高中生物《大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙教版选修1
高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1(最新整理)
实验一大肠杆菌的培养和分离1。
培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质.2..本实验用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,用LB固体培养基分离大肠杆菌。
3。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物;而灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
4.。
实验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高一、微生物1．概念：微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。
二、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质.2．营养构成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．培养基的类型(1)按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。
(2）按目的用途分:鉴别培养基、选择培养基。
4．微生物生长对特殊营养物质的要求（1)细菌培养基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置,细菌喜荤.（2)霉菌培养基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可,霉菌喜素。
5．微生物生长对pH的要求细菌要求在中性偏碱（6.5~7。
5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸（5。
0～6.0）的环境中生长。
三、无菌技术1．获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
（2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触. 2．消毒和灭菌(1）概念：[填表］项目方法结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌（2）常用方法：[连线]四、分离细菌的两种方法比较项目划线分离法涂布分离法五、大肠杆菌的培养与分离1．大肠杆菌（1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌.（2)繁殖:以分裂的方式繁殖,分裂速度很快。
高中生物《实验一大肠杆菌的培养和分离》教案1浙科版
浙科版《生物技术实践》（选修1）教学
第一部分微生物的利用
一、课标内容：
进行微生物的分离和培养
二、教学要求
本部分“实验2：分离以尿素为氮源的微生物”与“实验3：观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做1个实验，即“实验1：大肠杆菌的培养和分离”。
2实验建议
在大肠杆菌的培养和分离的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
无菌操作，既包括各种器皿必须是无菌的，也包括各种培养基也必须是无菌的，同时还要求在接种时，不能带有其它杂菌，所以在实验过程中，应时刻让学生保持这种无菌意识。
在菌落和菌种种类的辩认时，要教会学生能大致区分细菌、放线菌与酵母菌菌落，有些用肉眼不能判断的菌落也可借助显微镜进行观察推断。
浙科版选修1实验1大肠杆菌的分离和培养
B）
3、在平板划线操作中，错误的是 ( C ) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C．接种环在平板上的划线位置是随机的 D．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰
在适当的稀释浓度下， 可以培养到相互分开的单菌落
倒平板
制斜面
（五）、 纯化 分离 方法
划线分离法和涂布分离法
（一）划线分离法（接种环）
操作： 用蘸有菌液的接种环（只蘸一次）在固体培养 基表面连续划线。 结果： 接种环上菌液减少 细菌分散 单细菌 细菌间距离加大 单菌落
（二）涂布分离法（玻璃三角刮刀）
操作：先将菌液稀释，然后将0.1ml不同稀 释度的菌液涂布到固体培养基上。 结果：适当的稀释度 单细菌
细
毒
菌
2.微生物包括五类
放线菌 真 菌
原生动物
大肠杆菌
酵母菌
放线菌
链球菌
艾滋病病毒
肺炎双球菌
曲霉菌
菌落 （1）概念 P20第七行
（2）菌落形状、颜色、大小 等特征是鉴定菌种的重要依 据。
培养皿涂布杂菌形成的菌落
实验器材
洗耳球
移液管
移液枪
玻璃刮刀（涂布棒）
接种环
超净工作台
摇床
(一)培养基
(三)无菌操作
•
1、获得纯净培养物的关键: 防止外来杂菌的入侵
•菌
（1）灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 ② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
浙科版高二生物选修1_《大肠杆菌的培养和分离》教案
实验1 大肠杆菌的培养和分离【学习目标】1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的化纤培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
【教学重点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。
【教学难点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读。
【实验教材分析】本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。
本次课程主要包括了本次实验的目的、大肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实验步骤等内容。
在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。
并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。
故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化，同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。
因此，本节课起着承前启后的重要作用。
【学情分析】本节课的教授对象是选了选修1这门课的高二学生，在实验前，学生已经学习过了革兰氏阳性菌与阴性菌的相关知识，本次实验主要是学生在掌握细菌的相关知识后学习大肠杆菌的分离与鉴定，很好地实现了将所学知识与实践相联系，易引起学生的兴趣，学生的积极性较高，从而有利于实验教学的展开。
但学生对于实验原理、实验方法和实验技术等方面还不熟悉，需要教师对此进行详细的讲解，在讲解过程中注意运用适宜的教学方法，引导学生将所学知识运用到具体的实验实践中。
同时，教师需严格要求学生在操作上符合实验室规范，将实验操作过程中的注意事项对学生进行逐一说明，保证实验的有序性与安全性。
【实验教学过程】（一）创设情境，导入新知【教师活动】教师展示饮用水净化、消毒灭菌、检测、出品的简略过程，抛出在检测这一过程中主要是以某一微生物作为指标来进行检测，从而引出本次实验的材料—大肠杆菌（展示图片）。
浙科版选修1学案
选修1 《生物技术实践》实验1 大肠杆菌的培养和分离1、细菌:细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核。
有一大型环状DNA分子（拟核）和多个小型环状DNA(质粒)，以分裂（二分裂）的方式繁殖。
大肠杆菌是: 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，代谢类型: 异养兼性厌氧型。
( 菌体:指细菌细胞单菌落:单个细菌细胞在固体培养基形成的细胞群。
芽孢:细菌细胞休眠体) 2、培养基（1)培养基的基本成分：水、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)、无机盐。
