免疫胶体金层析法hcg

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hcg胶体金免疫层析法

hcg胶体金免疫层析法英文回答：Human Chorionic Gonadotropin (hCG) Colloidal Gold Immunochromatographic Assay.Principle:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a rapid, qualitative membrane-based immunoassay for the detection of hCG in urine or serum specimens. The test is based on the principle of competitive immunochromatography.A monoclonal antibody specific to hCG is conjugated to colloidal gold particles. When hCG is present in the specimen, it binds to the colloidal gold-labeled antibodies, forming antigen-antibody complexes. These complexes then migrate along the nitrocellulose membrane by capillary action.As the complexes pass through the membrane, theyencounter a second monoclonal antibody specific to hCG immobilized on the test line. The second antibody binds to the antigen-antibody complexes, forming a sandwich complex. The presence of hCG in the specimen is indicated by the appearance of a colored band at the test line.Materials:hCG colloidal gold immunochromatographic test device.Urine or serum specimen.Sample diluent.Test tube or cup.Procedure:1. Remove the test device from its packaging and place it on a flat surface.2. Collect a urine or serum specimen.3. Add 2 drops of the specimen to the sample well on the test device.4. Add 2 drops of sample diluent to the sample well.5. Read the results within 5-10 minutes.Interpretation of Results:Positive Result:Two colored bands appear: one at the control line (C) and one at the test line (T). This indicates that hCG is present in the specimen.Negative Result:Only one colored band appears at the control line (C). This indicates that hCG is not present in the specimen.Invalid Result:No colored bands appear, or a colored band appears only at the test line (T). This indicates that the test is invalid and should be repeated.Limitations:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a qualitative test and cannot be used to determine the concentration of hCG in a specimen.The test may not detect all cases of pregnancy. A negative result does not rule out pregnancy. If pregnancyis suspected, a quantitative hCG blood test should be performed.The test may be affected by certain medications or medical conditions.中文回答：人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 胶体金免疫层析法。

人绒毛膜促性腺激素检测试纸(胶体金免疫层析法)产品技术要求宝瑞源

人绒毛膜促性腺激素检测试纸（胶体金免疫层析法）
适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。

1.1 包装规格
条型：1人份/盒、2人份/盒、3人份/盒、5人份/盒、10人份/盒、50人份/盒、100人份/盒；
卡型：1人份/盒、2人份/盒、3人份/盒、5人份/盒、10人份/盒、25人份/盒、50人份/盒；
笔型：1人份/盒、2人份/盒、3人份/盒、5人份/盒、10人份/盒、25人份/盒；卡型+条型：2人份/盒；
笔型+条型：2人份/盒。

1.2 划分说明
条型：膜条加样端、吸收端贴有胶带；
卡型：膜条装入塑料卡中；
笔型：膜条装入塑料笔中。

2.1 最低检出限
应不高于25mIU/ml。

2.2 特异性
2.2.1 阴性特异性：分别用含500mIU/mL人促黄体生成素（hLH）、1000mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（HCG）液进行检测，结果均为阴性。

2.2.2 阳性特异性：分别用含500mIU/mL人促黄体生成素（hLH）、1000mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的25mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（HCG）液进行检测，结果均为阳性。

2.3 重复性
取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25mIU/mL的HCG液测定，反应结果一致。

