免疫学检验技术的研究进展

2011年2月第49卷第6期免疫学检验技术的研究进展贺天辉（贵州省德江县民族中医院检验科，贵州德江５６５２００）[摘要]免疫学检验技术在临床医学和科研分析中占有重要作用，其发展也会为其他医学学科提供理论依据和技术支持。

本文主要综述目前免疫学检验技术的应用及研究状况。

[关键词]免疫学检验技术；荧光素标记；酶标记[中图分类号]R392.33[文献标识码]A[文章编号]1673-9701（2011）06-14-02现代免疫学检验技术源于标记技术在免疫学中的应用。

科技的进步推动免疫检验技术的迅速发展，正从单一的免疫诊断技术向单细胞、多基因、微量化等方面发展。

而哮喘、器官和骨髓移植、自身免疫性疾病、变态反应、淋巴细胞和浆细胞的恶性肿瘤以及继发性和原发性免疫缺陷的临床诊断都客观要求免疫学检验技术更加精确，并且能够定量评价临床治疗的有效性。

1研究进展1.1荧光素标记抗体技术1.1.1流式细胞免疫荧光分析技术流式荧光免疫微球分析技术是建立在免疫荧光、免疫微球和流式细胞分析等实验技术基础上的一种新的血清学实验方法。

利用荧光对抗体进行染色可以获得所需信息的原理而研制的流式细胞仪，具有激光技术、电子计算机技术和单克隆抗体技术特点，主要用于细胞表型、细胞内及核膜成分、DNA含量等领域的分析。

它具有在同一试管中同步检测多种靶物质的潜在特征，受到许多临床检验学者的关注。

迄今尚未进入临床应用。

1.1.2四聚体分析技术该技术利用T细胞表面的TCR可与构建的四聚体的表位肽相互作用而精确识别，从而可以高亲和力结合，进而达到检验抗原特异性T细胞的作用[1]。

在此分析技术上衍生的检验方法主要有M HC-肽四聚体流式细胞技术、原位M HC-肽四聚体染色法、M HC-肽四聚体磁分离技术、M HC-肽四聚体ELISA技术、M HC-肽四聚体分子微阵列技术等，主要用于肿瘤抗原特异性T细胞、病毒等的检验。

1.1.3间接免疫荧光技术用作细胞内抗原定位或相应抗体检测的对照标准，主要用于抗病原体、抗核抗体、抗平滑肌抗体等以及其他呼吸道病原体抗体的检测等。

可降低手工操作的误差以及提高标准化检测和自动化程度。

该技术比较成熟，已经可以进行商品开发。

1.2酶标记免疫检验技术1.2.1酶联免疫吸附试验技术理论上只要是某一抗原纯品或相应的抗体，都可以用酶联免疫技术进行检测，因此，可溶性抗原、抗体系统都可以用该技术进行检测，广泛应用于各种微量蛋白（例如细胞因子、小分子激素、肿瘤标志物等）和血源病原体（抗原和抗体）。

酶联免疫吸附试验技术（ELISA）以免疫过氧化物技术为基础，敏感性高，特异性强，操作简便，易于观察，便于大规模检查。

已经用于临床应用。

1.2.2酶联免疫斑点技术酶联免疫斑点技术是一种用于测定B细胞分泌免疫球蛋白、T细胞分泌细胞因子功能的分析技术，是定量酶联免疫吸附试验技术的发展和延伸。

酶联免疫斑点技术的原理是在微孔培养板底部植入抗CK 或Ig的特异性单克隆抗体。

待检测样本进入微孔板内培养时，在有丝分裂原或者特异性抗原的作用下，活化记忆型T细胞或B 细胞，产生CK或Ig。

细胞下方的固相单克隆抗体就会捕获CK 或Ig物质。

细胞被清洗后，加入生物素化的第二抗体，抗体和CK 或Ig物质结合后，再加以酶做标记的生物素或亲和素反应，以酶底物显色，阳性细胞就可形成直径约50～200μm大小不等的圆形着色斑点[2]，每一个斑点对应分泌CK或Ig的一个细胞，而特定阳性T、B细胞族群的产生则可以通过斑点直径的大小可以直接反映。