（2）培养基的类型(按物理形态):①LB液体培养基(用于菌种的扩大培养) ②LB固体培养基（用于分离菌种和保存菌种）（3）培养条件: 适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等（4）培养基的配置:“细菌喜荤，霉菌喜素”①细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH为中性偏碱；②霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可，PH为中性偏酸。
(5)培养条件:适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等3、无菌操作(1)目的要求:防止所利用的微生物被其他微生物(杂菌)污染(2) 无菌操作过程:①各种器皿和培养基必须是无菌的，用高压蒸气锅灭菌[121 0C，1kg/cm2，15min] 灭菌；接种环也必须无菌,可以灼烧灭菌②转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无杂菌污染，在超净台（打开紫外灯和过滤风，灭菌30min）上酒精灯火焰旁操作。
转移时培养基不能沾在皿壁和瓶口上。
③棉花塞的制作标准:棉塞周围没有皱褶和缝隙，容易拔出，但手提棉塞时，三角瓶或试管不能落下来。
其中棉花用非脱脂棉（为什么?）。
④实验中使用过的器皿、培养基都需经过灭菌后才能清洗。
4、细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。
这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
(1) 划线分离用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上连续划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1
高中生物第一部分《实验一大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1微生物的利用大肠杆菌的培养和分离学案一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2和实验3不作要求。
三、知识要点：1、微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2、细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3、培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
有的还需要在培养基中加入特殊营养物质。
4、在培养微生物时，必须进行。
高中生物 全一册学案浙科版选修1【共13套62页】
本套资源目录高中生物实验10泡菜的腌制和亚硝酸的测定学案浙科版选修1高中生物实验11植物的组织培养学案浙科版选修1高中生物实验12乳酸脱氢酶同工酶的分离学案浙科版选修1高中生物实验13dna片段的pcr扩增学案浙科版选修1高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修1高中生物实验2分离以尿素为氮源的微生物学案浙科版选修1高中生物实验3观察土壤中能水解纤维素的微生物学案浙科版选修1高中生物实验4果汁中的果胶和果胶酶学案浙科版选修1高中生物实验5加酶洗衣粉的使用条件和效果学案浙科版选修1高中生物实验6α_淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测学案浙科版选修1高中生物实验7用蒸气蒸馏法从芳香植物中提全油学案浙科版选修1高中生物实验8果酒及果醋的制作学案浙科版选修1高中生物实验9腐乳的制作学案浙科版选修1泡菜的腌制和亚硝酸的测定1．乳酸菌的特点是怎样的？乳酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。
乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。
常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。
乳酸杆菌常用于生产酸奶。
2．亚硝酸盐与人体健康有什么关系？亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。
自然界中，亚硝酸盐分布广泛。
据统计，蔬菜中亚硝酸盐的平均含量约为4 mg/kg，咸菜中亚硝酸盐的平均含量在7 mg/kg以上，而豆粉中的平均含量可达 10 mg/kg。
膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.3～0.5 g时，会引起中毒；当摄入总量达到3 g时，会引起死亡。
我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过30 mg/kg，酱腌菜中不超过20 mg/kg，而婴儿奶粉中不得超过2 mg/kg。
膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿排出，只有在特定的条件下(适宜的pH、温度和一定的微生物作用)，才会转变成致癌物——亚硝胺。
浙科高中生物选修一实验大肠杆菌的培养和分离
平板划线
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大肠杆菌的纯化方法：
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稀释涂布平板法
平板划线法
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培养基组成 葡萄糖 10g 蛋白质 5g NaCl 15g H2O 定溶1000 mL
维生素 0.1ml
主要营养物质
碳源
氮源 无机盐 氢元素、氧元素
与生长有关
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不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
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资料： 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造
2018-2019学年浙科版选修1 第一部分 第1课时 大肠杆菌的培养和分离 学案
探究 2——归纳概括
2018-2019 学年
1．培养基的成分
营养物质
定义
作用
主要来源
碳源
能提供碳元素的物质
构成生物体的细胞物质和 一些代谢产物，有些也是 异养生物的能源物质
无机碳源：CO2、 NaHCO3 等；有机碳 源：糖类、脂肪酸、 石油等
氮源
能提供氮元素的物质
合成蛋白质、核酸及含氮 的代谢产物
常用方法
消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭
消毒
灭菌
较为温和
强烈
煮沸消毒、化学药剂消 灼烧灭菌、干热灭菌、
毒、紫外线消毒
高压蒸汽灭菌
部分生活状态的微生物
全部微生物
不能
能
2．几种消毒和灭菌方法及其适用范围
类型
适用范围
操作方法
煮沸 消毒法
日常生活
100 ℃煮沸 5～6 min
消毒 方法
巴氏 消毒法
化学 药剂
分，就不能用此方法，A 项错误；超净工作台或接种箱用紫外灯灭菌 30 min，同时还需打开
过滤风，C 项错误；灭菌后的培养基、器具不一定达到了完全无菌，而且要防止二次污染，
D 项错误。
高中生物选修1生物技术实践学案大肠杆菌的培养和分离
实验1大肠杆菌的培养和分离1．消毒和灭菌的常用方法举例？2．3．2．划线分离法和涂布分离法的优缺点？4．3．划线分离法中，第一次灼烧、之后每次划线前灼烧和划线结束后灼烧的目的？班级___________ 姓名___________·题组训练1．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（）A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上2．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
回答下列问题。
（1）该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为个。