2.4 批间差
取三个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，三个批号测试条的反应结果一致。

胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素-上海师范大学学报

第41卷第3期上海师范大学学报（自然科学版）Vol．41，No．3 2012年6月Journal of Shanghai Normal University（Natural Sciences）Jun．，2012胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素杨秀梅，邢国杰，徐宽，沈鹤柏，朱龙章*（上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234）摘要：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法，建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测，灵敏度可达25mIU/mL，线性范围25 10000mIU/mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应，所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法，能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素，在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．关键词：HCG；胶体金；免疫层析；定量检测中图分类号：O648文献标识码：A文章编号：1000-5137（2012）03-0274-060前言人绒毛膜促性腺激素（human chorionicgonadotropin，HCG）是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素［1］．HCG的产生与滋养细胞的生长状况和数量有直接关系［2］，正常发育的绒毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不断地快速上升，每48h上升66%以上．如果HCG每2d增加的量＞66%，可以诊断为宫内妊娠；而如果增加的量＜66%，则异位妊娠或宫内孕发育不良的可能性很大［3］．HCG是妊娠时所分泌的特异性激素，可用于协助异位妊娠早期未破裂的诊断．目前较为明确的诊断方法为B超，但是在怀孕5周内B超难以发现胚芽的影像，所以寻找早期诊断异位妊娠的方法显得尤为重要．因此，本文作者试图探讨血清人绒毛膜促性腺激素检测在异位妊娠早期诊断的价值．胶体金免疫层析方法对人绒毛膜促性腺激素的定量检测的研究目前只达到半定量的水平，而本研究则实现了对人绒毛膜促性腺激素的定量检测．这弥补了胶体金免疫层析方法中无法定量的缺陷，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．目前现有的胶体金免疫层析试条只能定性判断是否怀孕，而先兆流产、异位妊娠、药物引流、某些妇产科疾病、术后治疗过程等都需要对HCG指标变化进行跟踪及对HCG进行定量检测［4－5］．孕卵在子宫腔以外的任何部位着床发育，均称异位妊娠［6］．异位妊娠是妇产科常见急腹症之一，当输卵管妊娠流产或破裂时可引起腹腔内严重出血，如不能及时就诊、处理可危及生命［7］．HCG动态定量检测可作为异位妊娠随访监控指标，对早期异位妊娠的诊断具有重要意义［8］．本研究在常规早孕试纸定性检测的基础上，对原有胶体金免疫层析技术进行改进，实现了HCG的定量检测，对异位妊娠的早期诊断及过程监控具有重要的影响．1材料1．1主要材料HCG单克隆抗体、羊抗鼠二抗（上海捷宁生物科技有限公司）；硝酸纤维素膜、吸水纸、玻璃纤维购收稿日期：2011-12-21作者简介：杨秀梅（1985－），女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；朱龙章（1956－），男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．*通信作者第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素于美国Millipore公司；柠檬酸三钠（上海青析化工有限公司）；氯金酸（国药集团化学试剂有限公司）．1．2主要仪器HM3010单维往复划膜仪；AllegraTM64R台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；金标分析仪（中国科学院上海光学精密机械研究所）．2试纸条的制备方法2．1胶体金的制备用柠檬酸三钠还原法［9］制备20nm胶体金．向洗净的锥形瓶中加入98mL的超纯水，再加入1%的氯金酸2mL．将锥形瓶放在恒温搅拌器上加热至沸腾，维持加热状态并加入1%柠檬酸三钠2mL．继续煮沸10min，观察颜色变化，冷却至室温后置于4ħ冰箱待用．2．2结合垫的制备取1mL的胶体金用0．1mol/L的K2CO3溶液调节pH值到8．0 9．0，加入36μgα－HCG抗体，混匀涡旋并静置10min，加入50μL BSA（10%）溶液反应10min后，用离心机在13000r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀物用硼酸盐缓冲溶液重悬至原体积后，再次离心弃去上清液，浓缩至原体积的1/10，4ħ保存．选用玻璃纤维作为结合垫材料，将上述制备的胶体金α－HCG抗体复合物重新分散于0．01mol/L PBS（pH=7．4，含5%蔗糖，1%BSA）中，并喷于结合垫上，37ħ烘干2h．2．3样品垫的制备选用玻璃纤维素膜作为样品垫材料，将其放入样品垫处理液（0．01mol/L PBS（pH=7．4），含有1% BSA，0．