蛋白表达不同检测方式的比较和分析
质谱分析蛋白表达差异
百泰派克生物科技
质谱分析蛋白表达差异
质谱分析蛋白表达差异是利用质谱技术研究蛋白表达差异。
研究蛋白质表达差异，可以帮助我们认识生命活动的本质。
百泰派克生物科技提供基于质谱的蛋白表达差异分析服务。
蛋白表达差异
蛋白质是由基因转录后翻译形成的，是生物体中一类重要的生物大分子。
蛋白质除了参与生物体细胞和组织的组成，还可以在生物体中发挥广泛的功能，例如催化代谢反应、参与DNA复制、对刺激（如病原体）作出反应，以及将分子从一个位置运输到另一个位置等等。
蛋白表达差异，指的是蛋白质在表达水平上的变化，它可以发生在细胞在不同功能状态、不同细胞周期，或者是在不同条件或药物刺激等情况下。
研究蛋白质表达差异，可以帮助我们认识生命活动的本质，更有助于帮助我们研究疾病的早期诊断、疾病的病程，和检测药物对疾病的疗效等等。
质谱分析蛋白表达差异
质谱分析蛋白表达差异是利用质谱技术对蛋白表达差异进行研究。
质谱技术通过检测不同样品中蛋白质的差异表达，来实现样品中蛋白表达差异的分析。
借助生物信息学技术，还可以对有表达差异的蛋白进行分析，例如基于质谱数据可以对差异表达的蛋白质进行统计分析，如韦恩图和火山图，通过韦恩图可以看出两个差异样品之间的共有的和特有的差异表达蛋白数量，通过火山图（Volcano Plot）可以查看蛋白在两个不同样品中表达水平的差异，以及差异的统计学显著性。
His-Tag表达蛋白纯化原理、方法和问题分析
组氨酸标签蛋白的纯化His-Tag融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性，无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去（IMAC）纯化。
2．1IMAC(ImmobilizedMetal-ionaffinitychromatography)是Porathetal.1975年用固定IDA作为配基的填料螯合过渡金属铜、镍、钴或锌离子，可以吸附纯化表面带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白，1987年Smithetal.发现带有几个组氨酸或色氨酸小肽和螯合金属离子的IDA-sephadexG-25作用力更强，此前在1986年他和他的合作者用Ni2+-IDA-sephadexG-25亲和纯化在氨基端带组氨酸和色氨酸的胰岛素原。
同年1987年Hochulietal.发现带有相连组氨酸的多肽和Ni2+-NTA填料作用力更强于普通的肽，1988年他第一次用这样的方法纯化了带六个组氨酸标签的多肽，无论是在天然还是变性条件下一次亲和纯化都得到很好效果，此后表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC变得非常普遍，相对而言，不带标签的蛋白纯化就非常困难，所以表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC纯化变成最常用而且最有效的研究蛋白结构和功能的有力手段。
1986年Porathetal.还发现Fe3+-IDA-sephadexG-25可以用于磷酸化蛋白的纯化，而后发现Ga3+-IDA也有同样的效果，这样螯合这两种金属离子的填料就有效用于磷酸化多肽的富集和纯化，同时IMAC也可以用于纯化各种和金属离子结合的多肽，应用非常广泛。
市面常见的商品化IMAC用于带六个组氨酸标签蛋白的配基有以下几种：2.2影响IMAC纯化结果的因素：2.2.1填料的种类：不同填料厂家的填料有差别，所以使用过程最好能得到厂家的技术支持，因为不同的厂家填料不同，此外蛋白纯化个性很强，没有哪一个填料是能适合所有带六个组氨酸标签蛋白的纯化，载量高和特异性好本身就是矛盾。
蛋白质表达的差异及其与疾病的关系
蛋白质表达的差异及其与疾病的关系蛋白质是生命体内最重要的分子之一，它们在细胞中发挥着各种重要的功能。
蛋白质的表达水平及其在不同个体之间的差异，对于疾病的发展和治疗具有重要意义。
本文将探讨蛋白质表达的差异及其与疾病之间的关系，并介绍一些相关的研究进展。
一、蛋白质表达的差异蛋白质表达的差异主要包括两个方面：个体间的差异和细胞内的差异。
1. 个体间的差异个体间的蛋白质表达差异往往与遗传因素密切相关。
人类基因组计划的研究发现，人体中约有20,000个基因，但形成的蛋白质却远远超过这个数字。
这说明在蛋白质的表达过程中，基因的转录和翻译过程存在差异，导致不同个体之间的蛋白质组成存在差异。
这些差异可能与个体的遗传背景、环境因素以及生活方式等有关。
2. 细胞内的差异细胞内的蛋白质表达差异主要体现在细胞类型和状态的差异上。
不同类型的细胞在功能、形态和基因表达上存在差异，因此它们产生的蛋白质也不同。
同时，细胞的状态也会影响蛋白质的表达水平。
例如，细胞在应激或病理状态下，会产生一些特定的蛋白质，这些蛋白质可能参与调节细胞的生理功能，或者作为早期诊断的标记物。
二、蛋白质表达差异与疾病的关系蛋白质表达的差异与疾病的发展和治疗密切相关。
