肝素的分离纯化工艺
生物酵素发酵的酶解法提取肝素钠粗品的无盐生产技术
生物酵素发酵的酶解法提取肝素钠粗品的无盐生产技术生物酵素发酵的酶解法提取肝素钠粗品的无盐生产技术是一种高效、环保的肝素钠提取方法。
本文将从理论层面详细阐述该技术的原理、工艺流程及优化措施，以期为肝素钠的生产提供有益参考。
一、1.1 酶解法提取肝素钠的基本原理酶解法提取肝素钠是利用生物酶对肝素钠进行水解反应，从而实现肝素钠的提取。
肝素钠是一种具有抗凝血作用的天然高分子物质，主要存在于哺乳动物的血液中。
酶解法提取肝素钠的过程主要包括以下几个步骤：1. 酶解：选用适宜的生物酶，如β-1,4-内酰胺酶、β-2,6-糖苷酶等，将肝素钠分解成目标产物和副产物。
2. 分离纯化：通过透析、离子交换层析等手段，将目标产物和副产物分离纯化。
3. 干燥：将分离纯化后的产物进行干燥处理，得到肝素钠粗品。
二、1.2 酶解法提取肝素钠的工艺流程酶解法提取肝素钠的工艺流程主要包括预处理、酶解、分离纯化和干燥四个环节。
具体如下：1. 预处理：首先对原料血浆进行预处理，包括血液净化、蛋白质沉淀、酸碱调节等，以去除血浆中的杂质和干扰因素。
2. 酶解：将预处理后的血浆与适宜的生物酶混合，在一定温度和pH条件下进行酶解反应。
酶解过程中，应注意控制反应时间、温度和pH值，以保证目标产物的高效生成。
3. 分离纯化：采用透析、离子交换层析等手段，将酶解后的目标产物和副产物分离纯化。
透析可以通过半透膜将大分子物质和小分子物质分离；离子交换层析则是利用带有特定功能基团的树脂，将目标产物和副产物吸附在树脂上，通过改变树脂的性质进行洗脱。
4. 干燥：将分离纯化后的产物进行干燥处理，得到肝素钠粗品。
干燥过程中，应注意控制温度和时间，以避免产品品质的降低。
三、2.1 酶解条件对肝素钠粗品质量的影响酶解条件是影响肝素钠粗品质量的关键因素之一。
合理的酶解条件可以提高目标产物的生成率，降低副产物的质量，从而提高肝素钠粗品的质量。
具体来说，影响酶解条件的因素主要包括：1. 温度：温度过高会导致酶活性降低，影响目标产物的生成；温度过低则会影响酶的稳定性，降低酶的活性。
制药工艺学作业——肝素资料
-肝素（化学化工学院制药102班：王俊超学号：20100934204）1. 摘要肝素是一类结构异常复杂的糖胺聚糖混合物，因具有多种生物学功能，其提取纯化方法一直是各国学者研究的热点。
2. 关键词肝素，提取，分离纯化肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，它与蛋白质结合在一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显效药物。
3. 肝素的结构：生物体内的肝素总是与蛋白质结合成复合体，此复合体无抗凝血活性或其他生物活性，肝素的活性才能表现出来所以肝素的制备一般包括肝素—蛋白复合物的提取，肝素—蛋白复合物的分解和肝素的分级分离三步。
我国是世界上肝素的主要出口国之一,但长期以来以生产粗品肝素为主，产品普遍存在收率差成本高等问题。
因此，研究肝素的高效提取纯化工艺技术非常重要。
4. 肝素的提取方法4.1 盐析提取法盐析法是国内常用的肝素提取方法，其基本原理是利用蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度降低而沉淀的现象。
操作方法是先用碱性溶液将肝素从肝素—蛋白复合物中分离，然后利用盐析法除去蛋白质，经吸附、洗脱、乙醇沉淀、丙酮干燥等传统工序后得肝素粗品。
该方法的优点是操作简单，成本低廉，缺点是蛋白质不能完全除去。