（2）该小组采用划线分离法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌。
在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。
这样做的目的是 .。
（3）示意图A和B中，表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。
3．利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。
但现有野生菌株对淀粉转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。
（1）实验步骤：①配制含有玉米淀粉的（固体、液体）培养基。
②在上的酒精灯火焰旁，将接种至已灭菌的平板上。
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行诱变。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和在生物技术中的重要性。
2、掌握大肠杆菌培养的基本原理和操作方法。
3、学会大肠杆菌分离的技术和方法。
4、培养无菌操作的意识和实验技能。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌培养的条件和培养基的制备。
（2）无菌操作技术在大肠杆菌培养和分离中的应用。
2、难点（1）大肠杆菌的分离和纯化方法。
（2）如何确保实验操作的无菌环境。
三、知识准备1、微生物的基本概念微生物是指肉眼难以看清，需要借助显微镜才能观察到的微小生物，包括细菌、真菌、病毒等。
2、细菌的结构和生理特点细菌通常具有细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等结构。
其生理活动包括营养摄取、代谢、生长和繁殖等。
3、培养基的类型和作用培养基是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
常见的培养基类型有固体培养基、液体培养基和半固体培养基等，它们分别适用于不同的实验目的。
四、学习过程1、大肠杆菌的培养（1）培养基的制备首先，准备LB培养基（LuriaBertani培养基）的成分，包括胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
按照一定的比例将这些成分溶解在蒸馏水中，调节pH值至适当范围。
然后，将培养基进行高压蒸汽灭菌，以杀灭其中的微生物和芽孢。
（2）接种在无菌环境下，使用无菌接种环或移液器，从保存的大肠杆菌菌种中吸取少量菌液，接入已灭菌的液体培养基中。
接种过程要迅速，避免杂菌污染。
（3）培养条件将接种后的培养基置于恒温培养箱中，在37℃下进行振荡培养。
振荡培养可以增加培养基中的氧气含量，促进大肠杆菌的生长。
2、大肠杆菌的分离（1）平板划线法在无菌操作台上，将已灭菌的固体培养基倒入培养皿中，待其冷却凝固。
用接种环蘸取少量大肠杆菌培养液，在固体培养基表面进行连续划线。
通过多次划线，将细菌逐步稀释，最终在培养基表面形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法首先，将大肠杆菌培养液进行一系列梯度稀释。
然后，取适量不同稀释度的菌液，分别涂布在固体培养基表面。
高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离教案浙科版选修1
实验1 大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌1．大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
2．在肠道中，大肠杆菌一般对人无害，但也有一些菌株可以侵袭肠黏膜并产生毒素，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。
3．大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。
二、实验内容1．本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
2．本实验用LB液体培养基(通用的细菌培养基)扩大培养大肠杆菌。
培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上便会形成一个个单独的菌落。
三、细菌的培养和分离1．细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。
人们在培养细菌时，一般用接种环转移带菌的培养物。
接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，再操作。
2．细菌的分离(1)划线分离法：在液体培养基中，只要接种后培养8 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。
可用接种环蘸菌液在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
在固体培养基培养10～20 h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。
如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
这种方法也可用于分离细菌，将污染的杂菌除去。
接种环在取菌种前和划线前都要灼烧、而后都要冷却、操作完毕后又要灼烧的原因是什么？【提示】取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍，然后取0.1 mL不同稀释度的稀释菌液加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件11 浙科选修1
平板划线接种
灼烧接种环
冷却
蘸取菌液
灼烧接种环冷却来自灼烧接种环 灼烧接种环
冷却 冷却
划线 （第一区域）
划线 （第二区域）
划线 （第三区域）
划线 （第四区域）
灼烧接种环
冷却
平板倒置放置培养
划线 （第五区域）
灼烧接种环
(1)常用消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯 气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）
(2)常用灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
作用
主要作能源物质 合成含N类化合物
调节渗透压等
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类)
N2，NH3，铵，硝酸 盐
尿素，牛肉膏，蛋白 胨
水 生长因子
调节促生长
维生素，AA，碱基等
无菌技术
• 消毒：较为温和的方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢
• 灭菌：强烈，所有，完全无菌
• 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通 也是最重要的技术。
步骤一：制备LB培养基(液)
• 称量-计算-溶化-灭菌-倒平板
• 灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高 压蒸汽灭菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
步骤一：制备LB培养基(液)
• 倒平板
倒平板过程总结
• 紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 • 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 • 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 • 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和培养条件。
2、掌握大肠杆菌培养和分离的基本操作技术。
3、理解无菌操作的重要性，并能正确进行无菌操作。
4、培养观察、分析和解决问题的能力。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌的培养方法和操作步骤。
（2）分离大肠杆菌的原理和技术。
2、难点（1）无菌操作技术的规范和熟练掌握。