许多疾病的发生和发展过程中，蛋白质的表达异常是重要的因素之一。
1. 疾病的发展过程中的蛋白质表达差异疾病的发展过程中，一些蛋白质的表达水平会发生改变。
这些蛋白质的异常表达可能与疾病的产生和发展有密切关系。
例如，癌症的发展通常伴随着一系列蛋白质的过度表达或缺失。
这些蛋白质可能参与细胞增殖、迁移和凋亡等重要的生命过程，从而促进癌细胞的生长和扩散。
2. 蛋白质表达差异的临床应用蛋白质表达差异的研究为疾病的早期诊断和治疗提供了新的思路。
许多疾病在早期阶段时，蛋白质的表达水平已经发生变化，这些变化可以作为生物标记物用于疾病的早期筛查和诊断。
例如，心肌梗死的早期诊断可通过检测血清中心肌特异性蛋白的表达水平来实现。
蛋白质的表达、纯化及检测-分子实验报告
实验目的1.了解外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达情况2.学会用SDS-PAGE电泳法分离不同分子量的蛋白质3.学习通过亲和层析法纯化目的蛋白4.学会考马斯亮蓝染色法和蛋白质杂交法检测蛋白质实验原理1.外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达：将外源基因克隆在特殊的表达载体中，让其在E. coli中表达，该表达载体上含有lac操作子的启动子。
在不加诱导剂的条件下培养宿主菌，lacI基因表达的阻遏蛋白LacI与lac操作子结合，使外源基因不能表达；向培养基中加入诱导物IPTG后，LacI阻遏蛋白变构失活，不能与lac操作子结合，外源基因就表达。
2.蛋白质SDS-PAGE电泳分离：SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
其分离原理是根据蛋白质分子量的差异，因为SDS-PAGE的样品处理液及缓冲液的加入破坏了蛋白质的二级、三级、四级等结构，并使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物，稳定地存在于均一的溶液中，SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷，远远超过其原来所带的电荷，从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计，消除了不同分子之间原有的电荷差别，其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小，这样分离出的谱带也为蛋白质的亚基。
3.考马斯亮蓝法检测蛋白质：考马斯亮蓝是一种蛋白质染料，主要有R-250和G-250两种类型。
考马斯亮蓝可以和蛋白肽链中碱性氨基酸残基或芳香族氨基酸残基（Arg，Trp，Tyr，His，Phe）结合。
考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；因为考马斯亮蓝R250中的R代表Red，偏红，红蓝色，与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶，染胶效果好，染色后为蓝色，且与胶的结合可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
4.基因融合就是将两个或多个开放读码框按一定顺序连接在一起，融合阅读框架的表达产物是一个杂和蛋白。
实验室常用的两种检测尿白蛋白方法比较及临床意义
实验室常用的两种检测尿白蛋白方法比较及临床意义陈榕方【摘要】目的:探讨尿蛋白干化学定性与免疫比浊法检测尿白蛋白的准确性及临床价值进行一系列的分析.方法:干化学法应用仪器希森美康UF1000尿液分析仪,其原理为双波长反射侧光法、免疫比浊法应用仪器为贝克曼IMMAGE-800特定蛋白分析仪,抽取2017年3月～2018年3月天津市泰达医院内分泌科及肾内科糖尿病患者520例作为糖尿病肾病早期组和晚期组,并抽取同时间段的健康体检者420例为对照组,比较三个组别的尿蛋白干化学定性阳性率及免疫比浊法检测阳性率.结果:520例肾病组尿检者中:免疫比浊法检测呈阳性的例数为410例,阳性率为78.84％;尿蛋白干化学定性阳性患者为308例,阳性率为59.23％.420例健康体检者中:免疫比浊法检测为阳性的患者例数为72例,占17.14％;干化学法检测出尿蛋白定性弱阳性患者32例,阳性率为7.62％.在DN早期组与DN晚期组的检测结果比较分析,随着病程增加,免疫比浊法检测mALB的含量及阳性率呈持续上升趋势,差异具有显著性(P<0.05).结论:由于两种检测方法的原理、影响因素的不同,其检测结果也存在差异.免疫比浊法更准确.【期刊名称】《中国医疗器械信息》【年(卷),期】2018(024)022【总页数】3页(P17-18,64)【关键词】尿蛋白;方法学;免疫比浊法;干化学法;尿微量白蛋白;糖尿病肾病【作者】陈榕方【作者单位】天津市泰达医院检验科天津 300457【正文语种】中文【中图分类】R446.1糖尿病作为一种慢性疾病，继发性肾脏损害是其常见并发症，尿中蛋白质的发现是初期肾脏损害最有价值的指标之一。