4.2 酶解提取法传统的酶法提取是利用蛋白酶将肝素中的杂蛋白降解为小分子肽，从而使肝素分子脱离，最后通过调节pH，热变性和盐析除去酶蛋白和被降解的蛋白质制得肝素目前已使用的酶有胰蛋白酶、胰酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶等。
应用此法可以简化浓缩工艺和后续的脱蛋白工艺，且可提高肝素粗品的得率和蛋白的脱除率。
李红心[1]将酶解结合氧化法精制肝素钠与二次氧化法进行了对比，结果表明，酶解结合氧化法所得产品较白，且单位效价和效价回收率均高于二次氧化法，效价提高6U/mg，效价回收率提高5% 宋大巍等[2]对胰蛋白酶水解提取肝素的工艺参数进行了研究，在最优工艺参数：酶水解温度55 ，酶水解时间2h，料液比1：1.5条件下，肝素得率理论值为211.34mg kg-1，验证实验得率为206.83mg kg-1。
肝素的提取与鉴定设计实验报告
肝素的提取与鉴定设计实验报告一、实验目的本实验旨在了解肝素的提取方法和鉴定方法，掌握肝素的提取技术和纯化方法，并能够利用凝胶过滤层析法进行肝素的鉴定。
二、实验原理1. 肝素的提取：肝素是一种聚糖类物质，可从动物组织中提取。
常用的提取方法有碱水解法、酸水解法和酶解法。
本实验采用酶解法进行肝素的提取。
将动物组织经过清洗、切碎后加入适量的蛋白酶进行酶解，然后经过离心分离得到上清液，再经过乙醇沉淀得到粗品。
2. 肝素的纯化：通过凝胶层析法对粗品进行纯化。
将粗品溶于缓冲液中，然后加入凝胶柱中，利用凝胶柱中不同孔径大小的孔隙分离出不同分子量大小的肝素，并收集相应分子量大小范围内的肝素。
3. 肝素含量测定：利用显色反应测定肝素含量。
将样品与显色剂混合，经过显色反应后测定吸光度，根据标准曲线计算出肝素含量。
三、实验步骤1. 肝素的提取（1）清洗组织：将动物组织用生理盐水清洗干净。
（2）切碎组织：将清洗干净的组织切成小块。
（3）加入蛋白酶：将切碎后的组织加入适量的蛋白酶中进行酶解。
（4）离心分离：将酶解后的混合液进行离心分离，得到上清液。
（5）乙醇沉淀：将上清液加入等体积的乙醇中进行沉淀，得到粗品。
2. 肝素的纯化（1）制备缓冲液：配制0.1mol/L pH7.4磷缓冲液。
（2）柱层析：将粗品溶于缓冲液中，然后加入凝胶柱中进行层析。
收集不同分子量大小范围内的肝素。
3. 肝素含量测定（1）制备标准曲线：取一系列不同浓度的肝素标准品，加入显色剂后测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）测定样品：将纯化后的肝素样品加入显色剂中，经过显色反应后测定吸光度，根据标准曲线计算出肝素含量。
四、实验结果经过酶解和乙醇沉淀得到的粗品经过凝胶层析法进行纯化，得到了不同分子量大小范围内的肝素。
利用显色反应测定肝素含量，计算出不同分子量范围内的肝素含量。
五、实验结论本实验通过酶解法提取动物组织中的肝素，并通过凝胶层析法进行纯化。
最后利用显色反应测定肝素含量。
填料应用指南(一)小分子肝素的纯化pdf
达替肝素 帕肝素 依诺肝素 那曲肝素
二、小分子肝素的纯化流程
大分子肝素
层析介质应用
乙醇沉淀 图 1 低分子肝素的纯化流程图
三、采用 CaptoDEAE 纯化达替肝素的工艺目标 MW<3000 含量: <13% MW>8000含量: 15-25% 重均分子量: 5600-6400 层析纯化工艺产品收率: >50%
五、采用 Capto DEAE 纯化达替肝素的工艺
1.将达替肝素原料粉用平衡缓冲液（20mMTris， pH7.5）按照 10mg/ml 的浓度溶解。