1%Triton X－100）中浸泡后，37ħ烘干2h备用．2．4硝酸纤维素膜（NC膜）的制备用划膜仪在NC膜的不同位置喷点α－HCG单抗及羊抗鼠IgG抗体，自下至上依次为质控线（C 线）、检测线（T线），37ħ烘干2h备用．2．5试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC底板上，并切成4mm宽的试纸条装壳．3实验结果3．1胶体金的表征3．1．1胶体金的紫外扫描对2．1．1所制备的20nm的胶体金进行紫外扫描，测定结果见图1，从图1上可看出所制备的20nm的胶体金的最大吸收峰位于520nm处，这与文献［10］报道的一致，符合实验的要求．图120nm胶体金的紫外—可见扫描曲线572上海师范大学学报（自然科学版）2012年3．1．2用Zeta 电位分析仪对所制得的胶体金进行Zeta 电位、粒径测定对所制备的20nm 胶体金进行Zeta 电位、粒径的测定．测定结果见图2和图3．可以看出，所制备的胶体金的平均Zeta 电位是－25．0mV （图2），胶体金颗粒的平均粒径大约为20．01nm （图3）．图2胶体金的粒径分布曲线图3胶体金的Zeta 电位扫描曲线3．1．3用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描对所制备的20nm 的胶体金用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描，扫描结果见下图4，从图4中可以看出胶体金颗粒粒径在20nm 左右，而且粒径分布比较均一，形貌接近于球形，符合实验的要求．图420nm 胶体金的透射电镜图3．2胶体金免疫层析试纸条的构造图将吸水纸、NC 膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC 底板上，并切成4cm 宽的试纸条，胶体金免疫层析试纸条的构造见图5．图5胶体金免疫层析试纸条构造图3．3检测结果的判读3．3．1定性检测将待测样品滴加到检测卡的加样孔中，静置15min ，观察结果．质控线和检测线均出现红色为阳性，仅质控线出现红色为阴性，质控线不显色为无效．3．3．2定量检测判定将显色后的试纸条放入金标分析仪中进行扫描，读取T /C 比值，大于判定值为阳性［11］．672第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素3．3．3定量检测重复性检测6个浓度的HCG 样品，每个浓度检测10次，并用金标分析仪扫描读取信号T /C 值．每个浓度样品10次检测的T /C 值的标准差与平均值的比值即为变异系数．3．4直观检测灵敏度评价将HCG 样品用样品处理液稀释成10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL．如图1所示500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL 为强阳性反应；25、100mIU /mL 为弱阳性反应；10mIU /mL 无阳性反应；即肉眼可观察到的最低浓度是25mIU /mL （图6）．1阴性对照；2 10HCG 样品的浓度：10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL图6胶体金试免疫层析纸条检测HCG 结果3．5定量检测结果3．5．1HCG 标准曲线测定用金标分析仪检测不同浓度的HCG 样品，每个浓度检测3次，取3次T /C 比值的平均值．在最优实验条件下，依据检测体系中待测物浓度与金标分析仪读值T /C 比值在一定条件下呈线性关系的原理，以HCG 样品的浓度为横坐标，金标分析仪读值T /C 比值为纵坐标作图，建立胶体金检测标准曲线．当HCG 样品浓度为25 10000mIU /mL 时，HCG 的浓度与其金标分析仪读值T /C 比值之间呈良好的线性关系（图7），线性回归方程为y =0．0014x +0．6901，相关系数R 2=0．9977，线性良好．图7胶体金免疫层析试纸条检测HCG 标准品系统拟合工作曲线3．5．2试纸条检测卡重复性结果通过实验发现，同一批次的该试纸的重复性良好，可达到98%；不同批次的试纸条的重复性也可达到97%，假阳性率和假阴性率均为0．3．5．3试纸条检测卡稳定性结果经实验验证表明，该试纸条检测卡在4ħ和20ħ条件下，可保存6个月，在37ħ条件下可保存3个星期，检测结果均没有发生变化．3．6试纸条的特异性配制人促黄体生成素（hLH ）、人促甲状腺激素（hTSH ）、人卵泡刺激素（hFSH ）的抗原溶液，以处理液作为空白对照，用HCG 免疫层析试纸检测．结果显示，金标分析仪对其他常见的干扰物均未检出，说明此试纸无交叉反应现象（图8）．772上海师范大学学报（自然科学版）2012年1．空白；2．hLH；3．hTSH；4．hFSH；5．HCG图8检测结果3．7试纸的精密性取3种浓度的HCG标准品（1000、50000、80000mIU/mL）按检测方法平行测定10次，所得结果计算变异系数（CV值），分别为9．79%、8．75%、9．62%．3．8临床检测结果用试纸条检测HCG临床血清样本20份．每个浓度检测3次，取其平均值作标准曲线．定量检测结果如图9所示，得到的相关性曲线方程为y=0．0009x+1．6188，R2=0．9689，线性良好．图920例HCG血清样本检测结果4结论（1）定量检测HCG的金标免疫层析方法的建立．本研究建立了一种快速的定量检测HCG的金标免疫层析方法，此方法具有法操作简单，快速，灵敏度高等特点，克服了传统方法的很多缺点，本方法最具创新的地方就是弥补了纸层析的方法中无法定量的缺陷，利用免疫层析方法定量检测HCG的动态变化从而达到检测和用于术后复查的目的，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．（2）HCG定量检测试纸条的灵敏度和线性范围．