随着我国生活水平的不断提高，糖尿病患病人数也在飞速增长，临床实验室尿蛋白的检测、筛查也显得尤为重要。
为明确实验室常用检测方法学的一致性，对DN早期及DN晚期病人分别使用干化学法与免疫比浊法检测尿液中的白蛋白，并将其结果进行对比分析。
蛋白质质量检测技术研究及其在临床诊断和治疗中的应用
蛋白质质量检测技术研究及其在临床诊断和治疗中的应用随着人类对健康的要求不断提高，生物医学领域也在不断推陈出新。
蛋白质是生命体中的重要分子，不仅在细胞代谢、信号传递中起作用，而且在临床诊断和治疗中也扮演着重要的角色。
而蛋白质质量检测技术的研究正是为了更好地应用蛋白质在临床中的作用。
一、蛋白质质量检测技术的研究目前，蛋白质质量检测技术主要依靠质谱技术和免疫学技术两种方式。
1. 质谱技术质谱技术是一种重要的蛋白质质量检测方法，可以通过分析蛋白质的氨基酸组成、序列、结构等来确定蛋白质的质量。
其中，液相色谱（LC）串联质谱（MS）是当前主要的手段之一，它可以实现定量分析和对一定数量的蛋白质进行鉴定。
在质谱技术中，还有一种比较新颖的技术叫做“中性失偶谱”，它能够使分析者快速地测定蛋白质样品的组成，甚至连低浓度蛋白质全长序列的测定也能够实现。
2. 免疫学技术免疫学技术是另一种主要的蛋白质质量检测方式，通过检测蛋白质的存在和含量来判断蛋白质的质量。
与质谱技术不同的是，免疫学技术主要通过针对蛋白质的抗体来实现。
常见的免疫学技术包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫检测法（ELISA）等。
二、蛋白质质量检测技术在临床诊断和治疗中的应用蛋白质质量检测技术在生命科学、医学研究和临床实践中有广泛的应用。
它不仅能够对疾病的发生和发展进行早期诊断，而且还可以为治疗方案的制定提供重要的参考。
1. 早期诊断在临床诊断中，蛋白质质量检测技术可以帮助医生早期发现患者出现的问题，其中很多还没有出现明显的临床症状。
例如，肿瘤标志物（如CA125、AFP、PSA 等）就是一种常见的蛋白质标记物。
通过检测这些蛋白质的含量，可以预判患病概率、判断疾病的类型、判断疾病的进展情况，为治疗提供重要依据。
2. 治疗方案制定蛋白质质量检测技术在治疗方案制定方面也非常重要。
通过检测患者体内某些蛋白质的含量，可以及早发现疗效不佳或治疗后可能出现的并发症。
例如，对于一些肝病患者，蛋白质含量的检测可以帮助医生判断治疗方案的有效性，以及预测出现肝功能不全的可能性。
检验蛋白质的方法
检验蛋白质的方法
首先，常用的蛋白质检测方法之一是比色法。
比色法是通过蛋
白质与某些特定试剂发生反应，产生颜色变化来检测蛋白质的含量。
其中，最常用的试剂是布拉德福试剂和洛斯试剂。
布拉德福试剂主
要用于定性和定量测定蛋白质，而洛斯试剂则主要用于定性检测蛋
白质。
其次，电泳法也是一种常用的蛋白质检测方法。
电泳法是利用
蛋白质在电场中的迁移速度差异来分离和检测蛋白质的方法。
其中，凝胶电泳是最常用的电泳方法之一，可以根据蛋白质的分子量和电
荷来进行分离和检测。
另外，二维凝胶电泳则可以更加精细地分离
和检测蛋白质。
此外，质谱法也是一种常用的蛋白质检测方法。
质谱法是通过
将蛋白质离子化并加速后使其进入质谱仪，根据蛋白质的质荷比来
进行检测和分析。
质谱法可以准确地确定蛋白质的分子量和氨基酸
序列，对于蛋白质的结构和功能研究具有重要意义。
最后，免疫学方法也是一种常用的蛋白质检测方法。
免疫学方
法是利用抗体与特定蛋白质发生特异性结合来进行检测和分析。
常
见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹法（Western blot）等，这些方法可以对蛋白质进行高灵敏度和高特异性的检测。
总之，检验蛋白质的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法来进行蛋白质的检测和分析，以满足具体研究或临床诊断的需要。
希望本文介绍的蛋白质检测方法对您有所帮助。
三种测定蛋白质热稳定性方法的比较
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第４期
２５３
周翠燕ꎬ等:三种测定蛋白质热稳定性方法的比较
蛋白质在加热过程中会发生热变性解折叠ꎬ蛋
化的趋势ꎬ所以圆二色谱法也是测定蛋白质 Ｔ ｍ 值的
指在蛋白质解折叠 ５０％时对应的温度
类蛋白的 Ｔ ｍ 值整体上较为一致ꎬ 但也存在一定差
异. 而结构更复杂的蛋白ꎬ并不一定有更多个 Ｔ ｍ 值.
表 １ 蛋白质样品信息汇总
Ｔａｂｌｅ １ Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓａｍｐｌｅ
分子量大小 / ｋＤａ
名称
ＰＹＬ ２
ＰＹＬ １０
植 物 ＡＢＡ ( 脱 落
ＤＳＣ) 、圆 二 色 光 谱 法 ( ｃｉｒｃｕｌａｒ ｄｉｃｈｒｏｉｓｍꎬ ＣＤ) 和 差
示扫 描 荧 光 法 ( ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙꎬ
ＤＳＦ) 等.