2.将 CaptoDEAE 装填的 10cm 高度的层析柱用平衡 缓冲液以 300cm/hr 的浓度平衡 8CV
3.将样品以 200cm/hr 的流速按照 15mg 肝素/ml 填 料的量上样
产品信息
产品
Capto DEAE Capto Q HiTrap Capto DEAE HiTrap Capto DEAE HiTrap Capto Q HiTrap Capto Q HiScreen Capto DEAE
数量
货号
2 5 ml 17-5443-10 2 5 ml 17-5316-10 5 × 1 ml 2 8-9165-37 5 × 5 ml 2 8-9165-40 5 × 1 ml 11-0013-02 5 × 5 ml 11-0013-03 1X 4.7 ml 28-9269-82
GE Healthcare Life sciences
达替肝素的纯化
王济源 GE 生命科学部 Fastrak
简介
中国是世界最大肝素粗品出口国，2010年占据一球 市场份额约60%，出口总量约114吨。目前临床应 用的小分子肝素产品生产工艺掌握在国外制药企业 中，而从肝素粗品制备得到临床用药，产品升值10 倍以上。肝素粗品经NaNO2降解以后，小分子肝 素分子量分布在0-13KD之间.目前欧盟和美国药典 对于小分子肝素的分子量分布和平均分子量有严格 的限制。国内目前有采用膜分离和分子筛的方法来 控制小分子肝素的分子量分布，但收率一般只有20% 以下，具生产能力有限。开发高生产能力，高收率 的小分子肝素生产工艺，可以有效提高国内 肝素企业的出口竞争力。 GE公司在纯化方面拥有丰富的经验，采用新一代的 离子交换填料Capto DEAE成功开发出纯化达替肝素 的新方法，分子量分布范围符合欧洲药典的要求， 并且回收率在60%以上，与传统方法相比具有操作 方便快速易于放大的特点，具有极强的使用价值。 其他的小分子肝素也可参考该工艺进行纯化。
肝素钠副产物中分离提纯硫酸皮肤素和低分子硫酸乙酰肝素的方法
肝素钠副产物中分离提纯硫酸皮肤素和低分子硫酸乙酰肝素的方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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肝素的提取及鉴定
肝素的提取及鉴定
肝素的提取也称为肝素的分离纯化，一般采用生物制药技术对肝素进行提取和分离。
具体操作流程如下：
1. 将猪或牛的肺或肉类均匀切成小块，加入盐水搅拌均匀。
2. 用醋酸钠缓冲液调节pH值，使pH值保持在5.0—5.5之间。
3. 加入蛋白酶及胰酶发酵消化，分离出肝素。
4. 用甲醇或乙醇进行沉淀，收集沉淀物并冷冻干燥。
5. 使用薄层色谱或高效液相色谱对肝素进行分离纯化，得到纯的肝素。
肝素的鉴定：
1. 纯度检测：使用高效液相色谱检测肝素的纯度。
2. 分子量检测：使用凝胶过滤色谱或梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肝素的分子量。
3. 活性检测：使用凝血酶原时间等生化实验检测肝素的活性。
4. 结构分析：通过核磁共振、质谱等手段对肝素的结构进行分析。
总之，在提取肝素时要注意操作规范，确保肝素质量达到要求，从而实现对肝素的鉴定。
一种肝素的提取、分离、纯化方法[发明专利]
