：取EP管1支，做好标记,加入N.S 450ul，加血清50ul ,混匀备用; 2、 稀释菌液(1:4稀释):取EP管4支，分别标记好H,O,甲,乙, 加入N.S 450ul，加菌液150ul,混匀备用; 3、编号：拿一块反应板标记好一份待测标本号和操作者姓 名，于反应板的第 一排各孔标以H,O,甲,乙。 4、加样：每份标本共4排4孔。各列先分别加入100ul(2 滴)N.S从第1孔至第4孔。再加入已稀释好的待测血清 100ul(2滴)至第1孔，混匀后吸出100ul(2滴)至第2孔， 以此类推稀释至第4孔弃去100ul(2滴) 。 5、加菌液：于各排各孔中分别加入对应的1:4稀释菌液 100ul(2滴) ，此时各列每孔的血清稀释度应该依次为 1:40,1:80,1:160,1:320。 6、 轻轻混匀1min，加盖(贴上封口纸)，37℃水浴，过夜， 次日观察结果。
试剂与器材
1、标本： 待测人血清。 2、试剂： 生理盐水（NS），伤寒杆菌“H” 抗原和“O”抗原，副伤寒甲“H”抗原、副 伤寒乙“H”抗原的诊断菌液(40亿个菌/ml), 分别用N.S稀释成10亿个菌/ml 的悬液(1:4 150ul+450ulNS)。 3、器材： 恒温水浴箱、微量血凝反应板、 试管架、试管、吸管等。
结果判断
观察反应板每孔底部有无凝集物，凝集 物颗粒的大小、形状。 1、阴性结果：血清中无抗体存在，未能与菌 体产生凝集反应。因此菌体自然下沉集于 孔底成点状。 2、阳性结果：血清中有相应抗体与菌体抗原 产生凝集反应，可见凝集物均匀分别散于 孔内。
Biblioteka Baidu
临床意义
1、正常：H＜1:160、O＜1:80，甲＜ 1:80、乙＜1:80 2、伤寒：H＞1:160、O＞1:80 3、副伤寒：H＞1:160、O＞1:80、甲＞ 1:80、乙＞1:80 4、恢复期H凝集效价成倍增高
（direct agglutination test ） 肥达反应 （Widal test） test）
微量血凝反应板法
试验原理
将已知伤寒沙门菌的菌体“O”抗原和 鞭毛“H”抗原，以及引起副伤寒的甲、乙 型副伤寒沙门菌的“H”抗原作为诊断菌液 与受检人待测的已稀释的血清在微量血凝 反应板内反应，根据各反应孔内的凝集现 象出现与否，来测定受检者血清中有无相 应抗体以及抗体的效价，判断待测血清中 相应抗体水平的高低。
操作步骤
1、稀释血清(1:10稀释)：取EP管1支，做好标记,加入N.S 450ul，加血清50ul ,混匀备用; 2、 稀释菌液(1:4稀释):取EP管4支，分别标记好H,O,甲,乙, 加入N.S 450ul，加菌液150ul,混匀备用; 3、编号：拿一块反应板标记好一份待测标本号和操作者姓 名，于反应板的第 一排各孔标以H,O,甲,乙。 4、加样：每份标本共4排4孔。各列先分别加入100ul(2 滴)N.S从第1孔至第4孔。再加入已稀释好的待测血清 100ul(2滴)至第1孔，混匀后吸出100ul(2滴)至第2孔， 以此类推稀释至第4孔弃去100ul(2滴) 。 5、加菌液：于各排各孔中分别加入对应的1:4稀释菌液 100ul(2滴) ，此时各列每孔的血清稀释度应该依次为 1:40,1:80,1:160,1:320。 6、 轻轻混匀1min，加盖(贴上封口纸)，37℃水浴，过夜， 次日观察结果。
试剂与器材
1、标本： 待测人血清。 2、试剂： 生理盐水（NS），伤寒杆菌“H” 抗原和“O”抗原，副伤寒甲“H”抗原、副 伤寒乙“H”抗原的诊断菌液(40亿个菌/ml), 分别用N.S稀释成10亿个菌/ml 的悬液(1:4 150ul+450ulNS)。 3、器材： 恒温水浴箱、微量血凝反应板、 试管架、试管、吸管等。
结果判断
观察反应板每孔底部有无凝集物，凝集 物颗粒的大小、形状。 1、阴性结果：血清中无抗体存在，未能与菌 体产生凝集反应。因此菌体自然下沉集于 孔底成点状。 2、阳性结果：血清中有相应抗体与菌体抗原 产生凝集反应，可见凝集物均匀分别散于 孔内。
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临床意义
1、正常：H＜1:160、O＜1:80，甲＜ 1:80、乙＜1:80 2、伤寒：H＞1:160、O＞1:80 3、副伤寒：H＞1:160、O＞1:80、甲＞ 1:80、乙＞1:80 4、恢复期H凝集效价成倍增高