差示扫描量热法的应用始于 ２０ 世纪 ６０ 年代ꎬ
是在程序控温下ꎬ通过测量输给待测物和参比物的
功率差与温度的关系ꎬ 以获得吸放热量的技术
Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ
ＺＨＯＵ Ｃｕｉ￣ｙａｎ
１ꎬ２ꎬ３ꎬ４
ꎬ ＹＵ Ｍｉｎ￣ｄａ ５ ꎬ ＬＩ Ｗｅｎ￣ｑｉ １ꎬ２ꎬ３ꎬ４
(１.Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｔｓｉｎｇｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
２. Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ( Ｂｅｉｊｉｎｇ) ꎬ Ｔｓｉｎｇｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
免疫组化法和免疫荧光染色法的区别
免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。
虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。
在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。
1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。
它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。
在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。
随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。
接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。
2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。
它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。
不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。
在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。
而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。
在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。
通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。
泛素化蛋白检测方法
泛素化蛋白检测方法泛素化蛋白检测方法是用来检测细胞中是否存在泛素化蛋白质的一种技术手段。
泛素化是一种重要的细胞调控方式，参与了细胞内很多生物学过程，如蛋白质降解、DNA损伤修复、信号转导等。
因此，泛素化蛋白的检测对于了解细胞生理和病理过程具有重要意义。
本文将介绍几种常用的泛素化蛋白检测方法。
1.免疫印迹法免疫印迹是一种常用的蛋白质检测方法，可以用于检测泛素化蛋白质的表达水平。
该方法通过将细胞裂解，并用SDS-进行蛋白质分离，然后将蛋白质转移至膜上。
接着，使用特异性的抗体识别泛素化蛋白质，并通过化学发光或荧光信号的检测来定量泛素化蛋白的含量。
这种方法简单、快速、灵敏，并可同时检测多种泛素化蛋白。
2.免疫组化免疫组化是一种能够在细胞和组织水平上检测蛋白质分布和定位的方法。
通过将细胞或组织切片，并使用特异性抗体标记泛素化蛋白质，然后通过对比传统组织学方法进行分析，可以了解泛素化蛋白质在细胞或组织中的表达和编码特征。
免疫组化可以定量检测泛素化蛋白质在细胞和组织中的表达水平，同时还能对泛素化蛋白质的亚细胞定位进行研究。
3.蛋白质质谱法蛋白质质谱法是一种用于检测蛋白质修饰的方法，可以用来分析和鉴定泛素化蛋白。
这种方法首先通过产生离子化的蛋白质片段，并利用质量分析仪进行分离和鉴定。
具体而言，可以根据泛素化蛋白质的谱峰与非泛素化蛋白质的谱峰相对比，来确定泛素化蛋白质的存在与否。
蛋白质质谱法具有高灵敏度和高特异性的特点，并且可以检测多种不同的泛素化位点。
4.串联亲和纯化法串联亲和纯化法是一种用于检测和鉴定泛素化蛋白质的方法。
该方法首先通过将泛素蛋白识别域（UBD）与亲和纯化基质结合，然后选择性地富集泛素化蛋白质。
接着，将富集的蛋白质再进行定量分析或质谱分析，以确定泛素化蛋白质的存在和性质。
这种方法具有很高的特异性和灵敏度，并且可以检测细胞中不同泛素化位点的蛋白质。
总结起来，泛素化蛋白检测方法包括免疫印迹法、免疫组化、蛋白质质谱法和串联亲和纯化法。
5种常规的蛋白质测定方法的全方位的比较分析
5种常规的蛋白质测定方法的全方位的比较分析来源： 类别：技术文章 更新时间：2011-02-16 16:32:50 阅读 62次蛋白质的测定在饲料的品质确定中占很大的作用，蛋白质的测定方法有很多种，最为常见的使用方式有定氮法，双缩脲法（Biuret 法）、考马斯亮蓝法(Bradford 法)、Folin －酚试剂法（Lowry 法）和紫外吸收法，蛋白质测定仪采用索氏定氮原理，通过用加碱、加酸等过程将物质中的氮元素转化为氨气，然后再用滴定的方法讲物质中氮的含量或者蛋白质的含量计算出来。
蛋白质测定仪采用微电脑全自动控制，有两种模式：手动模式和自动模式。
根据这两种模式又能将其分之为半自动定氮仪以及全自动定氮仪两种，在进行检测的过程中克服了定氮法的一些弊端，让定氮法进行进一步的发展。
下面就是以上4种测定方法中的优缺点比较：方法灵敏度 时间 原理 干扰物质 说明 凯氏定氮法（Kjedahl 法） 灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg 氮，误差为 ±2％费时 8～10小时 将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（Biuret 法） 灵敏度低1～20mg 中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu 2＋?