![一种肝素的提取、分离、纯化方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7d7bc03b773231126edb6f1aff00bed5b9f373b9.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101597344A [43]公开日2009年12月9日[21]申请号200910071972.9[22]申请日2009.05.07[21]申请号200910071972.9[71]申请人张丽萍地址163311黑龙江省大庆市萨尔图区新阳路2号农大小区5号1门402室[72]发明人张丽萍 宋大巍 曹荣安 杨楠 李良玉李雷刚 [74]专利代理机构大庆禹奥专利事务所代理人朱士文 杨晓梅[51]Int.CI.C08B 37/10 (2006.01)权利要求书 3 页 说明书 14 页 附图 14 页[54]发明名称一种肝素的提取、分离、纯化方法[57]摘要本发明涉及一种肝素的提取、分离、纯化方法。
该方法包括蛋白酶水解法提取肝素、超声波辅助盐析法提取肝素、离子交换树脂吸附分离肝素及肝素的纯化。
该方法所得到的肝素具有以下特点：(1)提取率可达230.81mg/kg，比传统方法提高40％；(2)肝素的效价提高为150U/mg。
200910071972.9权 利 要 求 书第1/3页 1、一种肝素的提取、分离、纯化方法，其特征在于：按如下步骤进行：蛋白酶水解法提取肝素、超声波辅助盐析法、树脂吸附分离肝素及肝素的纯化。
2、根据权利要求1所述的肝素的提取、分离、纯化方法，其特征在于：蛋白酶水解法、超声波辅助盐析法提取肝素及树脂吸附分离肝素包括下列步骤：(1)酶解、盐解及过滤：将匀浆后的猪小肠粘膜移入提取锅，需要加1∶15倍重量的水，用NaOH调pH至8.5，55℃加热半小时，加入猪小肠粘膜质量2％的胰蛋白酶反应2小时，加入混合液质量5％的NaCL在60℃反应2小时，之后将上述混合液加入到超声波药品处理机内，超声温度为40℃，超声时间为40min，超声功率为300W，超声处理之后用300目的滤布过滤；(2)吸附：将上述滤液移入吸附罐中，在液体温度为40℃的条件下，按原来猪小肠粘膜质量的8％加入树脂，搅拌吸附3小时；(3)清洗：把(2)中的树脂倒入不锈钢桶中，用1.2mol/L的NaCL浸泡洗涤30min；(4)洗脱：把(3)中的树脂移入桶中用5mol/L的NaCL浸泡3小时，要不时轻轻搅动，促使肝素解析；(5)酸处理：将洗脱液用H C L调p H值至3.5处理30m i n；(6)碱处理：将(5)得到的洗脱液用NaOH调pH至10处理3h；(7)乙醇沉淀：将(6)中所得的洗脱液用1.5倍体积的95％酒精处理12h，搅拌静置，虹吸出上层清液；(8)干燥：把下层沉淀取出滤干，在60℃下真空干燥，得到肝素粗品。
(整理)一种浓缩纯化肝素的生产工艺.
权利要求书1.一种浓缩纯化肝素的生产工艺，其特点在于，采用扩张柱床离子交换树脂法可将猪、牛、羊等哺乳动物的小肠粘膜、肝、肺脏等脏器的组织匀浆的提取液不经过预处理直接采用色谱技术分离、浓缩、纯化肝素的生产技术，还可用于粗品肝素的精制，改变了使用传统的离子交换固定柱床吸附技术原料液中不能含有不溶性颗粒的限制。
其原理在于吸附介质颗粒在向上流动的液体的作用下膨胀起来，吸附介质颗粒在床体中均匀的悬浮，并按照不同的颗粒尺寸和密度形成梯度而有续的排列，形成一个均衡、稳定的吸附环境，液体中的目标肝素被吸附于介质上，而细胞、细胞碎片、杂蛋白、核酸及杂多糖和其他的组织碎片将通过柱子而流出去，洗脱目标肝素时从相反方向将吸附介质压紧，再用洗脱缓冲液将目标肝素洗下来。
扩张柱床色谱技术兼有流化床和填充床的优点，不需预先除去料液中的颗粒而可以直接从料液中吸附目标产物。
从而起到有效的吸附分离作用。
扩张柱床离子交换色谱技术不但可用于从哺乳动物脏器匀浆液直接提取肝素，还可用于粗品肝素的精制。