研制出的HCG定量检测试纸条的检测灵敏度为25mIU/mL，线性范围：25 10000mIU/mL；与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激（hTSH）、人卵泡刺激素（hFSH）没有交叉反应，特异性较好；精密度符合临床应用要求，具有实际应用价值．（3）HCG定量检测试纸条的优势．本研究建立了HCG的标准工作曲线，在线性范围内可以对HCG 样品进行定量检测，经检测发现HCG的浓度与T/C比值具有良好的线性关系．相比ELISA进行定量检测时存在检测时间较长的缺点，本方法可以在15min内完成一定范围内的定量检测，时间缩短3 4h，同时在准确性、重复性、稳定性等方面均比ELISA方法更具优势．872972第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素参考文献：［1］王蜜霞，刘军涛，刘儒平，等．基于化学发光磁酶免疫的HCG检测系统研究［J］．仪器仪表学报，2010，31（2）：312－316．［2］阮雅文．血清β－HCG和P联检在异位妊娠辅助诊断的价值［J］．放射免疫学杂志，2011，24（4）：466－467．［3］CONDOUS G，KIRK E，VAN C B，et al．Failing pregnancies of un-known location：a prospective evaluation of the human chorionic gonadotrophin ratio［J］．BJOG，2006，113：521－527．［4］刘军涛，郭宗慧，刘春秀，等．免疫层析试条量化检测系统研究［J］．微纳电子技术，2007，7（8）：379－382．［5］康浴霞．异位妊娠的早期实验室诊断现状［J］．内蒙古民族大学学报，2009，15（2）：123－124．［6］张平花．浅谈异位妊娠的病因及护理对策［J］．价值工程，2011，17（3）：306－308．［7］STEPHAN L，MPSTAFA A．Laparoscopic treatment of ectopic pregnancies：a one hundred cases study European Journal of Obstetrics＆Gynecology and Reproductive Biology［J］．Clinica Chimica Acta，1991，41（3）：187－190．［8］FERRIGNO D，BACCHEN G．Surgical treatment of ectopic prehnancy Best Practice＆Research Clinical Obstetrics＆Gy-naecology［J］．Clinica Biochemistry，2009，23（4）：519－527．［9］贺昕，熊晓东，梁敬博，等．免疫检测用纳米胶体金的制备及粒径控制［J］．稀有金属，2005，29（4）：471－474．［10］STEPHAN L，MOSTAFA A E．Size and temperature dependence of the plasmon absorption of colloidal gold nanoparticles ［J］．Phys Chem B，1999，103（21）：4212－4217．［11］聂聪，王静，孙肖红，等．胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素［J］．军事医学科学院院刊，2009，33（6）：546－549．Quantitative detection of human chorionicgonadotrophin using colloid gold immunochromatographic assay YANG Xiu-mei，XING Guo-jie，XU Kuan，SHEN He-bai，ZHU Long-zhang*（College of Life and Environment Sciences，Shanghai Normal University，Shanghai200234，China）Abstract：Colloidal gold was prepared through reducing reaction of gold ions by sodium citrate．The rapid detection method was established with double-antibody sandwich assay．A rapid and quantitative detection method for human chorionic gonadotrophin u-sing colloid gold immunochromatographic assay was developed，which could accomplish qualitative detection in15min．The sensi-tivity was up to25mIU/mL．HCG sample with concentration of25mIU/mL to10000mIU/mL was measured．There were no cross-reactions with other hormones，such as hLH，hTSH，Hfsh．The colloidal gold immunochromatographic assay is rapid，specif-ic，sensitive，accurate and suitable for HCG，showing good potential in the early diagnosis of ectopic pregnancy and process moni-toring．Key words：HCG；colloid gold；immunochromatographic assay；quantitative detection（责任编辑：郁慧）。