酶联免疫斑点技术既可用于分泌抗体的B细胞，也可用于分泌各类CK的T细胞。

酶联免疫斑点技术也是T细胞功能检测的标准技术，具有较高的检测灵敏度[3]。

1.3新型标记免疫检验技术1.3.1元素标记免疫检验技术元素标记免疫检验技术中的标记元素主要有镧系元素（Eu3+，Tb3+，Sm3+）和钌元素（Ru），其检验技术分别是分辨荧光免疫分析技术和电化学发光免疫分析技术。

前者可以应用在两种指标的同时测定[4]，后者可以在电场作用下反复被激发而使信号得以放大。

1.3.2核酸标记免疫检验技术其设计原理是核酸的扩增或转录翻译[5]，扩增是DNA通过聚合酶链反应在较短的时间内按几何级数扩增，可以达到数百万倍；而转录翻译则是通过标记的抗体DNA与抗原反应后进行胞外转录翻译成相应的酶进行测定。

这两种方法的检测都有较大的灵敏性，但还处在研究阶段。

1.3.3量子点标记免疫检验技术在传统的标记免疫分析技术中，放射免疫分析存在污染，酶免疫分析灵敏度较低，发光免疫分析和荧光免疫分析发光时间短，容易淬灭。

早在20世纪70年代就引起科学家重视的量子点由于良好的光电性能重新引起了人们的广泛关注，开始在标记免疫分析中初步应用，并取得了令人满意的效果。

量子尺寸很小，电子和孔穴被量子陷域，连续能带变成分立能级结构，能够接受激发产生荧光，因此它实际上是一种探针。

目前应用较多的是Ⅱ～Ⅵ族或Ⅲ～V族元素组成的纳米微粒。

研究较多的主要集中在CdX（X＝S、Se、Te），粒径范围为2～20nm，还有一些复合结构以及多层结构。

在免疫示踪定位、生物多组分同时测定、细胞成像及疾病早期诊断中具有较广泛的应用价值[6-8]。

·综述·14中国现代医生CHINA MODERN DOCTOR2011年2月第49卷第6期2其他免疫检验技术2.1微阵列免疫芯片技术免疫微阵列是近年来新出现的一种高效的小分子抗原分析平台，它可以快速地定量检测复杂样品中的极低含量的目标物质。

用标记的抗原或抗体，同组成不同种类支持介质上的抗原或抗体微阵列进行反应，这样可以同时检测生物样品中的全部蛋白质含量变化的情况[9，10]。

该技术最大的优点就是降低了药品和样本的用量，实施高通量的平行检验与分析。

对血清样本中多种目的分子（包括自身抗体或其他微量蛋白）是一种比较合适的检测方法[11，12]。

2.2液态芯片技术液态芯片或液相芯片也称悬浮芯片，是20世纪70年代美国Luminex 公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞技术作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。

根据流式细胞计数原理，分别将单克隆抗体或抗原包被置于可被一束激光识别的特定的微珠表面，结合检测样本中的抗原或抗体后，最后，再与用荧光做标记的第二抗体反应，而定量的测量则通过另外一束激光激发测定荧光的强度值来确定[13]。

液态芯片技术可以用于测量各种小分子激素、细胞因子、肿瘤标志物、神经-内分泌以及传染病等的许多指标的检测。

该技术可以应用于任何使用微量分析的系统的测试项目[14]。

2.3表面增强激光离子化解吸-飞行时间质谱技术芯片表面通过不同的固相模式吸附探针分子，在样品中目标蛋白质被捕获后，为使目标蛋白离子化，加入能量吸收分子，同时接受激光束的轰击。

离子化的蛋白质在电场力的作用下飞行。

而飞行时间和离子化蛋白质的质量电荷比相关，通过计算蛋白质的质量电荷比，可以分析蛋白质的分子量和相对含量[15]。

此技术用于疾病表型指纹分析[16]。

3免疫学检验技术的发展趋势医学的发展要求免疫学检验技术能够特定部位取得微量样本进行精确的分析，随着分子生物学、微纳电子学等科研方面取得的进展，在此趋势下，更多新的、更敏感的分析方法将不断被应用，免疫学检验技术正朝着更高、更新的方向发展。

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