采用扩张柱床离子交换色谱技术从哺乳动物脏器匀浆液直接提取肝素和用粗品肝素精制肝素，大大降低了肝素纯化工艺的复杂性，提高了产率，降低了生产成本。
改变以往的国内树脂法精制肝素的生产中，基本上都是采用分批吸附的方法。
分批吸附法理论塔板数低，柱效损失大，纯化效率低，对目的分子吸附不够充分，因此损失大。
采用扩张柱床离子交换色谱技术提取肝素，可将肝素与杂质蛋白、核酸及其余硫酸多糖分离，浓缩，纯化一次完成。
减少工序，缩短时间，降低成本，提高效率和质量。
采用扩张柱床离子交换色谱技术直接从匀浆液中提取肝素，肝素单位效价达到120U/mg以上，用粗品精制肝素，效价达到160U/mg以上，产品中紫外区杂质(260nm，280nm)均满足药典要求；技术内容：(1)哺乳动物小肠粘膜的匀浆液经碱盐水解、胰蛋白酶酶解(猪牛羊等哺乳动物的肝脏肺脏的组织匀浆液加入0.1-0.5％木瓜蛋白酶)、高温变性和过滤处理，经过在一定离子浓度和PH 条件下进行扩张柱床吸附层析法吸附、浓缩、纯化肝素，乙醇沉淀，丙酮脱水，低温干燥。
种浓缩纯化肝素的生产工艺参考模板
权利要求书1.一种浓缩纯化肝素的生产工艺，其特点在于，采用扩张柱床离子交换树脂法可将猪、牛、羊等哺乳动物的小肠粘膜、肝、肺脏等脏器的组织匀浆的提取液不经过预处理直接采用色谱技术分离、浓缩、纯化肝素的生产技术，还可用于粗品肝素的精制，改变了使用传统的离子交换固定柱床吸附技术原料液中不能含有不溶性颗粒的限制。
其原理在于吸附介质颗粒在向上流动的液体的作用下膨胀起来，吸附介质颗粒在床体中均匀的悬浮，并按照不同的颗粒尺寸和密度形成梯度而有续的排列，形成一个均衡、稳定的吸附环境，液体中的目标肝素被吸附于介质上，而细胞、细胞碎片、杂蛋白、核酸及杂多糖和其他的组织碎片将通过柱子而流出去，洗脱目标肝素时从相反方向将吸附介质压紧，再用洗脱缓冲液将目标肝素洗下来。
扩张柱床色谱技术兼有流化床和填充床的优点，不需预先除去料液中的颗粒而可以直接从料液中吸附目标产物。
从而起到有效的吸附分离作用。
扩张柱床离子交换色谱技术不但可用于从哺乳动物脏器匀浆液直接提取肝素，还可用于粗品肝素的精制。
采用扩张柱床离子交换色谱技术从哺乳动物脏器匀浆液直接提取肝素和用粗品肝素精制肝素，大大降低了肝素纯化工艺的复杂性，提高了产率，降低了生产成本。
改变以往的国内树脂法精制肝素的生产中，基本上都是采用分批吸附的方法。
分批吸附法理论塔板数低，柱效损失大，纯化效率低，对目的分子吸附不够充分，因此损失大。
采用扩张柱床离子交换色谱技术提取肝素，可将肝素与杂质蛋白、核酸及其余硫酸多糖分离，浓缩，纯化一次完成。
减少工序，缩短时间，降低成本，提高效率和质量。
采用扩张柱床离子交换色谱技术直接从匀浆液中提取肝素，肝素单位效价达到120U/mg以上，用粗品精制肝素，效价达到160U/mg以上，产品中紫外区杂质(260nm，280nm)均满足药典要求；技术内容：(1)哺乳动物小肠粘膜的匀浆液经碱盐水解、胰蛋白酶酶解(猪牛羊等哺乳动物的肝脏肺脏的组织匀浆液加入0.1-0.5％木瓜蛋白酶)、高温变性和过滤处理，经过在一定离子浓度和PH 条件下进行扩张柱床吸附层析法吸附、浓缩、纯化肝素，乙醇沉淀，丙酮脱水，低温干燥。
试谈肝素钠生产新工艺流程
试谈肝素钠生产新工艺流程引言肝素钠（Heparin Sodium）是一种重要的抗凝血剂，广泛应用于临床治疗和疾病预防。
传统的肝素钠生产工艺存在一些问题，如低产率、复杂的工艺流程和高成本等。
为了改进现有工艺并提高肝素钠的生产效率，近年来不断探索新的生产工艺。
本文试谈肝素钠生产新工艺流程，旨在介绍新工艺的原理和优势。
