家兔的氨茶碱静脉注射药代动力学研究
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家兔的氨茶碱静脉注射药代动力学研究
实验目的
1、掌握紫外分光光度法测定兔血中氨茶碱
2、掌握药动学参数的计算方法
【实验原理】
氨茶碱,多用于治疗支气管哮喘,为茶碱与乙二胺的复盐。茶碱是主要的药效成分,而乙二胺则能够提高药物的水溶性。由于其治疗窗相对较窄(10-20微克/毫升),大约有75%的患者在血药浓度超过25微克/毫升的时候出现中毒反应。因此,加强患者的氨茶碱的血药浓度监控非常必要。
茶碱是一种弱酸,所以可以用有机溶剂在酸性条件下将其从血清里面中提取分离,同时血清蛋白变成沉淀。随后,茶碱可以用碱液从有机溶剂中提取分离。茶碱的最大吸收波长是274nm,然而,空白血清在该波长处也有显著的吸收,所以使用双波长(274nm和298nm)紫外分光光度法来测定兔血中的茶碱浓度。
【实验步骤】
1、参比溶液的标准曲线
取茶碱5.0g至10容量瓶中,用10ml NaOH溶液(0.1mol/L)溶解并定容至刻度制成500ug/ml的储备液。分别取5.0,10.0,15.0,20.0,25.0和30.0ul的储备液加至装有500ul空白血清样品的试管中。最终的生物标准校正浓度范
围为5.0-30.0ug/ml。标准样品通过下述的方法进行测定。绘制以△A(A274-A298)为纵坐标,以浓度为横坐标的标准曲线。
2、血清中茶碱浓度的测定
取200ul的盐酸(0.1mol/L)和5ml的氯仿-异丙醇(95:5)加入500ul的血清样品中。混合均匀后,将混合液用离心机(3000r/min)离心10min。然后,取氯仿层(3.0ml)转移进入另一试管中,再加入3.0ml的氢氧化钠(0.1mol/L)混匀。混合液用离心机(3000r/min)离心10min。取上清液(约2.5ml)分别在274nm和298nm处测定其吸光度A。空白液为2.0ml的蒸馏水和4.0ml的氢氧化钠(0.1mol/L)混匀制成。血液中的药物浓度使用茶碱标准曲线的线性回归方程进行计算。
3、动物实验
1)注射给药:氨茶碱(用两倍体积的5%的葡萄糖溶液稀释)以15mg/kg的剂量通过耳缘静脉在2min之内缓慢注射入家兔体内。
2)血液取样时间:静脉注射氨茶碱后在不同时间点取血(10,20,30,45,60,90,120,150,180,和240min)。3)血液取样方法:切割家兔耳缘静脉取血(2-3ml),放置20分钟后,离心机(5000r/min)离心10min。上清液即为分析用血清样本。
【数据处理】
1、通过计算与家兔血液中的茶碱浓度有关的△A来绘制
标准曲线
2、计算血清样品中茶碱浓度
3、计算药动学参数
绘制药物的药时曲线和用梯形分块法计算AUC。
绘制对数曲线并选择符合数据的隔室模型。
计算消除速率常数K和半衰期
【思考题】
1、如何判断与数据相匹配的隔室模型?
2、血清样品和血浆样品有什么不同?
3、AUC的重要意义是什么?
Supplement:参数计算全用3p97处理,到时那个软件会自动生成9份数据,分别为1,2,3三室的三种不同算法算出的结果,大家只要选择以1/c为权重的那三份进行比较,选择AIC最小即最佳隔室模型来作为你们实验的结果即可。软件生成的曲线图截取非常麻烦,并且那个图不美观,所以蔡老师说直接用EXCEL来作图即可。
个人能力有限,可能存在翻译错误,仅供参考,希望大家自己仔细阅读英语原版!!O(∩_∩)O~
以上是从网上下的个人修改了一下下不知道那个蔡老师是不是我们的蔡老师可能翻译的不好大家看看有需要改动的地方大家自己动动手咯O(∩_∩)O哈哈~↖(^ω^)↗