逍遥散对慢性温和不可预知应激模型大鼠的影响

逍遥散对慢性温和不可预知应激模型大鼠的影响1

熊静悦，曾南，张崇燕，杨婧，刘小帅

成都中医药大学药理教研室，四川成都（610075）

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摘要：目的：观察逍遥散对慢性温和不可预知应激（CUMS）模型大鼠行为学及脑内单胺类神经递质含量的影响。方法：应用慢性温和不可预知应激程序对大鼠进行为期11周的造模，造模后3周，分别采用逍遥散（19.5g·kg-1、25.0g·kg-1）和丙咪嗪（10mg·kg-1）对模型大鼠进行为期8周的治疗。实验进程中，定期测定大鼠体重、糖水消耗量；应用开场实验测定大鼠爬行格子数和站立次数；造模、治疗结束后处死大鼠，解剖分离大鼠皮层和海马部位，采用荧光分光光度法测定5-HIAA、5-HT、DA和NE含量。结果：与正常对照组比较，大鼠造模后3周糖水消耗量、爬行格子数和站立次数均明显减少（p<0.01）；与模型对照组比较，逍遥散19.5、25.0g·kg-1连续给药2周能显著增加糖水消耗量，但给药4周、7周对糖水消耗量影响不明显；与模型对照组比较，逍遥散25.0g·kg-1连续给药7周，对大鼠体重、爬行格子数和站立次数表现出提高趋势（p>0.05）;逍遥散25.0g·kg-1连续给药8周,能明显提高模型大鼠皮层部位5-HT含量及海马部位5-HIAA含量（p<0.05，p<0.01）。结论：逍遥散对CUMS抑郁模型大鼠表现出抗抑郁作用，作用机制与影响脑内单胺类神经递质5-HT活性有关。

关键词：逍遥散；慢性温和不可预知应激（CUMS）；抗抑郁

逍遥散出自宋朝《太平惠民和剂局方》，是中医调和肝脾的代表方剂之一，具有疏肝解郁、养血健脾之功效，用于治疗肝郁血虚脾弱证。作为调节情志的经典名方，现代临床中逍遥散被广泛用于精神科疾病的治疗，其中在抑郁症的治疗中应用较多，能使患者情志舒畅、心情愉快、精神状态得以改善，疗效明确，但治疗机制至今尚未完全阐明。实验研究发现[1-3]，逍遥散（10.0g·kg-1和20.0g·kg-1）连续给药6天，每日2次，能明显升高正常大鼠下丘脑去甲肾上腺素(NE)和纹状体多巴胺(DA)含量；连续4周采用“颈部带枷单笼喂养法”造成大鼠肝郁证模型，逍遥散水煎剂连续治疗2周后，能降低模型大鼠大脑、间脑和脑干部位中5-羟色胺(5-HT)与DA含量，升高NE含量；对“慢性束缚应激法”所致肝郁证模型大鼠，造模1周后用逍遥散（19.2g·kg-1）治疗4周，能显著提高模型大鼠脑组织中NE和DA水平。研究结果提示逍遥散对中枢神经系统5-HT、NE及DA能神经递质的影响作用，可能是其发挥“疏肝解郁”功效的药理学基础之一。

由于抑郁症的形成是致病因素长期作用的结果，因此在抑郁动物模型的制备时，必须考虑长期、多致病因素的叠加作用。慢性温和不可预知应激模型(Chronic Unpredictable Mild Stress, CUMS)的制备，是采用随机组合的多种不同应激因子（如冰水游泳、噪音刺激、异物刺激等）对动物长期刺激而进行造模。该模型能较好地模拟人类抑郁的核心症状――快感缺失[4,5]（以糖水消耗量反映），同时模拟了抑郁患者运动能力、社交能力、探索行为能力下降等症状表现，也能造成脑内单胺类神经递质(5-HT、NE和DA)含量的改变[6,7]，其理论依据与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源促进疾病发生、加速疾病发展的机制更接近，是目前较为推崇、使用广泛的抑郁动物模型[7-13]。本研究采用CUMS程序复制大鼠抑郁模型，观察逍遥散对该模型大鼠体重、活动量、糖水消耗量及脑内单胺类神经递质水平的影响，以期为逍遥散“疏肝解郁”之功效及临床治疗抑郁症的应用提供药理学依据。

1本课题得到成都中医药大学校基金重点项目（ZRZD200503）的资助。

1.材料与方法

1.1 动物

SD大鼠，♂，清洁级，初始体重190-220g，四川省医学科学院实验动物研究所提供。合格证号：scxk（川）2004-16。

1.2 药物

逍遥散(Xiaoyao San, XYS)：柴胡9g，当归9g，白芍9g，白术9g，茯苓9g，薄荷4.5g，生姜4.5g，甘草4.5g。药材购于成都中医药大学附属医院。以浸膏量为评判指标，采用3×3因素正交表，综合考察加水量、煎煮时间和煎煮次数三者的影响作用，经DPSv3.01软件统计分析后，确定逍遥散水煎剂的制备工艺如下：药材加4倍量水，煮沸后煎煮20min，同法煎煮三次，合并三次滤液，浓缩成1.25g·ml-1的药液，4℃冰箱保存。此外，取适量浓缩液、柴胡标准药材（四川省药品监督管理所，批号120992－200504）及配方中柴胡药材的甲醛溶液（参照2005版药典第198页所记载的方法处理），在同一硅胶G薄层板上点样，于365nm 紫外灯下检查，三者均在薄层板上的相同位置显示相同颜色的柴胡总皂苷荧光斑点，表明复方所用柴胡符合药典规定，且水煎剂中柴胡可被检出。

丙咪嗪 (Imipramine, IMI)：Sigma，批号I0899。生理盐水配制成1mg·ml-1溶液，临用前配制。

1.3 开场实验

参照Chen CZ [13]方法，将大鼠放入自制开场实验箱的中心位置（100cm×100cm木箱，底部等分为100个10cm×10cm小格），适应2min后，观察随后4min内大鼠的爬格子数（以大鼠的四肢均进入一个格子为一格）和站立次数（以大鼠的两前肢离开地面，身体直立为一次）。开场实验分别在大鼠分组前、造模3周及10周后进行，共3次。

1.4 糖水消耗实验

参照Stathis方法[7]，开始造模前一周里对大鼠进行2次1%蔗糖水偏好训练（每个鼠笼放置已定量的2个喂水瓶，1瓶纯水，1瓶1%蔗糖水，喂水1h后撤除）。于CUMS程序开始前进行第一次糖水消耗量(Sucrose Consumption，SC)测试。糖水偏好训练和测试均于大鼠禁食禁水23h后进行

1.5 慢性温和不可预知应激模型的建立

参照Stathis方法[7]略作改变。刺激因子包括电刺激＋噪音、冰水（4℃）游泳、禁食、鼠笼（45o）倾斜、潮湿垫料、禁水、合笼、禁食禁水、异物放置、异味刺激，具体执行安排见下表。共执行11周。