传统肝素钠生产工艺流程传统肝素钠的生产工艺流程包括以下几个主要步骤：1.提取原料：从猪肺或牛肺等动物器官中提取肝素原料。
2.精制原料：通过提取液沉淀和离心等步骤，去除杂质和有机物质，得到肝素钠的粗品。
3.结晶纯化：将粗品溶解于水，并加入酒精和其他溶剂，通过结晶纯化得到较纯的肝素钠晶体。
4.附加步骤：包括溶解、滤除杂质、浓缩、干燥等步骤，以提高肝素钠的纯度和稳定性。
5.包装和存储：将肝素钠装入合适的包装容器中，并存放在干燥、阴凉的环境中。
以上是传统肝素钠生产工艺流程的基本步骤，虽然具有一定的生产效果，但仍然存在一些问题，如提取效率低、工艺繁琐、纯度不高等。
因此，寻找新的工艺流程是非常必要的。
新工艺流程的优势新工艺流程相对于传统工艺流程，具有以下优势：1. 原料的高效提取传统工艺流程的原料提取效率较低，而新工艺采用先进的提取技术，能够更高效地提取肝素原料。
例如，采用超声波辅助提取技术，可以提高原料的溶解度和扩散速率，从而提高提取效率。
2. 简化的工艺流程新工艺流程简化了传统工艺流程中繁琐的步骤，降低了生产成本和操作难度。
例如，通过改进提取、纯化和结晶等步骤，将多步骤合并为少量的简单步骤，使整个工艺流程更加高效。
3. 提高纯度和质量新工艺流程采用了更加精确的控制和精细的纯化方法，使得肝素钠的纯度和质量得到提高。
通过改进结晶和纯化步骤，可以去除更多的杂质和有机物质，获得高纯度的肝素钠产品。
4. 提高生产效率和产量新工艺流程的优化使得生产效率和产量都得到提高。
通过改进提取技术和优化工艺参数，可以提高原料的利用率，提高肝素钠的产率和产量。
低分子肝素纯化关键技术及产业化应用
低分子肝素纯化关键技术及产业化应用
低分子肝素（Low Molecular Weight Heparin，LMWH）是一种具有抗凝血活性的天然药物，广泛用于预防和治疗血栓、心血管疾病等。
LMWH的纯化是产业化应用的重要环节，下面介绍一下关键的纯化技术和产业化应用。
1. 分子筛纯化：利用分子筛技术，根据分子量大小的差异将低分子肝素与其他杂质分离。
这是最常用的纯化技术之一，可以高效地去除大部分的杂质。
2. 离子交换纯化：利用离子交换树脂的亲、疏水性质和电荷特性，可以选择性地吸附低分子肝素，并去除其他离子杂质。
离子交换纯化可以有效地提高纯度和特异性。
3. 凝胶过滤纯化：通过凝胶过滤毛孔大小的差异，将低分子肝素与其他大分子杂质分离。
凝胶过滤纯化可以有效去除高分子杂质和聚集体。
4. 逆流色谱：逆流色谱是一种静相液层析技术，通过树脂床的吸附和解吸，实现对低分子肝素的纯化。
该技术具有高分离效率和强选择性，纯化效果好。
低分子肝素纯化的关键技术使得工业化大规模生产成为可能。
目前，低分子肝素已经广泛应用于临床，用于预防和治疗血栓性疾病，例如深静脉血栓、肺栓塞、心肌梗死等。
随着技术的进一步发展，低分子肝素的纯化工艺将进一步完善，提高纯度
和产量，为更多患者提供有效的治疗。
同时，低分子肝素的产业化应用也将有望推动整个产业链的发展和壮大。
肝素亲和柱原理
肝素亲和柱原理
肝素亲和柱是一种分离肝素结合蛋白（HeparinBindingProtein，HBP）的生物分离技术。
肝素是一种天然存在于人体中的多糖，可以与许多生物分子发生结合作用。
HBP是一种具有细胞外基质附着能力的蛋白质，在炎症反应和感染等生理生化过程中具有重要作用。
肝素亲和柱的原理是通过将肝素固定在柱子上，利用肝素与HBP 的特异性结合作用，将HBP从其他混杂物中分离出来。
首先，需要将混合物通过肝素亲和柱，使用缓冲液洗脱柱子上非特异性结合的蛋白质。
接下来，通过改变pH值或者浓度来进行洗脱肝素与HBP结合的蛋白质，从而得到纯化的HBP。