免疫层析法检测原理分类介绍.

免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16双抗体夹心·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。

妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。

当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。

当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。

该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。

测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。

竞争反应原理·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。

C 线包被羊抗鼠抗体。

当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。

当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。

人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试纸(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinwofu

人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试纸（胶体金免疫层析法）适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。

1.1 产品型号/规格：笔型/卡型/条型。

完整最小包装规格1人份。

1.2 主要组成成分：本品系由包被有抗HCG单克隆抗体及抗鼠IgG的固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗HCG单克隆抗体包被的玻璃纤维膜、样本垫及吸水纸组成。

2.1 物理性状2.1.1 外观：检测HCG试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。

2.1.2 宽度：检测HCG试纸的宽度应≥2.5mm。

2.1.3 移行速度：液体移动速度应不低于10 mm/min。

2.2 最低检测限用HCG国家标准品进行检测，应不高于25 mIU/ml。

2.3 特异性：2.3.1 阴性特异性：分别用含500 mIU/ml人促黄体生成素（hLH）、1000 mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000 μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/ml人绒毛促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。

2.3.2 阳性特异性：分别用含500 mIU/ml hLH、1000 mIU/ml hFSH 和1000 μIU/ml hTSH的25 mIU/ml HCG液中进行检测，结果应均为阳性。

2.4 重复性取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25 mIU/ml的HCG液测定，反应结果一致，显色度均一。

2.5 批间差取3个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，3个批号HCG试纸的检测结果都应符合2.4项的要求。

2.6 稳定性试剂盒4～30℃避光保存，有效期为24个月，对到效期后的试剂盒，分别检测2.1～2.4项，结果应符合各项的要求。

绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金试纸条诊断实验

绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试纸条诊断实验摘要：目的：掌握胶体金试纸条诊断技术的原理，使用方法及结果的判定；掌握绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试剂盒的制作技术。

胶体金是氯金酸(HAuC14)的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠)的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。

本实验所用到的双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法，主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。

关键词：胶体金绒毛膜促性腺激素（HCG）免疫金胶体金试剂盒双抗夹心法绒毛膜促性腺激素（HCG）是胎盘合体滋养层细胞所分泌的一种糖蛋白激素，胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。

其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。

HCG结构中包括α、β两个亚基，α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专用名为β-HCG。

胶体金快速诊断技术具有简捷快速，结果易于判定，特异性好等特点。

该技术操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。

该技术大多用单克隆抗体标记，具有很好的特异性。

胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。

双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体，一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。