紫色络合物 硫酸铵； Tris 缓冲液； 某些氨基酸 用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50～100mg 快速5～10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm 处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶； 各种核苷酸用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正 Folin －酚试剂法（Lowry 法） 灵敏度高 ≈5mg慢速40～60 分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr 和Phe 还原 硫酸铵；Tris 缓冲液； 甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时； 颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Br adford 法) 灵敏度最高 1～5mg快速5～15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax 由465nm 变为595nm 强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS 最好的方法；干扰物质少； 颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化蛋白质含量测定的方法一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法含氮有机物与浓硫酸共热,即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸铵。
干化学法与磺基水杨酸法对尿蛋白检测对比分析
西藏医药2020年第41卷第1期（总148期）•基础医学•干化学法与磺基水杨酸法对尿蛋白检测对比分析李攀西藏那曲比如县人民医院西藏那曲852300摘要Q的对比分析干化学法与磺基水杨酸法检测尿蛋白的方法差异。
方廉收集2018年11月~2019年3月入住我院内科患者的新鲜晨尿样本210人份。
每一人份均采用干化学法和磺基水杨酸法对尿蛋白同时进行检测，结合临床诊断对检测结果进行对比分析。
錯果干化学法和磺基水杨酸法检测尿蛋白的灵敏度分别为82.2%和94.7%,特异度分别为87.8%和85.4%,阴性预测值分别为54.5%和79.5%,阳性预测值分别为96.5%和96.4%,诊断准确度分别为83.3%和92.9%。
结论磺基水杨酸法检测尿蛋白诊断准确度高于干化学法，漏检率低，适合用于临床诊断泌尿系统及肾脏疾病。
关键词干化学法磺基水杨酸法尿蛋白性能评价蛋白尿是泌尿系统疾病或（和）肾脏疾病最常见的临床表现，也是其他疾病如多发性骨髓瘤、阵发性睡眠性血红蛋白尿等血液系统疾病，膀胱及邻近器官的结石、炎症和肿瘤也会出现尿蛋白。
因此，定性检测和筛查尿蛋白对于临床疾病辅助诊断、预后、疗效评价均具有重要的临床意义。
目前临床常用的定性检测方法有干化学法、磺基水杨酸法和加热乙酸法。
以前面两种测定方法最为常见，本文就干化学法和磺基水杨酸法的检测情况进行对比，现汇报如下：1材料和方法1.1材料收集2018年11月~2019年3月入住我院内科患者210例，均取新鲜晨尿共210人份。
其中确诊为肾脏及泌尿系统疾病的169例，其他疾病41例。
1.2方法1.2.1干化学法首先使用优利特URIT-500B尿液分析仪配套的质控分析试带完成仪器室内质控，当室内质控合格后才开始检测样本。
将分析试带充分浸入新鲜尿液中2〜3秒，取出并用干净吸水纸吸去试带上多余尿液，然后放入尿液分析仪内检测。
判读结果以+-,+,++, +++,++++^§^。
1.2.2磺基水杨酸法严格按照实验室标准操作规程操作，试剂配制参考《全国临床检验操作规程》闪磺基水杨酸试剂（成都力信合化工有限公司提供，为固体粉剂，规格为AR级100g/瓶）。
蛋白质定量方法对比
蛋白质定量方法对比全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：蛋白质是生物体内重要的有机分子，负责着细胞结构的建立和维持以及体内新陈代谢的进行。
因此，研究蛋白质的定量方法对于生命科学领域具有重要意义。
本文将比较几种常见的蛋白质定量方法，包括BCA法、Lowry法、Bradford法和Spectrophotometric method，分析它们各自的优缺点和适用场景。
首先，BCA法是一种基于铜蛋白络合物比色反应的蛋白质定量方法。
该方法具有高灵敏度和广泛线性范围，适用于多种类型的蛋白质样本。
然而，BCA法也存在一些缺点，包括受到干扰物质的影响、反应条件较为复杂等。
与BCA法相比，Lowry法是一种较为经典的蛋白质定量方法。
该方法利用费里酚蓝与蛋白质中的酚类物质在碱性条件下形成的复合物来定量蛋白质含量。
Lowry法具有较高的准确性和稳定性，但需要较长的反应时间和较大的标准曲线范围。
另一种常见的蛋白质定量方法是Bradford法，该方法利用共价结合蛋白质中的氨基酸残基与染料之间的相互作用来定量蛋白质。
与前两种方法相比，Bradford法具有操作简便、灵敏度高的特点，但对于具有不同氨基酸组成的蛋白质可能存在测定误差。
最后，Spectrophotometric method是一种利用紫外可见分光光度计进行蛋白质定量的方法。
通过测定蛋白质溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的浓度。
这种方法操作简单、速度快，但对于含有其他物质的样品可能存在测定误差。
综上所述，不同的蛋白质定量方法各有优劣，研究人员在选择适合的方法时应该根据具体需求和样品特性来进行选择。
在进行蛋白质定量时，应根据实验要求和条件选择最适合的方法，以确保结果的准确性和可靠性。
希望本文的比较能够帮助读者更好地理解各种蛋白质定量方法的特点和适用范围，提高实验的效率和准确性。
第二篇示例：蛋白质是生物体内重要的基本组成部分，具有多种生理功能。
准确测定蛋白质的含量对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
蛋白表达概述
未来研究方向与挑战
蛋白表达调控是一个复杂的过程，涉及多个层面和因素，需要深入研究其机制和 调控规律。
未来需要解决如何实现高效、特异和可控的蛋白表达，以及如何将蛋白表达技术 应用于临床治疗等挑战。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种将抗原-抗体反应与酶催化反应相结合的方法。 通过将酶连接到抗体上，利用酶的催化作用放大信号，提高检测的灵敏度和特异性。 该方法广泛应用于各种蛋白质、激素和病毒抗原的检测。
04
蛋白表达的应用
疾病诊断与治疗
疾病标志物检测
通过检测特定蛋白的表达水平， 有助于早期发现和诊断疾病，如 癌症、心血管疾病等。
05
蛋白表达的前景与展望
基因编辑技术对蛋白表达的影响
基因编辑技术如CRISPR-Cas9为蛋 白表达提供了强大的工具，可以精确 地编辑基因，从而调控蛋白的表达。
随着基因编辑技术的不断完善和优化 ，未来将有更多复杂的基因调控策略 应用于蛋白表达，以满足各种生物医 学需求。