肝素亲和柱的优点是非常特异性，可以高效地纯化HBP，同时也可以用于其他肝素结合蛋白的纯化。
该技术被广泛应用于医学、生物技术和生物化学等领域。
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肝素的分离纯化工艺
肝素的分离纯化工艺姓名：XX专业：生物制药1. 前言：肝素（heparin)是1916年麦克伦（Mclean)在研究凝血问题时，从狗的肝脏中发现的的，具有抗凝血活性。
肝素是由动物结缔组织的肥大细胞产生的，它广泛存在于哺乳动物的各种器官和组织中，如肠粘膜、十二指肠、肺、肝、心、胎盘和血液中，多与蛋白质结合成复合体存在，这种复合体无抗凝血活性，随蛋白质的去除而活性增。
在体内肝素可被肝脏产生的肝素酶灭活而从尿排泄出去。
无论在体内还是体外，肝素的抗凝作用都很强，故临床把它作为抗凝剂广泛使用。
肝素是世界上迄今为止已知的分子结构最复杂的化合物，短期内无法人工化学合成，目前只有来源于猪小肠粘膜的肝素能够用于临床治疗。
2. 肝素的相关简介2.1 理化性质肝素为白色或灰白色粉末,无臭无味,有吸湿性,钠盐易溶于水,不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。
它一种由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。
制剂分子量在1200～40000，抗血栓与抗凝血活性与分子量大小有关。
2.2 药用功能⑴治疗各种疾病并发的播散性血管内凝血早期。
⑵预防动、静脉血栓和肺栓塞。
⑶治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛（减轻症状、预防心肌梗塞），急性心肌梗塞（防止早期再梗塞和梗塞区延展，降低病死率）。
⑷人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物。
⑸作为溶血栓疗法的维持治疗。
⑹用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。
2.3 来源杂质肝素原料药的原料是肝素粗品，其提取只能源自健康生猪的小肠粘膜，由于含有大量杂质蛋白、杂质核酸、微生物等杂质，需经过物理和化学提取分离过程，定向获取天然结构基团完整的肝素，从而制成肝素原料药。
肝素钠原料药是标准肝素制剂的唯一有效成分和低分子肝素原料的生产起点，目前肝素制剂只有按照注射给药方式用于临床，这使得肝素原料药需要有很高的纯度，方可保证制剂的用药安全。
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肝素的分离纯化工艺 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
肝素的分离纯化工艺
姓名：XX
专业：生物制药
1. 前言：
肝素（heparin)是1916年麦克伦（Mclean)在研究凝血问题时，从狗的肝脏中发现的的，具有抗凝血活性。
肝素是由动物结缔组织的肥大细胞产生的，它广泛存在于哺乳动物的各种器官和组织中，如肠粘膜、十二指肠、肺、肝、心、胎盘和血液中，多与蛋白质结合成复合体存在，这种复合体无抗凝血活性，随蛋白质的去除而活性增。
在体内肝素可被肝脏产生的肝素酶灭活而从尿排泄出去。
无论在体内还是体外，肝素的抗凝作用都很强，故临床把它作为抗凝剂广泛使用。
肝素是世界上迄今为止已知的分子结构最复杂的化合物，短期内无法人工化学合成，目前只有来源于猪小肠粘膜的肝素能够用于临床治疗。