另外，还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线）上。

1.仪器和材料1.1可编程切条机切条机是将试纸板快速切割成一定宽度的单份试纸，适合各类不同规格试纸的研发与生产。

其最大的特点是一根一根切下来，可以随时终止并更改宽度。

胶体金免疫层析法测定尿HCG的评价

胶体金免疫层析法测定尿HCG的评价
温怀凯;江明华;郑晓群;干素娥
【期刊名称】《实验与检验医学》
【年(卷),期】2001(019)005
【摘要】目的对胶体金免疫层析测定试条检测随机尿HC-G的结果进行分析与评价.方法采用胶体金免疫层析测定法和放射免疫分析法对120份育龄妇女随机尿HCG进行测定.结果胶体金免疫层析试条对随机尿HCG的检测范围为120.0～427,570mIU/ml,灵敏度为120.0mIU/ml,当尿HCG浓度大于427,570mIU/ml时,该试条出现带现象,与尿中LH无交叉反应.结论胶体金免疫层析试条具有操作简单、快速等优点,与放射免疫法相比,存在灵敏度低和带现象问题,在日常应用中应加以注意.
【总页数】2页(P260-261)
【作者】温怀凯;江明华;郑晓群;干素娥
【作者单位】325027,浙江省温州医学院附属第二医院检验科;325027,浙江省温州医学院附属第二医院检验科;325027,浙江省温州医学院附属第二医院检验
科;325027,浙江省温州医学院附属第二医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.12.446.61
【相关文献】
1.胶体金免疫层析法检测血清β-HCG的性能评价 [J], 林一民;徐旭仁;吴立翔;赖年钰
2.胶体金免疫层析法测定HCG的质量控制 [J], 彭杨水;李格芳;方群;周祎
3.胶体金免疫层析法检测高含量尿HCG呈假阴性1例分析 [J], 李立宏;张树平;陈立峰;赵旭辉
4.胶体金免疫层析法检测尿hCG的质量控制方法探讨 [J], 王梅;康红;李月
5.尿HCG质控品均匀性和稳定性的评价 [J], 丁玮洁;夷峥;王梓蒙;石巍;黄维纲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求zhongbeihecheng

人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒(胶体金免疫层析法）
适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素的水平；
1.1 产品包装规格
1人份/袋、25人份/盒、50人份/盒。

1.2主要组成成分
试剂条内含硝酸纤维素膜（NC膜）的检测区（T）固定有抗β-HCG、α-HCG抗体，质控区（C）固定有羊抗鼠IgG。

每人份内含1条试剂条、干燥剂一袋、采样滴管一个、密封袋一袋。

2．1 外观
2．1．1 外观：
试剂盒表面清洁、密封完整、检测条无破损、无污染。

2．1．2 宽度：
膜条宽4.0mm，允差±0.2 mm。

2．1．3 爬速：
液体移行速度应不低于10mm/min。

2．2检出限
绒毛膜促性腺激素（HCG）最低检出限25mIU/ml。

2．3特异性
2. 3.1阴性特异性：
将质控品浓度为500 mIU/mL hLH、1000mIU/mL hFSH 和1000μIU/mL hTSH分别加入其浓度相当于0mIU/mL HCG 液中进行检测，结果为阴性；
2．3．2 阳性特异性：
将质控品浓度为500 mIU/mL hLH、1000mIU/mL hFSH 和1000μIU/mL hTSH 分别加入其浓度相当于25mIU/mL HCG 液中进行检测，结果为阳性。

2．4重复性
采用同一批号的试剂盒10人份，以浓度为25mIU/ml的HCG液质控品进行测试，显色度均一。

2．5稳定性
在37℃条件下放置21天后，分别检测2.1-2.4项，结果应均符合各项目的要求。

2．6批间差
取3 个批号的测试条，对重复性进行检测，三个批号测试条的结果都应符合2.4 的要求。

HCG胶体金试纸条检测血清HCG的性能评价及其在估算血清HCG水平中的应用

HCG胶体金试纸条检测血清HCG的性能评价及其在估算血清HCG水平中的应用赵艳华;姜朝新;曾令恒;曾庆洋;和仕进【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2013(034)015【摘要】目的评价"早早孕"试纸条(胶体金免疫层析法)检测血清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)的检测性能以及其在估算血清HCG水平中的应用.方法通过与化学发光法比较,从最低检出限、重复性、灵敏度、特异性以及试纸条的显色情况等方面评价大卫"早早孕"试纸条检测性能.结果大卫试纸条检测血清HCG的最低检出限为24.5 mIU/mL,以化学发光检测值10 mIU/mL为诊断界限,大卫试纸的灵敏度为96.43%,特异性为100.0%,诊断准确度为96.92%.试纸条显色方面,大卫试纸条检测线与质控线的显色均匀,显色带边缘清晰,具有明显层次感.结论大卫试纸条具有良好检出低限、重复性、灵敏度、特异性,在显色方面显色均匀,显色带边缘清晰,具有明显层次感,有利于估算血清HCG的含量.【总页数】3页(P2016-2018)【作者】赵艳华;姜朝新;曾令恒;曾庆洋;和仕进【作者单位】广东省佛山市南海区第三人民医院检验科,广东佛山,528244;广东省佛山市南海区第三人民医院检验科,广东佛山,528244;广东省佛山市南海区第三人民医院检验科,广东佛山,528244;广东省佛山市南海区第三人民医院检验科,广东佛山,528244;广东省佛山市南海区第三人民医院检验科,广东佛山,528244【正文语种】中文【相关文献】1.血清HCG、β-HCG和孕酮联合检测在宫外孕诊断中的价值评价 [J], 姜世辉2.HCG胶体金试纸条在估算血清β-HCG水平中的应用 [J], 杨惠元3.胶体金试纸条检测血清β-HCG协同定量 [J], 张梅;杨再国;彭凤翔;张晓霞4.血清HCG与HCG-β检测的临床应用 [J], 彭东;刘学芬;徐可为5.血清HCG、β-HCG和孕酮联合检测在宫外孕诊断中的应用 [J], 肖卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人绒毛膜促性腺激素检测试剂(胶体金免疫层析法)产品技术要求利德曼