蛋白质组学的发展前景
蛋白质组学作为研究蛋白质表达、功 能和相互作用的学科，在生物医学领 域具有广阔的应用前景。
02
03
翻译终止
起始密码子是翻译的起始点，核 糖体在这里与mRNA结合，并招 募翻译所需的氨基酸。
核糖体沿着mRNA移动，将氨基 酸按照密码子的顺序连接成肽链。
终止密码子使核糖体释放合成的 肽链，并从mRNA上解离。
翻译后修饰
磷酸化
01
磷酸化是指在蛋白激酶的作用下，将磷酸基团转移到蛋白质的
特定氨基酸残基上。
通过调节基因的转录效率和起始位点， 控制mRNA的合成量。
二种方法检测C-反应蛋白(CRP)的结果对比
二种方法检测C-反应蛋白（CRP）的结果对比C-反应蛋白（CRP）是机体处于应激状态时由肝脏大量合成的急性时相蛋白之一。
健康人血清中，含量甚微。
机体受到严重创伤、感染时大量合成，可升高数千倍[1]。
炎性反应会快速升高，可在6～12h内被检测出来[2]。
比起其他炎症指标，CRP值达到峰值和正常化更加快速，是临床上最有用的急性时相反应指标[3]。
测定CRP浓度，可以帮助鉴别细菌和病毒感染，还可以监控抗生素治疗效果，同时还可以帮助诊断脑膜炎、肺炎支气管炎、尿路感染、类风湿关节炎、心肌梗死等。
CRP检测临床实验室常用免疫透射比浊法。
我们将生化仪多点定标方式测定CRP的结果与快速CRP检测结果相比较，以寻求一种更好的方法服务于临床[4]。
1.材料与方法1.1 标本来源收集临床近3个月的门诊患者185例，其中男性99例，女性86例，年龄12～50岁。
1.2 仪器与试剂奥林巴斯AU400全自动生化分析仪；宁波美康免疫比浊CRP检测试剂，批号20100820；宁波美康标准品，批号分别为100602、100818、100708、100710、100618；快速CRP检测采用上海奥普生物检测仪，试剂批号20100618。
1.3 测定方法操作均根据仪器使用说明及分析参数编制检测程序，各检测对象均采用以上二种立法同时进行测试。
生化分析仪多点定标采用6点为0、8、20、40、80、155 mg/L。
主波长为340nm，副波长为700nm，反应终止时间为10min，取点时间为16和28；快速法采用封闭反应板、稀释、混匀加样、洗涤计数步骤操作。
1.4 统计学方法组间比较采用t检验。
2.结果2.1 对比实验将185例患者标本用快速CRP检测2次，取均值，将结果分为6组：低值A组（＜8mg/L），低值B组（8～20mg/L），中值A组（20～40mg/L），中值B组（40～80mg/L），高值A组（80～100mg/L），高值B组（＞100mg/L）。
2株毒力不同M.bovis差异表达蛋白的定量检测及分析
6 中国兽医杂志2021年(第57卷)第1期Chine r e of Veterinaro Medicine2株毒力不同！・bovis 差异表达 蛋白的定量检测及分析李梦莹1,田 帅1,董玉惠2,马小静1,张淮瑜1,宋阿北1,周向梅2,许立华1(1.宁夏大学农学院，宁夏银川750021 ； 2.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193)摘要:为研究牛分枝杆菌N 和C68004菌株间蛋白水平的差异表达对其致病性的影响，本试验采用串联质谱标记 (TMT )定量蛋白组学技术，对2个菌株的毒力及其致病性进行鉴定与分析。
结果分析得到2 174个共有蛋白,其中有479个 差(P<0.05)$ GO 分， 差 的功能 化、结合、运输、转录调控以及分子，特别是对内部或的反应。
KEGG 分， 差主要参和生物过程的调节。
导致N 菌致病性增强的毒力基因可能是mmaA4%ecce1 %IpqY %hspO %Mpb63和mmp!A o 并且N 菌的耐药基因rpoA 、rpoB 和rpoC量于C68004,可以推断N 菌对抗结核一物的耐药性可能比C68004更强$随 和免疫应答的 山菌在适应环境过程中，、DNA 复制以及 的 差异$关键词：牛分枝杆菌；学；差；毒力差中图分类号：Q939. 13o 1 文献标志码:A 文章编号：0529—6005(2021)01—0006—04Qcanhtative Determination and Analysis of Differentially Expressen Proteins inTwo Strains of Mycobacterium, bovis with Differeet VirulenceLI Meng-ying 1，TIAN Shuai 1，DONG Yu-hui 2，MA Xiao-jing 1，ZHANG Huai-yu 1，SONG A-bei 1，ZHOU Xiang-mei 2，XU Li-hua 1(1. Agriculture Colleac ，Ningxia University ，Yinchuan 750021 ，China ； 2. Colleac of Veterinaro Medicine ，ChinaAgeicueeueaeUnieeesie ， Beiiing100193 ， China )Abstract : In order to study the influence of di-erent protein expression levels on the pathogenicity of Mycobacterium bovis N andC68004 seeains ， ehisseudyused eandem ma s eag ( TMT ) speceeomeeeyeoequaneieaeieepeoeeomicseechnoeogyeoideneieyand anaeyye eheeieueenceand paehogenicieyoeeheewoseeains.Resueesshowed ehaeeheeeweee2 174 common peoeeinsand 479 di e eeneia e y ei-peessed peoeeinswieh P <0.05.GOanaeysiseesueesshowed ehaeeheeunceionsoeehedi e eeneia e y eipee s ed peoeeinsinceuded caeaey-sis ， binding ， eeanspoee ， eeansceipeionaeeegueaeion and moeecueaeseeuceuee-eeeaeed eoees ， especia e y in eesponseeoineeenaeoeeieeenaestiduUtion. KEGG analysis results showed that the diderentia0u expressed proteins were mainly invelved in the reaulation of memboi-io and biologicoi processes. The virulence genes