（2）如何确保培养和分离过程中不被杂菌污染。
三、知识链接1、微生物的特点微生物具有个体微小、结构简单、生长繁殖快、代谢类型多样等特点。
2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
（2）按化学成分可分为天然培养基和合成培养基。
3、无菌技术包括消毒和灭菌，消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
四、学习过程1、实验准备（1）材料和用具准备LB 液体培养基、LB 固体培养基、大肠杆菌菌种、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台等。
（2）超净工作台的消毒打开超净工作台的紫外灯和风机，照射和吹风 20 30 分钟，对工作台进行消毒。
2、大肠杆菌的扩大培养（1）在无菌条件下，用接种环从保存大肠杆菌的斜面培养基上挑取少量菌种，接入 LB 液体培养基中。
（2）将接种后的液体培养基置于 37℃恒温摇床中，振荡培养 12 小时左右，使大肠杆菌大量繁殖。
3、大肠杆菌的分离（1）制备固体培养基在 LB 液体培养基中加入琼脂，加热融化后，倒入培养皿中，制成固体培养基。
待培养基冷却凝固后，将培养皿倒置。
（2）平板划线法分离大肠杆菌①点燃酒精灯，将接种环在火焰上灼烧灭菌。
②冷却接种环后，蘸取少量培养后的大肠杆菌菌液。
③在固体培养基表面进行连续划线，将菌液逐步稀释，形成单个菌落。
（3）培养和观察将划线后的培养皿倒置，放入 37℃恒温培养箱中培养 12 24 小时。
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高中生物《大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙
教版选修1
一、大肠杆菌细菌是单细胞的原核生物。
细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。
细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。
由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。
革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。
大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。
在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。
大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。
二、培养基配置微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。
有的化合物既是碳源又是氮源、能源。
生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物可以自身合成。
在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。
以下为本实验中培养基配置步骤：
1、称量：准确称取各成分。
蛋白胨0、5g，酵母提取物0、25g，氯化钠0、5g，加水50ml。
配置LB固体培养基时还需加1g 琼脂。
2、溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。
配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
3、调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4、灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。
将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
5、倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
三、灭菌和消毒
1、无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；
③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2、消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。
3、灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
4、比较消毒和灭菌：比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能
5、注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。
灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的
液体暴沸；③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落了。
四、细菌的分离
1、划线分离法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。
划线到最后，可使细菌间的距离加大。
在培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。
如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
其操作步骤是：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。
在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第1次平行划线3～5条，转动培养皿约70角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。
划线时，接种针应与平板表面成30角左右。
不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。
划线完毕后，盖上皿盖，
倒置于恒温箱培养。
取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
2、涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－5 ～10－7之间，然后取0、1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合。
将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。
划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。
细菌的两种分离法各有优点,都可采用。
五、菌落和菌种种类的辨认单个细菌用肉眼是看不见的，但是，当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、颜色、光泽度、透明度等方面具有一定的特征。
细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的，有黏稠性，多数透明或半透明，但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的；放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子，所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，由于菌丝和孢子有多种色素，所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不
同的颜色，菌落不易用接种环挑动；酵母菌落类似于细菌菌落，
表面光滑而湿润，有黏稠性但大多呈乳白色，少数呈红色。
如果
菌落无法辨认，只有借助于显微镜观察。
在显微镜下细菌一般为
杆状、球状和弧状，直径都在1um左右；放线菌菌丝是没有横隔
的分枝丝状体，气生菌丝顶端分裂成串状孢子，孢子丝有直线
形、螺旋状、弯曲式或轮生等；酵母有卵圆型或丝状，但卵圆形
细胞大于细菌，直径约5~7um。
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