人绒毛膜促性腺激素检测试剂（胶体金免疫层析法）适用范围：本产品用于体外定性检测尿液中人绒毛膜促性腺激素1.1组成与规格产品规格及划分见表1备注：中包装在不超出小包装规格型号的前提下，可根据客户需求调整中包装的装量，中包装含试纸（条、卡、笔），尿杯和/或滴管、说明书。

1.2 组要组成本产品的主要成分包括：上样垫：玻璃纤维；胶体金垫：玻璃纤维、金标记抗体（抗HCG-β）；包被C线：0.01mol/L PBS、羊抗鼠；包被T线：0.01mol/L PBS、抗HCG-α；硝酸纤维膜；PVC板；吸样垫。

2.1 物理性状2.1.1 外观检测HCG试剂部分应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染,材料附着牢固。

2.1.2 宽度宽度误差应不超过试纸宽度的-5%与5%之间，但不得小于2.5mm。

2.1.3移行速度液体移行速度应不低于10mm/min。

2.2 最低检出限用HCG标准品检测，应不高于25mIU/mL。

2.3 特异性2.3.1 阴性特异性分别用浓度为500mIU/mL hLH、1000mIU/mL hFSH、1000μIU/mL hTSH的0mIU/mL HCG样品及阴性尿液进行检测，结果应为阴性。

2.3.2 阳性特异性分别用浓度为500mIU/mL hLH、1000mIU/mL hFSH、1000μIU/mL hTSH的25mIU/mLHCG样品进行检测，结果应为阳性。

2.4 重复性取同一批号的试剂10支，用HCG标准品25mIU/mL作检测，反应结果应一致，均为阳性，并且显色一致。

2.5 稳定性试验以下稳定性试验二者选一：2.5.1 效期稳定性：产品在4℃～30℃储存，有效期为12个月，效期满后一个月内检测物理性状、最低检出限、特异性和重复性，结果应符合2.1～2.4的要求。