that caused increased pathooenicith in M. bovis N might be mmaA4，eccel ，pqY ， hspX ，Mpb63，and mmp2. In addition ，the expression levels of epob ，rpoB and rpoC of N were sianificantly highco than that ofC68004， suggesing/ha//heeesisanceoeN oeieampicin ， /heeies-eine/ubeecueosisdeug ， isseongee/han /ha/oeC68004.Wih eee-quen/ceinicaemedicaion and changesin immuneeesponse ， /heeipee s ion oepeoeinseeeaed omeaboeic ， DNAeepeicaion and deugeesisanceoeNwasdi e een/in /hepeocessoeadap aion o/heeneieonmen/Key words : M . bonus ； proteomics ； ddferentially expressed proteins ( DEPs ) ； virulence dCferencoCorresponding acthors :XU Li-hua ，E-mat : littlezhe99@ 163. com ； ZHOU Xiang-mei ，E-mat : zhouxm@cau. edu. cn蛋白组学技术串联质谱标记(Tandem mas s taa ，收稿日期：2020—02—12基金项目：国家自然科学基金项目(31560687, 31760722,2017YFD0500901)；宁夏大学研究生创新项目(GIP2019006)作者简介:李梦莹(1994 -)，女， ，从事动物传染病诊断与防治，E-mail :441790017@ qq. com通信作者：许立华，E-mait : nttlezhe99 @ 163. com ；周向梅，E-mait : zhouxm@ cau. edu. cnTMT )与液相色谱质谱联用(Liquid chromatographe-tandem mass spectrometro ，LC-MS^MS "相结合是一种于标 量的新技术，可以对多个样品进质和多肽的定量分析[1] $ TMT 是定量蛋白质组学中最 的 素标记方法，它对 质的相对 量提供 性和可重复性。
蛋白质的表达、纯化及检测-分子实验报告
实验目的1.了解外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达情况2.学会用SDS-PAGE电泳法分离不同分子量的蛋白质3.学习通过亲和层析法纯化目的蛋白4.学会考马斯亮蓝染色法和蛋白质杂交法检测蛋白质实验原理1.外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达：将外源基因克隆在特殊的表达载体中，让其在E. coli中表达，该表达载体上含有lac操作子的启动子。
在不加诱导剂的条件下培养宿主菌，lacI基因表达的阻遏蛋白LacI与lac操作子结合，使外源基因不能表达；向培养基中加入诱导物IPTG后，LacI阻遏蛋白变构失活，不能与lac操作子结合，外源基因就表达。
2.蛋白质SDS-PAGE电泳分离：SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
其分离原理是根据蛋白质分子量的差异，因为SDS-PAGE的样品处理液及缓冲液的加入破坏了蛋白质的二级、三级、四级等结构，并使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物，稳定地存在于均一的溶液中，SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷，远远超过其原来所带的电荷，从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计，消除了不同分子之间原有的电荷差别，其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小，这样分离出的谱带也为蛋白质的亚基。
3.考马斯亮蓝法检测蛋白质：考马斯亮蓝是一种蛋白质染料，主要有R-250和G-250两种类型。
考马斯亮蓝可以和蛋白肽链中碱性氨基酸残基或芳香族氨基酸残基（Arg，Trp，Tyr，His，Phe）结合。
考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；因为考马斯亮蓝R250中的R代表Red，偏红，红蓝色，与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶，染胶效果好，染色后为蓝色，且与胶的结合可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
4.基因融合就是将两个或多个开放读码框按一定顺序连接在一起，融合阅读框架的表达产物是一个杂和蛋白。
测定蛋白质相对分子质量的常用方法
测定蛋白质相对分子质量的常用方法
蛋白质相对分子质量（Relative Molecular Mass,简称RMM）是指表征一种蛋白质大小和形态特点的重要参数，其量化表达了蛋白质实质量，广泛用于生物研究和蛋白工程研发等领域。
蛋白质从多种实验方法中的分子量的衡量，可以帮助医学研究人员对蛋白质性质的深入了解，并提供发展相关临床诊断标记因子的理想对象。
检测蛋白质相对分子质量的方法至关重要。
常用的检测蛋白质相对分子质量的方法有：光谱法、电泳法和分子质量分析法。
1. 光谱法：基于蛋白质在不同电压下被破坏后，释放出具有特定吸收特性的物质，利用紫外-可见及红外光谱法技术对其光谱图谱作出分析，由蛋白质染料和测定的蛋白的分子质量可测出蛋白的相对分子质量。
2. 电泳法：电泳技术是将电泳染色的蛋白样品分散在电泳凝胶中，用电场将蛋白向凝胶中心移动，当蛋白到达了凝胶中心，就限制了分子质量受阻，蛋白质相对分子质量可通过计算蛋白移动距离和所应用的电压来测定出来。
3. 分子质量分析法：是利用质谱仪进行精确定性分析，一般通过容积、重量或者电离质谱来确定蛋白分子质量。
紫外光谱测定和电泳法的估计精度只能保证两位数，而质谱方法的分析精度可以达到九位数，因此，它是测定蛋白质相对分子质量的重要技术。
这种研究方式试验简单，分析快速，灵敏度高，而且正确率也很高，可以得到相对分子质量较高的精度值。
以上是检测蛋白质相对分子质量的常用方法，它们不但具有易于操作及准确性高等优点，而且可以获得更加精确的分子质量信息。
因此，有效应用这些技术有助于获得对蛋白质相对分子质量精确、可靠的衡量。
蛋白的原核表达及纯化方法