2. 肝素的相关简介
2.1 理化性质
肝素为白色或灰白色粉末,无臭无味,有吸湿性,钠盐易溶于水,不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。
它一种由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。
制剂分子量在1200～40000，抗血栓与抗凝血活性与分子量大小有关。
药用功能
⑴治疗各种疾病并发的播散性血管内凝血早期。
⑵预防动、静脉血栓和肺栓塞。
⑶治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛（减轻症状、预防心肌梗塞），急性心肌梗塞（防止早期再梗塞和梗塞区延展，降
低病死率）。
⑷人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物。
⑸作为溶血栓疗法的维持治疗。
⑹用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。
来源杂质
肝素原料药的原料是肝素粗品，其提取只能源自健康生猪的小肠粘膜，由于含有大量杂质蛋白、杂质核酸、微生物等杂质，需经过物理和化学提取分离过程，定向获取天然结构基团完整的肝素，从而制成肝素原料药。
肝素钠原料药是标准肝素制剂的唯一有效成分和低分子肝素原料的生产起点，目前肝素制剂只有按照注射给药方式用于临床，这使得肝素原料药需要有很高的纯度，方可保证制剂的用药安全。
3. 该工艺的分离原理
肝素在水溶液中带很高的负电荷。
先用盐解或酶解法使肝素与杂蛋白分离出来，然后采用离子交换树脂来提取纯化肝素，常用的是强碱阴离子树脂或强碱低交联度阴离子树脂。
在离子交换过程中，水中的阳离子（如Na+、Ca2+、 K+、 Mg2+、Fe3+等）与阳离子交换树脂上的H+ 进行交换，水中阳离子被转移到树脂上，而树脂上的H+交换到水中。
水中的阴离子（如Cl-、HCO3-、肝素等）与阴离子交换树脂上的OH-进行交换，水中阴离子被转移到树脂上，而树脂上的OH- 交换到水中。
而H+ 与OH- 相结合生成水，从而达到脱盐的目的。
4. 肝素钠工艺流程
工艺路线：
工艺步骤：
1、盐解：将刮好的新鲜肠粘膜，按肠粘膜和水的总重量，加入3%的NaCl，搅拌均匀，再加烧碱液调PH值为9，缓慢升温50--55度，加温时每10--20分钟加水搅拌一次，恒温2小时，注意要间隔搅拌。
恒温结束后，要快速升温到96--98度，恒温10分钟，趁热捞出上层的渣子。
冷却至50℃以下，用30目双层纱布过滤，收集滤液。
2、吸附、洗涤、洗脱上述滤液中加入2%的C1型714树脂，搅拌8小时，静置过夜；去上清液，树脂用水冲洗，再去上清液，滤干，加入2倍量的L NaCl溶液并搅拌2h,滤干。
用2倍量的L NaCl溶液搅拌洗脱8h，滤干；再用1倍量的同样洗脱液搅拌洗脱2h，滤干，合并洗脱液。
3、沉淀得到的洗脱液加人等量的95%乙醇沉淀，过夜，取出上清液，收集沉淀，丙酮中脱水干燥，得肝素钠粗品。
4、溶解、脱色将肝素钠粗品用15倍的1% NaCl溶液溶解，用6mol/L HCl调pH至左右，过滤收集清液，用5mol/L NaCl调pH至11，按3%用量加入过氧化氢（含量30%），25℃放置，开始时不断调节pH维持在11，第2天再按1%量加入过氧化氢，调pH至11，共放置48h;然后过滤，收集滤液。
5、沉淀、干燥滤液用6mol/L HCl调pH至，加入等量95%乙醇沉淀，过夜；次日虹吸除去上清液，沉淀用丙酮洗涤脱水，干燥，得肝素钠精品。
总收率可达20000U/kg肠黏膜。