2.5.2 加速稳定性：产品在37℃可保持20天，在第21天检测物理性状，最低检出限、特异性和重复性，结果应符合2.1～2.4要求。

免疫胶体金层析法测定HCG的原理

免疫胶体金层析法测定HCG的原理
免疫胶体金层析法是一种常用的免疫学测定方法，也常用于人体生物标志物检测中。

该方法能够通过检测人体中某些特定物质的存在与否来判断人体健康状况，其中HCG（人绒毛膜促性腺激素）是其中的一种。

免疫胶体金层析法是一种基于免疫反应原理而建立的测定方法。

其原理是将待测物与特异性抗体结合，在一定条件下，形成免疫复合物。

通过一系列的处理步骤，可使免疫复合物在试纸上产生可视化的颜色变化。

首先，该方法中的抗原是HCG，该物质是一种促进妊娠细胞生长和分化的激素。

HCG主要是由绒毛膜产生的，其主要功能是维持黄体功能，同时在妊娠初期也是确诊妊娠的重要标志物之一。

接下来，针对HCG的抗体需要选择特异性较高的抗体，通常使用在动物体内免疫制备抗体的方法，如小鼠、兔子等。

这些抗体将会对抗原进行特异性识别和结合。

接着将这些抗体与胶体金颗粒进行结合，在适当的条件下，将待测样品滴加到试纸上。

样品中的HCG将与预先固定的抗体结合，形成HCG-抗体-胶体金复合物。

胶体金具有较小的颗粒直径，形成的复合物在分离膜上具有较高的渗透性。

在试纸上，一般会存在两条线，一条是检测线（Test Line），另外一条是对照线
（Control Line）。

当样品中含有HCG时，它会与胶体金复合物竞争与试纸上预先固定的抗体结合。

如果样品中的HCG浓度高于所设定的阈值，就会出现对应的颜色条纹，表明样品中含有HCG。

人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinhuake

人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本产品用于体外半定量检测人尿液样本中人绒毛膜促性腺激素的含量。

1.1 包装规格1人份/盒、2人份/盒、10人份/盒、25人份/盒。

1.2 主要组成本产品由包装规格相应人份的检测试剂盒、干燥剂和尿杯组成。

检测试剂盒由五条不同最低检出量的检测试纸条和塑料卡塞两部分组成，检测试纸主要由PVC塑料底板、样品垫、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水板组合而成，聚酯膜上喷有胶体金标记的鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，硝酸纤维素膜上分别包被了鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。

2.1 物理性状2.1.1 外观应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。

2.1.2 膜条宽度应≥2.5mm。

2.1.3 液体移行速度应≥10mm/min。

2.2 准确性与重复性用本产品检测25mIU/mL（+）、100mIU/mL（++）、600mIU/mL（+++）、2000mIU/mL （++++）和10000mIU/mL（+++++）五种浓度的人绒毛膜促性腺激素质控液，每种浓度的质控液检测≥20次，检测结果与相应质控液标示值相差同向不超过一个量级，不得出现反向相差，阳性质控溶液不得出现阴性结果。

且各浓度检测结果的一致性不低于90%。

2.3 特异性2.3.1 阴性特异性分别用含500mIU/mL 促黄体生成素（hLH）、1000mIU/mL促卵泡生成素（hFSH）和1mIU/mL促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/mL 人绒毛膜促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。

2.3.2 阳性特异性分别用含500mIU/mL 促黄体生成素（hLH）、1000mIU/mL促卵泡生成素（hFSH）和1mIU/mL促甲状腺素（hTSH）的25mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阳性。

2.4 批间差取三个批次的检测试剂盒，分别对准确性与重复性进行检测，三个批次的检测结果应一致且符合2.2的要求。

免疫胶体金层析法hcg

金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而不显色，作为质控对照。
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维素膜为载体，使抗原抗体反应和洗涤在同一渗滤膜上，反应后根据在膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜毛细管作用，使膜一端的液体慢慢向另一渗移，犹如层析
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物
随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
试纸条失效
失效
MAX

人绒毛膜促性腺激素检测试剂(胶体金免疫层析法)注册技术审查指导原则(2016年修订版)

人绒毛膜促性腺激素检测试剂（胶体金免疫层析法）注册技术审查指导原则（2016年修订版）本指导原则旨在指导注册申请人对人绒毛膜促性腺激素检测试剂（胶体金免疫层析法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。

本指导原则是对人绒毛膜促性腺激素检测试剂（胶体金免疫层析法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围本指导原则用于人绒毛膜促性腺激素检测试剂（胶体金免疫层析法）产品注册和相关许可事项变更时注册申报资料的准备及技术审评的参考。

适用于运用双抗体夹心免疫胶体金层析技术实现对人尿液中人绒毛膜促性腺激素进行体外定性检测，不可用于滋养细胞肿瘤的检测。

根据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号）、编码代号为6840，属于二类医疗器械。

本指导原则不适用于以125I等放射性同位素标记、（电）化学发光标记、（时间分辨）荧光标记等标记方法为捕获抗体，以胶乳颗粒、微孔板、管、磁颗粒、微珠和塑料珠等为载体包被抗体，定量测定HCG的免疫分析试剂。

二、注册申报资料要求（一）综述资料人绒毛膜促性腺激素（HCG），是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。

其中α-亚单位为垂体前叶激素所共有；β-亚单位是HCG所特异的。