蛋白的原核表达及纯化方法小伙伴们！今天咱就来唠唠蛋白的原核表达及纯化这事儿。
这在生物实验领域可是个挺重要的活儿呢，好多研究都得靠它。
下面咱就细细说说具体的方法哈。
一、原核表达系统的选择。
咱得先挑个合适的原核表达系统呀。
常用的原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统啥的。
大肠杆菌表达系统那可是相当受欢迎的，为啥呢？因为它培养简单、生长快、成本还低。
就像咱平常过日子，当然得选那种既方便又实惠的方式啦。
不过呢，不同的蛋白可能对表达系统有不同的要求，所以得根据咱要表达的蛋白的特点来选哦。
比如说，有些蛋白可能在大肠杆菌里表达会形成包涵体，这时候可能就得考虑其他系统啦。
二、表达载体的构建。
选好了表达系统，接下来就得构建表达载体啦。
这就好比给蛋白搭个“房子”，让它能在里面好好“住”下来，顺利表达。
一般咱得先把目的基因克隆到合适的载体上。
这个过程就需要用到一些酶啦，像限制性内切酶，它就像一把“小剪刀”，能把基因片段给剪下来，然后再用DNA连接酶把它接到载体上，就像用胶水把东西粘起来一样。
而且呀，载体上还得有一些调控元件，像启动子、终止子这些，它们就像是房子里的各种设施，能保证蛋白的表达顺利进行。
启动子能启动基因的转录，终止子能让转录在合适的地方停下来，不然就乱套啦。
三、蛋白的诱导表达。
载体构建好了，就该让蛋白开始表达啦。
这时候就需要诱导啦。
不同的表达系统诱导的方法不太一样哦。
就拿大肠杆菌来说吧，常用的诱导剂是IPTG。
当咱把IPTG 加到培养体系里的时候，就像是给蛋白发了个“信号”，告诉它：“该开始干活啦！”然后蛋白就会按照咱设计的路线开始表达啦。
不过呢，诱导的条件也得好好摸索一下，像诱导的时间、诱导剂的浓度这些，都可能会影响蛋白的表达量和活性哦。
要是诱导时间太短，蛋白可能还没表达够呢；要是时间太长，又可能会对蛋白的质量有影响。
四、蛋白的纯化。
蛋白表达出来了，可里面还混着好多其他乱七八糟的东西呢，这时候就得把蛋白给纯化出来啦。
不同定标方法测定前白蛋白结果的比较
不同定标方法测定前白蛋白结果的比较
曹永坚;冯妙芙;易四维
【期刊名称】《实用医学杂志》
【年(卷),期】2009(0)10
【摘要】目的:探讨用两点定标方法与多点定标方法测定前白蛋白的差异.方法:选用目前应用范围较广的一种试剂,进行两点定标与多点定标,同时检测60份样品和不同浓度的标准血清,进行相关性和准确性的比较,结果采用t检验和相对偏差进行统计分析.结果:两点定标结果与多点定标结果相比明显偏低:低值、中值和高值分别偏低9.2%、1.7%和11.6%.两点定标方式定标,浓度≤100 mg/L时,结果可偏低33.1%,浓度在101～400mg/L时,结果相差3.7%,浓度>400 mg/L时,结果相差11.7%.而多点定标方式结果准确,相对偏差CV=2.7%,两者相差CV=12.1%.结论:不同定标方式的测试结果差异有显著性,多点定标法测定前白蛋白比两点定标法准确,应提倡使用.
【总页数】2页(P1691-1692)
【作者】曹永坚;冯妙芙;易四维
【作者单位】510370,广州市,广东省中医院芳村分院检验科;510120,广州市,广东省中医院检验科;510370,广州市,广东省中医院芳村分院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R4
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蛋白表达不同检测方式的比较和分析
免疫组化法(immunohistochemistry)
原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
蛋白免疫印迹( Western Blot)
原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC 膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
ELISA检测
原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
3种蛋白检测水平的比较
各组检测方法之间的差别及特点：
以下是western和ELISA的区别：
1. western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦
2. ELISA可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
3. WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到
4. ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响
5. WB所检测的一般是抗原，而ELISA抗原抗体都可以检测。
6. WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而ELISA无能为力。
7. WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而ELISA不行。
8. WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。
ELISA一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
9. WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等缺点在ELISA上表现得要好得多。
《HMGB1、MMP-9和CEA在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义》
中英文实例分析：
一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）
二、western blotting
三、ELISA
pone.0130839.pd
f
《Implication of Leptin-Signaling Proteins and Epstein-Barr Virus in Gastric Carcinomas》一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）
二、western blotting
elisa.pdf
effect of varying doses of tamoxifen on ovarian histopathology, serum VegF, and endothelin 1 levels in ovarian hyperstimulation syndrome: an experimental study
三、ELISA。